附（Nonspecific protein adsorption， NPA)能力，可以将复杂蛋白免疫检测中的非特异性蛋白质吸附控制到接近"绝对0"水平 (接近或低于仪器的检测极限），不仅可以免除封闭和多次清洗的麻烦，还可以通过使用更 强的信号扩增手段来提高蛋白质微阵列的灵敏性。而且其硅橡胶的本质赋予了该材料较强 的机械性能和良好的可操作性。苏州傯聚已经成功地将SJ改性硅胶应用于11个肿瘤标志 物组成的多指标联检微阵列ELISA试剂盒，实现了高通量和高灵敏的检测，证明了这种材 料是一种优秀的蛋白质微阵列固体支撑材料。同时，这种材料还具有表面性质可调的特性， 可以通过控制修饰反应时间在一定范围内调整其表面形貌。
[0042] 本发明的多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽与固体载 体的连接方法来进行。例如，对于蛋白质/多肽与改性硅胶表面的连接而言，可以通过 I-乙基-3-(3_ 二甲基氨丙基）-碳化二亚胺[l-ethyl-3-(3_dimethyl ami-nopropyl) carbodiimide，EDC]和 N-羟基瑭泊酰亚胺（N-hydroxysuccinimide，NHS)的反应将改 性硅胶表面高分子链上的羧基（-C00H)基团改为活化基团，该活化基团可与蛋白/多 肽上所带的氨基（-NH2)反应从而实现将蛋白/多肽固定于固体载体表面（参见例如 Hongwei Ma，Yuanzi ffu, Xiaoli Yang1Xing Liu, Jian, an He, Long Fu, Jie Wang, Hongke Xu, Yi Shi and Renqian Zhong, Integrated poly (dimethysiloxane)with an intrinsic nonfouling property approaching" Absolute''zero background in immunoassays, Anal. Chem.，82, 6338 - 6342, 2010)。
[0043] 对于点样时使用的点样液中本发明的多肽的浓度没有特殊限制，本领域技术人员 可以依常规选择，优选为1 μ g~1000 μ g/mL，更优选10 μ g~500 μ g/mL。此外，对于本发 明的多肽在固体载体上分布的密度没有特殊限制，本领域技术人员可以依常规选择，优选 为1~100点/10mm2,更优选5~50点/10mm2〇
[0044] 本发明的检测器件对于肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体IgG临床 辅助诊断是有用的，或者其可以用于制造肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体 IgG临床辅助诊断的检测试剂盒。
[0045] 本发_的检测试齐I丨盒
[0046] 在另一个方面中，本发明还提供一种检测试剂盒（本发明的检测试剂盒），其包括 本发明的检测器件。该检测试剂盒可用于肠道病毒71型抗体IgM或者肠道病毒71型抗体 IgG的临床辅助诊断。
[0047] 本发明的检测试剂盒必须包含本发明的检测器件。本发明的检测试剂盒还可以包 括：
[0048] 1.配好的血清样本稀释液或血清样本稀释液组分溶液：样本稀释液，例如有北京 赛驰生物科技有限公司的样本稀释液（产品编号070021-S2)、郑州博威嘉生物科技有限公 司的加样变色样本稀释液（产品编号bwj010103)等。该类样本稀释液为含BSA、蔗糖等成 分的PBS溶液，含防腐剂，澄清液体，可直接使用。该样本稀释液用来稀释血清，试剂盒检测 的血清要稀释适当倍数，例如2~200倍，优选10~100倍。
[0049] 本发明的检测试剂盒还可以包括：
[0050] 2.浓缩洗液及洗液：固体载体表面孵育血清及酶标二抗后，需用洗液清洗掉固体 载体表面未结合的抗体和酶标二抗。浓缩洗液例如是1 %的吐温20水溶液，使用时需稀释 2~40倍、优选5~20倍。可以通过将浓缩洗液（10X)用纯化水或蒸馏水按1:9稀释，来 配置洗液。例如，450mL纯化水或蒸馏水中加入50mL浓缩洗液（10X)，充分混匀。未使用 完的洗液放在2~8°C保存，可保存3个月。
[0051] 本发明的检测试剂盒还可以包括：
[0052] 3.酶标二抗溶液：人肠道病毒71型感染者血清中的IgM或者IgG可与固体载体 (例如SJ改性硅胶）上的本发明的多肽结合，酶标二抗可与抗体结合，而酶标二抗上的标记 物可与发光底物混合溶液反应，从而发出可检测的光。酶标二抗可以是例如辣根过氧化物 酶标记的羊抗人IgM或辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG。对酶标二抗在酶标二抗溶液中 的浓度没有特殊限制，可以是例如Ing~1000ng/mL。
[0053] 本发明的检测试剂盒还可以包括：
[0054] 4.发光底物混合溶液：发光底物混合溶液可与酶标二抗上标记的辣根过氧化物 酶反应，使得反应发出仪器可检测到的化学光，发光底物混合溶液包括发光底物液A-过氧 化氢溶液，及发光底物液B-发光氨（鲁米诺）溶液。使用时预先采用两种发光底物液体以 等体积混合而成，得到发光底物混合溶液（45分钟内使用）。发光氨只有用氧化剂处理过才 会发光。通常使用双氧水和一种氢氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。在辣根过氧化物酶 催化下，双氧水分解为氧气和水：
[0055] 2H2〇2- 0 2+2H20
[0056] 鲁米诺与氢氧化物反应时生成了 一个双负离子，它可被过氧化氢分解出的氧气氧 化，产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定，立即分解出氮气，生成激发态的3-氨 基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中，释放的能量以光子的形式存在，波长位于可见光的蓝 光部分。发光底物混合溶液的例子例如Thermo Seientific公司的SuperSignal? ELISA Femto Maximum Sensitivi-ty Substrate，货号 37074。
[0057] 本发明的检测试剂盒还可以包括：
[0058] 5. -个或两个以上的反应腔体，根据需求可以采用例如双面的生物孵育反应 器，中国专利ZL 201120177686. 3或者ZL201110142518. 5 ;或者单面的生物孵育反应器 ZL201220430886. X。
[0059] 本发明的检测试剂盒还可以包括：
[0060] 6.其他用于检测肠道病毒71型的检测分子（例如多肽、蛋白质、核酸等）。
[0061] 本发明的检测试剂盒还可以包括：
[0062] 7.使用说明书，其中记载了该检测试剂盒可以用于肠道病毒71型抗体IgM或者肠 道病毒71型抗体IgG临床辅助诊断。
[0063] 反应器件和反应试剂盒可以例如采用凝胶成像仪进行化学发光成像。作为凝胶成 像仪，可以采用例如GE LAS4000mini型或天能5500型微阵列成像仪。 实施例
[0064] 以下，通过实施例对本发明进行更具体的说明，但并不是对本发明技术范围的限 定。通过本说明书的记载，本领域技术人员可以容易的对本发明进行修饰/改变，这些包含 在本发明的技术范围内。本发明的范围由权利要求书确定。
[0065] 1.多肽制备与确认
[0066] 实施例中使用的多肽具有SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列，由上海吉尔生化有 限公司合成，该多肽的表征可通过氢谱和质谱确认合成了所述多肽。液相色谱法检测纯 度：96. 8% (面积归一法）：质谱法检测（ESI-MS):计算分子量：1959. 17,测试值1958. 50。
[0067] 2.检测器件的制各
[0068] 检测芯片是以SJ改性硅胶（iPDMS薄膜）为固体支撑材料，在其上通过点样固定 多肽溶液制备而成。改性硅胶是在传统的聚二甲基硅氧烷材料中加入带烯烃末端的、表面 引发聚合反应的引发剂，并通过热交联（硅氢键键合）固定到聚二甲基硅氧烷的三维结构 中，得到SJ改性硅胶，其制作过程如图1所示。
[0069] 其中的A和B为聚二甲基硅氧烷的两个组分，聚二甲基硅氧烷 (Poly(dimethylsiloxane)，Sylgard 184)购买自美国道康宁（DowCorning)公司，包含 液态组分A(成分为金属铂催化剂与带乙烯基的二甲硅氧烷高分子前体混合物）和交联 剂B(成分为带有乙烯基和Si-H基团的二甲基硅氧烷前体）两种成分。C为末端带乙 烯基的引发剂，购于杭州东伟公司。最后修饰上的高分子是寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯单 体（Oligo (ethylene glycol)methacrylate，以下简称 0EGMA，分子量 Mw = 526)购买于 Aldrich。将聚二甲基硅氧烷前体A和交联剂B与带乙烯基末端的引发剂C以A :B:C= 10 : I :0.5比例充分混合。通过固化反应制成透明的弹性硅橡胶，然后通过SIP技术进行表面 修饰即可得到SJ改性硅胶。实验表明，SJ改性硅胶的表面有足够高密度的、通过共价键固 定的引发剂，其可以通过表面引发聚合反应（SIP)实现表面高分子修饰。使用poly(OEGMA) (聚乙二醇甲基丙稀酸醋）进行反应获得聚乙二醇（Polyethylene Glycol，PEG)修饰的表 面，实现较强的抗蛋白非特异性吸附的能力。
[0070] 制好的SJ改性硅胶薄膜需保存在4°C冰箱中。
[0071] 采用晶芯?PersonalArrayerTM 16个人点样仪在改性硅胶上制备多肽微阵列， 过程为：
[0072] 1)预处理
[0073] 将SJ改性硅胶薄片（15X 15mm2)浸泡在活化液中，30min后取出用去离子水淋洗 3次，用氮气吹干，马上用于点样。
[0074] 2)点样
[0075] 将点样液稀释好并转移到384孔