专利名称：：植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白及其编码基因与应用，特别涉及来源于拟南芥的一种调控植物响应低磷和高盐胁迫的转录因子及其编码基因与应用。
背景技术：
：粮食问题是当今世界所面临的几大难题之一。土壤缺磷和盐渍化是限制农业生产的两个重要限制因素。磷矿是不可再生的资源，大量施用磷肥会造成环境污染；盐渍土是一种世界性的低产土壤，甚至是不毛之地。因此，认识植物对低磷和高盐胁迫的反应机制，提高植物自身对低磷和高盐胁迫的耐受能力，已成为如何进一步提高作物产量的重要研究工作，倍受世界各国政府和植物及农业科学家的关注。拟南芥C^a&'^^w's"3h'a/7a)是一种典型的模式植物(其作用与实验鼠、果蝇等模式生物相当)，已被广泛应用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究。拟南芥共有约1.3亿个碱基对，约2.7万个基因。现在已知拟南芥基因组中含有超过1500个编码转录因子的基因，其中WRKY基因有74个，这些WRKY基因在植物响应低磷和高盐胁迫中的作用还不清楚。拟南芥的大多数基因在其他植物中都能找到与之同源的基因，有关拟南芥的绝大多数发现都能应用于其他植物的研究。以往的研究已经证明，对拟南芥的研究将帮助科学家找到提高农作物产量的方法。面对农作物生产中日益严重的土壤低磷和高盐问题，克隆调控植物响应低磷和高盐胁迫的转录因子基因并对其功能进行研究，对尽快培育耐低磷和耐高盐作物品种有重要的实践意义。
发明内容本发明的目的是提供一种植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白，名称为AtLPSTC^s&VopsAz^ah'朋a尸力os;3力atea/c/5"a7t7b7era/7ce)，来源于哥伦比亚生态型拟南芥(Ar3Z^'c/o/7s/s^a力'a^)，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐逆性功能的由(a)衍生的蛋白质。其中，序列表中的序列2所示的蛋白序列由553个氨基酸残基组成。为了使(a)中的AtLPST分泌到细胞周质或培养基中或使其功能稳定，可在由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端连接上信号肽序列，为了(a)中的AtLPST便于纯化，可在由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表1所示的标签。表l.标签的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>上述(b)中的AtLPST可人工合成，也可先合成其编码基因，再按照下述方法进行生物表达得到。上述(b)中的AtLPST的编码基因可通过将序列表中序列l的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5'端连上信号肽的编码序列，和/或在其5'端和/或3'端连上表1所示的标签的编码序列得到。上述植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白的编码基因""尸5D也属于本发明的保护范围。上述植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之1)序列表中SEQIDW2:1的核苷酸序列；2)在高严谨条件下可与1)所述的DNA序列杂交的核苷酸序列。其中，序列表中序列l是由1662个脱氧核苷酸组成，自序列表中序列1的5'端第1-1659位核苷酸序列为编码序列(0RF)，编码具有序列表中序列2的氨基酸残基序列的蛋白质。上述植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白的基因组基因，可具有下述核苷酸序列之1)序列表中SEQIDJ^:3的核苷酸序列；2)在高严谨条件下可与l)所述的DNA序列杂交的核苷酸序列。序列表中序列3由2597个核苷酸组成，自序列3的5'端第125-490位核苷酸为第一个外显子，自序列3的5'端第696-797位核苷酸为第二个外显子，自序列3的5'端第890-1042位核苷酸为第三个外显子，自序列3的5'端第1126-1447位核苷酸为第四个外显子，自序列3的5'端第1540-1656位核苷酸为第五个外显子，自序列3的5'端第1776-2393位核苷酸为第六个外显子。自序列3的5'端第491-695位核苷酸为第一个内含子，自序列3的5'端第798-889位核苷酸为第二个内含子，自序列3的5'端第1043-1125位核苷酸为第三个内含子，自序列3的5'端第1448-1539位核苷酸为第四个内含子，自序列3的5'端第1657-1775位核苷酸为第五个内含子。自序列3的5'端第1-124位核苷酸为5'UTR，第2394-2597位为3'UTR。上述高严谨条件可为在O.1XSSPE(或0.1XSSC)，0.1%SDS的溶液中，在65。C下杂交并洗膜。含有上述植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白的编码基因的表达载体、转基因细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明所提供的力"尸6T基因敲除掉或使力"尸5T基因表达量降低，植物就表现耐低磷和耐高盐性状；或者将力"尸5T基因在植株中过量表达，植物就表现低磷敏感和高盐敏感性状。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，如加入植物可选择性标记或具有抗性的抗生素标记物。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物。本发明的基因对培育耐低磷和耐高盐新品种，以及植物对低磷和高盐耐受的研究具有重要意义，如利用本发明的基因可设计小干扰RNA对该基因的表达进行干扰、插入突变该基因或者缺失突变该基因，从而提高植物对低磷和高盐的耐受能力。本发明的基因转入植物中过表达，可作为土壤磷指标和盐指标的指示植物，预警土壤的低磷和/或高盐。下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。图1为野生型、^"尸5T过量表达植株(35S::力7Z尸5T-刃和J"尸6T敲除突变体("&"-7)在低磷条件下的表型观察结果。图2为野生型、Jz^尸5T过量表达植株(35S:M7Z尸5T-9)和^Z尸67敲除突变体(s"pst-7)的幼苗在高盐条件下的表型观察结果。图3为野生型、JM尸5T过量表达植株(35S::^7Z尸6T-^)和JM尸5T敲除突变体("7p"-7)的成苗在高盐条件下的表型观察结果。图4为低磷条件下^"/^T基因的表达变化结果。图5为高盐条件下^"尸5T基因的表达变化结果。量表达植株(35S::J7Z尸5T-50和Z"尸5T敲除突变体("7p^-7)的磷含量测定结果。图7为野生型、X"尸5T过量表达植株(35S::力7Z尸5T-9)和^"尸5T敲除突变体(s^pW-"的钾、钠含量测定结果。具体实施例方式下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法实施例l、植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白及其编码基因的获得提取10天拟南芥(Col咖bia型)幼苗总RNA、反转录为cDNA。以此cDNA为模板、利用分别设有Kpnl和Sacl酶切位点的一对引物进行PCR扩增，得到耐旱相关基因的cDNA全长。引物序列如下Primer1:5'-ggtaccATGGACAGAGGATGGTCTGGTCTC-3，(辆I);Primer2:5'-gagctcCTATTGATTTTTGTTGTTTCCTTCGCCGTCGT-3，(Sacl)。采用Takara公司的高保真的PyrobestDNA聚合酶进行扩增，扩增体系为50nL，含10XPyrobestPCR缓冲液5.O)iL，10raMdNTPmix1.OfiL，引物各1.0|iL，Pyrobest酶0.5pL，模板3.0|iL(0.lug)，补充灭菌超纯水至50pL，反应体系在冰上进行操作。在PE9700仪器上进行扩增，预变性5min，95。C变性30s，56°C30s，72°C2min，循环数30个，72。C延伸10min。将扩增片段用0.8%的琼脂糖凝胶进行电泳，回收扩增片段，连接到pMD18-T载体，酶切、扩增、测序鉴定，测序结果表明，上述PCR扩增得到的片段具有序列表中序列l的核苷酸序列，为本发明的调控植物响应低磷和高盐胁迫cDNA基因命名为力M/^7;序列表中序列1的核苷酸序列由1662个碱基组成，其编码序列为自序列表中序列1的第1一1659位核苷酸，编码具有序列表中序列2的氨基酸残基序列。将上述获得的正确的含有力"尸67的重组载体命名为pMD18-力tZ尸5T。提取10天拟南芥(Columbia型)幼苗总DNA，以此DNA为模板、利用一对引物进行PCR扩增，得到耐旱相关基因的基因组DNA全长。引物序列如下Primer3:5'-ACAGACTCTTTCTTAATCTCTCTCTCTTTC-3';Primer4:5，-AAAGCTTTAAAGGCAATGCTAATTAAG-3，。采用Takara公司的高保真的PyrobestDNA聚合酶进行扩增，扩增体系为5(VL，含10XPyrobestPCR缓冲液5.0jiL，10mMdNTPmix1.0pL，引物各1.0pL，Pyrobest酶0.5pL，模板3.0nL(0.lug)，补充灭菌超纯水至50|iL，反应体系在冰上进行操作。在PE9700仪器上进行扩增，预变性5min，95。C变性30s，56°C30s，72°C3.5min，循环数30个，72。C延伸10min。对PCR产物进行测序，得到2597bp的核苷酸片段，是具有序列表中序列3的核苷酸序列，为本发明的调控植物响应低磷和高盐胁迫基因组基因，将其命名为g」"/^71。将g^z^R5T连接到pMD18-T载体得到的重组载体命名为pMD18-g^Z尸6T。序列表中序列3的5'端第125-490位核苷酸为第一个外显子，自序列3的5'端第696-797位核苷酸为第二个外显子，自序列3的5'端第890-1042位核苷酸为第三个外显子，自序列3的5'端第1126-1447位核苷酸为第四个外显子，自序列3的5'端第1540-1656位核苷酸为第五个外显子，自序列3的5'端第1776-2393位核苷酸为第六个外显子。自序列3的5'端第491-695位核苷酸为第一个内含子，自序列3的5'端第798-889位核苷酸为第二个内含子，自序列3的5'端第1043-1125位核苷酸为第三个内含子，自序列3的5'端第1448-1539位核苷酸为第四个内含子，自序列3的5'端第1657-1775位核苷酸为第五个内含子。自序列3的5'端第1-124位核苷酸为5'UTR，第2394-2597位为3'UTR。实施例2、植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白及其编码基因的功能验证一、^Z尸67过量表达植株(35S::J7Z尸6T-力的获得采用实施例l所获得的含有^Z尸57基因的重组载体pMD18-AZ尸57S]pBIB-Super载体(pBIB-Super载体的构建方法利用引物aagcttGTGGGCCTGTGGTCTCAAGAT禾口tctagaCTAGAGTCGATTTGGT从质粒pMSP-1(NiM，CuiD,EinsteinJ,NarasimhuluS，VergaraC，GelvinSB.Strenghtandtissuespecificityofchimaericpromotersderivedfromtheoctopineandmannopinesysthasegenes.19957:661-676.)中扩增出长l.lkb的super启动子序列；将扩增得到的super启动子用HindIII和XbaI双酶切，回收s叩er启动子片段，插入到质粒pBIB(BecherD.Binaryvectorswhichallowtheexchangeofplantselectablemarkersandreportergenes.NucleicAcidsRes.199018:203.)的HindIII和XbaI酶切位点之间中，得到pBIB-Super质粒)，同时用内切酶XbaI和KpnI进行大体系酶切。将所切得的J^堪因片段和线性化的pBIB-Super质粒片段进行回收，连接，并测序验证，即获得验证正确的含有^M尸57^因的重组载体并将其命名为S叩er::^"尸5T。将S叩er::力"/^符lj用农杆菌转化侵染Columbia野生型拟南芥植株。从而获得^A尸57过量表达Tl代转S叩er:Mz^尸67拟南芥植株。经过在含50mg/L潮霉素的MS培养基上筛选转S叩er:MM尸57拟南芥阳性植株并进行分离比统计，在T3代即得到转Super::刀"尸57拟南芥单拷贝纯合株系，即JM尸67过量表达株系。二、野生型、^Z尸5T过量表达植株(Super::^Z尸5T)禾口力"尸57^除突变体("7p"-7)在低磷或高盐条件下的表型观察结果1、野生型、^Z/^r过量表达植株(Super::JM尸5T-9)和^Z尸57敲除突变体(sOo"-7)在低磷条件下的表型观察结果在MS培养基上萌发后生长一周的野生型拟南芥(Col咖bia型)、力M尸57过量表达植株(一个步骤一获得的转S叩er::^"尸57拟南芥单拷贝纯合株系，名称为Super::AZ尸5T-9)和J"尸57敲除突变体(aWp^-7)(购自ABRC)拟南芥幼苗移入含有IOpMPi的低磷MS培养基(以正常MS培养基为基础，将Pi浓度由1.25mM调整为10|xM，其它成分与正常MS培养基一致。正常MS培养基组成为每升溶液含1650mgNH4N03，1900mgKNO3，370mgMgSO4'7H20，170mgKH2PO4，440mgCaCl22H20，22.3mgMnS04*4H20，0.83mgKI，0.025mgCuS04*5H20，6.25mgH3B05，0.025mgCoCl*6H20，8.65mgZnS04*7H20，0.25mgNa2Mo04*2H20，27.8mgFeS04*7H20，37.3mgNa2EDTA)上继续生长10天，观察其性状。以继续在MS培养基培养的各株系做为对照。结果如图l所示，在低磷MS培养基上生长IO天后，力"P57过量表达植株(Super::JtZ尸5T-刃表现出明显低磷胁迫症状，叶色变为黄褐色或紫色，幼苗生长受到明显抑制；野生型拟南芥(Columbia型)植株和^tZ尸57敲除突变("7pW-"体仍然生长正常，没有出现明显的低磷胁迫症状。图l中l为野生型植株，2为」^尸5T过量表达植株(Super::^M尸5T-50，3为」"/^微除突变体(a^o"-7)。2、野生型、AZ尸5T过量表达植株(Super::^z^R5T-50和^Z尸^57敲除突变体(a"p^-7)在高盐条件下的表型观察结果在MS培养基上萌发后生长一周的野生型拟南芥(Columbia型)、^"P57过量表达植株(Super::AZ尸5T-刃和AZ尸57敲除突变体(s"a^-_/)拟南芥幼苗移入含有170mMNaCl的高盐MS培养基(在MS培养基的基础上再添加170mMNaCl)上继续生长10天后，观察其性状。结果如图2所示，在高盐MS培养基上，^"/^7过量表达植株(Super::J"/^7-力表现出明显高盐胁迫症状，叶色变为白色，幼苗生长受到明显抑制；野生型植株表现轻微的高盐胁迫症状，叶色变为黄色，生长受到一定抑制；而^tZv^7敲除突变体"Od^-"仍然生长正常，没有出现高盐胁迫症状。图2中1为^Z/^r敲除突变体(aW/^f-7)，2为^M尸6T过量表达植株(Super::J"尸5T-9)，3为野生型植株。在MS培养基上萌发并生长一周的野生型、/l"尸5T过量表达植株(S叩er::j"尸57-"禾IW"/^職除突变体的幼苗移栽到土壤中，继续生长，每3天浇水一次，每天光照16小时，光强为100too1/(m2*s)，温度为22摄氏度，湿度为50%。拟南芥幼苗在土壤中继续生长3周后，停止浇水，改用相同体积的170mMNaCl溶液替换水进行浇灌，三天浇一次，20天后观察性状(图3中浇盐(170mMNaCl))。以继续正常浇水为对照(图3中正常浇水)。结果如图3所示，改浇NaCl溶液20天后，^"尸5T过量表达植株(Super::j^/^r-"表现出明显高盐胁迫症状，叶色变为黄色或白色，生长受到明显抑制；野生型植株表现轻微的高盐胁迫症状，老叶的叶色变为黄色或白色，生长受到一定抑制；而^"尸57敲除突变体("&W-7)仍然生长正常，没有出现高盐胁迫症状。图3中1为野生型拟南芥，2为J7Z尸6T过量表达植株(Super:M7Z尸5T-^)，3为力7Z尸57敲除突变体(aW/7"-7)。3、低磷和高盐条件下J"尸57基因的表达变化结果在MS培养基上萌发生长一周的野生型拟南芥(Columbia型)幼苗分别转移到低磷MS培养基(含10!iMPi，即以正常MS培养基为基础，将Pi浓度由1.25mM调整为10nM，其它成分与正常MS培养基一致。正常MS培养基溶液每升组成为1650mgNH4N03，1900mgKNO3，370mgMgSO4'7H20，170mgKH2PO4，440mgCaCl22H20，22.3mgMnS04*4H20，0.83mgKI，0.025mgCuS04'5H20，6.25mgH3B05，0.025mgCoCl'6H20，8.65mgZnS04*7H20，0.25mgNa2Mo04*2H20，27.8mgFeS04'7H20，37.3mgNa2EDTA)或高盐MS培养基(在MS培养基的基础上再添加170mMNaCl得到的固体培养基)上培养。培养条件采用全日照光照培养，温度22摄氏度，光强100Wno1/(m2*s)。每隔一段时间的时间点对相关材料分根冠取样，提取总RNA，总RNA的提取按InvitrogenTrizolReagent的产品说明书进行。将上述提取的总RNA经l.0%琼脂糖凝胶电泳检查完整性后，用紫外分光光度计和电泳方法相结合作精确定量。然后分别取相同量的RNA进行电泳然后Northern杂交。Northern杂交的探针片段的获得方法如下以力M尸57基因的cDNA全长产物为模板，用下述引物对进行扩增Prmier5:CTTTGGCGATGTCTAGAATTGA;Primer6:CCTCACCTACTGCTCTCGTAGG。PC財广增出长度为600bp的JM/^堪因特异cDNA片段作为探针。低磷MS培养基生长时^M尸67基因表达结果如图4所示，图4结果表明，^"尸6T基因受低磷胁迫诱导表达；高盐MS培养基生长时^Z尸57基因表达结果如图5所示，结果表明，」"/^堪因明显受高盐胁迫诱导表达。4、野生型、^M尸5T过量表达植株(Super::^Z尸5T-50和AA尸67^除突变体(s"psf-7)的磷含量测定结果野生型(WT)、^Z尸5T过量表达植株(Super::^a尸6T-50禾M"/^織除突变体(sf^W-"在MS培养基上生长，7天后分别移至MS培养基(图6中正常处理)或低磷MS培养基(图6中低磷处理)(含IO|oMPi，即以正常MS培养基为基础，将Pi浓度由1.25mM调整为10pM，其它成分与正常MS培养基一致。正常MS培养基溶液组成为1650mgNH4N03，1900mgKN03，370mgMgS04'7H20，170mgKH2P04，440mgCaCl2'2H20，22.3mgMnSCV4H20，0.83mgKI，0.025mgCuS04'5H20，6.25mgH3B05，0.025mgCoCl'6H20，8.65mgZnS04*7H20，0.25mgNa2Mo042H20，27.8mgFeS04'7H20，37.3mgNa2EDTA)上继续生长10天，分根部和冠部取样。样品在8(TC烘干过夜，然后在马福炉中进行灰化处理(300°Cl小时，575°C6小时)。灰化后的样品用5mL0.1NHC1浸提，浸提液用钒钼黄法进行磷含量测定。钒钼黄法方法具体如下所述吸取定容后的提取液2.00mL放入lOmL容量瓶中，力Q2滴二硝基酚指示剂，滴加6mol/LNaOH中和至溶液刚呈黄色，加入2.00mL钒钼酸铵试剂，用水定容10mL。15分钟后在波长450nm处进行测定，以空白溶液(空白试验的浸提液按上述步骤进行显色)调节仪器零点。标准曲线准确吸取50g/LPi标准液(利用KH2P04和双蒸水配制标准液)0、0.2、0.5、1、1.5、2、3mL分别放入10mL容量瓶中，按上述步骤显色，即得O、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15g/mLPi(利用101204和双蒸水配制标准液)的标准系列溶液，与待测液一起测定，读取吸光度，然后绘制标准曲线和求直线回归方程。结果如图6所示，结果表明，在正常生长条件下(MS培养基中，图6中正常处理)，^M尸57过量表达植株(Super::AZ尸6T-力的根部和冠部磷含量都明显低于野生型(WT)的根部和冠部磷含量，J"/^7敲除突变体7)的磷含量和野生型的磷含量没有明显区别；在低磷条件下(低磷MS培养基中，图6中低磷处理)，j"尸57过量表达植株(S叩er::刃的冠部磷含量明显低于野生型的冠部磷含量，JtZ,67敲除突变体("7pW-"的冠部磷含量明显高于野生型的冠部磷含量，三种植株的根部磷含量没有明显区别。结果表明，X"尸57被敲除后，导致植物在低磷条件下磷含量较野生型增加；^"尸67过量表达后，导致植物无论正常条件还是低磷条件下植物的磷含量都降低。5、野生型、J"/^r过量表达植株(Super::Ai:尸5T-刃和ALP67lt除突变体10的钾、钠含量测定结果野生型(WT)、^M尸5T过量表达植株(Super::^"尸5T-^0和^Z尸6T敲除突变体(aW/7W-7)在MS培养基上生长，7天后分别移至MS或高盐(170mMNaCl)培养基上继续生长10天，取样。样品在8(TC烘干过夜，然后在马福炉中灰化(300°Cl小时，575°C6小时)。灰化样品用10mL0.INHC1浸提，浸提液用原子吸收法(Aproteinkinase,interactingwithtwocalcineurinB-likeproteinsregulatesK+transporterAKT1inAraWops/s.XuJ，LiHD，ChenLQ，WangY，LiuLL，HeL，WuWH.Cell,2006，125:1347-1360)进行钾、钠含量的测定。结果如图7所示，在正常MS条件下，AZ尸67过量表达植株(Super::JM尸5T-刃中的钾含量明显低于野生型的钾含量，^!"/^織除突变体(W^W-7)中的钾含量与野生型(WT)的钾含量相比没有明显区别；在高盐条件下，J"尸57过量表达植株(Super::^Z尸5T-刃中的钾含量明显低于野生型(WT)的钾含量，^"尸57敲除突变体(af7/W-7)中的钾含量略高于野生型的钾含量，同时^"尸5T过量表达植株(Super::^Z尸5T^)的钠含量明显高于野生型的钠含量，J"尸5"微除突变体(3"p^-7)的钠含量明显低于野生型的钠含量。表明力"尸67在植物中过量表达后会导致植物的钾含量降低，进而导致植物在高盐条件下钠含量增加，使植物表现对盐敏感；^"尸67在植物中被敲除后，导致植物在高盐胁迫下钾含量比野生型高而钠含量比野生型低，使植物表现耐高盐胁迫的表型。序列表〈160〉3<210>1〈211〉1662<212>DNA〈213〉拟南芥属拟南芥(Ara力油p^z^a"扁)<400>1gatggtctggtctcactcttgattcatcttctcttgatcttttaaaccct60aatcgtatttctcataagaatcaccgacgtttctcaa^tcctttggcgatgtctagaatt120g3cgagaa1:atxaaccaacggtagtg犯tttaggtttccg180gtgagtctctcagg"tattcgtg3tcgtgaagatg^gatttttcatctggcgttgctgga240gataatgaccgtgaagttcccggcg鄉tggatttcttctccg3ca^ga^atctagggtt300tgtcgtg鲫acgacgaaggatttxgtgtgaag呵g犯gaacaagatgatcga^cggsc360gtaaataccggtttgaatcttcgaaca3ctggtaatacaa卿gtgatgagtc犯tg3tc420gatgstggagaatcttccgaaatggaagat鄉CgtgCg3Etaaatgagttggtgaaatta■c肌gatgagttgaagaaaatgacaatggata^txa^aagcttagagaattgctt3cac肌540gttagcaacagttacacttca^cttc3ga1:gcatcttgtttcactaatgcagca^cagcsa600ataaggtaatagaagctgctgsgaagcctg3ggagacgat3gtax:caagg660caatttattgatttaggccct3cga^gcagt鄉tgeiggccgagg3tgtgtcaaattct720tcatccgaagat3g犯ctcgttcggggggttcttctgcagccgagaggcgtagtaacggg780aagagacttgggcgtga卿aagccccgaaactgagtcca840tctactaccccgacgacatttgatca犯ccgctgaagctacgatgaggaaagcccgtgtc900tccgttcgtgcccgatcggaagctccgatg3ta^gcg3tggatgtcaatg恥0ggccagaagatggccaaagggaatccttgtccgcgggcatattaccgctgcacgatggcc1020acgggctgtcccgttcgcaacattgcgcggaagacagatcaattctgatt1080acaacctacgtaaccatccgttgccgccagccgcggtagccatggcttct1140accaccacggcggcggctaacatgttgctatccgggtcaatgtctagtcacgacgggatg1200caaatttactagctagggctgttcttccttgctccaca3gcatggcaaca1260atctcagcctccgcgccgtttccaaccgtcacattag6LCCtcacccactcacctccgcct1320<image>imageseeoriginaldocumentpage13</image>SerSerGluMetGluAspLysArgAlaLysAsnGluLeu145150GinAspGluLeuLysLysMetThr165ValSerAsnSerLeuLeuThrGin180ValSerLeuMet195GluLysMetAsp170TyrThr185GinGinAsn155AsnGinLysSerLeuGinAsnGinGinGinGin200AlaAlaGluLysProGluGluThrlieValPro210215LeuGlyProThrArgAlaValGlyGluAla225230SerSerGluAspArgThrArg245LysArgLeuValLysLeu160LeuArgGlu175MetHisLeu190VallieGluAsnLys205ArgGinPhelieAsp220AspValSerGlu235SerSerAlaArgSerAsnGly260SerAsnLyslieGinLysVal275AlaGluGinThr290ArgSerGluAla305GlyGinLysMetCysThrAlaGluMetAla340AspArg355HisProLeuPro370AlaAlaAsnMet385AlaThrMet295ProMetlie310AlaLysGly325ThrGlyCysGlyAsn280ArgSerAsnProGlyGly250ArgGluGluSerPro265SerThrSerAsnSer240AlaGluArg255GluThrGlu270ThrPheAspLysAlaAspGlyProCys330ValArg345ThrThrThrProThr285ArgValSerValArgAla300GinTrpSerlieLeulie360ValAlaMetAlaCys315ProArgAlaLysGinValTyrArgLysTyr320TyrTyrArg335GinArgCys350AsnHisAsnProAlaAla375LeuLeuSerGlySerMet390Ser395GluGly365SerThrThrThrAla380SerHisAspGlyMet40014<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>ggtttgtcgtga卿cgacgaaggatttcgtgtg鄉Mggaagaacaagatgatcgaac480ggacgta^tctaagtacgacttttcgataaatC￡Lt￡Ltg8Laatacaat11tcttactaat540ggtttgtattagtgtggacgtgtcataatttggtttacatttgaaatatc600accaaattttgtttcatttttttttttttgata^ggtatcatattttgttttcttacaa660aatgatttctaaatttgaattttaatttgtt3t3g3CCggtttgaatcttcgasca^ctg720gtaatscaaagagtgBtgagtca^tgatcgatgatgg卿atcttccgaaatggaagata780agcgtgcgaaagtttagtttgattttacat840ataatttgaaccggtttgattaatatttcggtttatcacagttggtgaaa■tt3C^g3tgagttgaagaagataatcaaaagcttagagaattgcttaca960ca^gttagcaacagttacacttcacttcagatgcatcttgtttcactaatgcagc肌cag1020acaMaaggtaaataattattagattgatcaaccac^gt1080taccctacatgaataggcaattaattttggtgattaggta3tag^gctg1140ctgagaagcctgagg卿cgggcaatttattgatttaggccctacgagag1200cagtaggtgaggccgaggatgtgtcaaattcttcatccgaagatagaactcgttcggggg1260gttcttctgcagccgagaggcgtagt3acgggaagagacttgggcgtgaagaaagccccg1320a^ctgagtcC卿鄉tg3attctactaccccgacgacatttgatcaaa1380ccgctgaagctacgatgagga^gcccgtgtctccgttcgtgcccgatcggaagctccga1440tggtaagttgtactgiatact:tataaaaaata肌ctdtgtg1500ctttagagattaattatctttgtactttatgtttctatagataagcgatggatgtcaatg]560gagaaa^tatggccagaagatggccaaagggaatccttgtccgcgggcatattaccgctg1620cacgatggccacgggctgtcccgttcgcaa3c3agta^gattaaccattg1680gactaaaagattcttgttgtaaaaacattag3gatttc犯tgtatata^tgtttgcgtgat1740tggctaatacgttcggtccgtataggttcaacgttgcgcgga^g3ca^t1800caattctgattac83cctacgaggg犯accataaccatccgttgccgccagccgcggtag1860ccatggcttctaccaccacggcggcggctaacatgttgctatccgggtcaatgtctagtc1920acgacgggatgatgaaccctacaaat11act鄉"Ugggctgttcttccttgctccacaa1980gcatggcaacaatctcagcctccgcgccgtttccaaccgtcacattagacctcacccact2040cacctccgcctcctaatggttccaatccttcctcttccgcggctaccaac2100actcactgatgcagcggccgcaacaacaacgacgaacttacctccgggaa2160tgctacctcatgt3at3ggccaggcattgtataaccaatccaagttctcggggctgcagt2220tctctggtggctctccctcgacggcagcgttttctcagtcacacgcggtggctgatacaa2280taacggcactcacagctgacccgaatttcacggcggctcttgcagccgttatttcttcta2340tgatcaatggtacgaaccaccacgacggcgaaggaaacaacaaaaatcaa2400ttacattttttttttgggtatctacattttttttccaactgggt城鄉a33C3g3gaig2460tttatttcattgattcacatttgttctgtttcgtaccaaaatccc3gt肌atatacaaaa2520gca^ct3t3ctcaagttc3tattcgtaMcactataaatagttacgtaacttaattagc2580attgcctttaaagcttt259权利要求1、一种植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质1)序列表中的SEQID№.2的氨基酸残基序列；2)将序列表中的SEQID№.2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有增加植物低磷和高盐胁迫敏感性的功能的由SEQID№2衍生的蛋白质。2、权利要求1所述的植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白的编码基因。3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白的编码基因具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQIDW2:1的核苷酸序列；2)序列表中SEQIDJY2:3的核苷酸序列；3)在高严谨条件下可与l)或2)所述的DNA序列杂交的核苷酸序列。4、含有权利要求2或3所述的调控植物响应低磷和高盐胁迫编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或宿主菌。5、扩增权利要求2或3所述基因中任一片段的引物对。6、权利要求1所述的植物响应低磷和高盐胁迫蛋白及其编码基因在培育对低磷和高盐胁迫抗性或敏感性提高的植物中的应用。7、根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述植物为拟南芥。全文摘要本发明公开了一种植物响应低磷和高盐胁迫的蛋白及其编码基因与应用。该蛋白质的氨基酸序列为1)序列表中的SEQID№.2的氨基酸残基序列；2)将序列表中的SEQID№.2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有增加植物低磷和高盐胁迫敏感性的功能的由SEQID№2衍生的蛋白质。本发明的基因可用于培育耐低磷和抗盐的植物新品种，以及培育对低磷和高盐敏感的指示植物。文档编号C12N15/82GK101508727SQ20091008113公开日2009年8月19日申请日期2009年4月2日优先权日2009年4月2日发明者孔佑涵,谦徐,李立芹,武维华,陈益芳申请人:中国农业大学