专利名称：一株解淀粉芽孢杆菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。
背景技术：
谷物是人们摄取营养、赖以生存的能量来源，是平衡膳食金字塔中比例最大、最为重要的物质基础。而因发霉、害虫危害导致的储粮品质劣变和损失严重危害着我国储粮安全。据联合国粮农组织(FAO)统计，每年约有25%粮食因真菌毒素污染影响食用。目前发现危害粮食储藏的真菌有150多种，并可产生200多种真菌毒素。人体摄入这些毒素之后能够导致呕吐、消化系统和神经系统症状、多种原发性癌症、甚至急性中毒死亡等。因此防止粮食霉变是保持粮食品质的重要方法之一。目前所用的防霉方法主要是通过降低储藏水分、温度等物理作用处理粮食及其制品以防止霉菌生长，或通过添加化学防霉剂的方法控制储粮及粮食产品霉变。但是这些方法具有破坏营养、效果持续时间短、防霉不彻底和成本高等缺陷，从而造成实际防控效果不理想，另外有些化学防霉剂，本身具有一定毒性，使用不当反而会影响食用安全和污染环境。而利用一些有着抗真菌作用又对人体无害的微生物防霉则有成本低、增值快、作用效果持久、安全高效、绿色环保等优点。因此研究、开发生物防霉和利用微生物及其代谢产物防霉等技术，是提高防霉效率、减少营养损失、降低储存成本的好方法。另外某些微生物的代谢过程还可以降解粮食和饲料中的不容易被机体消化吸收的大分子，使其降解成可以被机体直接吸收利用的小分子，从而在提高粮食利用率的同时，并提升了产品价值。目前，生防菌在很多国家都已经获得使用批准，并且在很多方面都取得了实际效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种对储粮真菌具有抑制作用，并且对真菌毒素有削减作用的解淀粉芽孢杆菌。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案
本发明提供一株解淀粉芽孢杆菌(Macillus amyloliquefaciens )，命名为ASAGl，经鉴定为解淀粉芽孢杆菌iBacillus amyloliquefaciens)的一个株系，是从粮库储藏玉米中分离得到，已于2009年5月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (简称CGMCC，地址为北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为 CGMCC No. 3056。本发明还提供一种菌剂，它的活性成分为解淀粉芽孢杆菌(ifeciBm 卯e/acieas)ASAGl，其保藏编号为CGMCC No. 3056。该菌剂可以通过现有技术中的
制备方法来制备，还可以根据需要，添加可接受的辅料。进一步地，本发明还提供了所述解淀粉芽孢杆菌ASAGl或所述菌剂在抑制储粮有害真菌中的应用，其中，所述储粮有害真菌为黑曲霉菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌、炭黑曲霉菌、 疣孢青霉菌、赭曲霉菌、黄绿青霉菌、三线镰刀菌、半裸镰刀菌、尖孢镰刀菌、灰绿曲霉菌或赤曲霉菌。更进一步地，本发明还提供了所述解淀粉芽孢杆菌ASAGl或所述菌剂在削减储粮真菌毒素中的应用，其中，所述储粮真菌毒素为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素或玉米赤霉烯酮。本发明的优点是
1.本发明所述的解淀粉芽孢杆菌是一种生防细菌，它对储粮真菌具有显著抑制作用， 对真菌毒素具有消减作用，是良好的防霉剂和真菌毒素脱毒剂。2.现有技术中分离出来的解淀粉芽孢杆菌菌株主要是防治大田里的真菌，没有涉及仓储，特别是储粮中的真菌，而储粮真菌，特别是霉菌与大田中的真菌有很大的不同。 本发明主要针对储粮中的真菌进行防控，目前还没报道。
图1为本发明的菌株的染色镜像；
图2发酵24h、48h、72h时AFT残留含量变化趋势图； 图3发酵24h、48h、72h时OTA残留含量变化趋势图； 图4发酵24h、48h、72h时ZEN残留含量变化趋势图。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但并不是限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂供应商购买得到。实施例1解淀粉芽孢杆菌ASAGl获得与鉴定一、解淀粉芽孢杆菌ASAGl的获得与鉴定
本发明所述的解淀粉芽孢杆菌，是从粮库储藏玉米中分离得到。其菌株的形态如下革兰氏阳性菌，细胞形态杆状，形成芽孢，接触酶和氧化酶反应均为阳性。利用碳水化合物产酸试验淀粉水解、水解酪素及水解明胶均为阳性。最佳培养基配方马铃薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、琼脂20 g/L，琼脂15克，自然pH。培养温度28 32 °C。本发明所述的ASAGl菌株其16S rDNA序列如序列表SEQ ID No 1所示。二、解淀粉芽孢杆菌ASAGl的保藏
通过上述鉴定结果，确认菌株ASAGl为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的一个株系，命名为ASAGl，于2009年05月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为CGMCC No. 3056。实施例2解淀粉芽孢杆菌ASAGl的培养
(1)斜面培养培养时间2 3天，培养基成分(1升)马铃薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、 琼脂20 g/L,琼脂15克，自然pH，培养温度28 32 °C。(2)种子培养超净工作台中从斜面挑取经活化的单菌落接入种子培养液中，28°C 摇菌广2天，转速200 r/min，得到种子液；
种子培养液成分(1升)葡萄糖20g/L、牛肉膏5g/L、7水合硫酸镁lg/L、硫酸铵lg/L、 碳酸钙3g/L、磷酸二氢钾0. 6g/L、马铃薯200g/L，pH值7. (Γ7. 2。
(3)发酵按5%接种量，将上步骤获得的种子液接入发酵培养基中，28°C振荡培养 2 3天，转速200 r/min，得到解淀粉芽孢杆菌ASAGl发酵液。其中，发酵培养基的配方同种
子培养基。实施例3解淀粉芽孢杆菌ASAGl对真菌的拮抗实验
将实施例2制备的解淀粉芽孢杆菌ASAGl发酵液以12000 r/min离心10 min，上清液用0. 2 μ m无菌微孔滤膜过滤除菌后，采用牛津杯定量法做抑制试验，测量抑菌圈直径大小，以确定该菌株对12种常见储粮有害真菌的抑菌效果。其中黑曲霉菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌、炭黑曲霉菌、疣孢青霉菌、赭曲霉菌、黄绿青霉菌使用察氏培养基，三线镰刀菌、半裸镰刀菌、尖孢镰刀菌使用PDA培养基，灰绿曲霉菌使用高盐察氏培养基，赤曲霉菌使用浓糖察氏培养基做抑菌试验。试验所用菌种来源
黑曲霉菌(Aspergillus, niger CGMCC3. 4463) 黄曲霉菌(Aspergillus, flavus CGMCC3. 4410) 赭曲霉菌(Aspergillus, ochraceus CGMCC3. 4520) 灰绿曲霉菌(Aspergillus, glaucus CGMCC3. 3980) 烟曲霉菌(Aspergillus, fumigatus CGMCC3. 3552) 赤曲霉菌(Aspergillus, ruber CGMCC3. 3956) 黄绿青霉菌(Penicillium. citreo-viride CGMCC3. 4038) 疣孢青霉菌(Penicillium. verruculosum CGMCC3. 4297) 半裸镰刀菌(Fusarium. semitectum CGMCC3. 0719) 尖孢镰刀菌(Fusarium. oxysporum CGMCC3. 2830) 三线镰刀菌(Fusarium. tricinetum CGMCC3. 4731)
以上菌种均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，其中黄曲霉菌、赭曲霉菌、三线镰刀菌为产毒株。炭黑曲霉菌(Aspergillus, carbonarius)由中国农业大学赠予。所述察氏培养配方硝酸钠3 g/L、磷酸氢二钾1 g/L、7水合硫酸镁0.5 g/L、氯化钾0.5 g/L、硫酸亚铁0.01 g/L、蔗糖30 g/L、琼脂20 g/L。所述高盐察氏培养基硝酸钠3 g/L、磷酸二氢钾1 g/L、7水合硫酸镁0.5 g/L、氯化钾0.5 g/L、硫酸亚铁0.01 g/L、蔗糖30 g/L、氯化钠60 g/L、琼脂20 g/L。所述浓糖察氏培养基硝酸钠3 g/L、磷酸氢二钾1 g/L、7水合硫酸镁0.5 g/L、氯化钾0.5 g/L、硫酸亚铁0.01 g/L、蔗糖200 g/L、琼脂20 g/L。牛津杯定量法对除菌发酵液的抑菌试验结果，如表1所示，解淀粉芽孢杆菌ASAGl 发酵液对以上12种真菌都有明显的抑制作用。表1除菌发酵液对12种储粮有害真菌抑制作用
权利要求
1.一株解淀粉芽孢杆菌(Macillus amyloliquefaciens)ASAG1，其保藏编号为CGMCC No.3056。
2.一种菌剂，它的活性成分为解淀粉芽孢杆菌(Macillus amyloliquefaciens ) ASAG1，其保藏编号为 CGMCC No. 3056。
3.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌ASAGl或权利要求2所述菌剂在抑制储粮有害真菌中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述储粮有害真菌为黑曲霉菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌、炭黑曲霉菌、疣孢青霉菌、赭曲霉菌、黄绿青霉菌、三线镰刀菌、半裸镰刀菌、 尖孢镰刀菌、灰绿曲霉菌或赤曲霉菌。
5.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌ASAGl或权利要求2所述菌剂在削减储粮真菌毒素中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述储粮真菌毒素为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素或玉米赤霉烯酮。
全文摘要
本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。该解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ASAG1，其保藏编号为CGMCC No.3056，是一株生防细菌。本发明还提供了含有该保藏菌株的菌剂。本发明所述解淀粉芽孢杆菌或所述菌剂对储粮真菌具有显著抑制活性，并且对储粮真菌毒素具有消减作用。
文档编号A23L3/3571GK102191200SQ20111008041
公开日2011年9月21日 申请日期2011年3月31日 优先权日2011年3月31日
发明者伍松陵, 吴子丹, 孙长坡 申请人:国家粮食局科学研究院