专利名称：应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体的是涉及一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法。
背景技术：
手性药物的对映异构体通常表现出不同的生理行为——它们往往一种立体异构体有药效，而它的镜像分子或具有毒副作用、或具有相反的药效或根本就没有药效 [J. Chromat. A, 2001,906, 3-33]。因此，研究开发高效率的单一对映异构体手性化合物生产技术已成为科研部门和工业界的关注焦点，制备单一对映异构体的手性化合物要依托立体选择性合成与手性拆分技术。目前，用于手性药物对映体拆分的方法主要有结晶法、膜拆分法、色谱法、毛细管电泳法等。色谱和毛细管电泳法应用广泛，分离效率虽高，但操作不能连续化，达不到制备规模，仅适用于药物分析和检测；而结晶法可达制备规模，但要求药物外消旋体以聚集体形式存在，因而限制了可分离药物的种类；膜拆分可进行连续操作，但平衡分离因子和通量之间的矛盾是亟待解决的问题[Anal. Chem. 2010，82，4712-4722]。蛋白因其独特的药物结合位点及立体选择性而被广泛用做手性选择剂，其中牛血清白蛋白、卵糖蛋白、糖蛋白、卵类粘蛋白、纤维二糖水解酶、抗生物素蛋白、胰凝乳蛋白酶等已被成功应用于高效液相色谱和毛细管电泳法拆分药物对映体，具有良好分离效果[J. Chromat. A, 2000,875, 235-254 ;J. Chromat. A, 2001,906, 253-273] 中国专利 200510110689. 4发明一种碳纳米管固载蛋白作为固定相填充于PMMA芯片分离通中，基于微流芯片进行手性分离分析的方法，此方法分离分析速度快，适用于药物检测和分析，但由于载样量小，不适于处理量大的制备型分离。中国专利200810113779. 2发明了一种串联式连续多级手性拆分装置，首先利用大分子手性选择剂(BSA等)与待拆分药物进行位点识别反应，然后通过成熟的超滤或纳滤膜实现拆分，此方法克服了手性膜分离通量和对映体选择性较低的缺点，但装置较为复杂，分离时间l_4h。功能化磁性复合纳米粒，由于同时具有磁响应性和表面功能性，通过磁稳定床技术，能快速、高效地从介质中分离目标分子，已在生物医学、细胞学和生物工程学等领域广泛应用[Biotechnol. Bioeng.，1997，53，79-87 ；Angew. Chem. Int. Ed.，2009，48， 1620-1624]。近年来，由于生物检测以及酶催化技术的需求，对磁性纳米颗粒表面进行蛋白质修饰的方法得到了越来越多的关注。目前，将超顺磁性颗粒表面负载功能化蛋白用于手性药物对映体拆分，并通过磁稳定床技术强化的研究还未曾报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法。本发明的技术方案概述如下应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤
(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性将质量浓度为2-10g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. 02-lg/L的离子型聚合物水溶液等体积混合，在10-45°C，吸附20-40分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为2-10g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为 0. 8-10g/L的蛋白质水溶液等体积混合，吸附2- ，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；所述蛋白质为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵类粘蛋白、卵类糖蛋白或亲和素；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为100-5000奥斯特的条件下，将质量浓度为l_500mg/L 的手性药物外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以0. 2-lOmL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。所述超顺磁性颗粒为平均粒径为lO-SOnm、饱和磁化强度为lO-SOemu/g的狗304、 Y -Fe203> CoFe2O4^ NiFe2O4 或 Ni0.5Zn0 5Fe204。所述离子型聚合物为聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯亚胺、乙二醇壳聚糖、聚丙烯胺、聚丙烯酸或聚对苯乙烯磺酸钠。所述步骤(1)中所述离子型聚合物水溶液的质量浓度为0. 1-0. 5g/L，所述温度为 20-30 "C。所述步骤(3)中所述磁场强度为2000-4000奥斯特，所述手性药物外消旋体水溶液质量浓度为5-100mg/L，所述流速为l-5mL/min。所述手性药物为布洛芬、华法林、氧氟沙星、萘普生、酮洛芬、奥沙西泮、氟比洛芬、 西酞普兰、普萘洛尔或扑尔敏。第二种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为0. 3-10%的硅烷化试剂溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为l-10g/L，在25-130°C，反应3_48h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述硅烷化试剂溶液的溶剂为甲苯、环己烷或乙醇；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为2-10g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为 0. 8-10g/L的蛋白质水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂，使共价连接试剂摩尔浓度为 0. 005-0. 2mol/L，反应2- ，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；所述蛋白质为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵类粘蛋白、卵类糖蛋白、胃蛋白酶或纤维素水解酶I ；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为100-5000奥斯特的条件下，将质量浓度为l_500mg/L 的手性药物外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以0. 2-lOmL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。所述超顺磁性颗粒为平均粒径为lO-SOnm、饱和磁化强度为lO-SOemu/g的狗304、Y -Fe203> CoFe2O4^ NiFe2O4 或 Ni0.5Zn0 5Fe204。所述硅烷化试剂为氨丙基三甲氧基硅烷或巯丙基三甲氧基硅烷。所述共价连接试剂为戊二醛、乙基-(3- 二甲基丙基)碳二亚胺盐酸盐、氮-琥珀酰亚氨基-3 (2-吡啶二硫代)-丙酸酯或对苯二异硫氰酸酯。所述步骤(1)中所述硅烷化试剂溶液的体积百分浓度为1_5%，所述温度为 40_80°C，所述反应时间为6_12h。所述步骤(3)中所述磁场强度为2000-4000奥斯特，所述手性药物外消旋体水溶液质量浓度为5-100mg/L，所述流速为l-5mL/min。所述手性药物为布洛芬、华法林、氧氟沙星、萘普生、酮洛芬、奥沙西泮、氟比洛芬、 西酞普兰、普萘洛尔或扑尔敏。本发明的优点(1)本发明的方法操作简便，条件温和，反应时间短，蛋白质固载量大且能保持其药物识别能力；(2)磁稳定床技术强化拆分过程使产品光学纯度显著提高，实现了手性拆分的连续化操作。
具体实施例方式下面的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但不对本发明作任何限制。超顺磁性颗粒的制备是以低温共沉淀法、超临界造粒法、水热合成法、溶胶-凝胶法、微乳法、前驱体热分解法等方法合成粒径均勻、具有超顺磁性的纳米颗粒。实施例1一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性将质量浓度为2g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. lg/L的聚二烯丙基二甲基氯化铵水溶液等体积混合，在25°C，吸附25分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为15nm、饱和磁化强度为70emu/g的!^e3O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为5g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为lg/L的牛血清白蛋白水溶液等体积混合，吸附池，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为MOO奥斯特的条件下，将质量浓度为5mg/L的手性布洛芬外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以lmL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为99. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。本实施例的方法也可用于拆分手性氧氟沙星、华法林或普萘洛尔外消旋体。实施例2一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性
将质量浓度为4g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. 02g/L的聚乙烯亚胺水溶液等体积混合，在30°C，吸附20分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为10nm、饱和磁化强度为80emu/g的Y-Fe2O3 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为2g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为0. 8g/L的人血清白蛋白水溶液等体积混合，吸附池，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为2000奥斯特的条件下，将质量浓度为lmg/L的手性萘普生外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以5mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为98. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。本实施例的方法也可用于拆分手性布洛芬、酮洛芬、奥沙西泮或氟比洛芬外消旋体。实施例3一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性将质量浓度为6g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为lg/L的聚丙烯胺水溶液等体积混合，在45°C，吸附30分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为20nm、饱和磁化强度为50emu/g的Coi^e2O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为7g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为5g/L的卵类粘蛋白水溶液等体积混合，吸附池，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为5000奥斯特的条件下，将质量浓度为100mg/L的手性扑尔敏外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以lOmL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为93. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。也可采用卵类糖蛋白替代本实施例中的卵类粘蛋白，拆分手性扑尔敏外消旋体。实施例4一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性将质量浓度为8g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. 2g/L的聚对苯乙烯磺酸钠水溶液等体积混合，在10°c，吸附25分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为30nm、饱和磁化强度为30emu/g的Nii^e2O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为5g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为2g/L的亲和素水溶液等体积混合，吸附池，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为4000奥斯特的条件下，将质量浓度为500mg/L的手性酮洛芬外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以2mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为99. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。也可采用聚丙烯酸替代本实施例中的聚对苯乙烯磺酸钠，对手性酮洛芬进行拆分。实施例5一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性将质量浓度为10g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. 5g/L的乙二醇壳聚糖水溶液等体积混合，在20°C，吸附40分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为80nm、饱和磁化强度为lOemu/g的Nia5Sia5I^2O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为10g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为10g/L的 α 1酸性糖蛋白水溶液等体积混合，吸附证，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为100奥斯特的条件下，将质量浓度为50mg/L的手性西酞普兰外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以0. 2mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为97. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。实施例6第二种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为2%的氨丙基三甲氧基硅烷的环己烷溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为5g/L，在80°C，反应8h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为15nm、饱和磁化强度为70emu/g的!^e3O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为5g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为2g/L的牛血清白蛋白水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂戊二醛，使共价连接试剂摩尔浓度为0. lmol/L，反应4h，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为MOO奥斯特的条件下，将质量浓度为5mg/L的手性布洛芬外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以lmL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为97. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。本方法也可用于拆分手性氧氟沙星、华法林或普萘洛尔外消旋体。实施例7第二种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为0. 3%的巯丙基三甲氧基硅烷的环己烷溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为lg/L，在40°C，反应12h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为lOnm、饱和磁化强度为80emu/g的Y-Fe2O3 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为2g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. 8g/L 的人血清白蛋白水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂氮-琥珀酰亚氨基-3(2-吡啶二硫代)_丙酸酯，使共价连接试剂摩尔浓度为0. 005mol/L,反应池，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为2000奥斯特的条件下，将质量浓度为lmg/L的手性萘普生外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以5mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为99. O%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。本方法也可用于拆分手性布洛芬、酮洛芬、奥沙西泮或氟比洛芬外消旋体。实施例8第二种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为5%的氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为5g/L，在25°C，反应48h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为20nm、饱和磁化强度为50emu/g的Coi^e2O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为5g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为3g/L的卵类粘蛋白水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂戊二醛，使共价连接试剂摩尔浓度为 0. lmol/L，反应池，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为5000奥斯特的条件下，将质量浓度为100mg/L的手性扑尔敏外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以lOmL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为95. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。也可采用卵类糖蛋白替代本实施例中的卵类粘蛋白，拆分手性扑尔敏外消旋体。实施例9第二种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为10%的巯丙基三甲氧基硅烷的甲苯溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为10g/L，在130°C，反应3h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为30nm、饱和磁化强度为30emu/g的Mi^e2O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为5g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为5g/L的纤维素水解酶I水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂对苯二异硫氰酸酯，使共价连接试剂摩尔浓度为0. 2mol/L，反应4h，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；
(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为4000奥斯特的条件下，将质量浓度为500mg/L的手性普萘洛尔外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以2mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为97. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。也可采用胃蛋白酶替代本实施例中的纤维素水解酶I，拆分手性普萘洛尔外消旋体。实施例10第二种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为1 %的氨丙基三甲氧基硅烷的甲苯溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为2g/L，在80°C，反应6h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述超顺磁性颗粒为平均粒径为80nm、饱和磁化强度为lOemu/g的Na5Zna5Fe2O4 ；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为10g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为10g/L 的α 1酸性糖蛋白水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂乙基-(3-二甲基丙基)碳二亚胺盐酸盐，使共价连接试剂摩尔浓度为0. 2mol/L,反应证，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为100奥斯特的条件下，将质量浓度为50mg/L的手性西酞普兰外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以0. 2mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，对映体过量值为94. 0%，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。
权利要求
1.一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，其特征包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性将质量浓度为2-10g/L的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为0. 02-lg/L的离子型聚合物水溶液等体积混合，在10-45°C，吸附20-40分钟，得到表面改性的超顺磁性颗粒；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为2-10g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与浓度为0. 8-10g/L的蛋白质水溶液等体积混合，吸附2-5h，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；所述蛋白质为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵类粘蛋白、卵类糖蛋白或亲和素；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为100-5000奥斯特的条件下，将质量浓度为l_500mg/L的手性药物外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以0. 2-10mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。
2.一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，其特征包括如下步骤(1)采用化学键合法对超顺磁性颗粒表面进行改性将超顺磁性颗粒粉末浸入体积百分浓度为0. 3-10%的硅烷化试剂溶液中使超顺磁性颗粒粉末的浓度为l-10g/L，在25-130°C，反应3-48h，分离，得到表面改性的超顺磁性颗粒；所述硅烷化试剂溶液的溶剂为甲苯、环己烷或乙醇；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质将质量浓度为2-10g/L的所述表面改性的超顺磁性颗粒水溶液与质量浓度为 0. 8-10g/L的蛋白质水溶液等体积混合，再加入共价连接试剂，使共价连接试剂摩尔浓度为 0. 005-0. 2mol/L，反应2- ，得到蛋白质修饰的磁性纳米颗粒；所述蛋白质为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵类粘蛋白、卵类糖蛋白、胃蛋白酶或纤维素水解酶I ；(3)将所述蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，在磁场强度为100-5000奥斯特的条件下，将质量浓度为l_500mg/L的手性药物外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部以0. 2-10mL/min流速泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是所述超顺磁性颗粒为平均粒径为 10-80nm、饱和磁化强度为 10_80emu/g 的 Fe304、γ-Fii2O3、CoFii2O4、NiFii2O4 或 Ni。. 5Zn。. 5Fe204。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述离子型聚合物为聚二烯丙基二甲基氯化铵、聚乙烯亚胺、乙二醇壳聚糖、聚丙烯胺、聚丙烯酸或聚对苯乙烯磺酸钠。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述硅烷化试剂为氨丙基三甲氧基硅烷或巯丙基三甲氧基硅烷。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述共价连接试剂为戊二醛、乙基-(3-二甲基丙基)碳二亚胺盐酸盐、氮-琥珀酰亚氨基-3 (2-吡啶二硫代)-丙酸酯或对苯二异硫氰酸酯。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤(1)中所述离子型聚合物水溶液的质量浓度为0. 1-0. 5g/L，所述温度为20-30°C。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征是所述步骤(1)中所述硅烷化试剂溶液的体积百分浓度为1_5%，所述温度为40-80°C，所述反应时间为6-12h。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是所述步骤(3)中所述磁场强度为 2000-4000奥斯特，所述手性药物外消旋体水溶液质量浓度为5-100mg/L，所述流速为 l-5mL/min。
10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是所述手性药物为布洛芬、华法林、氧氟沙星、萘普生、酮洛芬、奥沙西泮、氟比洛芬、西酞普兰、普萘洛尔或扑尔敏。
全文摘要
本发明公开了一种应用蛋白质功能化磁性纳米颗粒拆分手性药物的方法，包括如下步骤(1)采用物理吸附法对超顺磁性颗粒表面进行改性；(2)负载具有手性识别作用的蛋白质；(3)将蛋白质修饰的超顺磁性纳米颗粒填充到用于磁稳定床的玻璃管中，并置于轴向磁稳定床中，将手性药物外消旋体水溶液从填充后的柱状容器底部泵入，在柱状容器顶部连续获得含有一种对映异构体的分离产物的液体，而超顺磁性颗粒吸附物为另一种对映异构体的分离产物。本发明的方法操作简便，条件温和，反应时间短，蛋白质固载量大且能保持其药物识别能力；磁稳定床技术强化拆分过程使产品光学纯度显著提高，实现了手性拆分的连续化操作。
文档编号C07C59/64GK102408288SQ20111022797
公开日2012年4月11日 申请日期2011年8月10日 优先权日2011年8月10日
发明者付雁, 冯子洋, 刘璐, 张金利, 李灵均, 李艳莉, 李韡, 黄天天 申请人:天津市天地创智科技发展有限公司