杀虫黄杆菌菌株和生物活性组合物、代谢物和用途

杀虫黄杆菌菌株和生物活性组合物、代谢物和用途
【专利摘要】本发明提供杀虫黄杆菌(Flavobacterium)菌株和自其衍生的生物活性组合物和代谢物，以及其用于控制害虫的使用方法。
NRRL B-50584
20111014
【专利说明】杀虫黄杆菌菌株和生物活性组合物、代谢物和用途

【技术领域】
[0001] 本文中公开杀虫黄杆菌菌株和自其衍生的生物活性组合物和代谢物，和其用于控 制害虫和促进植物生长，尤其是根部健康的使用方法。

【背景技术】
[0002] 天然产物是借由微生物、植物和其它有机体产生的物质。微生物天然产物提供丰 富的化学多样性来源，且存在出于医药目的利用天然产物的较长历史。尽管着重于天然产 物用于人类治疗法，其中超过50 %衍生自天然产物，但是仅11 %的杀虫剂衍生自天然来 源。尽管如此，天然产物杀虫剂具有在常规和有机农场两者中在控制害虫方面起到重要作 用的可能性。借由微生物（细菌、放线菌和真菌）产生的二级代谢物提供新颖化学化合物， 其可以单独使用或与已知化合物组合使用以有效控制害虫且降低耐药性发展的风险。存在 若干成功作为农业杀昆虫剂的微生物天然产物的众所周知的实例（汤普森（Thompson)等 人，2000 ;阿里纳（Arena)，1995 ;克里格（Krieg)等人，1983)。
[0003] 微生物杀虫剂的发展自在纯培养物中分离微生物开始。其随后在温室和在田野里 使用活体外、活体内或中试规模试验继续进行功效和波谱筛选。同时，借由微生物产生的活 性化合物经分离和识别。为了微生物杀虫剂的商业化，微生物必须借由在工业规模下发酵 且与生物相容性和经批准的添加剂一起调配来经济地生产，以增加功效且使方便应用最大 化。
[0004] 线虫是无体节、两侧对称、蠕虫类无脊椎动物，其拥有体腔和完整的消化系统，但 不具有呼吸和循环系统。其体壁含有多层表皮、具有四条纵向带的下皮层，和内部肌肉组织 (奇特伍德（Chitwood)，2003)。其身体内含物大部分被消化和生殖系统占据。线虫可以归 类为寄生的或独立生存的。寄生线虫可以借由其宿主（例如，植物寄生虫）归类。独立生 存的线虫可以根部据其摄食习惯归类，且包括以下组：（1)杂食动物；（2)食细菌动物；（3) 食真菌动物；和（4)捕食动物。
[0005] 植物寄生线虫大体上摄食植物的地下部分，诸如根部、球茎和块茎，和植物的地 上部分，诸如叶子和茎。每年由植物寄生线虫造成的农作物损失已经估计超过1000亿 美元（肯宁（Koenning)等人，1999)。植物寄生线虫的实例包括但不限于属于以下属的 线虫：根结线虫属（Meloidogynespp.)(例如，根节线虫）；短体线虫属（Pratylenchus spp.)(例如，根腐线虫）；异皮线虫属（Heteroderaspp.)(例如，胞囊线虫）；胞囊线虫属 (Globoderaspp.)(胞囊线虫）；莖线虫属（Ditylenchusspp.)(例如，莖及球莖线虫）； 垫刃线虫属（Tylenchulusspp.)(例如，柑桔线虫）、剑线虫属（Xiphinemaspp.)(例如， 短剑线虫）、内侵线虫属（Radopholusspp.)(穿孔线虫）；肾形线虫属（Rotylenchulus spp.)(例如，肾形线虫）；螺旋线虫属（Helicotylenchusspp.)和盾线虫属（Scutellonema spp.)(例如，螺旋线虫）；刺线虫属（Belonolaimusspp.)(例如，刺线虫）；伞滑刃线虫属 (Bursaphelenchusspp.)(例如，松木线虫）；矛线虫属（Hoplolaimusspp.)(矛线虫）、长 针线虫属（Longidorusspp.)(针线虫）；珍珠线虫属（Nacobbusspp.)(假根结线虫）；和 滑刃线虫属（Aphelenchoidesspp.)(叶面线虫）。控制线虫最有效的手段是通过杀线虫 剂，其抑制卵孵化、幼体活动性和/或植物传染性。对于植物寄生线虫的化学控制的发展是 具挑战性的，因为环境和生理原因两者：（1)大部分植物寄生线虫存活在靠近根部的土壤 中的受限制区域中，因此递送化学杀线虫剂是困难的，且（2)线虫的外部表面是不良的生 物化学靶标，且对于多个有机分子是不可渗透的（奇特伍德，2003)。此外，借由经口路径递 送毒性化合物是几乎不可能的，因为大部分植物寄生线虫物种仅在其已经渗透且感染植物 根部之后摄入物质。因此，杀线虫剂已经倾向于广谱毒素，其具有高挥发性或具有促进其在 土壤中的活动性的其它化学和物理性质。
[0006] 在过去的十年间，卤化烃（例如，二溴化乙烯、甲基溴）一直是全世界最大量使 用的杀线虫剂。归因于其高人类毒性和对于臭氧层的平流层臭氧层的有害影响，这些化 合物在蒙特利尔议定书（MontrealProtocol)中被禁止，但使用甲基溴用于控制线虫和 植物病原体在美国得以延长，归因于缺乏替代产物。连同有机磷酸酯一起，氨基甲酸酯是 最有效的非熏剂杀线虫剂。不幸的是，诸如涕灭威（aldicarb)和草氨酰的大部分氨基甲 酸酯也是高毒性的。到2010年8月，涕灭威的制造商拜耳（Bayer)已经同意在美国取消 对于马铃薯和柑桔的所有产品注册，且截至2018年8月末，涕灭威将被完全淘汰。最近， 阿维菌素（abamectin)--由土壤放线菌（soilactinomycete)、链霉菌（Streptomyces avermitilis)产生的两个阿维菌素（avermectin)的混合物--已经注册用于杀线虫用途 (Faske和Starr，2006)。先正达（Syngenta)以商标名Avicta?将这一活性成份作为用于棉 花和蔬菜的种子处理剂出售。
[0007] 已经报道若干微生物植物/线虫病原体对植物寄生线虫呈活性（盖瑞拉 (Guerena)，2006)。这些生物控制剂包括细菌苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis)、 洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderiacepacia)、穿刺巴斯德柄菌（Pasteuriapenetrans) 和巴氏杆菌（P.usgae)。巴斯德生物科学（PasteuriaBiosciences)已经在美国东 南部启动用巴氏杆菌对抗草皮上的刺线虫。杀线虫真菌包括但不限于：哈茨木霉菌 (Trichodermaharzianum)、洛斯里被毛抱（Hirsutellarhossiliensis)、明尼苏达被毛 抱（H.minnesotensis)、厚垣抱普可尼亚菌（Pochoniachlamydosporia)(同义词：厚壁抱 子轮枝菌）、指状节丛抱菌（Arthrobotrysdactyloides)和淡紫拟青霉（Paecilomyces lilanicus)(由Prophyta以BioAct1"和McloCor/出售）。另一真菌（杀死的真菌），琉孢 漆斑菌可在Valent生物科学的商业调配物DiTem?中获得。
[0008]其它商业的生物杀线虫剂包括Deny?:和BlueCircle# (洋葱伯克霍尔德菌）、 八ctivatc? (坚强芽孢杆菌）（Quarles，2005)和以色列产品BioNem? (坚强芽孢杆菌） (现在由拜耳以种子处理剂VOTiVC^'出售）（特雷夫（Terefe)等人，2009)。已经假设，微 生物分离物对于线虫卵孵化、幼体活动性和传染性的有害影响可以归因于由这些有机体产 生的毒素（霍尔曼（Hallman)和西科拉（Sikora)，1996 ;玛洛恩妮（Marrone)等人，1998 ; 西迪基（Siddiqui)和马哈茂德（Mahmood)，1999;赛克森纳（Saxena)等人，2000;迈尔 (Meyer)和罗伯茨（Roberts)，2002)、寄生或甚至捕获线虫的能力（西迪基和马哈茂德， 1996;克里（Kerry)，2001 ;杰斐（Jaffee)和马尔登（Muldoon)，1995)、全身性耐药性的感 应（哈斯基-巩特尔（Hasky-Gunther)等人，1998)、改变线虫行为（西科拉和霍夫曼-赫 加特（Hoffman-Hergarter)，1993)或干扰植物识别（奥斯登多普（Oostendorp)和西科拉， 1990)〇
[0009] 诸如植物提取物和精油的植物杀线虫剂可以用于控制线虫（考克里斯-布雷尔 (Kokalis-Burrelle)和罗德里格-卡巴纳（Rodriguez-Kabana)，2006)。奇特伍德已经 在其近期的回顾文章中概括使用植物衍生化合物进行线虫控制的选择方案（奇特伍德， 2002)。西迪基（Siddiqui)和阿拉姆（Alam) (2001)展示，经来自尼姆树（neemtree)(印 楝（Azadirachtaindicd))和楝树（Chinaberrytree)(苦楝（Meliaazadirah))的植物 部分改善的盆栽土可抑制蕃茄的根节线虫发展。然而，在美国目前没有经注册用于对抗线 虫用途的尼姆产品。一种来自智利(Ncma-Qu)的新植物产品最近已经通过美国环境保护 局（USEPA)注册为有机杀线虫剂且被有机物质检查委员会（OrganicMaterialsReview Institute，0MRI)列举可用于有机耕种，所述新植物产品基于阜皮树（Quillajasaponaria tree)提取物，含有皂苷（经C-3下的三糖和经C-28中的寡糖取代的皂树酸的双链衍生 物）。其由Brandt出售。
[0010] 对非宿主农作物实行轮作本身常常足够防止线虫群体达到经济损害水平（盖瑞 拉2006)。变异化学物质是由植物产生的化合物，其在植物环境中影响有机体的行为。杀 线虫的变异化学物质的实例包括聚噻吩、硫代葡萄糖苷、生物碱、脂质、萜类化合物、类固 醇、三萜系化合物和酚醛树脂（考克里斯-布雷尔和罗德里格-卡巴纳，2006 ;奇特伍德， 2002)。当作为覆盖农作物生长时，来自异株克生植物的生物活性化合物在生长周期期间渗 出和/或在生物质分解期间释放到土壤中。芸苔农作物可以用于生物熏蒸一一一种基于在 土壤并入组织分解期间的杀菌挥发物的释放的害虫管理策略（柯克加德（Kirkegaard)和 萨瓦尔（Sarwar)，1998)。然而，罗伯特索瓦（Roubtsova)等人（2007)对于腐烂椰菜组织对 南方根结线虫数量的影响的研宄表明，为了适当控制，必需将植物组织与全部线虫感染土 壤体积彻底混合。
[0011] 在农业土壤中控制线虫的未来依赖于两个因素：线虫抗性农作物的发展，和新的、 广谱、毒性较低的杀线虫剂的发现和发展。研宄、发展和注册新的化学杀线虫剂的成本是极 高的（>2亿美元），其限制了其发展。在1967年到1997年经注册用作杀虫剂的497种新 的活性成分中，仅有七个注册为杀线虫剂（阿斯博林（Aspelin)和格鲁伯（Grube)，1999)。 除常规化学方法以外，已经提议将核糖核酸干扰（RNAinterference，RNAi)作为控制线虫 的方法。通过RNAi使用基因沉默首次在秀丽隐杆线虫上展示，且最近也用于诸如根结线虫 属的植物寄生线虫。（巴赫提亚（Bakhetia)等人，2005)。搜索新的微生物菌株以用作生 物杀线虫剂的来源是重要目标，以便于降低由植物寄生线虫造成的大量经济损害和降低目 前经注册的用于线虫控制的毒性化合物的使用。
[0012] 根部据萨瑟（Sasser)和弗莱克曼（Freckman) (1987)，在全世界由线虫造成的农 作物损失对于主要农作物在8%到20%范围内。植物寄生线虫可以造成相当大的农作物损 害，在世界范围内每年的损失估计有870亿美元（董（Dong)和张（Zhang)，2006)。诸如甲 基溴的熏剂在控制土传植物病和线虫方面是非常有效的，但是归因于较高哺乳动物毒性、 臭氧消耗效应和其它残留效应，甲基溴的使用已经在不同国家中被禁止，且国际协定计划 将其完全撤出市场（欧卡（Oka)等人，2000)。诸如碘代甲烷、1，3-二氯丙烯和三氯硝基甲 烷的化学替代方案也具有哺乳动物和环境安全方面的问题。化学非熏剂杀线虫剂正在被淘 汰和禁止。最近，美国环境保护局宣布正在淘汰涕灭威。
[0013] 黄杆菌属和自其产生的产品的用途
[0014] 革兰氏阴性菌（gramnegativebacterium)黄杆菌属是黄杆菌科的成员（伯纳黛 特（Bernardet)等人，2006a和2006b综述）。已经发现黄杆菌属的物种对鱼类、藻类和土 壤有机体呈病原性。已经发现黄杆菌属产生多种酶，其涉及琼脂、藻酸盐、甲壳素、果胶木聚 糖、角蛋白、昆布糖的降解。举例而言，认为降解多糖的酶可以由黄杆菌属产生。这些酶可 以降解例如不同病原体的细胞壁。黄杆菌属也可以产生蛋白酶。最近，也已经发现黄杆菌 属产生抗真菌化合物，其可以用来控制香蕉病原体。
[0015] 已经发现黄杆菌属的物种产生多种化合物。在这一属中的一些物种能够氧化广泛 范围的芳香族烃（举例而言，参见巴恩斯利（Barnsley)，E.，1988)。
[0016] 发现黄杆菌属SC12154的发酵产生脱乙酰氧基头孢菌素C和新颖7-经取代的头 胞菌素的混合物（辛格（Singh)等人，1984)，其据报道展现弱抗菌活性。两种具有抗脱 氧核糖核酸（DNA)聚合酶的抑制活性的磺酸脂FlavocristamideA和B自海洋细菌黄杆 菌属分离（小林（Kobayashi)等人，1995)，所述海洋细菌黄杆菌属自海洋双壳贝褶纹冠蚌 (bivalveCristariaplicata)分离。报道了属于（0-内酰胺抗菌素类的chitinovorins A、B和C自黄杆菌chitinovorum的培养物培养液的分离和识别（庄司（Shoji)等 人，1984)。称为chitinovorinD的更强碱性的抗菌素随后自黄杆菌属PB-5246分离，连 同已知的chitinovorinA、B和C一起（庄司等人，1985)。新颖血管性血友病因子（von Willebrandfactor，vWF)受体诘抗剂SulfobacinA和B自金黄杆菌属（Chyseobacterium sp.)的培养物培养液分离，随后经报道为黄杆菌属NR2993 (神山（Kamiyama)等人，1995) 〇 新极性胡萝卜素硫酸盐自海洋细菌，识别为黄杆菌属的菌株PC-6分离，且经指定为 (2R，3S，2'R，3 ^R) -4-酮基念珠藻黄素-3'-硫酸盐和（2R，3S，2'R，3 ^R)-念珠藻黄 素-3-硫酸盐（横山（Yokoyama)等人，1996)。基于质谱法和化学修饰阐明自脑膜炎败血性 黄杆菌IF012535 (加藤（Kato)等人，1998)的脂多糖组分的脂质A的化学结构。新颖-单 酰基甘油自革兰氏阴性菌典型海水黄杆菌ATCC19260分离，连同其它糖脂和磷脂一起（八 木（Yagi)和丸山（Maruyama)，1999)。发现细胞菌属-黄杆菌属-拟杆菌的北极细菌产 生若干挥发性有机化合物（迪克查特Oickschat)等人，2005)，其受甲基酮支配。甲基酮 为脂肪族饱和或不饱和的，且含有12-18个碳原子，有时具有末端甲基分支。
[0017] 除了以上代谢物以外，其它来自黄杆菌属的已知化合物是myxol(横山 (Yokoyama)等人，1995)，是属于类胡萝卜素类的化合物，其已经先前经报道来自蓝绿 藻泥污颤藻（弗朗西斯（Francis)等人，1970);来自黄杆菌属脱氢酶（利奥恩-延森 (Liaaen-Jensen)等人，1968)的双环C5(l胡萝卜素二醛癸异戊二烯黄素，其随后归因于其 引起关注的结构经合成（弗雷佐（Ferezou)和朱丽亚（Julia)，1985)。
[0018] 此外，也已经发现，自干旱土壤样品分离的产生生物表面活性剂的黄杆菌属菌 株MTN11(登记号AY162137)产生黄脂，其为非常极性的且是良好的乳化剂（博杜尔 (Bodour)，2004)。实例包括关节菌素和气杆菌素。已经提议这些黄脂可以在被污染的土壤 中使用以在有机生物降解期间减轻金属毒性（卡普兰（Kaplan)和基茨（Kitts)，2004)。确 切地说，卡普兰和基茨（2004)发现归于来自16SrRNA基因序列的黄杆菌属和假单胞菌属 的有机体存在于被石油烃污染的土壤中，尤其是在这些石油烃的降解阶段期间。


【发明内容】

[0019] 本文中提供包含黄杆菌属菌株的新颖用途和组合，且明确地说，组合物。
[0020] 在一具体实施例中，黄杆菌属菌株可以具有以下特征：
[0021] (A)16SrRNA基因序列，其包括：正向序列，其对SEQIDNO:3中阐述的序列具有 至少99%的一致性；和反向序列，其对SEQIDN0:4中阐述的序列具有至少99%的一致性； 和共有序列，其对SEQIDNO:5中阐述的序列具有至少99%的一致性；
[0022] (B)杀虫活性；
[0023] (C)生长调节，且尤其是生长促进活性；
[0024] (D)产生杀虫化合物，其具有以下性质：（1)具有约150-195的分子量，其借由液相 色谱法 / 质谱法（LC/MS)确定；（2)具有S7. 60、7. 52、6. 83、6. 68、2. 74、L14 的1HNMR值， 且具有 203. 96、161. 90、145. 11、13L78、131. 78、127. 28、123. 83、117. 24、117. 24、34. 52、 8. 89 的13CNMR值；（3)在反相C-18HPLC(Phenomenex，Luna5yC18 (2) 100A，100X4. 60mm) 柱上具有约8-14分钟的高压液相色谱（HPLC)滞留时间，所述柱使用在0. 5mL/min流动速 率和210nm的UV检测下的水：乙腈（CH3CN)梯度溶剂系统（0-20min;90-0%含水CH3CN， 20-24min;100%CH3CN，24-27min;0-90%含水CH3CN，27-30min;90%含水CH3CN);
[0025] (E)对于脊椎动物是非病原性的；
[0026](F)对四环素（tetracycline)、红霉素（erythromycin)、链霉素（streptomycin)、 青霉素（penicillin)、氨节西林（ampicillin)、 土霉素（Oxytetracycline)、氯 霉素（Chloramphenicol)、环丙沙星（Ciprofloxacin)、庆大霉素（Gentamicin)、 哌拉西林（Piperacillin)、亚胺培南（Imipenem)和磺胺甲恶挫-甲氧节啶 (Sulphamethoxazole-Trimethoprim)敏感。
[0027] 明确地说，黄杆菌物种是黄杆菌菌株，其具有黄杆菌属H492(NRRL寄存号第 B-50584号）的识别特征。因此，在一有关方面中，提供所述黄杆菌菌株。
[0028] 也提供实质上纯的培养物或全细胞培养液，其包含所述菌株或衍生自所述黄杆菌 菌株的细胞碎片、滤液、上清液、提取物和/或化合物，或衍生自所述菌株、实质上纯的培养 物、全细胞培养液、细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的化合物（例如，代谢物）。进一 步提供一组合物，其包含所述实质上纯的培养物或全细胞培养液，所述培养物或全细胞培 养液包含所述菌株或衍生自这一黄杆菌菌株的细胞碎片、滤液、上清液、化合物和/或提取 物，和载剂、稀释剂、表面活性剂、载剂、表面活性剂或佐剂。
[0029] 因此，本文中提供在植物中调节害虫侵扰的方法，其包含：向植物和/或其种子和 /或用于生长所述植物的基质施加一定量的实质上纯的培养物、全细胞培养液，其包含黄杆 菌物种菌株、或衍生自所述黄杆菌物种菌株的细胞碎片、滤液、上清液、提取物和/或化合 物（包括但不限于一或多种代谢物），或衍生自所述实质上纯的培养物、全细胞培养液、细 胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的化合物（例如，代谢物），和任选地以有效调节所述害 虫侵扰的量的另一杀线虫物质。在一具体实施例中，所述害虫是线虫。在一更具体的实施 例中，害虫是植物寄生线虫。
[0030] 本文中也提供对于至少一种害虫的杀虫组合协同，其包含如下活性组分：（a)实 质上纯的培养物、全细胞培养液，其包含黄杆菌物种菌株或衍生自所述菌株或衍生自所述 实质上纯的培养物或全细胞培养液的细胞碎片、滤液、上清液、提取物或化合物（例如，代 谢物），其包含所述黄杆菌物种菌株，和（b)另一杀虫物质，其中（a)和（b)以协同量存在。 在一具体实施例中，所述害虫可以是线虫，但还可以包括，但不限于，害虫、植物真菌、植物 病毒和植物细菌和野草。此外，所述组合可以是组合物。其它杀虫物质可以是（a)衍生自 微有机体；(b)天然产品和/或（b)化学杀虫剂，且明确地说，化学杀昆虫剂或杀线虫剂。
[0031] 在一有关方面中，本文中提供在植物中或对植物协同调节至少一种害虫或害虫物 种侵扰的方法，其包含：以有效调节所述害虫或害虫物种感染的所述组合的量向植物和/ 或其种子和/或用于生长所述植物的基质施加上文阐述的组合。本文中也提供可自黄杆菌 物种获得或自其衍生的经分离的化合物，或作为替代方案，能够产生可以用于控制不同害 虫，和/或也尤其是杀线虫害虫的这些化合物的有机体。
[0032] 进一步提供在植物（例如，诸如水果（例如，草莓、香蕉、西瓜、浆果）的农作物）、 蔬菜（例如，番茄、黄瓜、南瓜、胡椒、茄子）、或行栽农作物（例如，大豆、小麦、水稻、玉米、 棉花、花生、马铃薯）、树（例如，松树）、花、观赏植物、灌木（例如，玫瑰花）、球茎植物（例 如，洋葱、大蒜）、草坪（例如，狗牙根部草、肯塔基州蓝草、羊茅草）或藤本植物（例如，葡萄 藤）中调节生长的方法，其包含向植物和/或其种子和/或用于生长所述植物的基质施加 一定量的实质上纯的培养物或全细胞培养液，其包含所述菌株或衍生自所述黄杆菌物种菌 株的细胞碎片、滤液、上清液、化合物（例如，代谢物）和/或提取物，和任选地调节，且明确 地说促进生长的另一生长促进物质，其借由（例如）调节，或明确地说促进所述植物中的根 部建立。
[0033] 在一有关方面中，本文中提供协同调节植物生长的方法，其包含：以有效调节所述 植物生长的所述组合的量向植物和/或其种子和/或用于生长所述植物的基质施加上文阐 述的组合。本文中也提供可自黄杆菌物种获得或自其衍生的经分离的化合物，或作为替代 方案，能够产生可以用于控制所述植物生长的这些化合物的有机体。
[0034] 包含所述黄杆菌物种菌株、或衍生自实质上纯的培养物或全细胞培养液的所述菌 株或衍生自实质上纯的培养物或全细胞培养液的细胞碎片、滤液、上清液、提取物和/或化 合物（例如，代谢物）（其包含衍生自所述实质上纯的培养物、全细胞培养液、细胞碎片、滤 液、上清液和/或提取物的所述黄杆菌物种化合物）可以在移植到土壤中和所述植物的地 上部分之前施加到植物的根部。因此，提供在植物中调节根和嫩枝延伸的方法，其包括：(a) 在移植入土壤时，用可有效调节根和嫩枝延伸的量的衍生自黄杆菌属菌株的所述培养物、 全细胞培养液、上清液、滤液和/或提取物的所述培养物、全细胞培养液、上清液、滤液和/ 或提取物和/或一或多种化合物（例如，代谢物），和任选地另一生长促进物质处理植物的 一或多个根和嫩枝；(b)将（a)的经处理的植物移植入土壤。
[0035] 在一有关方面中，也提供实质上纯的培养物或全细胞培养液的用途，所述培养物 或全细胞培养液包含或衍生自黄杆菌物种菌株的细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物，或 黄杆菌物种菌株的代谢物、衍生自所述黄杆菌属菌株的实质上纯的培养物、全细胞培养液、 细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的代谢物，和任选地用于在植物中调节生长，且尤其 用于调节根部延伸的另一生长促进物质或剂。
[0036] 并且，在一有关方面中，是包含衍生自黄杆菌物种菌株或所述培养物或全细胞培 养液或其化合物（例如，代谢物）的所述菌株或细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物实质 上纯净的培养物或全细胞培养液、衍生自所述细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的化合 物（例如，代谢物）的用途的组合，其用于在植物中调节生长，其借由例如调节，且明确地 说，提高植物的生物质、植物的高度、根的数目、根的重量，其包含来自黄杆菌属菌株的所述 上清液滤液和/或提取物的上清液、滤液和/或提取物和/或一或多种代谢物和用于在植 物中调节生长的任选地另一生长促进物质或剂。所述组合可以是协同组合。
[0037] 也提供包含黄杆菌物种菌株或衍生自黄杆菌物种菌株的细胞碎片、滤液、上清液 和/或提取物的实质上纯净的培养物或全细胞培养液，或其化合物（例如，代谢物），或衍 生自所述实质上纯净的培养物、全细胞培养液、细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的化 合物（例如，代谢物），和任选地另一在植物中调节种子发芽的生长促进物质的用途，其中 所述植物包括但不限于农作物，诸如水果（例如，草莓）、蔬菜（例如，番茄、黄瓜、南瓜、胡 椒、茄子），或行栽农作物（例如，大豆、小麦、水稻、玉米、棉花、花生、马铃薯）、树（例如，松 树）、花、观赏植物、灌木（例如，玫瑰）、草皮（例如，狗牙根、肯塔基州蓝草、羊茅草）、球茎 植物（例如，洋葱、大蒜）或藤本植物（例如，葡萄藤）用于调节这些发芽。在一有关方面 中，提供用于在植物中调节发芽的方法，其借由用一定量的包含黄杆菌物种菌株、或衍生自 黄杆菌物种菌株的细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的实质上纯净的培养物或全细胞 培养液，或其化合物（例如，代谢物），衍生自所述实质上纯净的培养物、全细胞培养液、细 胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的代谢物，和任选地另一在植物中有效调节种子发芽的 生长促进物质。在一具体实施例中，种子可以是转基因种子种子。
[0038] 在一有关方面中，也提供用于在植物中调节种子发芽的组合，其包含包含黄杆菌 物种菌株或衍生自黄杆菌物种菌株的细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的实质上纯净 的培养物或全细胞培养液，或其化合物（例如，代谢物），或衍生自所述实质上纯净的培养 物或全细胞培养液、细胞碎片、滤液、上清液和/或提取物的化合物（例如，代谢物）（其在 植物中调节种子发芽），和任选地第二物质中的至少一者，其中所述第二物质是种子涂布 剂。组合可以是协同组合。
[0039] 这些化合物可以借由（a)在培养基中于足以产生所述化合物的条件下培养黄杆 菌菌株以获得黄杆菌培养物，和（b)自（a)的全细胞培养液分离在（a)中产生的所述化合 物。明确地说，分离步骤（b)中的化合物可以借由（i)将全细胞培养液施加到离子交换柱、 尺寸排阻柱或反相高压液相色谱柱中的至少一个以获得柱碎片；（ii)分析柱碎片以得到 杀虫活性，和（iii)浓缩（ii)的柱碎片以获得经分离的化合物。作为替代方案，这些化合 物可以借由化学合成获得且可以用作纯净化合物或/和粗产物。

【专利附图】

【附图说明】
[0040] 图1显示使用6孔水琼脂不活动性生物分析得到的对于H492全细胞培养液和标 签级avid的剂量反应。
[0041] 图2显示在50mL管分析中使用的、且用不同浓度的H492全细胞培养液处理的黄 瓜植物的新鲜嫩枝重量（黑色条）和新鲜根部重量（具有垂直线的条）。
[0042] 图3显示在接种南方根结线虫两周之后，用不同剂量的H492全细胞培养液处理的 黄瓜根部的虫瘿指数。
[0043] 图4显示在接种南方根结线虫两周之后，用不同剂量的H492全细胞培养液处理的 每克黄瓜根部的虫瘿。
[0044] 图5显示在黄瓜测试中于采集时，在100mL土壤中黄杆菌属H492(MBI-302)全细 胞培养液对于根节线虫（南方根结线虫）、矛线虫属Oorylaimusspp.)和其它非寄生线虫 的影响。
[0045] 图6显示在采集时，在黄瓜根部（全部的根部）中黄杆菌属H492 (MBI-302)全细 胞培养液对于根节线虫（南方根结线虫）和其它非寄生线虫的影响。
[0046] 图7显示在采集时，在黄瓜根部（每1克）中黄杆菌属H492 (MBI-302)全细胞培 养液对于根节线虫（南方根结线虫）和其它非寄生线虫的影响。
[0047] 图8显示在采集时，在黄瓜根部上黄杆菌属H492 (MBI-302)全细胞培养液对于根 节线虫（南方根结线虫）虫瘿指数和虫瘿数目的影响。
[0048] 图9显示在用黄瓜的根节线虫（南方根结线虫）测试中，在采集时，黄杆菌属 H492 (MBI-302)全细胞培养液对于黄瓜植物生物质和活力的影响。
[0049] 图10显示在黄瓜测试中，在土壤中黄杆菌属H492 (MBI-302)全细胞培养液对于肾 形线虫（肾形肾状线虫（Rotylenchulusreniformis))、矛线虫属和其它非寄生线虫的影 响。
[0050] 图11显示在采集时，在黄瓜根部（全部的根部）中黄杆菌属H492 (MBI-302)全细 胞培养液对于肾形线虫（肾形肾状线虫）和非寄生线虫的影响。
[0051] 图12显示在采集时，在黄瓜根部（每1克根部）中黄杆菌属H492 (MBI-302)全细 胞培养液对于肾形线虫（肾形肾状线虫）和非寄生线虫的影响。
[0052] 图13显示在用黄瓜的肾形线虫（肾形肾状线虫）测试中，在采集时，黄杆菌属 H492 (MBI-302)全细胞培养液对于黄瓜植物生物质和活力的影响。
[0053] 图14显示在玉米测试中，黄杆菌属H492 (MBI-302)全细胞培养液对于根腐线虫 (短体线虫属）、螺旋线虫（螺旋线虫属）、残根线虫（stubbyrootnematode)(拟毛刺线虫 属（Paratrichodorusspp.))和其它非寄生线虫的影响。
[0054] 图15显示在采集玉米时，在玉米根部中（全部的根部）黄杆菌属H492 (MBI-302) 全细胞培养液对于根腐线虫（短体线虫属）、螺旋线虫（螺旋线虫属）和其它非寄生线虫的 影响。
[0055] 图16显示在玉米测试中于采集时，在玉米根部中（每1克根部）黄杆菌属 H492 (MBI-302)全细胞培养液对于根腐线虫（短体线虫属）、螺旋线虫（螺旋线虫属）和非 寄生线虫的影响。
[0056] 图17显示在用玉米的根腐线虫（短体线虫属）测试中，在采集时，黄杆菌属 H492 (MBI-302)全细胞培养液对于玉米植物生物质和活力的影响。
[0057] 图18显示在大豆测试中，黄杆菌属H492 (MBI-302)全细胞培养液对于大豆胞囊线 虫（soybeancystnematode)(大豆异皮线虫（Heteroderaglycine))的影响。
[0058] 图19显示在大豆测试中，黄杆菌属H492 (MBI-302)全细胞培养液和水对于非寄生 线虫的影响。
[0059] 图20是用于自培养物培养液获得本发明化合物的纯化方案的示意性图示。
[0060]图21和22描绘不同H492 (MBI-302)碎片的生物分析的结果。
[0061] 图23显示H492 (MBI-302)的剂量反应对于不移动性％ (不活动性）的影响。
[0062] 图24显示聚酮1对于虫瘿/根部的数目的影响。
[0063] 图25显示聚酮1对于虫瘿指数的影响。
[0064] 图26显示聚酮1对于新鲜顶部重量的影响。

【具体实施方式】
[0065] 尽管迄今为止的组合物和方法易受不同修改及替代形式影响，但本文中将详细描 述例示性实施例。然而，应理解，不意欲将本发明限制于所公开的具体形式，但是相反地，目 的是覆盖属于如所附权利要求书定义的本发明的精神和范畴的所有修改、等效物和替代方 案。
[0066] 当提供数值范围时，应理解，除非上下文另外明确规定，否则在所述范围上限和下 限之间的达到下限单位十分之一的每一中间值，和所述范围内的任何其它所述或中间值都 包括其中。也包括更小的范围。这些更小范围的上限和下限也包括在其中，但不包括所述 范围中的任何特定排除的界限。
[0067] 除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域 的一般技术人员通常所理解的相同的含义。尽管在本发明的操作或测试中也可以使用与本 文中描述的方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但是现在描述优选方法和材料。
[0068] 必须指出，除非上下文另外明确规定，否则如本文中和所附权利要求书中所用的 单数形式"一（a/an) "和"所述"包括多个参考物。
[0069] 如本文中所定义，"衍生自"意谓自具体来源直接分离或获得，或作为替代方案，具 有自具体来源分离或获得的物质或有机体的识别特征。在所述来源是有机体的情况下，"衍 生自"意谓其可以自所述有机物本身或自用于培养或生长所述有机体的培养基分离或获 得。
[0070] 如本文中所定义，"全培养液培养物"或"全细胞培养液"是指含有细胞和培养基两 者的液体培养物。如果细菌在培养板上生长，那么可以在水或其它液体（全部培养物）中 采集细胞。术语"全培养液培养物"和"全细胞培养液"互换地使用。
[0071] 如本文中所定义，"上清液"是指当生长在培养液中的细胞在另一液体中自琼脂培 养盘采集和借由离心、过滤、沉降或此项技术中熟知的其它手段经移除时剩余的液体。
[0072] 如本文中所定义，"滤液"是指来自已经穿过膜的全培养液培养物的液体。
[0073] 如本文中所定义，"提取物"是指借由溶剂（水、清洁剂、缓冲剂、有机溶剂）自细胞 移除且借由离心、过滤或其它方法自细胞分隔的液体物质。
[0074] 如本文中所定义，"代谢物"是指自具有杀虫，且尤其是杀线虫活性的微有机体获 得的微有机体、或上清液、滤液或提取物的发酵的化合物、物质或副产品。
[0075] 如本文中所定义，"经分离的化合物"基本上不含其它化合物或物质，例如，至少为 约20 %纯净、优选地至少约40 %纯净、更优选地约60 %纯净、甚至更优选地约80 %纯净、最 优选地约90%纯净、且甚至更优选地约95%纯净，如借由分析方法所确定，所述分析方法 包括但不限于色谱法和电泳法。"衍生自"黄杆菌物种的化合物也涵盖代谢物。
[0076] 如本文中所定义，"载剂"是惰性、有机或无机材料，其活性成份经混合或调配以促 进其应用到植物或其它待处理的目标，或其存储、运输和/或处置。
[0077] 如本文中所定义，"调节"用于意谓更改害虫侵扰、植物生长、根部延伸、种子发芽 的量，或害虫侵扰扩散的速率、植物生长的速率、根部延伸的速率、种子发芽的速率。
[0078] 如本文中所定义，"害虫侵扰"是以造成有害影响的量存在的害虫，所述有害影响 包括在宿主群体中的疾病或感染或在生长系统中出现不当的野草。
[0079] 如本文中所定义，"杀虫剂"是衍生自增加植物害虫死亡率或抑制其增长率的生物 产品或化学物质的物质，且包括但不限于杀线虫剂、除藻剂、除草剂、杀昆虫剂、植物杀真菌 剂、植物杀菌剂和植物杀病毒剂。
[0080] 如本文中所定义，"植物寄生线虫"是摄食植物且在植物的任何部分上造成损伤的 线虫。
[0081] 如本文中所定义，"非寄生线虫"是独立地存在于土壤中且不对植物的任何部分造 成损害或损伤的线虫。
[0082] 如本文中所定义，术语"烷基"是指具有一到约12个碳原子的单价直链或支链烃 基，其包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等。
[0083] 如本文中所定义，"经取代的烷基"是指进一步带有一或多个选自以下基团的取代 基的烷基：羟基、烷氧基、氢硫基、环烷基、经取代的环烷基、杂环、经取代的杂环、芳香基、经 取代的芳香基、杂芳基、经取代的杂芳基、芳氧基、经取代的芳氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、 酰胺基、-c(0)H、酰基、酰氧基、羧基、磺酰基、磺酰胺、硫酰基等。
[0084] 如本文中所定义，"烯基"是指具有一或多个碳碳双键且具有在约2个到至多12个 范围内的碳原子的直链或支链羟基，且"经取代的烯基"是指进一步带有一或多个如上文所 阐述的取代基的烯基。
[0085] 如本文中所定义，"炔基"是指具有至少一个碳碳三键，且具有在约2个到至多12 个范围内的碳原子的直链或支链羟基，且"经取代的炔基"是指进一步带有一或多个如上文 所阐述的取代基的炔基。
[0086] 如本文中所定义，"芳香基"是指具有在6个到至多14个范围内的碳原子的芳香族 基团，且"经取代的芳香基"是指进一步带有一或多个如上文所阐述的取代基的芳香基。
[0087] 如本文中所定义，"杂芳基"是指含有作为环结构的一部分的一或多个杂原子（例 如N、0、S等），且其具有在3个到至多14个范围内的碳原子的芳环，且"经取代的杂芳基" 是指进一步带有一或多个如上文所阐述的取代基的杂芳基。
[0088] 如本文中所定义，"烷氧基"是指-0-烷基-部分，其中烷基如上文所定义，且"经 取代的烷氧基"是指进一步带有一或多个如上文所阐述的取代基的烷氧基。
[0089] 如本文中所定义，"烷硫基"是指-S-烷基-部分，其中烷基如上文所定义，且"经 取代的烷硫基"是指进一步带有一或多个上文所阐述的取代基的烷硫基。
[0090] 如本文中所定义，"环烷基"是指含有在约3个到至多8个范围内的碳原子的含环 烷基，且"经取代的环烷基"是指进一步带有一或多个如上文所阐述的取代基的环烷基。
[0091] 如本文中所定义，"杂环"是指含有作为环结构的一部分的一或多个杂原子（例如 N、0、S等），且其具有在3个到至多14个范围内的碳原子的环状（亦即含环）基团，且"经 取代的杂环"是指进一步带有一或多个如上文所阐述的取代基的杂环基团。
[0092] 物质
[0093] 在上文所阐述的组合物和方法中使用的物质可以衍生自黄杆菌物种或菌株。如本 文中所定义，"衍生自"或"可获自"意谓化合物可以分离自或借由细胞培养物、全细胞培养 液、滤液、上清液、碎片或提取物产生。因此，衍生自黄杆菌物种或菌株的化合物也包括由所 述物种或菌株分离或产生的化合物。由细胞培养物、全细胞培养液、滤液、上清液、细胞碎片 或提取物"产生"的化合物也可以被称作"代谢物"。"衍生自"黄杆菌菌株的提取物不仅可 以衍生自细胞培养物或全细胞培养液，且亦衍生自衍生自所述全细胞培养液或细胞培养物 的滤液、上清液、提取物或细胞碎片。
[0094] 在一具体实施例中，黄杆菌属菌株可以具有以下特征：
[0095] (A)16SrRNA基因序列，其包括：正向序列，其对SEQIDNO:3中阐述的序列具有 至少99%的一致性；和反向序列，其对SEQIDN0:4中阐述的序列具有至少99%的一致性； 和共有序列，其对SEQIDNO:5中阐述的序列具有至少99%的一致性；
[0096] (B)杀虫活性；
[0097] (C)生长调节且尤其是生长促进活性；
[0098] (D)产生杀虫化合物，其具有以下性质：⑴具有约150-195的分子量，其借由 液相色谱法 / 质谱法（LiquidChromatography/MassSpectroscopy，LC/MS)确定；（2) 具有S7.60、7.52、6.83、6.68、2.74、l. 14 的1HNMR值，且具有 203.96、161.90、145. 11、 131. 78、131. 78、127. 28、123. 83、117. 24、117. 24、34. 52、8. 89 的13CNMR值；（3)在反相 C-18HPLC(Phenomenex，Luna5yC18 (2) 100A，100X4. 60mm)柱上具有约 8-14 分钟的高压液 相色谱（HPLC)滞留时间，所述柱使用在0. 5mL/min流动速率和210nm的UV检测下的水：乙 腈（CH3CN)梯度溶剂系统（0-20min;90-0%含水CH3CN，20-24min;100%CH3CN，24-27min; 0-90%含水〇13^27-30111111;90%含水〇1不的 ；
[0099] (E)对于脊椎动物是非病原性的；
[0100](F)对四环素、红霉素、链霉素、青霉素、氨苄西林、土霉素、氯霉素、环丙沙星、庆大 霉素、哌拉西林、亚胺培南和磺胺甲恶唑-甲氧苄啶敏感。
[0101] 明确地说，黄杆菌物种是具有黄杆菌属H492 (NRRL寄存号第B-50584号）的识别 特征的黄杆菌菌株，或由所述菌株产生的突变菌株，其在一具体实施例中具有所述菌株的 识别特征。因此，在一有关方面中，提供所述黄杆菌菌株。
[0102] 也提供实质上纯的培养物或全细胞培养液，其包含或衍生自这一黄杆菌菌株的细 胞碎片、滤液、上清液、化合物（例如，代谢物）和/或提取物。进一步提供一组合物，其包 含所述实质上纯的培养物或全细胞培养液，所述培养物或全细胞培养液包含或衍生自这一 黄杆菌菌株的细胞碎片、滤液、上清液、化合物（例如，代谢物）和/或提取物，和载剂、稀释 剂、表面活性剂、载剂、表面活性剂或佐剂。
[0103] 在方法和组合物和组合中使用的化合物可以是化合物，其（a)具有杀虫活性；(b) 具有约150-195的分子量，其由液相色谱法/质谱法（LC/MS)确定，且（c)具有约8-14分 钟的高压液相色谱（HPLC)滞留时间，在反相C-18高压液相色谱柱上，在0. 5mL/min流动速 率和210nm的UV检波下使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶剂系统（0-20min;90-0%含水CH3CN， 20-24min;100%CH3CN，24-27min;0-90%含水CH3CN，27-30min;90%含水CH3CN);且（d)任 选地可从黄杆菌物种获得。在一个实施例中，所述化合物可以是聚酮。
[0104] 在一具体实施例中，化合物可以衍生自黄杆菌且具有羟基化芳香族聚酮结构，其 包含：至少一个酮部分、至少一个6元芳环、至少一个a, |3不饱和部分、至少一个轻基、至 少一个亚甲基和至少一个甲基；150到约195的核心结构中的分子量；至少9个碳和至少2 个氧。
[0105] 在一个特定实施例中，化合物（a)可自黄杆菌物种获得；(b)对害虫呈毒性；(c) 具有约150-195,且更具体地说，176的分子量，其由液相色谱法/质谱法（LC/MS)确定；（d) 具有S7.60、7.52、6.83、6.68、2.74、l. 14 的1HNMR值，且具有 203.96、161.90、145. 11、 131. 78、131. 78、127. 28、123. 83、117. 24、117. 24、34. 52、8. 89 的13CNMR值；（e)在反相 C-18HPLC(Phenomenex，Luna5yC18 (2) 100A，100X4. 60mm)柱上具有约 8-14 分钟的高压液 相色谱（HPLC)滞留时间，所述柱使用在0. 5mL/min流动速率和210nm的UV检测下的水：乙 腈（CH3CN)梯度溶剂系统（0-20min;90-0%含水CH3CN，20-24min;100%CH3CN，24-27min; 0-90%含水〇13^27-30111111;90%含水〇1不的。
[0106] 在一更特定的实施例中，提供化合物，其包括但不限于：
[0107] (A)具有结构##STR001##的化合物

【权利要求】
1. 一种黄杆菌属（Flavobacteriumsp.)的经分离菌株，其具有以下特征： (A) 16SrRNA基因序列，其包含：正向序列，其与SEQIDNO:3中阐述的序列具有至少 99%的一致性；和反向序列，其与SEQIDNO:4中阐述的序列具有至少99%的一致性；和共 有序列，其与SEQIDNO:5中阐述的序列具有至少99%的一致性； (B) 杀虫活性； (C) 生长调节活性； (D) 产生杀虫化合物，所述化合物具有以下性质：（1)具有约150-195的分子量，如 通过液相色谱法/质谱法LC/MS所测定；（2)具有S7.60、7.52、6.83、6.68、2.74、l. 14 的1HNMR值，且具有 203. 96、161. 90、145. 11、131. 78、131. 78、127. 28、123. 83、117. 24、 117. 24、34. 52、8. 89 的13CNMR值；（3)在反相C-18HPLC(菲罗门公司（Phenomenex)， Luna5yC18 (2) 100A，100X4. 60mm)柱上具有约8-14分钟的高压液相色谱HPLC滞留时间， 所述柱使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶剂系统（0-20min;90-0%含水CH3CN, 20-24min;100% CH3CN，24-27min;0-90%含水CH3CN，27-30min;90%含水CH3CN)在 0? 5mL/min流动速率和 2IOnm的UV检测下； (E) 对于脊椎动物是非病原性的； (F) 对四环素（tetracycline)、红霉素（erythromycin)、链霉素（streptomycin)、 青霉素（penicillin)、氨节西林（ampicillin)、 土霉素（oxytetracycline)、氯 霉素（chloramphenicol)、环丙沙星（ciprofloxacin)、庆大霉素（gentamicin)、 哌拉西林（piperacillin)、亚胺培南（imipenem)和磺胺甲恶挫-甲氧节啶 (sulphamethoxazole-trimethoprim)敏感，或自所述经分离菌株衍生的实质上纯的滤液、 上清液或提取物。
2. 根据权利要求1所述的菌株，其中所述黄杆菌物种是具有黄杆菌属H492 (NRRL寄存 号B-50584)的鉴定特征的黄杆菌菌株。
3. -种实质上纯的培养物或全细胞培养液，其包含根据权利要求1所述的菌株，或自 其衍生的细胞碎片、滤液、上清液或提取物。
4. 一种组合，其包含（a)第一物质，其中所述第一物质是（1)包含根据权利要求1所述 的菌株的实质上纯的培养物或全细胞培养液，或（2)衍生自根据权利要求1所述的菌株的 细胞碎片、滤液、上清液、化合物和/或提取物，和（b)至少一或多种第二物质，其中所述第 二物质是化学或生物杀虫剂或生长促进剂。
5. 根据权利要求4所述的组合，其中所述第二物质是选自由杀线虫剂、杀真菌剂和杀 昆虫剂组成的群组的杀虫剂。
6. 根据权利要求4所述的组合，其中所述组合是组合物。
7. -种组合物，其包含（a)第一物质，其选自由以下各项组成的群组：衍生自根据权利 要求1所述的菌株的实质上纯的培养物、全细胞培养液、细胞碎片、滤液、上清液和/或提取 物，和（b)载剂、稀释剂、表面活性剂、载剂、表面活性剂或佐剂。
8. -种调节植物中的害虫侵扰和/或调节植物生长的方法，其包含向所述植物和/或 其种子和/或用于生长所述植物的基质施加一定量的以下至少一者： (A)实质上纯的培养物或全细胞培养液，其包含或衍生自根据权利要求1所述的菌株 的细胞碎片、滤液、上清液、化合物和/或提取物； (B) 根据权利要求4所述的组合； (C) 具有以下性质的化合物：（1)具有约150-195的分子量，如通过液相色谱法/质 谱法LC/MS所测定；（2)具有S7. 60、7. 52、6. 83、6. 68、2. 74、1. 14 的1HNMR值，且具有 203. 96、161. 90、145. 11、131. 78、131. 78、127. 28、123. 83、117. 24、117. 24、34. 52、8. 89 的 13CNMR值；（3)在反相C-18HPLC(菲罗门公司，Luna5yC18(2) 100A，100X4. 60mm)柱上 具有约8-14分钟的高压液相色谱HPLC滞留时间，所述柱使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶剂 系统（0-20min;90-0 % 含水CH3CN, 20-24min; 100 %CH3CN, 24-27min;0-90 % 含水CH3CN, 27-30min;90%含水CH3CN)在0. 5mL/min流动速率和210nm的UV检测下；（4)可自黄杆菌 物种获得，且（5)是有效调节所述害虫侵扰和/或植物生长的聚酮。
9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述害虫是线虫类害虫。
10. 根据权利要求8所述的方法，其中所述植物选自由以下各项组成的群组：草莓、南 瓜、黄瓜、番茄、玫瑰、胡椒、黄瓜、茄子、葡萄藤、棉花、洋葱、大蒜、小麦、大豆、玉米和水稻。
11. 根据权利要求8所述的方法，其中所述化合物选自由以下各项组成的群组： (A) 具有结构##STR001##的化合物
或其在杀虫上可接受的盐或立体异构体，其中Y是OH、SH、NR、OR、SR、R，其中-R是含 有1、2、3、4、5、6、7、8或9个烷基部分的低碳链烷基、芳基或芳基烷基部分、经取代的低碳 数烷基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、 经取代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、-C(O)H、酰 基、氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基；X是0、NH、NR或S成、R2、R3、R4、R5、 R6、R7、R8、R9各自独立地为H、烷基、经取代的烷基、烯基、经取代的烯基、炔基、经取代的炔 基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、环烷基、经取代的 环烷基、烷氧基、经取代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、齒素、氨基、酰胺基、 羧基、-C(0)H、酰基、氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基； (B) 具有结构##STR001a##的化合物
或其在杀虫上可接受的盐或立体异构体，其中Y是0H、SH、NR、0R、SR、R，其中-R是含有 1、2、3、4、5、6、7、8或9个烷基部分的低碳链烷基、芳基或芳基烷基部分、经取代的低碳数烷 基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、经取 代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、 氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基；X是0、NH、NR或S;n是0、1、2、3、4、5、 6、 7、8或9成、1?2、1?3、1?4、1?5、1? 6、1?7、1?8、1?9各自独立地为11、烷基、经取代的烷基、烯基、经取代 的烯基、炔基、经取代的炔基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代 的杂环、环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、经取代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、 羟基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、-C(O)H、酰基、氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或 硫酰基； (C) 具有结构##STR001b##的化合物
或其在杀虫上可接受的盐或立体异构体，其中Y是0H、SH、NR、0R、SR、R，其中-R是含有 1、2、3、4、5、6、7、8或9个烷基部分的低碳链烷基、芳基或芳基烷基部分、经取代的低碳数烷 基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、经取 代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、 氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基；X是0、NH、NR或S;n是0、1、2、3、4、5、6、 7、 8或9 ;R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7各自独立地为H、烷基、经取代的烷基、烯基、经取代的烯基、 炔基、经取代的炔基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、 环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、经取代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、卤 素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基； (D) 具有结构##STR001c##的化合物
或其在杀虫上可接受的盐或立体异构体，其中Y是0H、SH、NR、OR、SR、R，其中R是含有 1、2、3、4、5、6、7、8或9个烷基部分的低碳链烷基、芳基或芳基烷基部分、经取代的低碳数烷 基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、经取 代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、 氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基；X是0、NH、NR或S;n是0、1、2、3、4、5、6、 7、8或9 ;R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7各自独立地为H、烷基、经取代的烷基、烯基、经取代的烯基、 炔基、经取代的炔基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、 环烷基、经取代的环烷基、烷氧基、经取代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、卤 素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基； (E) 具有结构##STR001c##的化合物
或其在杀虫上可接受的盐或立体异构体，其中X是0、NH、NR或S;n是0、1、2、3、4、5、6、 7、8或9成、1?2、1?3、1?4各自独立地为H、烷基、经取代的烷基、烯基、经取代的烯基、炔基、经取 代的炔基、芳基、经取代的芳基、杂芳基、经取代的杂芳基、杂环、经取代的杂环、环烷基、经 取代的环烷基、烷氧基、经取代的烷氧基、硫代烷基、经取代的硫代烷基、羟基、齒素、氨基、 酰胺基、羧基、-C(O)H、酰基、氧基酰基、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫酰基。
12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述化合物是（E)-4-苯基丁-3-烯-2-酮、亚苄 基苯乙酬、（E) (2-轻苯基）丁 條酬、（3E，5E) 苯基己-3, 5-二條酬、（2E， 4E) -1，5-二苯基戊-2,4-二烯-1-酮、（E) -1- (2-羟苯基）戊-1-烯-3-酮、（E) -3- (2-羟苯 基）-1-苯基丙-2-烯-1-酮、(E) -1- (2-羟苯基）-5-甲基己-1-烯-3-酮、(E) -3- (4-羟苯 基）-1-苯基丙-2-烯-1-酮、(E) -1- (4-羟苯基）-5-甲基己-1-烯-3-酮、(E) -4- (3-羟苯 基）丁-3-烯-2-酮、(E)-4-(2-羟苯基）丁-3-烯-2-酮、2-(2'-苯基-2-氧代乙氧基） 苯甲醛、（E)-4-(2-羟苯基）-3-甲基丁-3-烯-2-酮、（E)-I-苯基戊-2-烯-1-酮、（3E， 7Z)-癸-3, 7-二烯-2-酮、(E) -4- (3-羟苯基）丁 -3-烯-2-酮、（1E，4E) -1，5-双（3-羟苯 基）戊-1，4-二烯-3-酮、（E) -1，4-二苯基丁 -2-烯-1-酮、（E) -1- (4-羟苯基）-4-苯基 丁 -2-烯-1-酮、（1E，4E) -1，5-双（3-羟苯基）-2-甲基戊-1，4-二烯-3-酮、（E) -3- (3-羟 苯基）-1-苯基丙-2-烯-1-酮、(E) -1-苯基戊-1-烯-3-酮、(E) -4- (4-羟苯基）-3-甲基 丁 -3-烯-2-酮、（E)-5-甲基-1-苯基己-1-烯-3-酮、2-溴-1-苯基乙酮、（E)-1-(3-羟 苯基）-5-甲基己-1 -烯-3-酮、（E) -4- (4-羟苯基）丁 -3-烯-2-酮、3-羟基苯甲醛、4-羟 基苯甲醛、2-羟基苯甲醛、苯甲醛、Y-十二内酯、Y-辛内酯、2-辛酮、2-庚酮、2-十一烷 酮、顺-4-庚烯醛、4-甲基-2-戊酮、异丁醛、（E)-4-苯基丁-2-烯醛、（E)-4-(4-羟苯基） 丁-2-烯醛、（E)-4-(3-羟苯基）丁-2-烯醛、（E)-4-(2-羟苯基）丁-2-烯醛、3-苯丙 醛、3-(4-羟苯基）丙醛、3-(3-羟苯基）丙醛、3-(2-羟苯基）丙醛、2-苯乙醛、2-(4-羟苯 基）乙醛、2-(3-羟苯基）乙醛、2-(2-羟苯基）乙醛、肉桂醛、（E)-3-(4-羟苯基）丙烯醛、 (E) _3_ (3_轻苯基）丙條酸、（E) _3_ (2_轻苯基）丙條酸、（2E，4E) _5_苯基戊_2,4_二條 醛、（2￡，4￡)-5-(4-羟苯基）戊-2,4-二烯醛、（2￡，4￡)-5-(3-羟苯基）戊-2,4-二烯醛、 (2E，4E)-5-(2-羟苯基）戊_2,4_二烯醛、戊-2-酮、己-2-酮、3-甲基庚-2-酮、3-甲基 辛-2-酮、3-甲基壬-2-酮和其立体异构体。
13. -种自黄杆菌菌株获得聚酮化合物的方法，其包含： (i) 将根据权利要求1所述的菌株培养足以获得所述化合物的一段时间，以及 (ii) 从所述培养物的上清液中分离在步骤（a)中产生的所述化合物。
14. 一种种子，其包含根据权利要求4所述的组合。
15. -种以下至少一者用于调节所述害虫侵扰和/或植物生长的用途： (a)衍生自根据权利要求1所述的菌株的实质上纯的培养物、全细胞培养液、细胞碎 片、滤液、上清液和/或提取物，或衍生自所述纯培养物、全细胞培养液、细胞碎片、滤液、上 清液和/或提取物的代谢物； (b) 根据权利要求4所述的组合； (c) 具有以下性质的化合物：（1)具有约150-195的分子量，如通过液相色谱法/质 谱法LC/MS所测定；（2)具有S7. 60、7. 52、6. 83、6. 68、2. 74、1. 14 的1HNMR值，且具有 203. 96、161. 90、145. 11、131. 78、131. 78、127. 28、123. 83、117. 24、117. 24、34. 52、8. 89 的 13CNMR值；（3)在反相C-18HPLC(菲罗门公司，Luna5yC18(2) 100A，100X4. 60mm)柱上 具有约8-14分钟的高压液相色谱HPLC滞留时间，所述柱使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶剂 系统（0-20min;90-0 % 含水CH3CN, 20-24min; 100 %CH3CN, 24-27min;0-90 % 含水CH3CN, 27-30min;90%含水CH3CN)在0. 5mL/min流动速率和210nm的UV检测下；（4)可自黄杆菌 物种获得，且（5)是聚酮和任选地以下至少一者：(b)第二物质，其中所述第二物质是化学 或生物杀虫剂、生长促进剂，或（c)载剂、稀释剂、表面活性剂、载剂、表面活性剂或佐剂。
【文档编号】A01N31/08GK104508116SQ201380014385
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2013年3月13日 优先权日:2012年3月13日
【发明者】安娜·露西娅·科尔多瓦-科雷洛斯, 拉特纳卡·阿索尔卡, 玛丽亚·科伊武宁, 玛格丽特·罗德里格斯, 邢丽娟, 帕梅拉·马罗内 申请人:马罗内生物创新公司