. 58, 60. 22, 59. 92, 52. 80, 47. 42, 41. 96, 32. 75, 21. 35, 21. 05, 14. 56.
[0073] 实施例11 :化合物12的制备
[0074]
[0075] 中间体4与l-(2_苯甲腈）哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得47.5mg白色 固体，收率：46 %。M.p. : 146-147°C;MS(ESI,m/z):487.1 [M+ir^H-NMR(500MHz,DMS0-d6) 8inppm:8. 33(d,J= 7. 7Hz, 1H,Ar-H), 8. 14 - 7. 98 (m, 3H,Ar-H), 7. 69 (dd,J= 7. 7, 1. 5Hz, 1H,Ar-H), 7. 61 - 7. 56 (m, 1H,Ar-H), 7. 34 (t,J= 7. 8Hz, 2H,Ar-H), 7. 25 (d,J= 8. 1Hz, 2H,Ar-H), 7. 15 (d,J= 8. 3Hz, 1H,Ar-H), 7. 08 (t,J= 7. 5Hz, 1H,Ar-H), 4. 88 (s, 2H, CH2), 3. 19 - 3. 10 (m, 4H,CH2), 2. 81 - 2. 73 (m, 2H,CH2), 2. 60 (dd,J= 19. 5, 11. 8Hz, 6H,CH2)； 13C-NMR(126MHz,DMS0-d6)Sinppm: 158. 58, 155. 22, 140. 08, 139. 89, 136. 82, 135. 87, 135. 29, 134. 24, 132. 60, 128. 80, 127. 89, 126. 19, 125. 16, 121. 87, 121. 60, 121. 43, 118. 99, 118. 24, 104. 65, 59. 34, 52. 57, 51. 08, 41. 47, 32. 21.实施例 12 :化合物 13 的制备
[0076]
[0077] 中间体4与4-哌嗪基苯腈的反应，合成过程同实施例4。得65. 4mg白色固 体，收率：48 %。M.p. : 179-180。(： ；MS(ESI,m/z) :475. 1[M+1]+;iH-NMR(500MHz,DMS0-d6) 8inppm:8. 33(d,J= 7. 7Hz, 1H,Ar-H),8. 13 - 7. 99 (m, 3H,Ar-H),7. 57 (d,J= 9. 0Hz, 2H,Ar-H),7. 34 (d,J= 8. 1Hz, 2H,Ar-H),7. 24 (d,J= 8. 1Hz, 2H,Ar-H),7. 01 (d,J =9. 0Hz, 2H,Ar-H),4. 88 (s, 2H,CH2),3. 31 (d,J= 5. 2Hz, 4H,CH2) ,2.78-2. 72 (m, 2H,CH2)，2. 54 (t,J= 4. 9Hz, 6H,CH2) ;13C-NMR(126MHz，DMS0-d6)Sinppm: 158. 58， 153. 19, 140. 00, 136. 82, 135. 88, 135. 30, 133. 26, 132. 61，128. 78, 127. 88, 126. 18, 125. 15， 121. 61，120. 01，113. 99, 98. 16, 59. 35, 52. 20, 46. 31，41. 46, 32. 22.
[0078] 实施例13 :化合物14的制备
[0079]
[0080] 中间体4与对呱嗪苯乙酰的反应，合成过程同实施例4。得32mg白色固体， 收率：30 %。M.p. : 145-146 。(： ；MS(ESI,m/z) :504. 1[M+1]+; 4-匪1?(500MHz，DMS0-d6) 8inppm:8. 33(d,J= 7. 7Hz, 1H,Ar-H),8. 12 - 8. 02 (m, 3H,Ar-H),7. 79 (d,J= 9. 0Hz, 2H,Ar-H),7. 34 (d,J= 8. 1Hz, 2H,Ar-H),7. 24 (d,J= 8. 1Hz, 2H,Ar-H),6. 96 (d,J= 9. 1Hz, 2H,Ar-H), 4. 87 (s, 2H,CH2), 3. 31 (s, 2H,CH2), 2. 79 - 2. 73 (m, 2H,CH2), 2. 55 (dd,J= 10. 1，5. 7Hz, 7H,CH2)，2. 45 (d,J= 7. 2Hz, 3H,CH2) ;13C-NMR(126MHz，DMS0-d6)Sinppm: 195 .52, 158. 58, 153. 83, 140. 01，136. 82, 135. 87, 135. 23, 134. 89, 132. 61，130. 02, 128. 79, 127 .89, 126. 57, 126. 19, 125. 16, 121. 61, 113. 03, 59. 40, 52. 29, 46. 59, 41. 46, 32. 24, 26. 06.
[0081] 实施例14 :体外抗肿瘤细胞活性测试
[0082] 1?材料：
[0083] 1. 1CCK-8试剂盒购于日本同仁化学研究所。
[0084] 1. 2靶细胞的制备：人前列腺癌细胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上 皮细胞WPMY-1的复苏与培养。
[0085]a.分别从液氮罐中取出人前列腺癌细胞系PC_3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺 上皮细胞WPMY-1的冷存管，迅速置入37°C水浴箱中，不停摇动使之迅速溶化，无菌操作移 入离心管中；
[0086]b.分别加DMEM完全培养液到PC-3细胞及WPMY-1细胞的离心管至10mL，F12完 全培养基到LNCaP细胞的离心管至10mL，1640完全培养基到DU145细胞的离心管至10mL， lOOOrmp离心5min，弃上清。
[0087]c.PC-3、WPMY-1细胞分别加DMEM完全培养基3-4mL吹打使细胞混匀后移入培养 瓶中，LNCaP细胞加3-4mL的F12完全培养基吹打使细胞混匀后移入培养瓶中，DU145细胞 加3-4mL的1640完全培养基吹打使细胞混匀后移入培养瓶中，5%C02,37°C培养；
[0088]d.观察细胞生长情况，及时更换培养液，分瓶。
[0089] 1. 3细胞计数：
[0090] a.选取对数生长期细胞，胰酶消化，分别对应的完全培养基终止，移入离心管中， 加相应的完全培养基至10mL;
[0091] b.取10iiL细胞悬液滴入计数板一侧凹槽中，显微镜下计数四个大格的细胞总 数、除以4,乘104,即为每毫升培养液所含细胞数；
[0092]c.调整细胞数至lX105cells/mL。
[0093] 1. 4醚类芳基哌嗪衍生物溶液配置：取醚类芳基哌嗪衍生物加入DMS0溶剂，调整 初浓度为lOmmol，配置浓度为lmmol待用，4°C保存。
[0094] 2?试验方法
[0095] 2. 1 96孔板各孔加入人前列腺癌细胞系PC_3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上 皮细胞WPMY-1100yL(1X105cells/mL)，37°C培养过夜。
[0096] 2. 2弃液，加入不同浓度的受试对象100yL，对照加DMEM完全培养基100yL，继 续培养24h。?
[0097] 2. 3各孔加入CCK-8检测试剂10yL，继续培养20min至lh。
[0098] 2. 4酶标仪450nm下测定每孔0D值。
[0099] 2. 5计算抑制率：
[0100] 肿瘤细胞抑制率％ =[(对照组测定的平均0D值一加药组测定的平均0D值）/对 照组测定的平均0D值]X100%。
[0101] 2. 6以抑制率对药物浓度的对数作图，求得IC5。值：
[0102] 以lgc为横坐标，抑制率为纵坐标，求得IC5。值。
[0103] 表1是本发明化合物的体外抗肿瘤细胞活性结果。
[0104]表1
[0105]
【主权项】
1. 芳基哌嗪衍生物，其特征是具有通式（I)的结构，其中： R1=H、直连或支链烷基、直连或支链烷氧基、CF3、CN、酰基、酯基； R2=H、直连或支链烷基、直连或支链烷氧基、CF3、CN、酰基、酯基； R3=H、直连或支链烷基、直连或支链烷氧基、CF3、CN、酰基、酯基； R4=H、直连或支链烷基、直连或支链烷氧基、CF3、CN、酰基、酯基； R5=H、直连或支链烷基、直连或支链烷氧基、CF3、CN、酰基、酯基。2. 根据权利要求1所述的芳基哌嗪衍生物，其特征是具有下述结构的化合物5-14 ; 3. 权利要求1或2所述的芳基哌嗪衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：首 先原料4-(溴乙烷）苯乙酸⑴被硼烷二甲基硫醚络合物还原成中间体2,其次中间体2在 碱催化下与糖精钠反应得到中间体3,再次中间体3在碱催化下与对甲苯磺酰氯反应生成 羟基保护的中间体4 ;最后中间体4与相应芳基哌嗪类化合物发生亲核取代反应得到相应 的化合物5-14 ;4. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述中间体2与糖精钠反应所用到的碱 是碳酸钾；中间体3与对甲苯磺酰氯反应所用到的碱是三乙胺或4-(N，N-二甲基）氨基吡 啶。5. 权利要求1所述芳基哌嗪衍生物的盐，如式（II)所示： 其中HX为生理上可接受的酸。6. 如权利要求5所述的芳基哌嗪衍生物的盐，其特征在于为氢溴酸盐、氢碘酸盐、盐酸 盐、高氯酸盐、硫酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、杏仁 酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、草酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、墟泊酸盐或乳酸盐。7. 权利要求5所述的芳基哌嗪衍生物的盐的制备方法，其特征是：将芳基哌嗪衍生物 溶于有机溶剂中，然后加入HX酸，析出的固体为芳基哌嗪衍生物的无机酸盐或有机酸盐。8. 权利要求1所述芳基哌嗪衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。9. 如权利要求8所述的用途，其特征在于所述抗肿瘤是指抗前列腺癌。
【专利摘要】本发明涉及药物化学、药物先导化合物的发现领域，具体涉及一类芳基哌嗪衍生物（Ⅰ）。其中：R1–R5的定义见说明书。本发明还公开了这些芳基哌嗪衍生物的制备方法以及使用这些新型衍生物用于抗肿瘤的用途。本发明所述的化合物经初步药效学研究，体外抗肿瘤实验，结果显示：一些化合物表现较好的抗肿瘤活性，可研制开发为新型的抗肿瘤药物。
【IPC分类】A61P35/00, C07D275/06, A61K31/496
【公开号】CN105130921
【申请号】CN201510464593
【发明人】袁牧, 陈洪, 许芳, 叶碧波, 郭洁文, 许冰冰, 梁雪, 邵斌豪, 杨宗琳, 黄珺珺, 朱柳
【申请人】广州市广金投资管理有限公司, 广州医科大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年7月29日