)、1.49(lH，dd，J= 5.6,7.6Hz，H-7)、6.36(lH，dd，J= 5.6,9.6Hz，H-8)、6.09(lH，d,J= 9.6Hz，H-9)、0.86(3H，s, 12-CH3)、1.20(3H，s, 13-CH3)、 1. 08 (3H,s, 14-CH3), 1. 11 (3H,d,J= 6. 8Hz, 15-CH3) ； 13C-NMR(CDC13, 100MHz) : 8c 122. 7(C-1)、199. 8(C-2)、43. 3(C-3)、34. 0(C-4)、38. 1 (C-5)、36. 3(C-6)、28. 0(C-7)、 199. 8(C-8)、125.2 (C-9)，163. 1(C-10)、26. 2(C-ll)、14. 8(C-12)、29.0 (C-13)、 15. 3(C-14)、22. 2(C-15)〇
[0053] 甘松香酮H(kanshoneH，C)，无色针状结晶（二氯甲烷）。UV(MeOH) 入nax:287、195nm;CD(c 0.05,Me0H)入（Ae):332(-7.91)、247(+4.97)、 222( + 2. 32)、213( + 2. 46)、202( +l. 22)nm;iH-NMR(CDC1 3, 4 0 0MHz) :SH 6. 07(1H，dd，2. 0, 10. 0,H-l)、6. 12 (1H，ddd，1. 6, 5. 2, 9. 6,H-2)、2. 03 (1H，m，H-3a)、 2. 20 (1H,m,H-3 0 )，1. 98 (1H,m,H-4)、1. 35 (1H,d,J= 8. 0Hz，H-6)、1. 75 (1H,dd，J =1. 2, 8. 0Hz，H-7)、5. 67 (1H，s，H-9)、1. 20 (3H，s，12-CH3)、1. 17 (3H，s，13-CH3)、 l.ll(3H，s，14-CH3)、1.08(3H，d，J= 6.8Hz，15-CH3) ;13C-NMR(CDC13，100MHz):Sc 128. 1 (C-l)、137. 2(C-2)、32. 6(C-3)、34. 6(C-4)、37. 1 (C-5)、37. 3(C-6)、36. 1 (C-7)、 196. 8(C-8)、123.2 (C-9)、160. 1(C-10)、25. 6(C-ll)、29. 5(C-12)、15.8 (C-13)、 22. 2(C-14)、15. 3(C-15) 〇
[0054] 3-氧代甘松香酮H(3_oxokanshoneH，D)，淡黄色粉末（二氯甲烧）。 UV(MeOH)Anax：198^ 290nm； [^j^' -391.88(c(i.32,Mc( )H) ；CD(c0. 05,MeOH) 入（A e):197(-l.ll)、221 (9.40)nm;(-)-ESI-MSm/z229.97[M-H]、（+)-ESI-MS:m/z 231. 33[M+H]+;氢谱、碳谱核磁数据见【具体实施方式】部分表1。
[0055]虫-匪1? (CDC13, 400MHz)谱中，SH 1. 28 (3H，s)、1. 26 (3H，s)、1. 24 (3H，s)和SH 1. 30 (3H，d，J= 6. 4Hz)处的峰为 4 个甲基信号；SH 6. 98 (1H，d，J= 10. 0Hz)、6. 18 (1H，d，J =10. 0Hz)、6. 08(lH，s)为3个烯氢质子信号。
[0056]13C-NMR谱共给出15个碳原子信号，包括2组双键碳信号142. 4、131. 6、129. 1 和156. 3)、2个羰基碳信号Sc (199. 6、195. 8)。与化合物甘松香酮H比较，该化合物不同之 处在199. 6(C-3)处的碳信号为1个羰基碳信号。综合iH-NMR^C-NMIUlSQC^HMBC谱等 信息推测出该化合物的平面结构（图3)。
[0057]
[0058] 3-氧代甘松香酮H的相对构型通过N0ESY谱确定，最终确定该化合物的上述结构。
[0059]3-羟基甘松香酮H(3_hydroxylkanshoneH，E)，无色油状物（乙酸乙 酯）〇UV(MeOH)入咖：283. Onm ; -50.13 (c 0.5, McOH)；CD(c 0. 05, MeOH) 入（Ae) :213. 5(+l. 32)、275. 5(+0. 08)、296. 0(+0? 66)、336. 5(-3. 55)nm; (-)-ESI-MS:m/z231.30[M-H]、（+)-ESI-MS:m/z255. 28[M+Na]+;氢谱、碳谱核磁数据见【具体实施方式】部分 表1。
[0060]13C-NMR(CDC13, 400MHz)谱共给出 15 个碳信号，Sc 128. 4、139. 2、124. 5、158. 6 处 的碳信号，提示结构中存在2组双键。与化合物甘松香酮H的NMR谱比较，该化合物不同之 处在71.4(C-3)处的碳信号为1个连氧碳信号。综合iH-NMR^C-NH^HSQGHMBC谱等 信息推测出化合物的平面结构（图2)。
[0061]
[0062]N0ESY谱中，SH 4.04(d，J=9.6Hz，H-3)与SH 1. 17(s，Me-13)、1.27(d，J=6. 8Hz，Me-15)空间相关，提示C3-0键、C4-C15键、C5-C14键处于相反方向；SH 1. 45 (d，J= 8.OHz，H-6)与Sh 1. 29 (d，J= 6. 8Hz，Me-15)空间相关，提示C6-Cn键、C4-C15键处于相反 方向，最终确定该化合物的上述结构。
[0063] 表1. 3-氧代甘松香酮H和3-羟基甘松香酮H的核磁数据（⑶Cl3,iH-NMRin 400MHz, 13C-NMRin100MHz)
[0064]
[0065] 实施例2
[0066] 本发明所述化合物对5-羟色胺转运体（SERT)的影响
[0067]米用稳定转染的hSERT_HEK293 细胞株，以 4-(4-(dimethylamino)phenyl)-l_me thylpyridinium(APP+)为荧光底物，在高内涵系统上检测化合物甘松马兜铃烷型倍半萜及 其衍生物对SERT活性的影响。
[0068] 1)实验仪器与试剂 [0069]实验仪器：
[0070] 高内涵Operetta系统和Columbus数据管理和分析系统（PerkinElmer)，超净台， 移液枪（1000yL, 200yL, 20yL, 10yL, 2. 5yL，美国Eppendorf公司）
[0071] 试剂和材料：
[0072] 人胚肾细胞系HEK293(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库），hSERT pcDNA3 质粒（Addgene,plasmid15483)，MEM培养基（Gibco)，APP+(Sigma)，Hoechst 33342(CellSignalingTechnology)，96 孔板（Costar3605)
[0073] 2)实验操作过程
[0074] 首先建立并鉴定了稳定表达hSERT-HEK293细胞株{安磊，李静，金增 亮等.人源5-羟色胺转运体稳定表达细胞系的建立及其功能探究[J].军事医学 2011，35 (9) :681-684}。以APP+为荧光底物，基于高内涵系统检测SERT的功能{Fowler A,SeifertN,AckerV.etal.Anonradioactivehigh-throughput/high-contentassay formeasurementofthehumanserotoninreuptaketransporterfunctionin vitro[J].JournalofBiomolecularScreening, 2006, 11 (8):1027-1034}
[0075] 具体步骤：
[0076] (1)精密称取实施例1所得甘松马兜铃烷型倍半萜及其衍生物，用DMS0配制成 20mM的母液，用无酚红MEM基础培基稀释药物至10. 0yM，1. 0yM，0. 1yM。
[0077] (2)按1. 0X104细胞/孔的密度接种稳定转染的hSERT-HEK293细胞至96孔板中， 在37°C，5%C02条件下培养24h。
[0078] (3)实验设立空白对照组，阳性对照2. 0uMFluoxetine组和1. 0uMTianeptine 组，测试药物分别设立10. 0yM，1. 0yM，0. 1yM组。细胞弃去培养基，用PBS缓冲液洗2遍， 按照80yL/孔体积加入各待测样品，每个浓度3个复孔，在37°C，5% 0)2条件下避光孵育 2-3h〇
[0079] (4)孵育完成后，每孔加入20yLAPP+，孵育20分钟。
[0080] (5)弃去孔内的液体，用PBS缓冲液洗2遍，每孔加入1. 0yg/mLHoechst50yL， 避光孵育20min。
[0081] (6)弃去孔板内的液体，PBS洗2-3遍，采用高内涵系统检测细胞内的荧光强度
[0082] Hoechst33342Excitation:360_400nm，Emission:410_480nm
[0083] APP+Excitation:460_490nm，Emission:505_550nm
[0084] 3)数据分析：
[0085] 采用Columbus数据管理和分析系统进行图像分析，根据Hoechst33342焚光识别 细胞核方式来确定细胞，根据胞内APP+荧光强度来确定SERT转运活性，计算相对荧光强度 =(药物组的胞内APP+荧光强度/对照组的胞内APP+荧光强度）进行AN0VA分析。
[0086] 4)实验结果
[0087] 如图1所示，马兜铃烯-9 0 -醇显著性地增强（F(5, 62) = 304. 7,p〈0. 0001)SERT 活性，Dunnett多重比较事后检验（Dunnett，smultiplecomparisonposthoctest)证 实马兜铃烯-9 0 -醇在浓度为 10. 0yM(q= 6. 942,p〈0. 001)，1. 0yM(q= 8. 720,p〈0. 001) 和0. 1yM(q= 7. 519,p〈0. 001)时与空白对照组相比都能显著增强SERT活性，阳性药对照 组fluoxetine在2. 0yM时能显著抑制SERT的活性（q