中不需要对样本进行预稀释，方便临床使用，操 作简单、快速，适用于全自动生化分析仪，具有较大的临床实用价值。其中最有优势的是 本发明检测试剂盒中所选用的底物，在本发明检测试剂盒中选用MG-2-氯-对硝基苯 酚-a-L-岩藻糖苷（CNPF)作为酶作用的底物，由于AFU催化CNPF释放2-氯-4-硝基苯 酚（CNP)，后者呈色的ΡΗ范围颇宽，在AFU最适应的ΡΗ条件下，仍可呈现明显黄色，引起 405nm~410nm处吸光度升高；连续监测吸光度的升高速率，可计算出样品中AFU活性。 [0044] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0045] 实施例1a-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒的制备：
[0046] 1、试剂1的制备：
[0047] 按所述用量取各组分：
[0048] 2-(Ν-吗啡啉）乙磺酸 23g 咪唑烷基脲 2.6g 乙二胺四乙酸二钠 2g 氯化納 2g
[0049] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0050] 2、试剂2的制备：
[0051] 按所述用量取各组分：
[0052] 2-(N-吗啡啉）￡*磺酸 23g 咪唑烷基脲 2,% MG-2-氯-对硝基苯磨-a-L-岩藻糖苷 曲拉通X-K)() 2mL 氯化钠 2g
[0053] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0054] 实施例2a-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒的制备：
[0055] 1、试剂1的制备：
[0056] 按所述用量取各组分：
[0057] 2-(N-吗啡啉）乙磺酸 35g 咪唑烷基脲 4.5g 乙二胺四乙酸二钠 _ 氯化纳 4g:
[0058] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0059] 2、试剂2的制备：
[0060] 按所述用量取各组分：
[0061] 2-(N-吗啡啉）乙磺酸 35g 咪唑烷基脲 4.5g MG-2-氯-对硝基笨酚-α-L-岩藻糖苷 4g 曲拉通X-100 4mL 氯化纳 4g
[0062] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6.5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0063] 实施例3a-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒的制备：
[0064] 1、试剂1的制备：
[0065] 按所述用量取各组分：
[0066] 2-(N-吗啡啉）乙磺酸 10:g 咪唑烷基脲 0.75g 乙二胺四乙酸二钠 〇.8g 氯化納 lg
[0067] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0068] 2、试剂2的制备：
[0069] 按所述用量取各组分：
[0070] 2-(N-吗啡啉）乙磺酸 10g 咪唑烷基脲 0.75g MG-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷 6g 曲拉通X-1Q0: ImL 氯化钠 lg
[0071] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0072] 实施例4a-L-岩藻糖苷酶检测试剂盒的制备：
[0073] 1、试剂1的制备：
[0074] 按所述用量取各组分：
[0075] 2-(Ν-吗啡啉）乙磺酸 45g 咪峻炼基脲 6g 乙二胺轉乙酸二钠 5g
[0076] 氯化纳 6g
[0077] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0078] 2、试剂2的制备：
[0079] 按所述用量取各组分：
[0080] 2-(N-吗啡啉）乙磺酸 45g 咪唑烷基脲 6g MG-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷 7g 曲拉通X-丨00 4mL 氯化納 6g
[0081 ] 将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液 调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至1L。
[0082] 各种不同含量配比的试剂盒工艺一致，试剂1和试剂2中各组分的用量参照发明 内容中的范围进行选定。
[0083] 本发明检测试剂盒具体测定方法为液体双试剂操作，其中液体双试剂在生化仪上 的基本实验参数可基本操作流程分别如下所述：
[0084] 基本的实验参数如下：
[0085]
[0086] 基本操作流程如下：
[0087]
[0089] 混匀后，37°C恒温90秒后测定初始吸光度，然后再180秒内准确测定平均每分钟 吸光度变化率AA/min。
[0090] 采用本发明制备的检测试剂盒，其样本中a-L-岩藻糖苷酶含量计算如下：根据 两点校准品浓度和对应吸光度变化率AA/min，采用两点线性校准模式确定工作曲线，样本 吸光度变化在工作曲线上相对应的浓度值即为测定浓度。
[0091] 试验例1本发明检测试剂盒与进口试剂盒测值的相关性实验
[0092] 1、供试试剂盒
[0093] (1)本发明实施例1所制备的试剂盒。
[0094] (2)对照试剂盒：a-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒（CNPF法），德国Autec Diagnostica公司生产。
[0095] 2、试验方法及结果
[0096] 通过用本发明实施例1所制备的试剂盒与购自德国AutecDiagnostica公司的 检测试剂盒测定对46例新鲜血清样本中a-L-岩藻糖苷酶活性的测定结果进行比较， 试验结果为图1所示，并进行回归分析。从图1中可以看出本发明试剂盒与德国Autec Diagnostica公司生产的试剂盒在测定血清样本中a-L-岩藻糖苷酶活性方面有良好的相 关性。
[0097] 试验例2本发明检测试剂盒的灵敏度试验
[0098] 以生理盐水为空白样本，用实施例1所制备的检测试剂盒重复测定20次，计算结 果均值为〇. 0002,标准差S为0. 00026,根据以空白均值加上两倍标准差的方法计算吸光 度变化0. 00072,用稀释后酶活力分别为0. 5U/L、1U/L和2U/L的a-L-岩藻糖苷酶校准品 溶液测定，其吸光度变化范围为〇. 0004、0. 0007和0. 0015,其中1U/L的a-L-岩藻糖苷酶 校准品吸光度变化值与空白测值的计算结果0. 00072最接近，因此本发明检测试剂盒检测 a-L-岩藻糖苷酶的灵敏度可达到1U/L，适合低值样本的检测应用。试验例3本发明各实 施例所制备的检测试剂盒精密度试验
[0099] 选取测定浓度为15-40U/L之间的血清，用本发明的实施例1、2、3和4制备的AFU 检测试剂盒进行试剂盒精密度实验，每个试剂盒对同一个血清样本进行10次的重复测定， 具体的结果如下表1所示。从表1中的实验结果可知，本发明实施例制备的检测试剂盒1、 2、3和4的精密度结果如下表所示，其中实施例1制备的检测试剂盒性能最优良。
[0100] 表1本发明实施例制备的检测试剂盒精密度结果
[0101]
【主权项】
1. 一种a -L-岩藻糖苷酶含量检测试剂盒，其特征在于：由独立的试剂1和试剂2组 成，其中试剂1的组分包括缓冲剂、防腐剂、金属离子螯合剂、稳定剂和水；试剂2的组分包 括缓冲剂、防腐剂、酶作用底物、表面活性剂、稳定剂和水。2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的缓冲剂为：三羟甲基甲胺基乙磺 酸、2-(N-吗啡啉）乙磺酸、N-(2-羟乙基）哌嗪-N' -2-乙烷磺酸、三羟甲基甲胺基丙磺酸 或哌嗪-1，4-二羟基丙磺酸。3. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂为咪唑烷基脲。4. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为氯化钠。5. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸 二钠，氨基三乙酸或二亚乙基三胺五乙酸及其盐。6. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的酶作用的底物为MG-2-氯-对硝 基苯酚-a-L-岩藻糖苷。7. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂为曲拉通X-IOO或乙 基苯基聚乙二醇。8. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：每1升试剂1中各组分的含量为：缓冲剂 2_80g，防腐剂0. l-10g，金属离子螯合剂0. 5-10g，稳定剂0. l-8g ;每1升试剂2中各组分 的含量优选为：缓冲剂2-80g，防腐剂0. l-10g，酶作用底物0. 5-10g，表面活性剂0. l-5ml， 稳定剂〇? l-8g。9. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：每1升试剂1中各组分的含量为：缓冲剂 5_40g，防腐剂0. 75-5g，金属离子螯合剂0. 8-4g，稳定剂l-5g ;每1升试剂2中各组分的含 量为：缓冲剂5-40g，防腐剂0. 75-5g，酶作用底物2-5g，表面活性剂l-3ml，稳定剂l-5g。10. 权利要求1所述的试剂盒的制备方法，其特征在于：（1)制备试剂1 :将各组分溶 解于蒸馏水或双蒸水中，混合均勾，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至6. 5-8. 5之 间，然后用蒸馏水或双蒸水定容至IL ; (2)制备试剂2 :将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中， 混合均勾，用lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至6. 5-8. 5之间，然后用蒸馏水或双蒸 水定容至IL ; (3)将试剂1和试剂2单独分装，密封，即得。
【专利摘要】本发明公开了一种α-L-岩藻糖苷酶含量检测试剂盒，由独立的试剂1和试剂2组成，其中试剂1的组分包括缓冲剂、防腐剂、金属离子螯合剂、稳定剂和水；试剂2的组分包括缓冲剂、防腐剂、酶作用底物、表面活性剂、稳定剂和水。制备方法为：(1)制备试剂1：将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，调节pH至6.5-8.5之间，定容；(2)制备试剂2：将各组分溶解于蒸馏水或双蒸水中，混合均匀，调节pH至6.5-8.5之间，定容；(3)将试剂1和试剂2单独分装，密封。本发明的检测试剂盒具有稳定性好，精确度高，线性测试范围宽，重复性好，抗干扰性强等优点。
【IPC分类】C12Q1/34
【公开号】CN105238848
【申请号】CN201510659274
【发明人】华权高, 来祥兵, 许可
【申请人】武汉生之源生物科技有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年10月14日