专利名称：一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及大蒜组织培养技术，属于农业技术领域，具体地说是一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基。
背景技术：
大蒜，多年生草本植物，百合科葱属。地下鳞茎分瓣，按皮色不同分为紫皮种和白皮种。辛辣，有刺激性气味，可食用或供调味，亦可入药。大蒜营养丰富:每100克含水分69.8克，蛋白质4.4克，脂肪0.2克，碳水化合物23.6克，钙5毫克，磷44毫克，铁0.4毫克，维生素C3毫克。此外，还含有硫胺素、核黄素、尼克酸、蒜素、柠檬醛以及硒和锗等微量元素。含挥发油约0.2%，油中主要成分为大蒜辣素，具有杀菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解广生。尚含多种稀丙基、丙基和甲基组成的硫酿化合物等。蒜中含有“蒜胺”，这种物质对大脑的益处比维生素B，还强许多倍。植物受创伤后，在伤面新生的组织称为愈伤组织。植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果，而是利用外源的植物激素类物质诱导细胞开始分裂形成的，常用的有生长素类物质如2，4-=氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸和细胞分裂素如6苄基嘌呤等。生长素和细胞分裂素按一定浓度和比例配合使用，易于诱导出愈伤组织。目前，通过组织和器官培养技术，仅在少数几种葱属植物上建立起了离体再生体系。大蒜属无性繁殖作物，绝大多数蒜种表现出很强的不结实性。生产上均采用传统的地方品种和自然变异的大蒜品种培植，很难获得或创造可育的大蒜材料进行有性杂交育种。但随着新的育种技术发展，人工诱变、原生质体的分离和融合以及组织培养等新的手段相继涌现，使大蒜的育种工 作取得了很大的进展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，克服大蒜鳞茎尖组织诱导率低的问题，本发明方法利用高效诱导的培养基，用于大蒜的科研和生产。为实现上述目的，本发明所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其特征在于:该大蒜愈伤组织诱导的培养基是将氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于基本培养基MS中而成的，其各组份的用量为:以IL基本培养基MS加入量计:MS 1L、氯吡脲
1.0 2.0mg、复硝酹钠0.05 0.5mg、水解酪蛋白200mg、鹿糖20g、琼脂6g。本发明所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其实现方式如下:
一、供试植物材料采用市场购买的破除休眠期的普通白皮大蒜，该实验多用氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白均为北京索莱宝科技有限公司产品，实验所用其他试剂均为国产分析纯；
二、去白皮大蒜将蒜瓣剥开后置于直径12cm的培养皿中，下垫5层纱布，用水浸湿，将剥好的蒜瓣放置于纱布上，25°C水培法生根，每天早晚各换水I次；三、去生长健壮的新鲜根尖3 5mm用大量清水冲洗，之后用75%酒精浸泡10 15s，再放入0.1%氯化汞7 8min，之后用大量无菌水冲洗8 10次以除去残留消毒液；
四、将消毒后的上述外植体接于含有氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS的培养基上，所述培养基为以IL基本培养基MS加入量计:MS 1L、氯吡脲1.0 2.0mg、复硝酚钠0.05 0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g ;pH值调整为5.8 6.0。所述原料中，MS为基本培养基，提供培养组织生长发育所需的无机营养和部分有机营养元素:氯吡脲和复硝酚钠是植物生长调节剂，具有促进培养组织形成胚性愈伤组织的作用；水解酪蛋白提供有机多肽类营养元素；蔗糖提供培养组织生长发育所的碳素营养:琼脂主要作用是固化培养基，起支撑作用。所述培养基的制作方法是将氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS，搅拌均匀，PH值调整为5.8 6.0之间即可。所述氯吡脲是一种高活性的苯基脲类衍生物，具有细胞分裂素活性。有促进细胞分裂和扩大、器官形成和蛋白质的合成、提高光合作用效率、增强抗逆性、延缓衰老、在瓜果植物上可促进花芽分化，保花保果，提高坐果率、促进果实膨大等作用。所述复硝酚钠是一种强力细胞赋活剂，与植物接触后能迅速渗透到植物体内，促进细胞的原生质流动，提高细胞活力。本发明所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其有益效果在于:本发明培养基具有促进细胞分裂和扩大、器官形成和蛋白质的合成、提高光合作用效率、增强抗逆性、延缓衰老、在瓜果植物上可促进花芽分化，保花保果，提高坐果率、促进果实膨大等作用；复合植物生长调节剂的使用使得培养基与植物接触`后能迅速渗透到植物体内，促进细胞的原生质流动，提高细胞活力，利用本培养基大蒜茎尖组织培养中愈伤组织的诱导率均大于34%，并可达到82%左右。
具体实施例方式以下实施例为本发明作进一步出阐述。实施例1
一、供试植物材料采用市场购买的破除休眠期的普通白皮大蒜。该实验多用氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白均为北京索莱宝科技有限公司产品，实验所用其他试剂均为国产分析纯；
二、去白皮大蒜将蒜瓣剥开后置于直径12cm的培养皿中，下垫5层纱布，用水浸湿，将剥好的蒜瓣放置于纱布上，25°C水培法生根，每天早晚各换水I次；
三、去生长健壮的新鲜根尖3mm用大量清水冲洗，之后用75%酒精浸泡10s，再放入
0.1%氯化汞7min，之后用大量无菌水冲洗8次以除去残留消毒液；
四、将消毒后的上述外植体接于含有氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS的培养基上，所述培养基为以IL基本培养基MS加入量计:MS 1L、氯吡脲1.0mg、复硝酚钠0.05mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g pH值调整为5.8。实施例2
一、供试植物材料采用市场购买的破除休眠期的普通白皮大蒜。该实验多用氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白均为北京索莱宝科技有限公司产品，实验所用其他试剂均为国产分析纯；
二、去白皮大蒜将蒜瓣剥开后置于直径12cm的培养皿中，下垫5层纱布，用水浸湿，将剥好的蒜瓣放置于纱布上，25°C水培法生根，每天早晚各换水I次；
三、去生长健壮的新鲜根尖4mm用大量清水冲洗，之后用75%酒精浸泡12s，再放入
0.1%氯化汞7min，之后用大量无菌水冲洗9次以除去残留消毒液；
四、将消毒后的上述外植体接于含有氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS的培养基上，所述培养基为以IL基本培养基MS加入量计:MS 1L、氯吡脲1.5mg、复硝酚钠0.3mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g pH值调整为5.9。 实施例3
一、供试植物材料采用市场购买的破除休眠期的普通白皮大蒜。该实验多用氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白均为北京索莱宝科技有限公司产品，实验所用其他试剂均为国产分析纯；
二、去白皮大蒜将蒜瓣剥开后置于直径12cm的培养皿中，下垫5层纱布，用水浸湿，将剥好的蒜瓣放置于纱布上，25°C水培法生根，每天早晚各换水I次；
三、去生长健壮的新鲜根尖5mm用大量清水冲洗，之后用75%酒精浸泡15s，再放入
0.1%氯化汞8min，之后用大量无菌水冲洗10次以除去残留消毒液；
四、将消毒后的上述外植体接于含有氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS的培养基上，所述培养基为 以IL基本培养基MS加入量计:MS 1L、氯吡脲2.0mg、复硝酚钠0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g pH值调整为6.0。
权利要求
1.一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其特征在于:该大蒜胚性愈伤组织诱导的培养基是将氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于基本培养基MS中而成的，其各组份的用量为:以IL基本培养基MS加入量计:MS 1L、氯吡脲1.0 2.0mg、复硝酚钠0.05 0.5mg、水解酪蛋白200mg、鹿糖20g、琼脂6g。
2.如权利要求1所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其特征在于:所述培养基的制作方法是将氯吡脲、复硝酚钠、水解酪蛋白、蔗糖、琼脂溶解于MS，搅拌均匀，pH值调整为5.8 6.0之间即可。
3.如权利要求1所述一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，其特征在于:使用方法如下: Φ去白皮大蒜将蒜瓣剥开后置于直径12cm的培养皿中，下垫5层纱布，用水浸湿，将剥好的蒜瓣放置于纱布上，25°C水培法生根，每天早晚各换水I次； Q去生长健壮的新鲜根尖3 5mm用大量清水冲洗，之后用75%酒精浸泡10 15s，再放入0.1%氯化汞7 8min，之后用大量无菌水冲洗8 10次以除去残留消毒液； O将消毒后的上述外植 体接于所述培养基上。
全文摘要
本发明公开一种大蒜愈伤组织高效诱导的培养基，涉及大蒜组织培养技术，属于农业技术领域。其特征在于其各组份的用量为以1L基本培养基MS加入量计MS1L、氯吡脲1.0～2.0mg、复硝酚钠0.05～0.5mg、水解酪蛋白200mg、蔗糖20g、琼脂6g。其有益效果在于本发明培养基具有促进细胞分裂和扩大、器官形成和蛋白质的合成、提高光合作用效率、增强抗逆性、延缓衰老、在瓜果植物上可促进花芽分化，保花保果，提高坐果率、促进果实膨大等作用；复合植物生长调节剂的使用使得培养基与植物接触后能迅速渗透到植物体内。
文档编号A01H4/00GK103141385SQ201310062350
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者王茜 申请人:王茜