甘松新酮类化合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物提取物及其制备方法与应用，尤其是甘松新酮类化合物及其制备 方法与应用。
【背景技术】
[0002] 5-羟色胺转运体（SERT)是一种对5-HT有高度亲和力的跨膜转运蛋白，约含630 个氨基酸残基，其编码基因（SLC6A4)分别位于7号和11号染色体上，由跨度约为35kb的 14个外显子组成。SERT蛋白包含12-13个跨膜区，N端及C端位于胞质中，靠近N端处有 cAMP依赖性蛋白激酶结合位点，在第三与第四跨膜区之间有一位于细胞外的环状部分，是 N-连接的糖基化位点。
[0003] SERT属于Na+/Cl依赖型转运蛋白，主要位于5-HT能神经元。SERT从神经突触 间隙中重新摄取5-HT进入突触前神经元，直接影响突触间隙5-HT浓度，改变突触后受体介 导信号的量和作用持续时间。此外，发现SERT在胎盘组织、骨髓、肾、肺、心、肾上腺、肝、甲 状旁腺、甲状腺、胰腺和小肠等器官亦有分布，提示SERT参与多种生理功能。
[0004] SERT是转运5-HT的重要分子，与情绪、食欲、睡眠、记忆、学习等许多生理心理功 能相关，SERT及5-HT表达改变可引起焦虑、抑郁、强迫症、恐惧症，甚至精神分裂症，并与药 物成瘾性密切相关；此外，发现SERT在胃肠道功能性疾病中扮演了重要角色，如临床上慢 传输性便秘、肠道易激综合征、功能性腹胀等胃肠功能性疾病，采用针对SERT的抗抑郁药、 抗焦虑药物取得了疗效。
[0005] 甘松（Nardostachys chinensis Batal.)是败酱科甘松属植物，具有理气止痛， 开郁醒脾；外用祛湿消肿的功效，甘松已经报道的生物活性包括（1)作用于神经系统，如 抗抑郁、镇静和抗惊厥、抗帕金森和记忆恢复；（2)作用于心血管系统，如降血压、抗心律失 常、抗心肌缺血、抗心血管损伤；（3)作用于呼吸系统，如增强耐缺氧能力；(4)抑菌；（5)抗 肝损伤等。甘松主要成分之一甘松新酮，也是甘松特有的化学成分，具有降血压、抗癫痫、中 枢抑制作用、抗抑郁、促神经生长和抗肿瘤等多种生物活性。甘松中存在一系列甘松新酮衍 生物，包括环氧化产物、过氧五元环开环产物等，特别是少量或微量成分鲜有报道，生物活 性及相关机制还有待进一步发现。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题在于提供甘松新酮类化合物一一甘松新酮及其衍生 物，具体为：甘松新酮、1 (10)-环氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双酮A和甘松过氧酮A。
[0007] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述甘松新酮及其衍生物的制备方法。
[0008] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述甘松新酮及其衍生物的应用。
[0009] 为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
[0010] 甘松新酮及其衍生物，为甘松新酮、1 (10)-环氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双 酮A和甘松过氧酮A，具有下述结构式（I)式：
[0012] 其中，A:甘松新酮[I (10)-en_9-0x0-7 β，ll-cycloperoxo-] ;B: I (10)-环 氧甘松新酮[I(10)-epoxy-9-0x0-7β， 11-cycloperoxo-] ;C:甘松新酮二醇 [1(10)111-9-0叉0-7 0，11-(1;[01-];〇:甘松双酮4[1(10)-611-7,9-(1;[0叉0-11-01-]出：甘松 过氧酮 A[1 (10)，8 (9) -diene-7-0x0-9-hydroperoxy-ll-0l-] 〇
[0013] 优选的，上述甘松新酮及其衍生物，其物理化学和波谱性质为：
[0014] 甘松新酮（nardosinone，A)，无色结晶（乙酸乙酯）。UV(MeOH) λΜχ: 197、216、251、 288、334nm;CD(c 0.05, MeOH) λ (Δ ε) :211(-0. 57)、240(+0. 56)、280(-0. 36)、343(+0. 18) nmjH-NMlUCDClh^OMHzhSH 7.03(lH，dd，J = 2.8,4.8Hz，H-l)，2.22,2.31(2H，m，eac h，H-2)，I. 53 (2H，m，H-3)，I. 93 (1H，m，H-4)，2. 92 (1H，d，J = 9. 6Hz，H-6)，4. 89 (1H，m，H-7 )，2. 87 (1H，dd，J = 7. 6, 18. 4Hz，H-8 a )，2. 63 (1H，dd，J = I. 6, 18. 8Hz，H-8 β )，I. 37 (3 H，s, 12-CH3)，I. 17 (3H, s, 13-CH3)，I. 12 (3H, s, H-CH3)，I. 01 (3H, d, J = 6. 8Hz, 15-CH3); 13C-NMR(O)Cl3, 100MHz) : δ c 137. 8 (C-I)，25. 9 (C-2)，25. 8 (C-3)，33. I (C-4)，38. 5 (C-5)，59 ? 7 (C-6)，78. I (C-7)，40. 0 (C-8)，196. 5 (C-9)，140.1 (C-IO)，85. I (C-Il)，22. 2 (C-12)，23. 9 (C-13)，26. 9 (C-14)，16. 20 (C-15)。
[0015] I (10) -环氧甘松新酮[I (lO)-epoxynardosinone，B]，无色结晶（乙酸乙 酯）。UV(MeOH) λ随：197.0nm; [a]f +1.27 (c 1.0, MeOH) ;CD(c 0.05, MeOH) λ (Δ ε )： 196. 5 (-1. 33) ^ 2 15. 5(-2. 42) nm ；(-)-ESI-MS :m/z 265. 25 [Μ-Η]、 (+)-ESI-MS:m/z 267. 33[Μ+Η]+;氢谱、碳谱核磁数据见【具体实施方式】部分表1和表2。
[0016] 甘松新酮二醇（nardosinonediol, C)，无色结晶（二氯甲烧）。UV(MeOH) λΜΧ: 197、239、333nm ;CD(c 0· 05，Me0H) λ (Δ ε ) :233(-0. 29)、241(-0. 27)、282(-0· 80)、 SSTH-IDnm51H-NMR(DMSO-C^eOOMHz)=SH 6.60 (lH，d，J = 9·1Ηz，Η-1) ,1.46 (lH，t，J =15.7,8. 3Hz，H-2) ,2.16 (lH，dd，J = 12.1,3. 9Hz，H-3) ,2.21 (lH，m，H-4) ,2.21 (lH，d ，J = 12.8Hz，H-6)，4.44(1? m，H-7)，2.64(1? d，J = 12.1Hz，H-8)，0.90(3? s，H-12)， 1.22(3H，s，H-13)，0.92(3H，s，H-14)，1.31(3H，d，J = 4.8Hz，H-15) ;13C-NMR(DMS0-d6，10 0MHz) : δ c 135. 2 (C-I)，26. 0 (C-2)，25. 0 (C-3)，32. I (C-4)，39. 9 (C-5)，52. 7 (C-6)，66. 4 ( C-7)，45. 6 (C-8)，199. 3 (C-9)，142. 3 (C-10)，77. 5 (C-Il)，16. 2 (C-12)，30. 2 (C-13)，25. 6 (C-14)，35. 2 (C-15)〇
[0017] 甘松双酮A (nardosinodione A, D)，无色油状物（乙酸乙酯）。UV (MeOH) λ nax: 198. 0、295. 5nm ; [ α ] +4. 67 (c 0.1 , MeOH) ；CD (c 0.05, MeOH) λ (Δ ε ) :203. 0(-0· 67)、209(-0· 78)、225· 0(-0· 14)、245· 0(-0· 39)、293· 5(+1. 57)、 329.0(-1.51)nm;(-)-ESI-MS m/z 249·25[Μ-Η]、（+)-ESI-MS:m/z 251·37[Μ+Η] + ;氢谱、碳 谱核磁数据见【具体实施方式】部分表1和表2。
[0018] 甘松过氧酮A (9-hydroperoxynardostachone A, E)，淡黄色油状物（乙酸乙 酯）〇 UV(MeOH) λ_:197·5、269·5ηπι ; [α]$ +55.33 (c 0.3，Me0H) ;CD(c 0.05，Me0H) λ (Δ ε ):279. 5(+1. 13)、326. 5(-0. 91)nm;(-)-ESI-MSm/z 265. 19[M-H]、（+)-ESI-MS m/ z 267. 36[M+H]+;氢谱、碳谱核磁数据见【具体实施方式】部分表1和表2。
[0019] 上述甘松新酮及其衍生物，归属于nardosinone-型倍半砲，母核上7,11-位形成 五元过氧环，1，10-位形成双键或发生环氧化（A和B);或者五元环打开，11位羟基取代， 7位羟基或酮羰基取代，1，10-位形成双键，9位酮羰基或烯醇过氧羟基取代（C、D和E)，其 中，7、11-位羟基可被取代基酰化、酚醚化、酰胺化成酯、酚醚或含氮化合物；9-位过氧羟基 具有有机过氧酸的性质。其化学结构特点是：土青木香烷型倍半萜母核上7,11-位形成五 元过氧环，1，10-位形成双键或发生环氧化；或者11位羟基取代，7位羟基或酮羰基取代，1， 10-位形成双键，9位酮羰基或烯醇羟基取代。
[0020] 上述甘松新酮及其衍生物的制备方法，具体步骤如下：
[0021] (1)甘松根茎每20kg用70% (v/v)乙醇浸提3次，每次48小时，合并提取液，减 压浓缩，得粗提物浸膏；然后用70% (v/v)乙醇热提上述药渣3次，每次2小时，合并提取 液，减压浓缩，再次得粗提物浸膏；合并两次粗提物得总浸膏；
[0022] (2)所得粗提物总浸膏，经水分散后，分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇 依次萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水层；
[0023] (3)将石油醚部位经硅胶柱色谱（100-200目拌样硅胶与200-300目柱硅胶重量比 为4:33)，石油醚：乙酸乙酯（体积比）=100:0(100:0指100%石油醚洗脱情况）-100:50 溶剂系统梯度洗脱，得22个流份Fr