1.一种乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:第一轮PCR试剂和第二轮PCR试剂;
所述第一轮PCR试剂包括:缓冲溶液,镁盐,脱氧核糖核苷三磷酸,酶混合液,第一轮PCR引物;所述第一轮PCR引物包括上游引物和下游引物;
所述第二轮PCR试剂包括:缓冲溶液,镁盐,脱氧核糖核苷三磷酸,酶混合液,第二轮PCR引物;
所述第一轮PCR引物包括46对BRCA1引物SEQ1-SEQ92和67对BRCA2引物SEQ93-SEQ226;每个所述上游引物的5’端添加序列SEQ227,每个所述下游引物的5’端添加序列SEQ228;
所述SEQ227的核酸序列为:TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG;
所述SEQ228的核酸序列为:GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述第二轮PCR引物包括上游通用引物P1和下游Index引物12条Index1-Index12。
3.一种乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2检测方法,其特征在于,包括:
配置第一轮PCR试剂和第二轮PCR试剂;
取样本加入到所述第一轮PCR试剂中,进行第一轮PCR扩增,设置第一轮PCR扩增程序参数,进行第一轮PCR扩增,得到第一轮PCR扩增产物;
将所述第一轮PCR扩增产物进行纯化,得到纯化后的第一轮PCR扩增产物;
将所述纯化后的第一轮PCR扩增产物加入到所述第二轮PCR试剂中,进行第二轮多重PCR扩增,设置第二轮多重PCR扩增程序参数,进行第二轮多重PCR扩增,得到第二轮多重PCR扩增产物;
将所述第二轮多重PCR扩增产物进行纯化,得到纯化后的第二轮多重PCR扩增产物。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述第一轮PCR扩增程序参数为:
预变性,预变性的温度为95℃,时间为10min;
变性,变性的温度为95℃,时间为30s;
退火,退火的温度为60℃,时间为30s;
第一次延伸,延伸温度为72℃,时间为60s;
第二次延伸,延伸温度为72℃,时间为5min。
5.根据权利要求3所述的法,其特征在于,所述第二轮多重PCR扩增程序参数为:
预变性,预变性的温度为95℃,时间为10min;
变性,变性的温度为95℃,时间为20s;
退火,退火的温度为60℃,时间为30s;
第一次延伸,延伸温度为72℃,时间为40s;
第二次延伸,延伸温度为72℃,时间为5min。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述将第一轮PCR扩增产物进行纯化,得到纯化后的第一轮PCR扩增产物的步骤包括:
纯化磁珠,得到纯化后的磁珠,将所述纯化后的磁珠与所述第一轮PCR扩增产物1:1混合,得到磁珠与所述第一轮PCR扩增产物混合液,静置10min;
所述磁珠与所述第一轮PCR扩增产物混合液置于磁架上,约3min后,吸走液体,加乙醇清洗,用20μl水洗脱,得到纯化后的第一轮PCR扩增产物20μl。
7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述将第二轮多重PCR扩增产物进行纯化,得到纯化后的第二轮多重PCR扩增产物;
纯化磁珠,得到纯化后的磁珠,将所述纯化后的磁珠与纯化后的第一轮PCR扩增产物1:1混合;得到磁珠与所述第一轮PCR扩增产物混合液,静置10min;
将磁珠与所述第一轮PCR扩增产物混合液置于磁架上,约3min后,吸走液体,加乙醇清洗,用20μl水洗脱,得到磁珠/纯化后的第一轮PCR扩增产物20μl。
8.根据权利要求6或7任一项所述的方法,其特征在于,所述加乙醇清洗,所述乙醇的体积180μl,所述清洗的次数为两次。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述乙醇的浓度为70%。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述乙醇的浓度为75%。