专利名称：Cho细胞无血清无蛋白化学培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物技术领域，是一种专门针对CHO细胞的无血清无蛋白化学培养基。
背景技术：
无血清无蛋白化学培养基是一种不需要动物血清的人工合成纯化学成分培养基， 通过增加明确的微量化学成分及生物短肽作为无血清细胞培养基的组分，代替无血清细胞培养基中的蛋白成分，支持培养细胞在无血清无蛋白化学培养基中的悬浮生长。从而可以避免动物血清在细胞培养过程中带来的污染和血清不明成分对下游生产造成的不确定影响。中国专利申请号200610024459公开了一种无血清动物细胞培养基及其制备方法，中国专利申请号20091(^65976公开了一种无血清动物细胞培养基干粉、液体培养基及其制备方法，该两项专利技术公开的产品虽然为无血清动物细胞培养基，但是培养基成分并非无蛋白、纯化学成分。CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)来源于中国仓鼠卵巢。CHO-Kl细胞最早培养于1968 年[Kao.F.T and Park Τ. T . proc. Natl Acad, sci USA 60:1275-1281(1968)].目前已有多种不同亚株及突变株。该细胞株广泛用于生物蛋白药物生产。该细胞株可以从ATCC或其他商业组织获取。
发明内容
本发明的目的是提供一种CHO细胞无血清无蛋白化学培养基，其血清蛋白成份由成份明确的微量元素及生物短肽代替，可以在无血清或其它细胞生长因子条件下支持细胞悬浮生长，具有组分明确、无血清无蛋白的优点。CHO细胞无血清无蛋白化学培养基，其特征在于包括5. 029-50. 294g/L的无机盐、 0. 554-5. 536g/L的氨基酸、0. 006-0. 06g/L的维生素以及2. 612-26. 123g/L微量元素，以及 0. 005-0. 05 mg/L生物短肽A和0. 25-2. 5mg/L生物短肽B，其中生物短肽A的氨基酸排序为脯氨酸-甘氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-组氨酸-丝氨酸；生物短肽B为赖氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-苏氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。其中无机盐起到渗透压调节剂的作用，本发明所采用的无机盐以及其在培养基的用量如下
权利要求
1.CHO细胞无血清无蛋白化学培养基，其特征在于包括5. 029-50. 294g/L的无机盐、 0. 554-5. 536g/L的氨基酸、0. 006-0. 06g/L的维生素以及2. 612-26. 123g/L微量元素，以及 0. 005-0. 05 mg/L生物短肽A和0. 25-2. 5mg/L生物短肽B，其中生物短肽A的氨基酸排序为脯氨酸-甘氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-组氨酸-丝氨酸；生物短肽B为赖氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-苏氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。
2.根据权利要求1所述的CHO细胞无血清无蛋白化学培养基，其特征在于所述无机盐以及其在每升培养基的毫克数如下CaC12(无水) 58.3-582.9 CuS04 · 5H20 0.0006-0. 006 FeS04 · 7H20 0. 21-2. 1 Fe(N03)2 · 9H20 0. 025-0. 25 KCl 155. 3-1553 MgS04(无水) M.41-M4.1 MgC12(无水) 14^9-142.9 NaCl 3490. 7-34907 NaHC03 1218. 9-12189 NaH2P04 · H20 31. 6-316 Na2HP04 (无水)35. 5-354. 9 ZnS04 · 7H20 0.22-2. 2 ；本发明所采用的氨基酸以及其在每升培养基的毫克数如下丙氨酸 2. 225-22. 25精氨酸· HCl 73. 5-735天冬氨酸 3. 34-33. 4天冬酰胺· H20 3. 75-37. 5半胱氨酸· HCl · H20 8. 76-87. 6胱氨酸· 2HC1 15. 6-156谷氨酸3. 67-36. 7谷氨酰胺 182. 1-1821甘氨酸9. 17-91. 7组氨酸· HCl · H20 15. 7-157异亮氨酸 27.18-271.8亮氨酸29. 5-295赖氨酸· HCl 45. 6-456蛋氨酸8. 6-86苯丙氨酸 17.7-177脯氨酸8. 62-86. 2丝氨酸13. 1-131苏氨酸26. 7-267色氨酸4. 5-45酪氨酸· 2Na · 2H20 27. 9-279 缬氨酸26. 4-264 ；本发明所采用的维生素以及其在每升培养基的毫克数如下生物素 0. 002-0. 02泛酸钙1. 09-10. 9叶酸 1. 32-13. 2烟酰胺1. 01-10. 1吡哆酸· Hcl 1. 009-10. 1吡哆醇.Hcl 0.015-0. 15核黄素0. 11-1. 1硫胺素.Hcl 1.09-11维生素 B12 0. 35-3. 5 ；本发明所采用的微量元素以及其在每升培养基的毫克数如下 氯化胆碱 4. 48-44. 8 葡萄糖 1572. 35-15723. 5 次黄嘌呤(钠盐)1.19-12 i-肌醇 6. 25-62. 5亚油酸0.021-0. 21硫辛酸0.053-0. 53腐胺·:2HC1 0. 04-0. 4丙酮酸(钠盐) 27. 胸苷0.18-1. 8pluronicF68 999.9甲醇胺0.005-0. 05精胺0.005-0. 05硫代甘油0.0099-0硫酸镍0.001-0. 01硫酸锰0.001-0. 01硫酸钡0.0010-0. 01硝酸银0.0010-0. 01氯化铝0.0010-0. 01。
全文摘要
本发明涉及一种CHO细胞无血清无蛋白化学培养基，其特征在于包括5.029-50.294g/L的无机盐、0.554-5.536g/L的氨基酸、0.006-0.06g/L的维生素以及2.612-26.123g/L微量元素，以及0.005-0.05mg/L生物短肽A和0.25-2.5mg/L生物短肽B，其中生物短肽A的氨基酸排序为脯氨酸-甘氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-组氨酸-丝氨酸；生物短肽B为赖氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-苏氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。该培养基pH7.1-7.5、渗透压为280-320mOsm/kg、没有细菌和真菌生长，能为CHO系列细胞，能提供细胞生长、细胞蛋白表达等的无血清培养环境的澄清溶液。
文档编号C12N5/071GK102533634SQ20121004019
公开日2012年7月4日 申请日期2012年2月22日 优先权日2012年2月22日
发明者唐碧云, 陈文永 申请人:江阴剑桥生物技术有限公司