一种坎巴嘎布的组织培养方法
【专利摘要】本发明涉及一种坎巴嘎布植物的快速繁殖技术，具体来说是一种坎巴嘎布植物的组织培养方法。具体来说，通过选择特定的组织培养方法，特别是分化培养基和生根培养基来进行组织培养，最终提供一种适宜药用坎巴嘎布植物的组织培养快速繁殖的方法。按照本发明的方法，所述移栽苗的成活率达90％以上。
【专利说明】一种坎巴嘎布的组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种坎巴嘎布植物的快速繁殖技术，具体来说是一种坎巴嘎布植物的组织培养方法。
技术背景
[0002]坎巴嘎布(学名为毛莲蒿)(Artemisia vestita Wall, ex DC)为菊科、蒿属。半灌木或灌木状；根茎粗大，木质，植物有挥发性香气。主要产丁青、昌都、江达、察雅、贡觉、洛隆、八宿、左贡、察隅、波密、米林、加查、朗县、隆子、洛扎、拉萨、南木林、日喀则。生长在海拔2600~4300米，山坡、山麓、草地、灌丛、砾质滩地等。入药有清热、解毒、利湿、祛风之效。在牧区也做饲料。
[0003]藏药材“坎巴嘎布”，是藏民族家中常备的熏香、消毒植物，据《四部医典》藏药卷记载，用坎巴嘎布煎服和外敷可治疗扭伤、撞伤、痛风。以此为主要成分的产品日益增多，需求量大增，目前尚没有栽培种，所有原料均为野生，因此造成野生品种的匮乏。因此通过组织培养方法来快速繁殖该药用植物具有非常重要的意义。本发明以藏本草植物坎巴嘎布种子为外植体进行再生植株的研究，已培养出大量的坎巴嘎布植物组培苗并进行了炼苗、移栽。通过该组培技术，更好地保持原有的母本性状。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种坎巴嘎布的组织培养方法，最终实现规模化生产优质坎巴嘎布植物的种苗。该方法简单实用，高效迅速，适宜规模化生产。
[0005]本发明的目的通过以下技术方案来实现:
[0006]一种坎巴嘎布的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤:
[0007]步骤一、材料的消毒:将坎巴嘎布种子通过先采用75%的酒精消毒30秒，用无菌水冲洗3次；再用0.1 %升汞消毒5-12分钟，用无菌水冲洗3-5次，即可用于接种；
[0008]步骤二、将经消毒的材料采用培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，+0.1g/L肌醇，PH为5.8 ;培养条件为:温度22±2°C，光照12-14小时/天，培养15天即可萌发；
[0009]步骤三、分化培养:将上述经种子萌发后的小苗，三周后转入分化培养基；
[0010]步骤四、生根培养:切下长1.5-2cm分化苗接种于生根培养基；
[0011]步骤五、炼苗和移栽。
[0012]所述的分化培养基选自如下配方:
[0013]分化培养基1:MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ；
[0014]分化培养基2:MS培养基+0.5mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ；
[0015]分化培养基3:MS培养基+lmg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ；
[0016]分化培养基4:MS培养基+2mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ；
[0017]分化培养基5:MS培养基+3mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8。
[0018]所述的生根培养基选自如下配方:
[0019]生根培养基1:MS培养基+0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂:+0.lg/L肌醇，PH5.8 ；
[0020]生根培养基2:MS培养基+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ；
[0021 ]生根培养基 3:MS 培养基 +0.5mg/L IBA+0.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂+0.lg/L 肌醇，PH5.8 ;
[0022]生根培养基4:MS 培养基+0.5mg/L IBA+1.0mg/L NAA+30g/L 蔗糖+6g/L 琼脂+0.lg/L 肌醇，PH5.8 ;
[0023]生根培养基5:MS 培养基 +0.5mg/L IBA+1.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂+0.lg/L 肌醇，PH5.8。
[0024]本发明所采用的炼苗和移栽是本领域的常规方法，即将带有3-4条根且健壮的植株揭开封口膜炼苗3-5天 ，然后洗干净培养基，移入装有草炭土和河沙(体积比为1:1-3:1)或草炭土和珍珠岩(体积比为1: 1-3: I)混合基质的营养钵中，置于温室，移栽时应注意保护试管苗的根尖，炼苗两周后进行田间移栽。移栽初期要注意遮荫与水分的补充，移栽苗的成活率达90%以上。
[0025]优选地，生根培养基优选生根培养基3，其生根时间及整齐度为最优。
[0026]关于分化培养基，6-BA对坎巴嘎布的分化虽然有明显增加作用但随着浓度的增加出现大量玻璃苗，优选地，分化培养基优选分化培养基2和3，所述分化培养基上能够获得生长健壮，长势优，分化出大量优质种苗。
[0027]本发明经过多重筛选实验优化培养繁育条件，提出了适宜药用坎巴嘎布植物的组织培养快速繁殖的方法。本发明选择优质坎巴嘎布植物的种子为试验材料；筛选了分化培养培养基的组成；筛选了生根培养培养基的组成。按照本发明的方法，所述移栽苗的成活率达90%以上。
[0028]与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果:
[0029]1.目前在西藏尚未有栽培种所需原料全部靠野生采挖，在采挖过程中不仅有时间上的限制而且对生态环境破坏性大，本发明不受时间与空间的限制能培育出大量优质种苗，同时有利于保护生态环境。
[0030]2.本发明不仅大大缩短了坎巴嘎布植物的育苗周期，容易满足大规模生产的需求。
[0031]3.具有普遍的适用性，有助于今后的快速繁殖与推广。
[0032]实验结果表明:分化培养过程中随着6-RA浓度逐步升高在一定范围对坎巴嘎布分化芽有明显增加作用，但6-RA激素浓度达到2.0mg/L时，叶片微卷曲，开始出现愈伤组织，6-RA激素浓度达到3.0mg/L时，叶片卷曲，组织松散，出现玻璃苗，这表明6-RA激素浓度范围在0.5-1.0mg/L时生长综合表现最佳，芽的平均增殖系数为5.7 ;生根培养过程中随着整体激素浓度的提高在基部易生成愈伤组织反而抑制生根，在添加0.5mg/L IBA、0.5mg/L NAA浓度的MS生根培养基中，生根时间及整齐度为最优。生根率可达到95%。
【具体实施方式】
[0033]下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0034]实施例1:坎巴嘎布组织培养试验
[0035]步骤一、材料的消毒:将野外采集的坎巴嘎布种子在实验室内通过先采用75%的酒精消毒30秒,用无菌水冲洗3次,再用0.1 %升汞消毒5-12分钟,用无菌水冲洗3-5次，既可用于接种。
[0036]步骤二、将经消毒的材料采用培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，+0.1g/L肌醇，PH5.8 ;培养条件温度为22±2°C、光照12-14小时/天，培养15天即可萌发；
[0037]步骤三、分化培养:将上述经种子萌发后的小苗，三周后分别转入1、MS培养基+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L 肌醇，PH5.8 ;2、MS 培养基 +0.5mg/L 的 6_BA+30g/L 蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ;3、MS 培养基+lmg/L 的 6-BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.1g/L 肌醇，PH5.8 ;4、MS 培养基 +2mg/L 的 6_BA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L 肌醇，PH5.8 ；
5、MS培养基+3mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ;以上5种培养基中；
[0038]步骤四、生根培养:切下长1.5_2cm分化苗接种于1、1^培养基+0.5mg/L IBA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂，+0.lg/L 肌醇，PH5.8 ;2、MS 培养基 +0.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L琼脂 +0.lg/L 肌醇，PH5.8 ; 3、MS 培养基 +0.5mg/LIBA+0.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L 肌醇，PH5.8 ;4、MS 培养基 +0.5mg/L IBA+1.0mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L 肌醇，PH5.8 ;5、MS 培养基 +0.5mg/L IBA+1.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ;以上5种培养基中；
[0039]步骤五、炼苗和移栽:将带有3条根且健壮的植株揭开封口膜炼苗4天，然后洗干净培养基，移入装有草炭土和河沙(体积比为1:1)混合基质的营养钵中，置于温室，移栽时应注意保护试管苗的根尖，炼苗两周后进行田间移栽。试验表明，所述移栽苗的成活率达70%以上。
[0040]按照上述方法进行坎巴嘎布的组织培养，结果如下:
[0041]表1不同激素配比对坎巴嘎布植物分化芽的影响
[0042]
【权利要求】
1.一种坎巴嘎布的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: 步骤一、材料的消毒:将坎巴嘎布种子通过先采用75%的酒精消毒30秒，用无菌水冲洗3次；再用0.1 %升汞消毒5-12分钟，用无菌水冲洗3-5次，即可用于接种； 步骤二、将经消毒的材料采用培养基为MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，+0.lg/L肌醇，PH为5.8 ;培 养条件为:温度22±2°C，光照12-14小时/天，培养15天即可萌发；步骤三、分化培养:将上述经种子萌发后的小苗，三周后转入分化培养基； 步骤四、生根培养:切下长1.5-2cm分化苗接种于生根培养基； 步骤五、炼苗和移栽。
2.根据权利要求1的组织培养方法，其特征在于:所述的分化培养基选自如下配方: 分化培养基1:MS培养基+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 分化培养基2:MS培养基+0.5mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 分化培养基3:MS培养基+lmg/L的6-BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 分化培养基4:MS培养基+2mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 分化培养基5:MS培养基+3mg/L的6_BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8。
3.根据权利要求1的组织培养方法，其特征在于:所述的生根培养基选自如下配方: 生根培养基1:MS培养基+0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂:+0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 生根培养基2:MS培养基+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 生根培养基 3:MS 培养基 +0.5mg/L IBA+0.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L肌醇，PH5.8 ; 生根培养基 4:MS 培养基 +0.5mg/L IBA+1.0mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L肌醇，PH5.8 ； 生根培养基 5:MS 培养基 +0.5mg/L IBA+1.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +0.lg/L肌醇，PH5.8。
4.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于:所述的炼苗和移栽是将带有3-4条根且健壮的植株揭开封口膜炼苗3-5天，然后洗干净培养基，移入装有草炭土和河沙(体积比为1: 1-3: I)或草炭土和珍珠岩(体积比为1: 1-3: I)混合基质的营养钵中，置于温室，炼苗两周后进行田间移栽。
5.根据权利要求2的组织培养方法，其特征在于:所述的分化培养基为分化培养基2和3。
6.根据权利要求3的组织培养方法，其特征在于:所述的生根培养基为生根培养基3。
【文档编号】A01H4/00GK104067941SQ201410329482
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年7月11日 优先权日:2014年7月11日
【发明者】泽仁旺姆, 尼珍, 郭尚磊 申请人:西藏自治区高原生物研究所