术、免疫印记技术等。③单克隆抗体的高特异性和 单一生物学功能，经改造人源化并与药物偶联后可免疫靶向治疗，此外，也可用于放射免疫 诊断等。
[0017] 本发明提供的杂交瘤细胞株T- II，于2015年8月24日保藏于中国典型培养物保 藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC-C2015140。
【附图说明】
[0018] 图1为TRPC3合成肽序列图谱； 图2为TRPC3单抗纯化的SDS-PAGE结果图，其中：1，2, 3表示三批样品，55KD和25KD 分别为IgG的重链和轻链。
【具体实施方式】
[0019] 以下通过【具体实施方式】的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限 制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本 发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0020] 实施例1、TRPC3抗原多肽设计 表1 TRPC3抗原多肽
将上述TRPC3抗原多肽的σ-螺旋、转角、亲水性以及抗原指数进行检测，其检测结 果为：本发明提供的TRPC3抗原多肽的抗原指数预测0. 995,表露性预测值1. 000,柔韧性预 测值1. 003, β -转角预测值1. 080, B细胞表位预测较佳。即所述TRPC3抗原多肽的σ-螺 旋、转角、亲水性以及抗原指数均符合B细胞表位分析结果，其中TRPC3抗原多肽的抗 原指数优势显著，结果见图1所示。
[0021] 实施例2、抗TRPC3的单克隆抗体的制备 1、试验对象：选取4只BALB/c健康小鼠，鼠龄在6~8周。
[0022] 2、试验方法： (1) TRPC3抗原肽合成 根据实施例1设计的抗原多肽，与KHL偶联，免疫BALB/c健康小鼠，接着采用间接 ELISA法测定小鼠血清效价，选择免疫效价高者进行加强免疫后准备细胞融合； (2) 培养骨髓瘤细胞 将骨髓瘤SP2/0细胞株（由暨南大学生命科学院免疫重点实验室赠送)用10%胎牛血清 的RPMI-1640培养液培养，传代3代后收集细胞，计算细胞数量，以备细胞融合使用；选用8 周左右的Balb/c小鼠，制备脾细胞悬液，作为培养细胞备用； (3) 细胞融合 取步骤（1)得到的加强免疫的小鼠，首先进行眼球放血，收集血清作为阳性对照，然后 拉颈处死小鼠，取小鼠脾细胞培养，获得免疫小鼠脾细胞悬液，将脾细胞与步骤（2)得到的 骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合，所述脾细胞与骨髓瘤细胞的体积比为5:1，然后加入96 孔培养板中，选择HAT作为培养基培养，观察生长情况，当细胞克隆长满覆盖大于10%孔底 时测定上清中单抗分泌阳性者为保留阳性孔，将进一步经过有限稀释法进行亚克隆筛选； (4) 单克隆抗体的制备 采用小鼠腹腔接种法制备单克隆抗体，先用液体石蜡对小鼠进行腹腔注射，一周后将 杂交瘤细胞株T- II接种到小鼠腹腔中，正常饲养7-10天后收集小鼠的腹水； (5) 单克隆抗的纯化 将步骤（4)得到的3批小鼠腹水使用正辛酸-硫酸铵法纯化，SDS-PAGE电泳鉴定重链 和轻链；同时采用ELISA法分析抗体的类型及其亚类，其类型为IgG，亚类为IgGl。
[0023] 3、试验结果： 试验结果如表2和图2所示。其中，抗TRPC3的单克隆抗体含量如表2所示，抗TRPC3 的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图如图2所示。
[0024] 表2杂交瘤T- II培养上清液及小鼠腹水中抗TRPC3的单克隆抗体的含量
【主权项】
1. 一种TRPC3抗原多肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO: 1所示。2. -株杂交瘤细胞株T-II，其特征在于，由权利要求1所述的TRPC3多肽与马来酰胺 活化的匙孔血蓝载体蛋白KLH偶联，经脱盐纯化后作为免疫原与佐剂混合免疫小鼠，取免 疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，培养，经ELISA检测筛选，得杂交瘤细胞株Τ-II，保藏编 号为C2015140。3. -种抗TRPC3的单克隆抗体，其特征在于，由权利要求2所述的杂交瘤细胞株Τ-II 分泌得到，所述抗TRPC3的单克隆抗体的制备方法包括以下步骤： S1将合成后的TRPC3抗原多肽与马来酰胺活化的匙孔血蓝载体蛋白KLH偶联，经脱盐 纯化后作为免疫原与佐剂混合免疫小鼠； S2取步骤S1得到的免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，培养，经ELISA检测技术筛 选，建立杂交瘤细胞株，得杂交瘤细胞株T-II; S3将步骤S2得到的杂交瘤细胞株Τ-II分泌的单抗采用超滤离心管（15ml，50KD)浓缩 后再进行辛酸-硫酸铵沉淀法纯化，即得。4. 权利要求3所述的抗TRPC3的单克隆抗体在制备与TRPC3分子表达相关的疾病的诊 断试剂中的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述与TRPC3分子表达相关的疾病为动脉 粥样硬化。
【专利摘要】本发明公开了TRPC3抗原多肽和抗TRPC3的单克隆抗体。该TRPC3抗原多肽由15个氨基酸组成，具体序列如SEQ？ID？NO:1所示。所述抗TRPC3的单克隆抗体的制备方法为：以TRPC3抗原多肽偶联KLH后作为抗原，免疫小鼠，筛选得到一株杂交瘤细胞株T-Ⅱ，由杂交瘤细胞株T-Ⅱ分泌得到抗TRPC3的单克隆抗体。该抗TRPC3的单克隆抗体能够特异性识别各种组织细胞所表达的TRPC3通道蛋白，可用于各组织细胞的TRPC3表达研究，借以监测与TRPC3分子相关的疾病。因此，抗TRPC3的单克隆抗体可以用于制备与TRPC3分子表达相关的疾病的诊断试剂中的应用。CCTCC C201514020150824
【IPC分类】C07K16/18, C07K7/08, C12N5/20, G01N33/68, C12R1/91, G01N33/577
【公开号】CN105399798
【申请号】CN201510820670
【发明人】张萃, 刘晓波, 郭雨青, 邹琴
【申请人】广东药学院
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年11月24日