一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗及其制备方法与流程

文档序号:11126081阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组载体,其特征在于,通过将编码猪圆环病毒Cap蛋白的核苷酸插入到马克斯克鲁维酵母表达载体所构建;

所述重组载体包括马克斯克鲁维酵母自主复制序列、马克斯克鲁维酵母菊粉酶启动子序列、编码猪圆环病毒Cap蛋白的基因序列、马克斯克鲁维酵母菊粉酶终止子序列、大肠杆菌复制序列和抗性筛选基因、和营养缺陷筛选基因。

2.根据权利要求1所述的重组载体,其特征在于,所述马克斯克鲁维酵母表达载体的DNA序列为SEQ ID No.5。

3.根据权利要求1所述的重组载体,其特征在于,由马克斯克鲁维酵母组成型菊粉酶启动子和终止子控制猪圆环病毒Cap蛋白的转录翻译。

4.根据权利要求1所述的重组载体,其特征在于,所述猪圆环病毒Cap蛋白氨基酸序列包括:

1)SEQ ID No.1核苷酸序列;或

2)SEQ ID No.1核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有猪圆环病毒Cap蛋白活性的由SEQ ID No.1核苷酸序列衍生的蛋白质。

5.根据权利要求1所述的重组载体,其特征在于,编码所述猪圆环病毒Cap蛋白的核苷酸系列为SEQ ID No.2所示序列。

6.一种马克斯克鲁维酵母重组工程菌株,其特征在于,由权利要求1所述重组载体转化马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株所构建。

7.根据权利要求6所述的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株,其特征在于,所述马克斯克鲁维酵母的营养缺陷型菌株,为马克斯克鲁维酵母菌敲除部分或全部特定营养基因所得。

8.根据权利要求7所述的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株,其特征在于,所述特定营养基因为URA3基因。

9.根据权利要求7所述的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株,其特征在于,所述马克斯克鲁维酵母菌为CGMCC No.10621。

10.一种制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗的方法,其特征在于,包括:

将编码猪圆环病毒Cap蛋白的核苷酸插入到马克斯克鲁维酵母表达载体,构建权利要求1所述重组载体;

将重组载体转化马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株,构建重组酵母;

重组酵母培养发酵,进行Cap蛋白的表达;

利用Cap蛋白在酵母细胞内自组装成猪圆环病毒II型病毒样颗粒;

收集培养发酵的菌,分离纯化获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒;

以所述猪圆环病毒II型病毒样颗粒为活性成分或活性成分之一,制备猪圆环病毒II病毒样颗粒疫苗。

11.根据权利要求10所述的方法,其特征在于,所述分离纯化包括:所收集的培养发酵的菌,破裂后收集释放的病毒样颗粒,凝胶层析纯化猪圆环病毒II型病毒样颗粒。

12.根据权利要求10所述的方法,其特征在于,所述重组酵母培养所用培养基中含有葡萄糖、硫酸铵、硫酸镁、磷酸二氢钾。

13.一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗,其特征在于,由权利要求6所述马克斯克鲁维酵母重组工程菌株培养发酵、分离纯化获得的猪圆环病毒II型病毒样颗粒为活性成分或活性成分之一。

14.根据权利要求13所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗,其特征在于,所述注射疫苗选自液体注射剂、注射粉剂、注射片剂中的一种或几种。

15.根据权利要求13所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗,其特征在于,所述疫苗包括佐剂,所述佐剂选自水包油、油包水、水包油包水佐剂中的任意一种或几种。

16.根据权利要求15所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗,其特征在于,所述佐剂选自ISA201水包油包水矿物油佐剂、IMS1313水溶性纳米侳剂、GEL01新型纳米侳剂中的任意一种或几种。

17.一种权利要求10所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒在制备疫苗中的应用,其特征在于,所述的猪圆环病毒II型病毒样颗粒用于制备预防和/或治疗猪圆环病毒II型病毒引发的疾病的药物和/或疫苗,所述猪圆环病毒II型型病毒引发的疾病选自:断奶仔猪多系统衰竭综合症、猪皮炎肾病综合症、仔猪先天性震颤和母猪繁殖障碍中的任意一种或几种。

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