o,Inc. ,Lincoln,肥,USA)上进行或在Merck硅胶 60(230-400目）上进行硅胶色谱法。通过至少一种W下分析方法确保所有最终产物的结构 和纯度：核磁共振（NMR)和LC-MS。在使用指定溶剂的化址erAvance? 300光谱仪度ruker BioSpinCo巧.，Billerica，MA，USA)或VarianUN口Y 400(Varian，Inc.，化 1〇 Alto、CA,USA)或化址erAVANCEIII500MHzUltraaiield-PlusTMDigitalNMR光谱 仪上记录NMR谱。化学位移（δ)相对于作为内标的四甲基硅烷（TM巧W百万分率（ppm) 给出。偶合常数（J)W赫兹化Z)表示，且用于信号形状的常规缩写为：s=单峰；d= 双重峰；t=Ξ重峰;m=多重峰；br=宽峰；等。除非另外说明，否则使用电喷雾电离 巧SM巧通过及fieroj]脚猎.?PlatformII系统或如attromicro?系统（均来自Waters Co;rp.,Milford,ΜΑ,USA)或 1200RRLC/6140SQ系统（AgilentTechnologies,SantaClara, CA，USA)获得质谱且报导（Μ+ΗΓ。 阳1引]本发巧中间体的制备
[0122] 除非另外指出，否则所有起始材料及试剂获自商业供货商，如Sigma-Al化ich(St. Louis,M0,USA)及其子公司，且未经进一步纯化即使用。
[012引 中间体1:双环化2.U辛烧-1，5-二胺二盐酸盐
[0124]
[0125] 通过上文方案6的方法制备中间体1，如下：
[012引步骤1:环己烧-1，3-二甲酸二甲醋
[0127]
[012引将1, 3-环己烧二甲酸（45.Og, 261. 4mmol)溶解于甲醇（250血）中。加入氯Ξ甲 基硅烷（10.OOmL，78. 79mmol)，将反应在室溫揽拌4天。通过LC-MS检查反应，观察到产物 质量[M+田+201。在减压下浓缩混合物。用二氯甲烧（200mL)稀释所得残余物。然后将有 机层用饱和NaHOV洗涂，经硫酸钢干燥，过滤并在减压下浓缩，得到微粘性、澄清和无色油 状物。将油状物再溶解于无水THF中并浓缩，得到49. 5g(95% )环己烧-1，3-二甲酸二甲 醋，其不经进一步纯化用于下一步骤。
[012引步骤2 :双环化2.U辛烧-1，5-二甲酸二甲醋
[0130]
[013。 将N，N-二异丙基胺（4. 5mL，32mmol)在四氨巧喃（25血）中的溶液在-78°C冷却并 用己烧（19mL)中的1. 6M正下基裡处理。将反应升溫至0°C，揽拌5分钟，然后冷却回-78°C。 在20分钟内滴加1，3-二甲基-3, 4, 5, 6-四氨-2 (1H)-喀晚酬（15血，120mmol)，然后滴加 环己烧-1,3-二甲酸二甲醋巧.0g，25mmol)在四氨巧喃（10血）中的溶液，并将混合物在 相同溫度下揽拌1小时。然后滴加1-漠-2-氯乙烧（2. 9mL，35mmol)在四氨巧喃（8mL) 中的溶液。使反应缓慢回至室溫并揽拌过夜。将反应混合物冷却至0°C，并用饱和氯化锭 溶液泽灭。在减压下浓缩反应混合物，并将所得残余物用少量水稀释和用二氯甲烧萃取 (4x50mL)。将有机层合并，经无水硫酸钢干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残余物用色谱 法纯化，得到中间体1-(2-氯-乙基）-环己烧-1,3-二甲酸二甲醋（1.22g)。将N，N-二异 丙基胺0).91mL，6. 50mm0U在四氨巧喃（lOmL)中的溶液在-78°C冷却，并用己烧（4.06mL) 中的1.6M正下基裡的处理。将反应升溫至0°C，揽拌5分钟，并且然后冷却回-78°C。在 20分钟内滴加1，3-二甲基-3, 4, 5, 6-四氨-2 (1H)-喀晚酬（2. 24mL，18. 6mmol)，然后滴加 1-(2-氯-乙基）-环己烧-1,3-二甲酸二甲醋（1.22g，4.64mmol)在四氨巧喃（10血）中 的溶液，并将混合物在相同溫度下揽拌1小时。使反应缓慢回到室溫，并揽拌过夜。将反 应用饱和氯化锭溶液泽灭，并在减压下浓缩。将所得残余物用少量水稀释，并用二氯甲烧 萃取（4巧OmL)。将有机层合并，经无水硫酸钢干燥，过滤并蒸发，得到含有DMPU的粗产物 (3. 05g)。产物不经进一步纯化用于下一步骤。
[013引步骤3 :双环化2.U辛烧-1，5-二甲酸
[0133]
[0134] 将双环化2. 1]辛烧-1,5-二甲酸二甲醋（来自步骤2的粗3.Olg)在四氨巧喃 (lOOmL)中的溶液用水（75mL)中1M氨氧化裡处理，并在70°C溫热6小时。在减压下浓缩 反应，并将所得残余物在水与乙酸乙醋之间分配。收集水层，并再次用乙酸乙醋洗涂。将水 层用1N肥1酸化至抑2,并然后用乙酸乙醋萃取。收集有机层，经无水硫酸钢干燥，过滤并 蒸发，得到725mg白色固体，其不经进一步纯化用于下一步骤。
[0135] 步骤4 :双环化2. 1]辛烧-1，5-二胺二盐酸盐
[0136]
[0137] 将双环化2.U辛烧-1，5-二甲酸（725mg，3. 66mm〇U在甲苯（60mL)中的混合物 用；乙胺（1. 53mL，11.OmmoU处理，接着用叠氮憐酸二苯醋（1. 97mL，9. 14mm〇U处理。将 反应在90°C加热3小时，然后冷却至室溫，在减压下浓缩。将所得残余物在冰浴中冷却，并 用6M氯化氨的水溶液化OmL)处理。除去冰浴，并将反应揽拌过夜。真空除去大部分水，并 将所得残余物与乙腊在冰浴中揽拌直至形成无色沉淀。通过过滤收集沉淀，并在真空下干 燥，得到无色固体状产物（250mg，32% )，其不经进一步纯化用于下一步骤。
[013引 中间体2 :6-甲基-化嗦-2-甲酸巧-氨基-双环化2. 1]辛-1-基）-酷胺肥1 盐
[0139]
[0140] 通过上文方案7和8的方法制备中间体2,如下：
[01川步骤1 :双环化2. 1]辛烧-1，5-二甲酸二乙醋
[0142]
[0143] 使用在合成中间体1(步骤2)中所述的类似实验程序，W0. 18mol反应规模由 环己烧-1,3-二甲酸二乙醋制备双环化2. 1]辛烧-1,5-二甲酸二乙醋。ESI-MSm/z: 277(M+H)"
[0144] 步骤2 :双环化2.U辛烧-1，5-二甲酸单乙醋
[0145]
[0146] 通过在环境溫度在乙醇（13mL)和水（3mL)中使用氨氧化领（0. 5当量）18小时来 进行环化二乙醋4(1. 3g)的部分水解。在减压下浓缩反应，并将所得残余物在水与乙酸乙 醋之间分配。收集水层并再次用乙酸乙醋洗涂。将水层用1N肥1酸化至抑2,并然后用乙 酸乙醋萃取。收集有机层，经无水硫酸钢干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过柱色 谱法纯化，得到500mg(47% )所需产物。ESI-MSm/z:227(Μ+ΗΓ
[0147] 步骤3 :5-苄基氧基幾基氨基-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸乙醋 [014 引
[0149] 使用合成中间体1(步骤4)中所述的类似实验程序，通过在甲苯中用DPPA和TEA 进行化dius重排，由双环化2. 1]辛烧-1，5-二甲酸单乙醋制备5-苄基氧基幾基氨 基-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸乙醋，并W1. 1-10. 3mmol反应规模用化0H泽灭。ESI-MS m/z:332(M+H)"
[0150] 步骤4 :5-氨基-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸乙醋
[0151]
[0152] 将5-苄基氧基幾基氨基-双环巧.2. 1]辛烧-1-甲酸乙醋（2.Og，6. 05mmol)溶 解于乙醇巧0. 0血）中。加入Pd/C(10% ) (0. 32g, 0. 30mmol)。将混合物在50psi&下于室 溫氨化6小时。通过滤过Gelite?;层除去催化剂。在减压下浓缩滤液，得到l.〇g(84%)所 需产物。ESI-MSm/z:198(Μ+ΗΓ.
[015引步骤5 :5-[ (6-甲基-化嗦-2-幾基）-氨基]-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸乙醋[0154]
[015引将5-氨基-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸乙醋（0.5g，2. 53mmol)溶解于二氯甲烧(10.0血，156mmol)中。加入6-甲基化嗦-2-甲酸〇).35g，2. 53mmol)、苯并Ξ挫-1-基氧 基Ξ(二甲基氨基）鱗六氣憐酸盐（1. 12g, 2. 53mmol)和二氯甲烧（10.0 mL, 156mmol)中的 Ξ乙胺化71mL，5.07mmol)。将反应物在室溫揽拌2小时。在减压下浓缩混合物。将所得 残余物在Combi巧化s7?K系统（己烧/乙酸乙醋：100/0至30/70进行8min，然后己烧/乙 酸乙醋：30/70)上纯化，得到0. 60g(75%)所需产物。ESI-MS m/z :318(Μ+ΗΓ
[0156] 步骤6 :5-[(6-甲基-化嗦-2-幾基）-氨基]-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸
[0157]
[0158] 将5-[(6-甲基-化嗦-2-幾基）-氨基]-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸乙 醋化60g，1.89mmol)溶解于四氨巧喃（10. 0血，123mmol)中。加入氨氧化裡单水合物 (0. 40g, 9. 45mmol)的水溶液化.0血,333mmol)。将混合物在室溫揽拌过夜。在减压下浓 缩混合物。将所得残余物在乙酸乙醋（20mL)和水（20mL)之间分配。收集水层，用1N肥1 酸化至抑2,并用乙酸乙醋化0血）萃取。将有机层用盐水洗涂，经Na2S〇4干燥，并浓缩， 得到白色固体状340mg(62% )所需产物。其不经进一步纯化用于下一步骤。ESI-MSm/z: 290 (Μ+ΗΓ
[0159] 步骤7 :6-甲基-化嗦-2-甲酸（5-氨基-双环化2.1]辛-1-基）-酷胺肥1盐
[0160]
[016。 将5-[(6-甲基-化嗦-2-幾基）-氨基]-双环化2. 1]辛烧-1-甲酸 (0. 340g, 1.ISmmol)悬浮于甲苯（10. 0血,93. 9mmol)中。加入Ξ乙胺（0. 20ιΛ, 1. 41mmol)， 随后加入叠氮憐酸二苯醋化25mL，1.ISmmol)。将反应物在室溫揽拌2小时。然后将混合 物在90°C加热1小时。将混合物冷却，并倒入冰冷的6M肥1水溶液，并揽拌过夜。收集 水层，在〇°C冷却，用固体K2CO3碱化至抑11，并用CH2CI2萃取（4x25血）。将合并的有机 层经Na2S〇4干燥，并在减压下浓缩。将所得残余物溶解于CH2Cl2、4M肥1/二嗯烧（1.0血） 中。在减压下浓缩混合物，得到白色固体状345mg(99 % )6-甲基-化嗦-2-甲酸（5-氨 基-双环化2. 1]辛-1-基）-酷胺肥1盐。其不经进一步纯化用于下一步骤。ESI-MSm/ Z:261 (M+H)".
[0162] 中间体3 :N-(5-氨基双环化2. 1]辛-1-基）-3-氣苯甲酯胺
[0163]
[0164] 步骤1 :环己烧-1，3-二甲酸二甲醋
[0165]
[016引 向1，3-环己烧二甲酸（25g, 0. 145mol)在甲醇（250血）中的溶液加入浓 H2S04(10mL)，并将反应溶液回流过夜。冷却至室溫后，在减压下除去甲醇。将残余物用乙 酸乙醋巧00血）稀释，用饱和化20)3(2x300血）和盐水（100血）洗涂，经MgS04干燥，并在 减压下浓缩得到浅黄色油状27.4g(94%)二甲基环己烧-1,3-二甲酸醋。ESI-MSm/z: 201 (M+H)
[0167]步骤2 :1-(3-氯丙基）环己烧-1，3-二甲酸二甲醋 [016 引
[0169] 向预冷却（-78Γ)的二异丙基酷胺裡（36血，78mmol)在THF(250血）中的溶液滴 加DMPU(30. 5g, 238mmol)(不使溫度超过-65°C)，接着在20min内于-78°C加入二甲基环 己烧-1，3-二甲酸醋（11. 9g，59. 5mm〇U在THF(50血）中的溶液。在-78°C揽拌1小时后， 加入1-漠-2-氯乙烧（11.Ig，77. 4mmol)，并将反应混合物缓慢升溫至室溫过夜。用饱和 NHaCUIOOhiL)泽灭后，在减压下浓缩混合物。将所得残余物用水（200mL)稀释，并用二氯甲 烧萃取（4xl00mL)。将合并的有机层用水（lOOmL)和盐水（lOOmL)洗涂，经Μ拆04干燥，并 在减压下浓缩。将所得残余物通过柱色谱法（硅胶，石油酸/乙酸乙醋：20/1)纯化，得到黄 色油状 11.7g(75%)l-(3-氯丙基）环己烧-1,3-二甲酸二甲醋。ESI-MSm/z:263(Μ+ΗΓ.
[0170] 步骤3 :双环化3. 1]壬烧-1，5-二甲酸二甲基醋
[0171]
[0172] 向预冷却（-78Γ)的二异丙基酷胺裡（27血，54mmol)在THF(80血）中的溶液 滴加DMPU(30. 2g，236mol)，接着在20min内加入在THF巧0血）中的1-(3-氯丙基）环己 烧-1，3-二甲酸二甲醋（11. 7g，44. 7mmol)。将反应混合物在-78°C揽拌30min，并然后在 1.化期间升溫至室溫。用饱和氯化锭（lOOmL)泽灭后，在减压下浓缩混合物。将残余物 用水（300血）稀释，并用二氯甲烧萃取（4x100血）。将合并的有机层用水（100血）和盐水 (lOOmL)洗涂，经Μ拆04干燥，并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法（硅胶，石油酸/乙 酸乙醋：20/1)纯化，得到浅黄色油状8. 32g(82%)双环化3.1]壬烧-1,5-二甲酸二甲 醋。ESI-MSm/z:227(Μ+ΗΓ.
[017引步骤4 :5-(甲氧基幾基）双环化3. 1]壬烧-1-甲酸[0174]
[017引 将双环化3. 1]壬烧-1,5-二甲酸二甲醋化32g，36. 8mmol)和 Ba(0H)2 · 8&0(5. 80g，18. 4mmol)在乙醇（40mL)和HzOaOmL)中的溶液回流过夜。冷却至 室溫后，在减压下浓缩混合物。将所得残余物用水（lOOmL)稀释，并用乙酸萃取（3x200mL)。 将合并的有机层用盐水（lOOmL)洗涂，经硫酸钢干燥，并在减压下浓缩，回收澄色油状起 始材料。将水相用2畑C1水溶液调节至抑1~2,并用二氯甲烧萃取（3xl00mL)。将 合并的有机层用盐水（lOOmL)洗涂，经硫酸钢干燥，并在减压下浓缩，得到白色固体状 1.8g(67% )5-(甲氧基幾基）双环化 3. 1]壬烧-1-甲酸。ESI-MSm/z:213(Μ+ΗΓ.
[0176] 步骤5 :5-(苄基氧基幾基氨基）双环巧.2. 1]辛烧-1-甲酸甲醋
[0177]
[0178] 将5-(甲氧基幾基）双环化3. 1]壬烧-1-甲酸（5. 23g，24. 7mmol)、叠氮憐酸二 苯醋（8. 0血,36. 9mmol)和Ξ乙胺（10血，136mmol)在甲苯（150血）中的混合物在室溫揽拌 一小时，并然后回流Ξ小时。加入苄基醇（4.OmL，38. 7mmol)，并将混合物继续回流过夜。冷 却至室溫后，将反应混合物用乙酸乙醋（100血）稀释，用饱和NaHC〇3和盐水洗涂，经硫酸钢 干燥，并在减压下浓缩。将所得残余物通过柱色谱法（硅胶，石油酸/乙酸乙醋：20/1)纯 化，得到栋色油状lOg5-(苄基氧基幾基氨基）双环-[3. 2.1]辛烧-1-甲酸甲醋（含有 化地)。ESI-MSm/z:318(M+Hr。其不经纯化用于下一步骤。
[0179] 步骤6 :5-(苄基氧基幾基氨基）双环巧.2. 1]辛烧-1-甲酸
[0180]
[0181] 向5-(苄基氧基幾基氨基）双环-[3. 2. 1]辛烧-1-甲酸甲醋（25g，粗产物）在甲 醇（200血）中的溶液加入化0H巧N，50血)，并将反应混合物回流两小时。冷却至室溫后，在 减压下浓缩混合物。将残余物用水（lOOmL)稀释，并用乙酸萃取（3xl00mL)，除去有机杂质。 将水相用2N肥1水溶液调节至抑1~2,并用二氯甲烧萃取（3xl00mL)。将合并的有机层 用盐水洗涂，经硫酸钢干燥，并在减压下浓缩，得到黄色油状8. 5g(49 %，步骤5和6) 5-(节 基氧基幾基氨基）双环化2. 1]辛烧-1-甲酸。ESI-MSm/z:304(Μ+ΗΓ.
[0182] 步骤7 :5-氨基双环化2. 1]辛-1-基氨基甲酸节醋
[0183]
[0184] 将5-(苄基氧基幾基氨基）双环化2. 1]辛烧-1-甲酸（8. 5g，28.0mmol)、叠氮憐 酸二苯醋巧.3g，33. 8mmol)和Ξ乙胺巧血，68mmol)在甲苯（150血）中的混合物在室溫揽 拌1小时，并然后回流Ξ小时。冷却至0°C后，加入TMSOKQO. 7g，83. 6mmol)在THF(85血） 中的溶液。将反应混合物升溫至室溫，并揽拌比，并然后用5%巧樣酸（20mL)泽灭，并在减 压下浓缩。将残余物在〇°C用肥1水溶液（2N，200mL)处理。将所得混合物用乙酸乙醋萃 取姑100血）。将水相用胞2〇)3调节至抑9~10,并用二氯甲烧/甲醇（10/1，3x150血） 萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涂，经硫酸钢干燥，并在减压下浓缩，得到黄色固体状 5. 13g(42% )5-氨基双环巧.2. 1]辛-1-基氨基甲酸节醋。ESI-MSm/z:275(M++1).
[0185] 步骤8 :巧-(3-氣苯甲酯胺基）双环化2. 1]辛-1-基）氨基甲酸节醋
[0186]
[0187]向5-氨基双环巧.2. 1]辛-1-基氨基甲酸节醋（402mg，1.47mmol)和3-氣苯甲酸 (309mg, 2. 21mmol)在DMF(20血）中的溶液加入ΗΑΤυα. 12g, 2. 95mmol)和DIPEAQ血）。在 室溫揽拌1小时后，加入水（lOOmL)，并将混合物用乙酸乙醋萃取（3巧OmL)。将合并的有机 层用盐水洗涂，经Na2S〇4干燥并在减压下浓缩。将所得残余物通过柱色谱法（硅胶，石油酸 /乙酸乙醋：2/1)纯化，得到白色固体状513mg(88% )巧-(3-氣苯甲酯胺基）双环[3. 2. 1] 辛-1-基）氨基甲酸节醋。ESI-MSm/z:397(Μ+ΗΓ.