降解效果，能在游离菌降解效率上提升30%以上，且在完成降解的时间上有客观的提升。
[0085]6、测定本发明所述GY2B降解菌固定化小球的循环利用性能及其降解效果:
[0086](I)取实施例1所得GY2B降解菌固定化小球，活化后储存备用；
[0087](2)量取90ml MSM培养液于锥形瓶中，维持锥形瓶中MSM培养液pH为中性条件，将锥形瓶放入灭菌锅120°C高温蒸汽灭菌30min后取出放于无菌操作台紫外光下冷却至室温，加入1ml已过滤灭菌的苯酸浓度为lg/L的苯酸母液，使锥形瓶中最终体系的体积为100mL，苯酚浓度为100mg/L ;然后加入8.5gGY2B降解菌固定化小球，将锥形瓶置于摇床30°CU50r/min下避光培养，定时取样测定锥形瓶体系中苯酚残留浓度；待测样品处理如下:4°C环境下10000r/min离心5分钟，取上清液稀释测定；测定在紫外分光光度计，270nm波长测定，由标准曲线计算得体系中苯酚浓度；
[0088](3)完成降解后，将使用过的GY2B降解菌固定化小球滤出，以无菌水清洗3次，再次使用检测其降解效果，操作方式如步骤(2) —致；
[0089](4)依上步骤重复多次检测GY2B降解菌固定化小球循环利用次数与降解效果的关系，结果如图6所示。
[0090]从图6可以看出，GY2B降解菌固定化小球在前两次使用时因驯化不完全导致降解率稍低，此后保持高效快速的降解特性，在15次再用之后降解效果才体现出轻微的减弱，因此，本发明GY2B降解菌固定化小球能高效重复利用至少16次以上，相比游离菌易流失且难以回收的劣势，是一个极大的降解优化方法。
[0091]7、测定储存时间对本发明所述GY2B降解菌固定化小球降解效率的影响:
[0092](I)取实施例1所得GY2B降解菌固定化小球，活化后储存备用；
[0093](2)量取90ml MSM培养液于锥形瓶中，维持锥形瓶中MSM培养液pH为中性条件，将锥形瓶放入灭菌锅120°C高温蒸汽灭菌30min后取出放于无菌操作台紫外光下冷却至室温，加入1ml已过滤灭菌的苯酸浓度为lg/L的苯酸母液，使锥形瓶中最终体系的体积为100mL，苯酚浓度为100mg/L ;然后加入8.5gGY2B降解菌固定化小球，将锥形瓶置于摇床30°CU50r/min下避光培养，定时取样测定锥形瓶体系中苯酚残留浓度；待测样品处理如下:4°C环境下10000r/min离心5分钟，取上清液稀释测定；测定在紫外分光光度计，270nm波长测定，由标准曲线计算得体系中苯酚浓度；
[0094](3)每隔15天取步骤(I)储存备用的GY2B降解菌固定化小球进入与步骤(2)所述一致的苯酚降解检测；实验时间90天，进行7次降解实验，降解效果如图7所示。
[0095]从图7可以看出，本发明所述GY2B降解菌固定化小球因对GY2B降解菌进行固定化，大大优化了 GY2B降解菌的降解性能。相比游离菌15?30天既要进行传代培养以保持其降解活性的局限性，本发明所述GY2B降解菌固定化小球能在90天以上的时间内保持极佳的降解效率。
[0096]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种GY2B降解菌固定化小球，其特征在于:所述GY2B降解菌固定化小球是以聚乙烯醇、海藻酸钠和高岭土的交联聚合产物为载体，包埋GY2B降解菌而形成的凝胶小球。
2.根据权利要求1所述的GY2B降解菌固定化小球，其特征在于:所述GY2B降解菌固定化小球中，聚乙稀醇为80?120重量份，海藻酸钠为I?5重量份，高岭土为5?25重量份，GY2B降解菌的含量为4.7?7份。
3.根据权利要求1或2所述的GY2B降解菌固定化小球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)将聚乙烯醇和海藻酸钠依次加入水中并分别加热搅拌溶解，再加入高岭土，搅拌混合均匀，得到混合液； (2)将所得混合液于紫外光照射下冷却至室温，加入GY2B降解菌菌悬液，搅拌混合均匀，得到菌体包埋液； (3)将所得菌体包埋液滴加入交联液中，交联固化凝结成球，收集洗净得到所述GY2B降解菌固定化小球。
4.根据权利要求3所述的GY2B降解菌固定化小球的制备方法，其特征在于:步骤(I)所述混合液中聚乙烯醇的质量百分比浓度为8%?12%，海藻酸钠的质量百分比浓度为0.1 %?0.5%，高岭土的质量百分比浓度为0.5%?2.5% ;步骤⑵所述GY2B降解菌菌悬液占所述菌体包埋液的体积百分比浓度为8%?12% ;步骤(3)所述交联液为硼酸与氯化钙加入水中混合配成的溶液，硼酸的质量浓度百分比含量为2%?4%，氯化钙的质量浓度百分比含量为3%?5%。
5.根据权利要求3所述的GY2B降解菌固定化小球的制备方法，其特征在于:步骤(I)中聚乙烯醇加入水中于80?100°C下搅拌2?4小时至充分溶解完毕；步骤(I)中海藻酸钠加入水中于70?90°C下搅拌I?3小时至充分溶解完毕；步骤(I)中加入高岭土后搅拌15?30分钟至混合均匀；步骤(3)所述交联固化的时间为22?26小时。
6.根据权利要求3所述的GY2B降解菌固定化小球的制备方法，其特征在于:步骤(2)所述GY2B降解菌菌悬液中GY2B降解菌的浓度为0.0588g/mL ;步骤(2)所述GY2B降解菌菌悬液为经过传代培养活化并在含苯酚的富集培养液中扩大培养的GY2B降解菌菌悬液。
7.根据权利要求3所述的GY2B降解菌固定化小球的制备方法，其特征在于:步骤(2)所述GY2B降解菌菌悬液的具体制备步骤为:于经传代培养3?5次完成活化的GY2B降解菌菌落挑取I?2环至含苯酚浓度50?200mg/L的富集培养液中培养8?16小时得到浓菌液，将浓菌液用无菌生理盐水离心洗涤2?5次，洗得的菌体悬于生理盐水中，调节菌液浓度得到GY2B降解菌菌悬液，所得GY2B降解菌菌悬液于2?10°C保存备用；所述离心洗涤的条件为:温度2?10°C，离心转速6000?12000r/min，离心时间10?20min。
8.根据权利要求3?7任一项所述的GY2B降解菌固定化小球的制备方法，其特征在于:步骤(3)所得GY2B降解菌固定化小球于含苯酚的MSM培养液中培养进行活化后保存。
9.根据权利要求1或2所述的GY2B降解菌固定化小球在处理含苯酚废水中的应用。
10.根据权利要求9所述的GY2B降解菌固定化小球在处理含苯酚废水中的应用，其特征在于:当含苯酸废水中苯酸浓度为50?30mg/L，则每升含苯酸废水中加入2?4g所述GY2B降解菌固定化小球，震荡环境下避光降解处理。
【专利摘要】本发明属于微生物降解有机污染物技术领域，公开了一种GY2B降解菌固定化小球及其制备方法与应用。所述GY2B降解菌固定化小球是以聚乙烯醇、海藻酸钠和高岭土的交联聚合产物为载体，包埋GY2B降解菌而形成的凝胶小球。其制备方法包括步骤：(1)将聚乙烯醇和海藻酸钠依次加入水中并分别加热搅拌溶解，再加入高岭土，搅拌混合均匀，得到混合液；(2)将混合液于紫外光照射下冷却至室温，加入GY2B降解菌菌悬液，搅拌均匀得到菌体包埋液；(3)将菌体包埋液滴加入交联液中，交联固化凝结成球，得到GY2B降解菌固定化小球。所述GY2B降解菌固定化小球对苯酚的降解效果更彻底、快速、稳定；且可提供稳定降解环境，适应毒性环境。
【IPC分类】C02F3-34, C02F101-38, C12N11-08, C12N11-10
【公开号】CN104593349
【申请号】CN201510018796
【发明人】吴平霄, 李跃武, 党志, 朱能武
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月14日