测26种β-受体激动剂，通量明显高于同类型的其 他方法，回收率高，精密度好。同时采用分散式固相萃取一步净化，没有复杂的淋洗、洗脱步 骤，操作简单，萃取剂价格低廉，成本低于现有的固相萃取柱净化法，而且使用有机试剂量 少，有利于保护实验人员的健康。
【具体实施方式】
[0029] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0030] 为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例对本发明所述检测方法进行详细说 明。其中，特布他林、沙丁胺醇、齐帕特罗、西马特罗、西布特罗、羟苄羟麻黄碱、克伦赛罗、溴 代克伦特罗、克伦普罗、氯丙那林、莱克多巴胺、妥布特罗、克伦特罗、羟甲基克伦特罗、溴布 特罗、班布特罗、马布特罗、苯氧丙酚胺、马喷特罗、喷布特罗、苯乙醇胺Α、沙美特罗、克伦潘 特罗、福莫特罗、菲诺特罗、异丙肾上腺素26种β-受体激动剂标准品，纯度多97.0%。氮 气：纯度99. 99%。甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯。其它试剂如无特别说明均为分析纯，实验 用水符合GB/T6682中一级水的规定。
[0031] 实施例1、
[0032] 1、试剂配制
[0033] 4v/v%氨水乙腈溶液：取4mL氨水于100mL容量瓶，用乙腈定容至100mL。
[0034] 0· 1 %甲酸水溶液：取100mL纯水，加入0·lmL甲酸。
[0035] β-激动剂贮备液配制：分别精密称取26种β-激动剂类药物对照品，用甲醇配 成26份，浓度各为lmg/mL标准贮备液，-20°C保存。
[0036] 混合对照工作液：分别吸取26种β-受体激动剂贮备液，置棕色储液瓶中，用甲醇 稀释成浓度为2ppm混合对照液，-20°C保存。
[0037] 混合对照工作液（内标）：分别吸取4种氘代β-受体激动剂贮备液，置棕色储液 瓶中，用甲醇稀释成浓度为2ppm混合对照液，-20°C保存。
[0038] 2、仪器和设备
[0039] 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾电离源；氮吹仪；离心机：最大转速大于 lOOOOrpm;滤膜0. 22μπι水系；天平：感量为0. 0001g和0. 01g各一台；旋涡振荡器；超声波 清洗仪；恒温振荡机。
[0040] 3、检测方法
[0041] 3. 1、采样和试样制备
[0042] 抽取有代表性的样品，用四分法缩减取100mL，过0. 4_孔径的分析筛，混匀，装入 试剂瓶中，避光，-20 °C储存备用。
[0043] 3·2、提取
[0044] 取样品2mL(精确至0.OlmL)，加入10mL4v/v%氨水乙腈、8g无水硫酸钠、2g氯化 钠祸旋震荡混勾后放入恒温振荡机振荡20min，超声5min，4°C，8000rpm，离心5min，取2mL 上层清液。
[0045] 3. 3、净化
[0046] 净化管中加入25mgC18和25mgPSA，取2mL提取的上层清液于净化管中，涡旋 2min，4°C、10000rpm离心，10min，45°C氮吹至干，用lmL甲醇-〇· 1% 甲酸水溶液（l:9(v/v)) 溶解，过0.22μm滤膜。
[0047] 3. 4、液相色谱-串联质谱测定
[0048] 液相色谱条件：
[0049] a)色谱柱：Z0RBAXEclipseXDB-C18 色谱柱（2. 1X100mm, 2. 7μm)
[0050] b)流动相：1 %。甲酸水溶液㈧、1 %。甲酸乙腈溶液（B)
[0051] c)流速：0· 2mL/min
[0052] d)进样体积：5yL
[0053] e)柱温：3(TC
[0054] f)洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为8%，时间程序见表1。
[0055] 表1梯度洗脱程序
[0056]
[0057] 质谱条件
[0058]a.分析仪器：LCMS_8〇40
[0059] b.离子源：ESI(+)
[0060]c.离子源接口电压：3. 5kV
[0061] d.雾化气及干燥气：氮气3. 0L/min、20L/min
[0062]e.碰撞气：氩气
[0063] f.脱溶剂管温度：250°C
[0064] g.加热模块温度：450°C
[0065] h.检测器电压：1.lkV
[0066] i.扫描模式：多反应监测
[0067] 4、实验结果：
[0068] 按照上述方法检测猪尿中26种β-受体激动剂在5μg/kg、10μg/kg和10μg/kg 三个浓度上的添加试验的回收率及精密度，结果如下表2所示。
[0069] 表2回收率及精密度
[0070]
[0071]
[0072] 由表2结果可见，在5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg三个浓度下，26种β-受体激动 剂回收率在53. 4%~128. 6%之间，精密度RSD在0. 4%~16. 2%之间，回收率高，精密度 好，符合日常检测猪尿中26种β-受体激动剂的要求。
【主权项】
1. 一种检测猪尿中β-受体激动剂的方法，猪尿样品经含氨水的乙腈稀释，与无水硫 酸钠和氯化钠混匀后离心，取上清液用分散式固相萃取，高速离心分离沉淀，甲醇-〇. 1 %甲 酸水溶液溶解沉淀，微孔滤膜过滤，以液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。2. 根据权利要求1所述的方法，所述分散式固相为十八烷基硅烷和Ν-丙基乙二胺的混 合物，十八烷基硅烷和Ν-丙基乙二胺的质量比为1:2~3:1。3. 根据权利要求1所述的方法，按g/mL计，所述分散式固相与上清液的质量体积比为 1:20 ~1:25。4. 根据权利要求1-3任意一项所述的方法，所述含氨水的乙腈中氨水的含量为4v/ V%〇5. 根据权利要求1-4任意一项所述的方法，按g/mL计，所述无水硫酸钠与猪尿样品的 质量体积比为2:1-6:1 ;所述氯化钠与猪尿样品的质量体积比为1:2~2:1。6. 根据权利要求1-5任意一项所述的方法，所述离心为4°C，8000rpm，离心5min。7. 根据权利要求1-6任意一项所述的方法，所述高速离心为4°C，lOOOOrpm，离心 10min〇8. 根据权利要求1-7任意一项所述的方法，所述甲醇-0. 1 %甲酸水溶液中甲醇与 0. 1 %甲酸水溶液的体积比为1:9。9. 根据权利要求1-8任意一项所述的方法，所述微孔滤膜孔径为0. 22μm。10. 根据权利要求1-9任意一项所述的方法，所述液相色谱-串联质谱测定方法中所 述液相色谱法色谱条件为以十八烷基硅烷为固定相，以1%。甲酸水溶液为流动相A，以1%。 甲酸乙腈溶液为流动相B，流速为0. 2mL/min，30°C，进样5μL，梯度洗脱；所述质谱条件为 离子源为ESI(+)，离子源接口电压3. 5kV，3.OL/min雾化，20L/min氮气干燥，以氩气为碰撞 气，脱溶剂管温度250°C，加热模块温度450°C，检测器电压1.lkV，进行多反应监测扫描。
【专利摘要】本发明属于分析化学领域，具体涉及一种检测猪尿中β-受体激动剂的方法。本发明所述检测猪尿中β-受体激动剂的方法为猪尿样品经含氨水的乙腈稀释，与无水硫酸钠和氯化钠混匀后离心，取上清液用分散式固相萃取，高速离心分离沉淀，甲醇-0.1％甲酸水溶液溶解沉淀，微孔滤膜过滤，以液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。本发明所述方法利用分散式固相萃取，吸附杂质、净化样品，而猪尿样品β-受体激动剂不被吸附，能够一次性检测26种β-受体激动剂，通量高。同时采用分散式固相萃取一步净化，没有复杂的淋洗、洗脱步骤，操作简单，萃取剂价格低廉，成本低于现有的固相萃取柱净化法，而且使用有机试剂量少，有利于保护实验人员的健康。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105424824
【申请号】CN201510733884
【发明人】李少晖, 任丹丹, 刘佳, 谢云峰, 杨永坛
【申请人】中粮营养健康研究院有限公司, 中粮集团有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月3日