>[01化]1)细胞接种：取对数生长期的细胞，用膜酶消化后分散成单个细胞，计数，将细胞 悬液调整至4. 0X104个/mU每孔50μL接种于已预先加好100μL/孔的培养基的96孔 板中，使接种的细胞数量为2. 0Χ1〇3个/孔。细胞贴壁后，分别加入含有不同浓度化合物 的新鲜培养基，使化合浓度分别是1. 25μΜ、2. 5μΜ、3. 75μΜ、5μΜ、10μΜ、20μΜ，每个浓度 设6个复孔，操作时避光，并调整各浓度所含DMSO含量一致。 阳106] 2)药物解育 7化后，每孔加入20μLMTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5- diphenyltetrazoliumbromide,Sigma;5mg/mL)，置解箱解育地后去上清，每孔加 110μL DMSO溶解，用酶标仪测定在490nm下的吸光度值。根据公式：抑制率=[(A日7咖照孔-A日70给药 孔）Aw。对胁L]X100%，计算各浓度的抑制率，结果见表1和表2。 阳107] 表1化合物对人肝癌细胞株邸L7402的抑制作用 阳10引
[0109] 表1实验结果表明，合成的気代化合物Dl，D4,D6和D7对人肝癌细胞株BEL7402 具有优于索拉非尼的活性。
[0110] 表2化合物对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人肾癌细胞株ACHN的抑制作用 阳111]
[0112] 表2实验结果表明，合成的気代化合物D1，D6对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231具有 优于索拉非尼的活性。合成的気代化合物D1对人肾癌细胞株ACHN具有优于索拉非尼的活 性。
[0113] 实施例11:体内药代动力学实验
[0114] 实验动物：Wistar大鼠20只，雄性，体重200g左右，10~12周龄。
[0115] 给药溶液的配制：（1)索拉非尼及其気代化合物混悬液的配制：称取适量化合物 适量，将化合物用少量的0. 5%的CMC-Na溶解并研磨，直至研磨均匀后用0. 5%CMC-Na定 容至需要的浓度后，超声均匀。大鼠给药剂量为3mg'kg1，配制混悬液的浓度为Img·血1。 (2)索拉非尼及其気代化合物静注药液的配制：称取适量索拉非尼及其気代化合物，溶于DMF溶液中，配制浓度为4mg·血1，给药剂量为3mg·kg1。
[0116] (1)单次口服索拉非尼及其気代化合物混悬液：Wistar大鼠5只，雄性。给药剂量 分别为3mg，kg1，给药前禁食12h，给药后4h开始进食，期间自由饮水。实验时单次灌服待 测化合物混悬液，于给药前和给药后5，15，30min，1，2，4，6，8，12，24，36，4化由眼眶静脉丛 取血。每次取血约0. 5血，肝素钢抗凝，轻轻混匀，4°C低溫8000r·min1离屯、lOmin后取上 清，置于-20°C冰箱中，待测。
[0117] (2)血浆样品预处理：血浆样品100μ以加入200μL混合内标工作溶液（配制在 100%的乙腊溶液中，浓度为5ng·血1的普糞洛尔），充分混合均匀，于4°C下W1400化pm 转速离屯、15min，取上清溶液80μL进样5μL用LC-MS/MS进行分析。图3和表3为大鼠 口服给药的药代动力学实验。 阳1化]表SWistar大鼠口服D1，D4,D6和sorafenib(3mg·kg1)药动学参数综合比较表阳119]
[0120] 表3实验结果表明，新合成的気代化合物D1，D4和D6具有与索拉非尼类似的药代 动力学性质，但D1的AUC值明显优于索拉非尼。 阳121] W上实施例仅用W说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实 例对本发明进行了详细的说明，对本领域的普通技术人员来说，依然可W对前述实施例所 记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而运些修改或替换，并 不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
【主权项】
1. 氘代双芳基脲类化合物，其特征在于其结构通式如式（I)所示：式中取代基R1- R7均为氘或氢；R L R7中至少一个取代基为氘。2. 根据权利要求1所述的氘代双芳基脲类化合物，其特征在于所述氘代双芳基脲类化 合物为Dl、D2、D3、D4、D5和D6,其结构式如下所示：3. 合成权利要求1所述氘代双芳基脲类化合物的含氘中间体，其特征在于：其具有通 式（II)所示结构：其中取代基R1- R3均为氘或氢，R4和R5均为氘。4. 根据权利要求3所述的合成所述氘代双芳基脲类化合物的含氘中间体，其特征在 于：所述含氘中间体具体为： 4-(2, 6-二氘-4-氨基苯氧基）-，甲基吡啶-2-甲酰胺 和4- (2, 6-二氘-4-氨基苯氧基）甲基吡啶-2-三氘甲酰胺。5. 根据权利要求1所述的氘代双芳基脲类化合物的制备方法，其特征在于制备方法具 体包括以下步骤： (1) 4-氯吡啶-2-甲酸甲酯发生取代反应，形成酰胺化合物a或含氘酰胺化合物b; 所述酰胺化合物a或含氘酰胺化合物b结构式如下：(2) 所述酰胺化合物a或含氘酰胺化合物b再发生醚化反应，形成醚类化合物c或含氘 醚类化合物d、e、f; 所述醚类化合物c或含氘醚类化合物d、e、f结构式如下：(3) 所述醚类化合物c或含氘醚类化合物d、e、f与4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯基酯 或含氘4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯基酯发生缩合反应，形成所述氘代双芳基脲类化合物。6. 根据权利要求5所述的氘代双芳基脲类化合物的制备方法，其特征在于所述步骤 (1) 中酰胺化合物a或含氘酰胺化合物b的制备方法为：将4-氯吡啶-2-甲酸甲酯与甲胺 进行取代反应，得到酰胺化合物a;或将4-氯吡啶-2-甲酸甲酯与氘代甲胺进行取代反应， 得到含氘酰胺化合物b。7. 根据权利要求5所述的氘代双芳基脲类化合物的制备方法，其特征在于所述步骤 (2) 中醚类化合物c或含氘醚类化合物d、e、f的制备方法为： 将所述酰胺化合物a与对氨基苯酚进行缩合反应，得到醚类化合物c; 或将所述含氘酰胺化合物b与对氨基苯酚进行缩合反应，得到醚类化合物d; 或将所述酰胺化合物a与含氘对氨基苯酚进行缩合反应，得到醚类化合物e; 或将所述含氘酰胺化合物b与含氘对氨基苯酚进行缩合反应，得到醚类化合物f。8. 权利要求1所述的氘代双芳基脲类化合物以及药学上可接受的盐在制备抗肿瘤的 药物中的应用。9. 根据权利要求8所述的氘代双芳基脲类化合物以及药学上可接受的盐在制备抗肿 瘤的药物中的应用，其特征在于所述药学上可接受的盐包括无机酸和有机酸衍生的盐； 所述无机酸和有机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对 甲苯磺酸、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀 酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯基乙酸和杏仁酸。10.根据权利要求8所述的氘代双芳基脲类化合物以及药学上可接受的盐在制备抗肿 瘤的药物中的应用，其特征在于所述肿瘤包括肝癌、肺癌、肾癌、甲状腺癌、结肠癌、胃癌、胰 腺癌，乳腺癌和黑色素瘤。
【专利摘要】本发明提供了氘代双芳基脲类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤的药物中的应用，该类化合物具有通式（I）的结构，其合成方法包括：以4-氯吡啶-2-甲酸甲酯为原料，与甲胺或氘代甲胺进行取代反应后，再与对氨基苯酚或氘代对氨基苯酚进行缩合，然后与4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯基酯或氘代4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯基酯反应制得氘代双芳基脲类化合物。经实验证明，本发明提供的氘代双芳基脲类化合物具有治疗肿瘤的作用，本发明还提供了研究与开发所述化合物的抗肿瘤药物的应用。
【IPC分类】A61K31/44, C07D213/81, A61P35/00
【公开号】CN105348186
【申请号】CN201510665877
【发明人】李文保, 李峰, 张良, 赵建春, 程贺娟, 管华诗
【申请人】青岛海洋生物医药研究院股份有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年10月15日