专利名称：一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物培养基，具体是一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基。
背景技术：
目前，抗菌药使用是控制水产动物水霉病的主要手段，但抗菌药的普遍应用已经引起了诸多环境污染问题，因而寻求抗菌药的理想替代品迫在眉睫。抗水霉芽孢杆菌广泛存在于自然界中，能够形成内生孢子，具有很强的抗逆性，不仅能够防病治病，促进动物生长，而且具有无副作用、无残留、无污染、不产生耐药性等特点，是替代抗水霉药的理想微生物制剂。因此，抗水霉芽孢杆菌的发酵培养基对其产品的开发与应用至关重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基。本发明提供的一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基，其组分和含量为麦芽糖 5-7 g/L，酵母粉 10-14 g/L，氯化钠 5-9 g/L。其组分和含量优选为麦芽糖5 g/L，酵母粉10 g/L，氯化钠9g/L。以该培养基培养解淀粉芽孢杆菌，其活菌数可达2. 63X 101(lCfU/mL，较以营养肉汤作为培养基培养解淀粉芽孢杆菌的活菌数高1. 68个数量级，可作为解淀粉芽孢杆菌发酵
的培养基。说明书附图
图1 碳源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响； 图2 氮源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响； 图3 无机盐对解淀粉芽孢杆菌生长的影响； 图4 不同浓度麦芽糖对解淀粉芽孢杆菌生长的影响； 图5 不同浓度酵母粉对解淀粉芽孢杆菌生长的影响； 图6 不同浓度氯化钠对解淀粉芽孢杆菌生长的影响。
具体实施例方式实施例1
1材料与方法 1. 1实验材料
抗水霉解淀粉芽孢杆菌证1，保藏单位名称中国典型培养物保藏中心(简称ccTcc)； 保藏单位地址武汉市武昌珞珈山；保藏日期2010. 6. 2 ；保藏编号CCTCC NO :M2010129 ； 分类命名解淀粉芽孢杆菌ail (Bacillus amyloliquifaciens Shi)。营养肉汤、麦芽糖、 葡萄糖、淀粉、蔗糖、尿素、酵母粉、硝酸钾、氯化铵、氯化镁、氯化钙、硫酸锰、硫酸镁，均购于国药集团化学试剂有限公司。1. 2发酵培养基组分的优化1. 2. 1不同种类碳源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
分别以麦芽糖、葡萄糖、淀粉、蔗糖等量替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的牛肉膏，然后将终浓度为1 X IO8 cfu/mL菌液均按5%接种量接种后分别于30°C、150r/min摇床振荡培养Mh，采用稀释涂布平板法测定解淀粉芽孢杆菌的活菌含量。1. 2. 2不同种类氮源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
分别以尿素、酵母粉、硝酸钾、氯化铵等量替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的蛋白胨，然后将终浓度为ι χ IO8 Cfu/mL菌液均按5%接种量接种后分别于30°C、150r/min摇床振荡培养Mh，采用稀释涂布平板法测定解淀粉芽孢杆菌的活菌含量。1. 2. 3不同种类无机盐对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
分别以氯化镁、氯化钙、硫酸锰、硫酸镁等量替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的氯化钠，然后将终浓度为ι χ IO8 Cfu/mL菌液均按5%接种量接种后分别于30°C、150r/min 摇床振荡培养Mh，采用稀释涂布平板法测定解淀粉芽孢杆菌的活菌含量。1. 2. 4解淀粉芽孢杆菌发酵培养基配比的优化
1.2. 4. 1不同浓度碳源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
以筛选的最佳氮源等量替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的蛋白胨，以筛选的最佳无机盐等量替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的氯化钠，以不同浓度筛选的最佳碳源代替解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的牛肉膏，然后将终浓度为IXlO8 cfu/mL菌液均按5%接种量接种后分别于30°C、150r/min摇床振荡培养Mh，采用稀释涂布平板法测定解淀粉芽孢杆菌的活菌含量。1. 2. 4. 2不同浓度氮源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
以筛选的最佳碳源替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的牛肉膏，并调节到筛选的最适浓度，以筛选的最佳无机盐等量替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的氯化钠，然后以不同浓度筛选的最佳氮源替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的蛋白胨，然后将终浓度为IX IO8 Cfu/mL菌液均按5%接种量接种后分别于30°C、150r/min摇床振荡培养Mh， 采用稀释涂布平板法测定解淀粉芽孢杆菌的活菌含量。1. 2. 4. 3不同浓度无机盐对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
以筛选的最佳碳源替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的牛肉膏，以筛选的最佳氮源替换解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的蛋白胨，并分别调节到最适浓度，然后以不同浓度筛选的最佳无机盐代替解淀粉芽孢杆菌培养用营养肉汤中的氯化钠，然后将终浓度为 1 X IO8 Cfu/mL菌液均按5%接种量接种后分别于30°C、150r/min摇床振荡培养Mh，采用稀释涂布平板法测定解淀粉芽孢杆菌的活菌含量。2实验结果
2.1不同种类碳源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
结果见图1。实验结果表明，麦芽糖是解淀粉芽孢杆菌培养用发酵培养基的最佳碳源。 以麦芽糖为碳源时，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度最高，其发酵浓度的对数值为9. 431，较以牛肉膏为碳源时的发酵浓度对数值高0. 692 {P>0. 05)，较以葡萄糖为碳源时的发酵浓度对数值高2. 301 {P<0.游)，较以淀粉为碳源时的发酵浓度对数值高1. 15 {P>0.游)，较以蔗糖为碳源时的发酵浓度对数值高1.024、P>0.05\2.2不同种类氮源对解淀粉芽孢杆菌生长的影响结果见图2。实验结果表明，酵母粉是解淀粉芽孢杆菌培养用发酵培养基的最佳氮源。 以酵母粉为碳源时，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度最高，其发酵浓度的对数值为9. 749，较以蛋白胨为氮源时的发酵浓度对数值高0. 629 {P<0. 05)，较以尿素为氮源时的发酵浓度对数值高1.699 (/Yft 05)，较以硝酸钾为氮源时的发酵浓度对数值高1.259 0°>fti^)，较以氯化铵为氮源时的发酵浓度对数值高4. 299 {P<0. 05)02.3不同种类无机盐对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
结果见图3。实验结果表明，氯化钠是解淀粉芽孢杆菌培养用发酵培养基的最佳无机盐。以氯化钠为无机盐时，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度最高，其发酵浓度的对数值为9. 628， 较以氯化镁为无机盐时的发酵浓度对数值高2. 133 (/Yft 05)，较以氯化钙为无机盐源时的发酵浓度对数值高2. 438 CP<0. 05)，较以硫酸锰为无机盐时的发酵浓度对数值高2. 536 CP<0. 05)，较以硫酸镁为无机盐时的发酵浓度对数值高2. 717 CP<0. 05)02.4解淀粉芽孢杆菌发酵培养基配比的优化 2.4.1不同浓度麦芽糖对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
结果见图4。实验结果表明，以麦芽糖为碳源时，麦芽糖浓度不同，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度也有所不同。当麦芽糖浓度为5 g/L时，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度最高，其发酵浓度的对数值为10. 031，较麦芽糖浓度为lg/L时的发酵浓度对数值高1. 017 {P<0. 05), 较麦芽糖浓度为3 g/L时的发酵浓度对数值高0.6 (/Yft 05)，较麦芽糖浓度为7g/L时的发酵浓度对数值高0. 118 (F〉ft 0幻，较麦芽糖浓度为9g/L时的发酵浓度对数值高1.088 iP<0. 05) 02. 4. 2不同浓度酵母粉对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
结果见图5。实验结果表明，以酵母粉为氮源，酵母粉浓度不同，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度也有所不同。当酵母粉浓度为10g/L时，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度最高，其发酵浓度的对数值为9. 749，较酵母粉浓度为6g/L时的发酵浓度对数值高1. 679 {P<0. 05\敬酵母粉浓度为14g/L时的发酵浓度对数值高0. 119 {P>0. 05)，较酵母粉浓度为18g/L时的发酵浓度对数值高1. 039 {P<0. 05)，较酵母粉浓度为22g/L时的发酵浓度对数值高1. 689 iP<0. 05) ο2. 4. 3不同浓度氯化钠对解淀粉芽孢杆菌生长的影响
结果见图6。实验结果表明，以氯化钠为无机盐，氯化钠浓度不同，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度也有所不同。当氯化钠浓度为9g/L时，解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度最高，其发酵浓度的对数值为10. 421，较氯化钠浓度为lg/L时的发酵浓度对数值高2. 45(/Yft 05)，较氯化钠浓度为5g/L时的发酵浓度对数值高0.窗〉0. 05)，较氯化钠浓度为13g/L时的发酵浓度对数值高1. 08 (.Ρ> 0. 05)，较氯化钠浓度为17 g/L时的发酵浓度对数值高1. 32 {P<0. 05)。
3、发酵培养基优化配方效果实验
发酵培养基麦芽糖5g，酵母粉10g，氯化钠9g，水1L。以终浓度为1 X IO8 cfu/mL菌液按5%接种量接种该培养基后于30°C、150r/min摇床振荡培养解淀粉芽孢杆菌Mh，其活菌数可达2. 63X KTcfu/mL，较以营养肉汤作为培养基培养解淀粉芽孢杆菌的活菌数高1. 68 个数量级。
4 结论
本实验结果表明，解淀粉芽孢杆菌培养用发酵培养基的的最佳碳源为麦芽糖、最佳氮源为酵母粉、最佳无机盐为氯化钠，其最优化发酵培养基为麦芽糖5g/L，酵母粉10g/L，氯化钠9g/L。以该培养基培养解淀粉芽孢杆菌，其发酵浓度可达Z.eSXK^cfu/mL，较以营养肉汤作为培养基培养解淀粉芽孢杆菌的发酵浓度高1. 68个数量级，可作为解淀粉芽孢杆菌培养用发酵培养基。
权利要求
1.一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基，特征在于其组分和含量为麦芽糖5-7 g/L，酵母粉 10-14 g/L，氯化钠 5-9 g/L。
2.如权利要求1所述的一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基，特征在于其组分和含量为麦芽糖5 g/L，酵母粉10 g/L，氯化钠9 g/L。
3.如权利要求1所述的一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基，特征在于所述的抗水霉解淀粉芽孢杆菌，其保藏号为CCTCC NO :M2010129。
全文摘要
本发明提供了一种抗水霉解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基，其组分和含量为麦芽糖5-7g/L，酵母粉10-14g/L，氯化钠5-9g/L。以该培养基培养解淀粉芽孢杆菌，其活菌数可达2.63×1010cfu/mL，较以营养肉汤作为培养基培养解淀粉芽孢杆菌的活菌数高1.68个数量级，可作为解淀粉芽孢杆菌发酵的培养基。
文档编号C12R1/07GK102533584SQ20111034658
公开日2012年7月4日 申请日期2011年11月5日 优先权日2011年11月5日
发明者何珊, 卫若鹏, 吕利群, 曹海鹏 申请人:上海海洋大学, 山西卫氏鱼康实业有限公司