[028引实施例1 :N，Ν' -(双环化2. 1]辛烧-1，5-二基）二（化晚-2-甲酯胺）
[0287]
[0288] 表1的实施例1通过上文方案1的方法由中间体1制备，如下：
[0289] 将双环化2. 1]辛烧-1，5-二胺二盐酸盐（20mg，0. 094mmol)和化晚甲酸 (34. 6mg，0. 28mmol)在二氯甲烧化血）中的混合物用Ξ乙胺0). 13mL，0. 94mmol)处理。 将反应物在室溫揽拌数分钟。加入N-(3-二甲基氨基丙基）-Ν'-乙基碳二亚胺盐酸盐 (72.Omg，0. 38mmol)和4-二甲基氨基化晚化3mg，0. 02mmol)。将反应在室溫揽拌过夜。将 反应用少量二氯甲烧稀释，并用水洗涂。收集有机层，经无水硫酸钢干燥，过滤并在减压下 浓缩。用色谱法纯化所得残余物，得到5. 4mg(16% )所需产物。分析数据列于表3中。
[0290] 实施例2和3 :N-巧-(3-氯苯甲酯胺基）双环化2.1]辛-1-基）-6-甲基化 晚-2-甲酯胺和N，Ν' -(双环化2. 1]辛烧-1，5-二基）双化-甲基化晚-2-甲酯胺）
[0291]
[0292] 表1的实施例2和3通过上文方案2的方法由中间体1制备，如下：
[029引 将双环化2. 1]辛烧-1,5-二胺二盐酸盐（l〇〇mg，0. 469mmol)、6-甲基化晚甲 酸化4. 3mg, 0. 47mmol)和 3-氯-苯甲酸（73. 4mg, 0. 47mmol)在二氯甲烧（10血，200mmol) 中的混合物用Ξ乙胺化66血，4.69mmol)处理。将混合物揽拌数分钟。加入N-(3-二 甲基氨基丙基）-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐（360mg，1.88mmol)和4-二甲基氨基化晚 (11.5mg，0. 0938mmol)。将反应混合物在室溫揽拌过夜。将反应用少量二氯甲烧稀释， 并用水洗涂。将有机层经无水硫酸钢干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗材料在反相液相 色谱仪/质谱仪（RP-HPLC/M巧纯化系统上纯化（梯度：水中的乙腊，25-95 %进行3. 6 分钟，循环时间为5min。使用30-58%乙腊的浅梯度0. 75-3. 6minW分离密切洗脱的杂 质。流速：1〇〇血/min。流动相添加剂：48mM甲酸锭。柱：In饥siT'ClS, 30x50mm, 5um粒 径），得到3.Omg(2 % ) 6-甲基-化晚-2-甲酸[5- (3-氯-苯甲酯基氨基）-双环巧.2. 1 ] 辛-1-基]-酷胺（实施例。和7.〇111旨(4% )N，N'-(双环化2.U辛烧-1,5-二基）双 (6-甲基化晚-2-甲酯胺）（实施例3)。分析数据列于表3中。
[0294] 实施例4 :6-甲基-化嗦-2-甲酸{5-[(化晚-2-幾基）-氨基]-双环化2. 1] 辛-1-基}-酷胺
[0295]
[0296] 表1的实施例4通过上文方案3的方法由中间体2制备，如下：
[0297] 将6-甲基-化嗦-2-甲酸巧-氨基-双环化2. 1]辛-1-基）-酷 胺.(nHaSmg，0. 05mmol)、化晚甲酸化2mg, 0. 05mmol)、苯并Ξ挫-1-基氧基Ξ(二甲基氨 基）鱗六氣憐酸盐（22. 4mg，0. 05mmol)和Ξ乙胺化02血，0. 15mmol)在二氯甲烧（2. 0血） 中的混合物在室溫揽拌2小时。在减压下浓缩混合物，并将所得残余物在反相液相色谱仪 /质谱仪（RP-HPLC/M巧纯化系统（梯度：乙腊的水溶液，19-95%进行3. 5分钟，循环时间 为5min。使用25-48 %乙腊的浅梯度0. 65-3. 2minW分离密切洗脱的杂质。流速：100血/ min。流动相添加剂：48mM甲酸锭。柱：Ιη饥siTClS, 30x50mm, 5um粒径（GLSciences))， 得到8mg(40% )所需产物。分析数据列于表3中。
[029引 W与实施例4类似的方法，由商业可得的6-甲基-化嗦-2-甲酸、3-氣-苯甲酸、 4-氣-苯甲酸和2-甲基-喀晚-4-甲酸W0. 05-2mmol反应规模制备表1的实施例5-8。 分析数据列于表3中。
[0299] 实施例98 :N-巧-(3-甲基苯甲酯胺基）双环化2. 1]辛-1-基）化嗦-2-甲酯胺
[0300]
[0301] 表1的实施例98通过上文方案3的方法由中间体9制备，如下：
[030引向中间体9(25mg，0.llmmol)和3-甲基苯甲酸（23mg，0. 15mmol)在DMF巧血）中的 溶液加入DIPEA(78mg，0. 66mmol)和HATU巧4mg，0. 15mmol)。在室溫揽拌1小时后，加入水 (20mL)，并将溶液用乙酸乙醋萃取（3x20mL)。将合并的有机层用盐水洗涂，经Na2S04干燥， 并在减压下浓缩。将所得残余物在反相液相色谱仪/质谱仪（RP-HPLC/M巧纯化系统（流动 相：4)101111畑4肥03的水溶液曲乙腊。梯度：32-37%6进行17111111，37-95%6进行0.2111111， 然后保持在95%B达4min，回到10%B进行0. 2min，于24min停止。流速：30血/min。柱： Shima化Uprc-ods20x250mm, 15m，两者顺序相连）上纯化，得到白色固体状10mg(27%) N-巧-(3-甲基苯甲酯胺基）双环化2. 1]辛-1-基）化嗦-2-甲酯胺。分析数据列于表3 中。
[0303]W与实施例98类似的方法，由商业可得的簇酸和胺中间体5、3、4、6、7、8、4、11、9 和 10W0.l-2mmol反应规模制备表 1 的实施例 9-19、20-34、35-48、49-51、52-64、65-79、 80-93、94-103和104-115,收率范围分别为20-80%。分析数据列于表3中。
[0304]W与实施例4类似的方法，由商业可得的簇酸和手性胺中间体22、21、23和25 W〇. 1-lmmol制备表1的实施例116-121、122-131、141-150和151-155,收率范围分别为 40-70%。任意指定运些化合物的绝对立体化学。分析数据列于表3中。
[0305] 实施例133. 6-甲基-化嗦-2-甲酸KlS，5R)-5-[(4-甲基-嚷挫-2-幾基）-氨 基]-双环化2. 1]辛-1-基}-酷胺
[0306]
[0307]向{(IR, 5S) -5-[ (6-甲基-R比嗦-2-幾基）-氨基]-双环[3. 2.]_]辛-1-基}-氨 基甲酸叔下醋（中间体13, 0. 050g，0. 14mmol)在1血二氯甲烧中的溶液加入4M氯化氨的 1,4-二嗯烧溶液（0.5血）。在室溫揽拌过夜后，在减压下浓缩反应混合物至干。将所得残 余物溶解于二氯甲烧（1.0血）中，加入4-甲基-1,3-嚷挫-2-甲酸（19.8mg，0. 14mmol)、 Ξ乙胺（7. 73^0. 56mmol)和苯并Ξ挫-1-基氧基Ξ(二甲基氨基）鱗六氣憐酸盐 化1.4mg，0. 14mmol)。在室溫揽拌1小时后，在减压下浓缩反应混合物。将所得残余物 在Combi尸/as々"系统（己烧/乙酸乙醋：100/0至10/90进行lOmin，然后己烧/乙酸乙 醋：10/90)上纯化，得到31mg(58% )6-甲基-化嗦-2-甲酸KlS，5R)-5-[(4-甲基-嚷 挫-2-幾基）-氨基]-双环化2. 1]辛-1-基}-酷胺。分析数据列于表3中。
[030引 W与实施例133类似的方法，W~0. 15mmol反应规模由中间体13和商业可得的 簇酸制备表1的实施例132、134和135,收率~60% ;由中间体12和商业可得的簇酸W~ 0. 15mmol反应规模制备表1的实施例136-140,收率~60%。分析数据列于表3中。
[0309] 实施例158和159 :6-甲基-化嗦-2-甲酸{(lR，5S)-5-[(化晚-2-幾基）-氨 基]-双环化2. 1]辛-1-基}-酷胺和6-甲基-化嗦-2-甲酸{(1S，5R) -5-[(化晚-2-幾 基）-氨基]-双环化2. 1]辛-1-基}-酷胺
[0310]
[0311] 将实施例 8化 37g, 1.OmmoU在手性HPLC系统（柱：30xl50mm0J(Chiral TechnologiesInc)。溶剂：EtOH/己烧：10/90.检测器：290nm下的UV。流速：14mL/min) 上拆分。前峰被任意指定为6-甲基-化嗦-2-甲酸KlR，5S)-5-[(化晚-2-幾基）-氨 基]-双环化2. 1]辛-1-基}-酷胺（实施例158, 56mg)，且后峰被任意指定为6-甲基-化 嗦-2-甲酸KlS，5R)-5-[(化晚-2-幾基）-氨基]-双环化2.U辛-1-基}-酷胺（实 施例 159,81mg)。
[0312] 类似地，分别通过对实施例8拆分获得表1的实施例156 (31mg)和157 (33mg)，通 过对实施例6拆分获得表1的实施例160 (90mg)和161 (90mg)，且通过对实施例99拆分获 得表1的实施例162巧Omg)和163 (66mg)。分析数据列于表3中。 惦1引实施例164:6-甲基-N-{5-[(化晚-2-基氨基）幾基]双环化2.U辛-1-基} 化嗦-2-甲酯胺
[0314]
[0315] 表2的实施例164通过上文方案4的方法由中间体26制备，如下：
[0316] 向5-化-甲基化嗦-2-甲酯胺基）双环化2. 1]辛烧-1-甲酸（中间体 2G,lOOmg, 0. 35mmol)和邮晚-2-胺（39mg, 0. 41mmol)在DMF巧血）中的溶液力日入 HATU(158mg，0. 41mmol)和DIPEA(0. 5血）。在室溫揽拌1小时后，加入水（20血），并将溶 液用乙酸乙醋萃取（3x20mL)。将合并的有机层用盐水洗涂，经Na2S〇4干燥，并在减压下浓 缩。将所得残余物通过柱色谱法（硅胶，石油酸/乙酸乙醋：2/1)纯化，得到白色固体状 35mg(27%)6-甲基-N-{5-[(化晚-2-基氨基）幾基]双环化2.1]辛-l-基}化嗦-2-甲 酷胺。分析数据列于表3中。
[0317]W与实施例164类似的方法，由中间体26和商业可得的杂芳基胺W~ 0. 3-0. 6mmol反应规模制备表2的165-168。分析数据列于表3中。
[031引使用实施例98的制备中所述的程序，分别由商业可得的甲酸和胺中间体31、27、 28、29和30合成表2的实施例169-177、178-182、183-185、186和187。分析数据列于表3 中。
[0319] 表1.式（I-A)化合物
[0320]
[0334] 表3 :式I化合物的分析数据
[0335]
防3閲4.本发巧化合物的药理学评估
[0354] 本发明化合物已在体外与体内测试，且可在下文所述的测定中在体外和体内被测 试。
[03财体外测定
[0356] 放射性配体结合测定
[0357]使用如[J.A.0'Brien等人MolI^armacol.，2003, 64, 731-740]中所述但略加 修改进行结合测定，修改包括使用结合至甲基-5-(2-化晚基乙烘基）化晚（M阳巧结合位 置的放射性配体代替[3田-MPEP。简言之，解冻后，将膜匀浆物再悬浮于50mMTris-HCl与 0. 9%化Cl结合缓冲液（pH7.4)中直至最终测定浓度为每孔20μg蛋白质供用于放射性 配体过滤结合。解育包括5nM放射性配体、膜和缓冲液或不同浓度的化合物。将样品在室 溫下在振荡下解育60分钟。当使用该放射性配体时，W10μΜ冷MPEP确定非特异性结 合。解育后，经GF/C过滤器（在0.25%聚乙締亚胺（ΡΕΙ)中预先浸泡）过滤样品，并且然 后使用Tomtec⑩化rvester%⑩MachIII细胞采集器（Tomtec,化mden，CT)W0.5毫 升冰冷50mMTris-肥1(抑7. 4)洗涂4次。从抑制曲线获得ICs。值，且根据化化eng和 W.比PrusoffBiochem.I^armacol. 1973, 22, 3099-310引中所述的Cheng和Prusoff方程 Ki=ICw/(l+[L]/Kd)计算Ki值，其中[L]为放射性配体浓度，且Kd为其在受体处的解离 常数，自饱和等溫线获得。本发明化合物的Ki值<10μΜ。代表性化合物的Ki值列于表4 中。 防35引 测试阴忡或阳忡别构活忡的钩務动测定
[0359] 大鼠代谢型谷氨酸受体5 (rmGluR5)的cDNA和人类代谢型谷氨酸受体5OimGluRS) 的cDNA由S.化kanishi化yotoUniversity,Kyoto,Japan)慷慨赠送。将rmGluRS或hmGluR5稳定表达于肥K293细胞系中，且在37°C、5%C02下在具有补充物（10%胎牛血 清、4mM谷氨酷胺、100单位/血青霉素（penicillin)、100μg/血链霉素（streptomycin) 和0.75mMG1418)的达尔伯克改良伊格尔培养基值u化ecco'sModifiedEagleMedium， DMEM)anvitrogen，CarlslDad，CA)中生长。在测定前24小时，将细胞接种于涂有聚-D-赖 氨酸的384孔黑色壁微量滴定盘中。临测定前，抽吸培养基且在5%C02、37°C下化含3μΜ Fluo-4/O.Ol%氧化异丙締酸（pluronicacid)的测定缓冲液（汉克氏平衡生理食盐水 溶液化ank'sBalancedSalineSolution,皿SS)) :150mMNaCl、5mMKCl、lmMCaClz'lmM MgClz加20mMN-2-径基乙基赃嗦-Ν' -2-乙横酸（肥阳巧（pH7. 4)、0. 1%牛血清白蛋白 度SA)和2. 5mM丙横舒）对细胞装载染料（每孔25μL)持续1小时。弃去过量染料后，在测 定缓冲液中洗涂细胞且W等于每孔30μL的最终体积分层。在巧光成像板读取器（FLIPR) (Mole州larDevices,Sunnyvale,CA)中W488nm的激发波长及500至560nm的发射范围监 测基础巧光。调整激光激发能量，使得基础巧光读数为约10,000个相对巧光单位。在待测 试化合物存在下WEC2。或EC8。浓度的谷氨酸（皆稀释于测定缓冲液中）刺激细胞，且在室 溫下经3分钟时间W规定时间间隔（暴露=0.6秒）测量相对巧光单位。从所有样品减去 自阴性对照组获得的基础读数。计算各孔的最大巧光变化。通过非线性回归（希尔方程） 化illequation)分析由最大巧光变化获得的浓度-应答曲线。若化合物在ECs。谷氨酸 应答中产生浓度依赖性抑制，可从运些浓度应答曲线可鉴别出阴性调节剂。在上述测定中 使用1111161111?5测试代表性实施例，且化1?1?最大抑制在约70%至约100%范围内，而化1口1? ICs。在约0. 32nM至约1μΜ范围内。代表性化合物的IC5。值列于表4中。
[0360] 若化合物在ECw谷氨酸应答中产生浓度依赖性增强，则由运些浓度-应答曲线可 鉴别出阳性调节剂（PAM)。
[0361] 基于来自放射性配体测定和巧移动测定的结果可鉴别出静止别构调节剂（SAM)。 若基于放射性配体测定化合物主动结合于受体的别构位点，但在巧动员测定中无可测量的 固有功效，则化合物为SAM。
[0362] 表4 :代表性化合物的体外活性
[0363]
[0364] 体内测定
[036引 类似于[K.Njung，e,K.和S.L.Handl巧，Pharmacology,Biochemistryand Behavior, 1991,38, 63 - 67]中所述的小鼠大理石埋葬（mousemarblebu;rying，mMB)测定 可测试式（I)化合物的体内抗焦虑作用。
[0366]也可通过[N.A.Moore等人BehaviouralPharmacology. 1994, 5, 196-202]中所述 Geller-Seifter冲突检验的修改形式来测试体内抗焦虑作用。
[0367]如Vogel等人[Psychopharmacologia, 1971, 21, 1-7]所述的"沃格尔冲突检验 (VogelConflictTest)"可用于检测式（I)化合物的抗焦虑活性，因为抗焦虑剂增加惩罚 性饮水。
[036引 也可使用如[Wa化er和Davis.Biol.Psychiatry, 1997, 42, 461-471]中所述的光 增强惊吓（li曲t-enhancedsta;rtle，LE巧反射法体内评估本发明化合物的抗焦虑作用。
[0369] 也可使用运些其他测试评估抗焦虑样特性：（1) [S.E.File和P.Seth化ropean JournalofPharmacology, 2003. 463, 35-53]中所述的社会互动，及（2) [S.Μ.Korte和 S.F.DeBoerliuropeanJournalofPharmacology, 2003, 463, 163 - 17引中所述的高架十 字迷宫。
[0370] 可体内评估式（I)化合物的抗抑郁作用。可使用类似于[J.F.化yan，等人 NeuroscienceandBiobehavioralReviews2005, 29, 547 - 569]中所述的强迫游泳测试 测量抑郁样作用的评定。
[0371] 也可在FST和社会互动测试中使用FlindersSensitiveLine(FSL)大鼠评估 抗抑郁作用，如[D.Η.Overstreet和G.GriebelPharmacolBiochemBehav. , 2005, 82, 1 : 223-227]所述。
[037引也可使用ΗΡΑ轴反馈降低的范例值avid等人，2007,圣地亚哥SFN会议（SFN meetinginSanDiego))评估抗焦虑和抗抑郁作用。此模型基于在饮用水中长期递送皮质 酬，在小鼠中引起焦虑和抑郁样行为。
[0373] 可通过如圧.H.Lee等人Chin.J.Physiol.，1992, 35, 4 :317-36]中所述通 过测量大鼠中MPTP的神经毒性评定帕金森氏病（PD)。此外，动物中实验诱发的纹状 体DA消耗为有效帕金森氏症模型，如[W.SchultzProg.化urobiol.，1982, 18,