[0073] 在本说明书和所附权利要求书的全文中，除非上下文另有要求，否则词语"包含" 及其变型如"含有"和"含"应理解为暗示包括所述整数或步骤或整数或步骤的组，但不排出 任何其他整数或步骤或整数或步骤的组。这同样适用于术语"包括"及其变型如"含有"和 "含"。
[0074] 序列：本文涉及的所有序列公开在所附的序列表中，所述序列表以其全部内容和 公开作为本说明书的一部分。下文提供了本文公开的序列的概要：
[0075] FGF-21 化合物
[0076]
【主权项】
1. 一种融合蛋白，其包含具有结构A-B-C或C-B-A或B-A-C或B-C-A或A-C-B或C-A-B 或 A-B-C-B-C 或 A-C-B 或 A-B-C-B 或 A-C-B-C 的多肽，其中 A是GLP-IR (胰高血糖素样肽-1受体）激动剂，且 C是FGF-21 (成纤维细胞生长因子21)化合物，且 B是包含约0-1000个氨基酸的接头。
2. 根据权利要求1的融合蛋白，其中所述接头包含赋予除连接A和C的功能之外的一 种或多种其他功能的功能性部分。
3. 根据权利要求2的融合蛋白，其中所述接头是肽接头。
4. 根据权利要求3的融合蛋白，其中所述FGF-21化合物选自天然FGF-21、FGF-21模 拟物和 SEQ ID NO:3。
5. 根据权利要求4的融合蛋白，其中所述FGF-21模拟物选自与SEQ ID N0:3中所示氨 基酸序列具有至少约80%氨基酸序列同一性并且具有FGF-21活性的蛋白质、FGF-21融合 蛋白和/或FGF-21缀合物。
6. 根据权利要求4的融合蛋白，其中所述FGF-21模拟物选自与SEQ ID N0:3中所示氨 基酸序列具有至少约90%氨基酸序列同一性并且具有FGF-21活性的蛋白质、FGF-21融合 蛋白和/或FGF-21缀合物。
7. 根据权利要求4的融合蛋白，其中所述FGF-21模拟物选自与SEQ ID N0:3中所示氨 基酸序列具有至少约96%氨基酸序列同一性并且具有FGF-21活性的蛋白质、FGF-21融合 蛋白和/或FGF-21缀合物。
8. 根据权利要求7的融合蛋白，其中所述FGF-21模拟物选自FGF-21突变蛋白、 FGF-21-Fc融合蛋白、FGF-21-HSA融合蛋白和/或聚乙二醇化FGF-21。
9. 根据权利要求8的融合蛋白，其中所述GLP-IR激动剂选自生物活性的GLP-I、GLP-1 类似物或GLP-I替代物。
10. 根据权利要求9的融合蛋白，其中所述GLP-IR激动剂选自GLP-I (7-37)、 GLP-l(7-36)酰胺、毒蜥外泌肽-4、利拉鲁肽、CJC-1131、albugon、阿必鲁肽、艾塞那肽、艾 塞那肽-LAR、胃泌酸调节素、利西拉肽、京尼平苷或具有GLP-IR激动活性的短肽。
11. 根据权利要求10的融合蛋白，其中所述接头包含以下功能性部分a)-h)中的一种 或多种： a) 为融合物赋予增加的稳定性和/或半衰期的部分，如XTEN化或PAS化序列或弹性蛋 白样多肽（ELP); b) 用于对融合蛋白进行共价修饰的进入位点如半胱氨酸或赖氨酸残基； c) 具有胞内或胞外靶向功能的部分如蛋白质结合支架； d) 蛋白酶切割位点如因子Xa切割位点或另一胞外蛋白酶的切割位点； e) 免疫球蛋白的Fc部分，例如IgG4的Fc部分； f) HSA ； g) 包含一个或多个组氨酸的氨基酸序列； h) 白蛋白结合结构域（ABD)。
12. 根据权利要求11的融合蛋白，其中所述接头由一个或多个功能性部分组成。
13. 根据权利要求10的融合蛋白，其中所述接头在所述功能性部分之外还包含其他氨 基酸。
14. 根据权利要求13的融合蛋白，其中所述接头包含以下蛋白酶切割位点中的一种或 多种： &)因子乂&切割位点，并且优选地包含序列此61?彼〇10勵 :11)或由序列此61?彼〇10 NO: 11)组成； b)蛋白酶切割位点，并且优选地包含至少一个精氨酸或由至少一个精氨酸组成，并且 更优选地包含序列GGGRR(SEQ ID NO: 14)或由序列GGGRR(SEQ ID NO: 14)组成。
15. 根据权利要求14的融合蛋白，其中所述接头包含用于共价修饰的进入位点或由用 于共价修饰的进入位点组成，并且优选地包含根据SEQ ID NO: 13的序列或由根据SEQ ID NO: 13的序列组成。
16. 根据权利要求15的融合蛋白，其中所述接头包含蛋白质稳定化序列或由蛋白质稳 定化序列组成，并且优选地包含选自下组的PAS化序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO:95、SEQ IDN0:96、SEQIDN0:97、SEQIDN0:98、SEQIDN0:99、SEQIDN0:10(^PSEQIDN0:101。
17. 根据权利要求16的融合蛋白，其中所述接头包含一个或多个用于对融合蛋白进行 共价修饰的进入位点或由一个或多个用于对融合蛋白进行共价修饰的进入位点组成，所述 进入位点如半胱氨酸或赖氨酸，并且优选半胱氨酸。
18. 根据权利要求17的融合蛋白，其包含与接头的用于共价修饰的进入位点共价连接 的一个或多个部分D。
19. 根据权利要求18的融合蛋白，其中所述共价连接的一个或多个部分D选自下列： a) 革El向单元如抗体或蛋白质结合支架 b) 蛋白质稳定化单元如羟乙基淀粉衍生物（HES)或聚乙二醇或其衍生物（PEG或PEG 衍生物） c) 脂肪酸。
20. 根据权利要求19的融合蛋白，其包含用于蛋白质纯化的标记如His标记，并且其中 所述标记优选地与所述融合蛋白在N-或C-端连接。
21. 根据权利要求20的融合蛋白，其在蛋白质纯化标记和所述融合蛋白的其余部分之 间包含蛋白酶切割位点，其中所述蛋白酶切割位点优选为Sumo蛋白酶切割位点。
22. 根据权利要求21的融合蛋白，其中A是FGF-21突变蛋白并且C是艾塞那肽、毒蜥 外泌肽-4或利西拉肽。
23. 根据权利要求22的融合蛋白，其中B具有选自下组的序列：SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:96,SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100 和 SEQ ID NO:101。
24. 根据权利要求23的融合蛋白，其中A是包含SEQ ID NO: 102或由SEQ ID NO: 102 组成的FGF-21突变蛋白。
25. 根据权利要求24的融合蛋白，其中C是艾塞那肽。
26. 根据权利要求25的融合蛋白，其用作药物的用途。
27. -种包含权利要求1的融合蛋白以及可药用的赋形剂的药物组合物。
28. -种包含权利要求1的融合蛋白以及可药用的赋形剂的药物组合物，其用作药物 的用途。
29. 制品，其包含 a) 根据权利要求27的药物组合物，和 b) 容器或包装材料。
30. -种治疗患者的疾病或病症的方法，其中FGF-21受体自磷酸化的增加或其中 FGF-21功效的增加有益于所述疾病或病症的治疗、预防或改善，其中所述方法包括向所述 患者施用权利要求1的融合蛋白。
31. -种治疗患者的心血管疾病和/或糖尿病和/或至少一种增加形成心血管疾病和 /或糖尿病风险的代谢综合征优选2型糖尿病的方法，包括向所述患者施用权利要求1的融 合蛋白。
32. -种为患者降低血浆葡萄糖水平、降低肝脏中脂质含量、治疗高脂血症、治疗高血 糖、增加葡萄糖耐受、降低胰岛素耐受、增加体温和/或降低重量的方法，包括向所述患者 施用权利要求的融合蛋白。
33. -种核酸，其编码根据权利要求1的融合蛋白，任选地包含以下核酸序列中的一 种： a) 根据具有ID NOs :27-38的序列之一的核酸序列 b) 编码根据SEQ ID NOs: 15-26和39-44的蛋白质序列的核酸 c) 在严格条件下与根据a)或b)的核酸杂交的核酸。
34. -种包含权利要求33的核酸的载体，其适合于在真核或原核宿主中表达编码的蛋 白质。
35. -种细胞，其稳定或瞬时携带权利要求34的载体并且能够在合适的培养条件下表 达权利要求1的融合蛋白。
36. -种制备权利要求1的融合蛋白的方法，包括 a) 在用于所述融合蛋白在细胞中表达的合适培养条件下培养细胞的培养物，或 b) 从培养物收获或纯化所述融合蛋白，所述培养物包含已经在用于所述融合蛋白表达 的合适条件下培养的细胞，或 c) 根据步骤a)培养细胞并根据步骤b)纯化融合蛋白，和任选地 d) 使用蛋白酶切割融合蛋白的His标记。
【专利摘要】本发明涉及包含至少一种FGF-21(成纤维细胞生长因子-21)化合物和至少一种GLP-1R(胰高血糖素样肽-1受体)激动剂的融合蛋白，以及牵涉该融合蛋白的药物组合物、医药用途和治疗方法，特别是在糖尿病、血脂异常、肥胖症和/或多脂的领域中。
【IPC分类】C07K14-605, A61K38-18, A61K38-26, C07K14-50
【公开号】CN104736558
【申请号】CN201380046749
【发明人】O·博沙伊嫩, M·德雷尔, P·哈伯曼, H－L·谢弗, M·索莫菲尔德, T·兰格
【申请人】赛诺菲
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年9月4日
【公告号】CA2880929A1, EP2892919A1, US20140073563, WO2014037373A1