专利名称：一种TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测黄病毒的非诊断性方法
技术领域：
本发明涉及一种TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测黄病毒的非诊断性方法。
背景技术：
黄病毒科黄病毒属病毒与披膜病毒科甲病毒属病毒、呼肠孤病毒科病毒和布尼亚病毒科病毒均属于虫媒病毒，虫媒病毒是指通过吸血的节肢动物叮咬敏感的脊椎动物而引起的一种人兽共患的自然疫源性疾病，其中以黄病毒属病毒对人类的危害最大。人、畜一旦被携带病毒的节肢动物叮咬感染，就会带来疾病和死亡，当病毒大面积爆发时，会给爆发地经济带来巨大损失，引起社会恐慌，是各国公共卫生机构都有可能面临的问题。目前，黄病毒主要的鉴定手段是病毒分离，但是由于其对实验条件要求苛刻、操作较复杂、技术难度高并且在检测时间长的同时伴随着严重的生物安全问题，所以无法再实际检测工作中推广使用。近年来使用常规反转录PCR扩增(retro-transcript-PCR，RT-PCR)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术在黄病毒的检测方面发挥了重要作用。但目前使用的RT-PCR、 实时荧光PCR大多只是针对某一种虫媒病毒的检测。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种快速、敏感的检测和筛选黄病毒属病毒的TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测黄病毒的非诊断性方法。为实现上述目的，本发明一种TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测黄病毒的非诊断性方法，其特征在于，该非诊断性方法包括设计了一对引物和探针对待检样本进行实时定量检测，引物和探针序列如下正向引物序列Fla-F5' -CAACATGATGGGRAARAG-3'
反向引物序列Fla-R5’ -CHAGRGCTTCRAACTCHAG- 3 ‘荧光探针序列Fla-P5’ -FAM-CTCCVAGCCACATGTACCATAT-BHQ1-3'进一步，所述探针连接的荧光基团为=FAM-BHQl，荧光探针5’端标记的荧光报告基团是FAM，3’端标记的非荧光淬灭基团为BHQ1。进一步，所述该非诊断性方法包括步骤1)样本用裂解液和RNA抽提液处理，提取病毒RNA ；2)实时荧光RT-PCR反应，配制一定组分浓度的25 μ LPCR反应体系，混勻后短暂离心分装到PCR管中；3)将待测样品加入到反应体系中，进行扩增；
4)收集荧光信号，检测Ct值。进一步，所述实时荧光RT-PCR反应的体系组分及其体积如下
权利要求
1. 一种TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测黄病毒的非诊断性方法，其特征在于，该非诊断性方法包括设计了一对引物和探针对待检样本进行实时定量检测，引物和探针序列为
2.如权利要求1所述的非诊断性方法，其特征在于，所述探针连接的荧光基团为 FAM-BHQ1，荧光探针5’端标记的荧光报告基团是FAM，3’端标记的非荧光淬灭基团为BHQ1。
3.如权利要求1所述的非诊断性方法，其特征在于，所述该非诊断性方法包括步骤.1)样本用裂解液和RNA抽提液处理，提取病毒RNA；.2)实时荧光RT-PCR反应，配制一定组分浓度的25μLPCR反应体系，混勻后短暂离心分装到PCR管中；.3)将待测样品加入到反应体系中，进行扩增；.4)收集荧光信号，检测Ct值。
4.如权利要求3所述的非诊断性方法，其特征在于，所述实时荧光RT-PCR反应的体系组分及其体积如下
全文摘要
本发明公开了一种TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测黄病毒的非诊断性方法，该非诊断性方法包括一对引物和探针对待检样本进行实时定量检测，旨在针对黄病毒属成员多、检测繁琐，给新发虫媒病毒监测检测带来不便的问题。该非诊断性方法克服了传统和现代方法中存在的不足,该引物和探针具有高度特异性、重复性好、灵敏度高、可进行多重定量的特点。
文档编号C12Q1/70GK102534048SQ20121000767
公开日2012年7月4日 申请日期2012年1月11日 优先权日2012年1月11日
发明者孙肖红, 方艳辉, 杨鹏飞, 燕清丽, 郭金金 申请人:中国检验检疫科学研究院