专利名称：苦草快速繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及一种水生植物的组织培养方法，更具体涉及苦草Hydrocharitaceae Vallisnera Linn.的一种快速繁殖方法，属于生物技术在水体植被恢复和水簇箱中水草种苗生产中的应用。
背景技术：
苦草Hydrocharitaceae Vallisnera Linn.属水鳖科苦草属，以其叶翠绿或略带紫红色供观赏、而且较抗污染、是生物食物链中的重要植物资源，又是水体植被恢复中的主要先锋水草。苦草的叶子呈线形或带形，在清水中栩栩如生，也是水簇箱中的常用品种。在自然界中繁殖系数低，如利用常规的分株法繁殖，形成不了规模化生产，难以满足水体植被恢复和水簇箱中植物材料的需求。
组织培养作为生物技术领域中的一种重要手段，利用植物细胞的全能性，如茎尖、嫩芽等组织，通过离体培养，产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根，从而形成植物的无性系快速繁殖的植株。虽然组织培养是一种比较成熟的技术，其基本培养基一般采用MS，但对不同植物，从产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根的不同生长阶段需要不同的营养配置，以及不同的生长条件。因此对苦草的组织培养，也需要特殊的培养基和培养条件。
发明内容
本发明的目的是，提供一种苦草快速繁殖的方法，该方法利用组织培养技术，将苦草培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖苦草，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
为了达到上述目的，一种快速繁殖苦草的方法按下列步骤进行(1)取长度为2～3厘米的苦草地下茎尖作为苦草培养物；(2)将苦草培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗苦草培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡5～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的苦草培养物接入诱导培养基中，培养20～30天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.1毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.1毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾)1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙)440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾)0.83毫克H3BO3(硼酸)6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰)22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌)8.6毫克
Na2MoO4·2H2O(钼酸钠)0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁) 27.8毫克乙二胺四乙酸二钠37.3毫克肌醇100毫克烟酸0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的苦草培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～40天长出许多苦草芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.1毫克NAA(萘乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的苦草芽分株，可作为新的苦草培养物，重复步骤(4)可得到大量的苦草芽；(6)若将步骤(4)的苦草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养25～30天即得到苦草苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.4毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
本发明具有如下优点本发明的诱导培养基、分化与增殖培养基及生根培养基是最适合苦草三个不同生长阶段---诱导培养、分化与增殖及生根培养的最佳培养基配方，一个苦草地下茎尖经反复增殖，一年可繁殖上万株种苗，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
具体实施例方式一种苦草快速繁殖的方法，该方法按下列步骤进行(1)取长度为2～3厘米的苦草地下茎尖作为苦草培养物；(2)将苦草培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗苦草培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡5～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的苦草培养物接入诱导培养基中，培养20～30天，苦草培养物开始萌动、生长；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.1毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.1毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾)1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙)440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾)0.83毫克H3BO3(硼酸)6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰)22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌)8.6毫克
Na2MoO4·2H2O(钼酸钠) 0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)27.8毫克乙二胺四乙酸二钠 37.3毫克肌醇 100毫克烟酸 0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的苦草培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～40天长出许多苦草芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.1毫克NAA(萘乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的苦草芽分株，可作为新的苦草培养物，重复步骤(4)可得到大量的苦草芽；(6)若将步骤(4)的苦草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养25～30天即得到苦草苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.4毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
实施本发明，可在短期内得到大量的苦草试管苗。
权利要求
1.一种苦草快速繁殖的方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行(1)取长度为2～3厘米的苦草地下茎尖作为苦草培养物；(2)将苦草培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗苦草培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡5～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的苦草培养物接入诱导培养基中，培养20～30天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.1毫克6-呋喃氨基嘌呤、0.1毫克2，4-二氯苯氧乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；(4)将经步骤(3)培养的苦草培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～40天长出许多苦草芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1毫克6-苄基腺嘌呤、0.1毫克萘乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；(5)将步骤(4)的苦草芽分株，作为新的苦草培养物，重复步骤(4)可得到大量的苦草芽；(6)将步骤(4)的苦草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养25～30天即得到苦草苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.4毫克吲哚丁酸、40克蔗糖、12克琼脂。
全文摘要
本发明公开了快速繁殖苦草的方法，该方法以苦草的地下茎尖为培养物，将苦草培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖苦草，一棵苦草地下茎尖一年可繁殖上万株苦草种苗，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
文档编号A01H4/00GK1586174SQ20041006062
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月23日 优先权日2004年7月23日
发明者赵家荣, 徐惠珠, 刘艳玲, 徐立铭 申请人:中国科学院武汉植物园