专利名称：海洋链霉菌产生的化合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种海洋链霉菌产生的化合物及其应用。
背景技术：
放线菌是一类基因组DNA的G+C mol %含量高、具有复杂形态分化的革兰氏阳性细菌，因其菌落多呈放射状而得名。放线菌能生产多种具有极高经济价值的生物活性物质， 被认为是一类重要的工业微生物资源，迄今发现的两万余种微生物来源的生物活性物质中，约一半是由放线菌产生的。目前，世界上绝大多数的金属开采业采用机械加化学方法进行，采矿同时产生的大量粉尘、噪声、有毒有害废水等所造成的严重污染已被举世公认。并且限于技术手段的原因，所开采的矿石多限于中、高品位矿石，大量的对于“机械加化学方法”来说是较低品位的矿源以及对中、高品位矿石开采后残留的较低品位矿全部处于搁置甚至浪费状态。来源于煤矿、铁矿及金属硫化物矿山等的重金属离子废水，以及其它工业过程产生的重金属离子废水，主要以自然净化、化学沉淀、离子交换、蒸发电解、高分子材料吸附等物理、化学法处理，而这些方法都面临能耗高、金属离子残留大、对金属离子的回收利用度低、方法不够环保等问题。传统的使用微生物转化法处理矿石、水体中重金属离子的方法，多集中在微生物通过其自身的代谢特点改变金属离子的化学存在状态方面，能耗高，产率低，金属回收效率低下。
发明内容
本发明的一个目的是提供链霉菌(Streptomyces sp. ) FXJ8. 012。本发明提供的链霉菌(Streptomyces sp. )FXJ8. 012，其保藏号为CGMCC No. 4950。所述的链霉菌(Streptomycessp. )FXJ8. 012 CGMCC No. 4950 在制备下述的式 I 所示化合物中的应用也是本发明保护的范围。本发明的第二个目的是提供一种式I所示化合物。本发明提供了式I所示化合物，
权利要求
1.链霉菌(Sti^ptomycessp.) FXJ8. 012，其保藏号为 CGMCC No. 4950。
2.权利要求1所述的链霉菌(Streptomycessp.) FXJ8. 012 CGMCC No. 4950在制备如下权利要求3或4所述的式I所示化合物中的应用。
3.式I所示化合物，
4.根据权利要求3所述的式I所示化合物，其特征在于所述式I所示化合物为如下式I-I所示化合物或如下式1-2所示化合物
5. 一种制备权利要求3或4所述的式I所示化合物的方法，包括如下步骤1)发酵权利要求1所述的链霉菌(Sti^ptomyces sp. )FXJ8. 012 CGMCC No. 4950，收集发酵液，离心取菌丝体；2)将步骤1)得到的菌丝体用无水乙醇抽提，收集抽提液、浓缩、干燥，得到乙醇粗提物；3)将步骤幻得到的乙醇粗提物进行硅胶柱层析分离，得到一次分离产物；4)将步骤3)得到的一次分离产物进行凝胶色谱分离，得到二次分离产物；5)将步骤4)得到的二次分离产物进行HPLC分离，得到式I所示化合物，即为式I-I所示化合物或式1-2所示化合物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于步骤1)中，所述发酵的时间为5天-10天，所述发酵的温度为25°C -30°C;所述离心的时间为10分钟-20分钟，所述离心的温度为25°C -28°C ；所述发酵的时间具体为5天、7天或10天，所述发酵的温度具体为25°C、28°C或30°C ； 所述离心的时间具体为10分钟、15分钟或20分钟，所述离心的温度具体为25°C、26°C 或 28°C ；步骤幻中，所述抽提为将步骤1)得到的所述菌丝体和所述乙醇等体积震荡混合， 步骤幻中，所述硅胶柱层析分离为将所述乙醇粗提物流过硅胶柱以进行吸附，再用洗脱缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；所述洗脱缓冲液为氯仿和甲醇的混合液，所述洗脱为梯度洗脱， 所述梯度洗脱的方式为所述洗脱缓冲液中的氯仿的体积百分含量由100%勻速降为 90%，其余为甲醇；步骤4)中，所述凝胶色谱分离为将所述一次分离产物流入凝胶柱，再用洗脱缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；所述洗脱缓冲液为甲醇；步骤幻中，所述HPLC为将所述二次分离产物流过色谱柱以进行吸附，再用洗脱缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；所述洗脱缓冲液为甲醇和水体积比为68 32的混合液。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于步骤1)中，所述发酵采用转速为150r/min-170r/min进行振荡培养；所述振荡的旋转半径为16mm，所述离心的转速为6000r/min-8000r/min，所述离心半径为25. 4cm ；所述发酵采用转速为150r/min、165r/min或170r/min进行振荡培养；所述离心的转速为 6000r/min、7000r/min 或 8000r/min ；步骤中，所述抽提时间为他-iai，所述抽提温度为25 V -28 V ；所述抽提时间具体为^ulOh或12h，所述抽提温度具体为25°C、26°C或；步骤3)中，所述洗脱缓冲液的速度为1.8ml/min-2.2ml/min，所述洗脱缓冲液的量为 15-18倍柱体积，所述收集第4-13个柱体积的洗脱液；所述洗脱缓冲液的速度具体为1. 8ml/min,2ml/min或2. 2ml/min，所述洗脱缓冲液的量具体为15倍柱体积；步骤4)中，所述洗脱缓冲液的速度为0. 4ml/min-0. 6ml/min，所述洗脱缓冲液的体积用量为所述凝胶柱体积的0. 4-0. 6倍；所述收集第0. 1-0. 3个柱体积的洗脱液；所述洗脱缓冲液的速度具体为0. 4ml/min,0. 5ml/min或0. 6ml/min，所述洗过缓冲液的体积用量具体为所述凝胶柱体积的0. 4倍；步骤5)中，所述洗脱缓冲液的速度为1. Oml/min ； 所述收集洗脱液为如下A或B :A为收集保留时间为22. 5min的洗脱液，得到式1_1所示化合物； B为收集保留时间为20. 2min的洗脱液，得到式1_2所示化合物。
8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于步骤幻中，所述乙醇粗提物和所述硅胶的体积比为1 6-1 10;所述乙醇粗提物和所述硅胶的体积比具体为1 6、1 8或1 10; 所述硅胶的粒径为100-200目； 所述硅胶柱的柱高80cm ；柱外径3. 6cm,内径3. Ocm ； 步骤4)中，所述凝胶柱为kphadex LH-20 ； 步骤5)中，所述HPLC的波长为190-800nm。
9.权利要求1所述的链霉菌(Sti^ptomycessp.) FXJ8. 012 CGMCC No. 4950或权利要求3或4所述式I所示的化合物或权利要求5-8中任一所述的方法在吸附金属离子中的应用；所述金属离子具体为狗3+、Cu2+和/或加2+。
10.一种用于吸附金属离子的产品，其活性成分为权利要求3或4所述的式I所示化合物或权利要求 1 所述的链霉菌(Sti^ptomyces sp.) FXJ8. 012 CGMCC No. 4950。
全文摘要
本发明公开了一种海洋链霉菌产生的化合物及其应用。本发明提供了一种式I所示化合物，还提供了制备该化合物的方法，包括如下步骤1)发酵链霉菌(Streptomyces sp.)FXJ8.012 CGMCC No.4950，收集发酵液，离心取菌丝体；2)将步骤1)得到的菌丝体用乙醇抽提，收集抽提液、浓缩、干燥，得到乙醇粗提物；本发明的实验证明，通过菌株的细胞内产生的次级代谢产物化合物8.012-1和8.012-2将矿石或水体中的重金属离子吸附进入菌体内部，进而使得金属离子在菌体内部得到富集；回收菌体从而实现重金属离子的回收。
文档编号C12R1/465GK102277315SQ20111017431
公开日2011年12月14日 申请日期2011年6月24日 优先权日2011年6月24日
发明者刘宁, 张利敏, 郗丽君, 黄英 申请人:中国科学院微生物研究所