专利名称：一种发酵法生产高纯度替考拉宁的方法
技术领域：
本发明涉及生物化工领域，具体地说是涉及通过调控微生物代谢来降低发酵液中相关物质的含量，从而在后续的提取工作中获得高纯度替考拉宁的方法。
背景技术：
替考拉宁是用替考游动放线菌发酵法产生的一种糖肽类抗生素，为5种化学结构极其相似化合物组成的抗生素混合物，分别命名为TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5，其化学结构式如图1所示。但前人进一步的研究发现，发酵液中还存在另外两个小组分物质的，即相关物质 RS-I和RS-2。它们与替考拉宁具有共同的母核，区别在于脂肪酸侧链的不同。由于这些脂肪酸侧链互为同系物，使替考拉宁各组分及相关物质在物理化学性质方面极为相似，常规的分离纯化方法如溶媒萃取、树脂吸附解吸提纯等不能有效地去除相关物质，尤其是当这些相关物质分子的极性比主要组分小时更难去除。因为不管是溶媒萃取还是大也树脂吸附，根据相似相溶原理，极性小的分子优先被萃取或吸附。而相关物质RS-I和RS-2正是由于亲脂性比替考拉宁的五个主要组份强一些，所以极性小，难去除。如果发酵过程中产生的相关物质RS-I和RS-2过高，而提取过程不能有效去除的话，会造成生产出来的药品不能符合药典关于组分与杂质的要求。既使通过返工等手段使产品符合药典要求的话，也会使生产成本增加。因此通过发酵工艺技术的改进，降低小极性相关物质组分的产生，对提高产品质量、降低生产成本具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有发酵工艺技术生产的发酵液中相关物质RS-I和 RS-2的含量过高造成的“去除成本高、收率低”等缺陷，提供一种发酵工艺改进后，发酵液中相关物质RS-I和RS-2的含量降低，从而有利于提高产品质量、降低生产成本的方法。本发明人在对发酵工艺优化的过程中发现，在发酵培养基组成一定的情况下，发酵前期发酵温度及通气量对相关物质RS-I和RS-2的含量有较大的影响。从而可通过在发酵前期调节这两项指标的方式，有效降低相关物质RS-I和RS-2的含量，从而极大地降低了后续工艺杂质去除的难度。本发明的目的可以通过以下措施来实现将替考拉宁种子按一定的比例接入发酵培养基后，在0-80小时保持发酵温度30-32°C、0-100小时保持通气比低于1 0. 5vvm。本发明的特点是通过在发酵的前期调节温度和通气量在适宜的范围内可在发酵结束时获得相关物质RS-I和RS-2的含量较低的发酵液，从而有利于后续的提取工艺，降低生产成本。
图1为替考拉宁的化学结构式；
具体实施例方式实施例1 在4吨发酵罐中有3吨发酵培养基，接入10%体积的种子液，0-80小时控制温度 30°C、0-100小时控制通气比1 0. 5wm，80小时以后控制温度28°C、100小时以后控制通气比1 0. 8vvm,搅拌全程100-200rpm，发酵结束后，高压液相法测得RS-1和RS-2峰面积占RS-I和RS-2峰面积与TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5峰面积的和的比例由原来的 3%及1.5%下降至2%和1%。实施例2:在4吨发酵罐中有3吨发酵培养基，接入10%体积的种子液，0-80小时控制温度 31 °C、0-100小时控制通气比1 0. 4wm，80小时以后控制温度28°C UOO小时以后控制通气比1 0. 7vvm,搅拌全程100-200rpm，发酵结束后，高压液相法测得RS-1和RS-2峰面积占RS-I和RS-2峰面积与TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5峰面积的和的比例由原来的 3%及1. 5%下降至1. 5%和0. 8%。实施例3:在4吨发酵罐中有3吨发酵培养基，接入10%体积的种子液，0-80小时控制温度 32°C、0-100小时控制通气比1 0. 3vvm,80小时以后控制温度28°C UOO小时以后控制通气比1 0. 6vvm,搅拌全程100-200rpm，发酵结束后，高压液相法测得RS-1和RS-2峰面积占RS-I和RS-2峰面积与TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5峰面积的和的比例由原来的 3%及1.5%下降至1.8%和1%。
权利要求
1. 一种发酵法生产替考拉宁的方法，其包含下述步骤a)、将替考游动放线菌斜面接种于种子培养基进行种子培养；b)、将培养好的种子接种发酵培养基进行发酵培养，在0-80小时控制发酵温度 30-32°C，0-100小时控制通气比为不高于1 0.5WM。
全文摘要
本发明公开了一种发酵法生产高纯度替考拉宁的方法，其包含a)将替考游动放线菌斜面接种于种子培养基进行种子培养；b)将培养好的种子接种发酵培养基进行发酵培养，在0-80小时控制发酵温度30-32℃，0-100小时控制通气比为不高于1∶0.5VVM。通过该方法得到的替考拉宁发酵液中相关物质RS-1和RS-2的含量降低，从而有利于提高产品质量、降低生产成本。
文档编号C12P21/02GK102417919SQ20111027051
公开日2012年4月18日 申请日期2011年9月2日 优先权日2011年9月2日
发明者于雪梅, 何红林, 尤春静, 左良成, 常晓菲, 张利强, 李瑾, 白芳静, 鞠忠岩 申请人:山东鲁抗医药股份有限公司