专利名称：链霉菌、抗肿瘤化合物Spiro-Indimycin A-D及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于エ业微生物领域，具体涉及ー种能够产生多种抗肿瘤化合物的新的链霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 03032,以及该菌生产的抗肿瘤化合物Spiro-IndimycinA-D及其制备方法和应用。
背景技术：
近年来，发现新型海洋放线菌资源，并从中筛选新型的活性次生代谢产物成为国际上海洋微生物研究的重要方向。从海洋放线菌中寻找结构新颖、高效、低毒的代谢产物逐渐成为药物寻找的新源泉。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种新的链霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032,该菌于2011年7月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO M 2011258。本发明的新的链霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032是从印度洋(E87° 59. 7! ,N 9° 59.3')水深3412米的海底沉积物中分离获得的。I、形态学特征和生理生化分析链霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032属于革兰氏阳性,好氧放线菌,基丝微黄分枝，气丝灰白色分支井分化成卷曲的孢子链；孢子椭球状(图2)，长0. 4-0. 7 μ m，表面光滑。在PDA培养基上长势较弱，在ISP5上生长有可溶性色素产生。接触酶、脲酶、牛奶凝固和胴化反应阳性，明胶液化、黑色素产生和氧化酶反应阴性。能水解淀粉、纤维素、吐温20，40，80 ;H2S产生和硝酸盐还原反应阴性；可以利用D-阿拉伯糖，D-纤维ニ糖，果糖，肌醇，丙酮酸钠，D-棉子糖，L-鼠李糖，D-甘露醇，D-葡萄糖，D-山梨糖和木糖醇，为唯一碳源和能源生长。而不能利用D-半乳糖，D-乳糖，D-甘露糖，D-核糖，D-海藻糖和D-木糖；对甲氧嘧啶和林可霉素敏感。pH、盐浓度和温度的耐受范围分别为pH 6. 0-9. 0，0-9%和15_40°C。细胞壁含有L-DAP。优势醌为MK-9(H6)和MK-11 ;主要脂肪酸为i-C15:0(8% ), i-C16:0(24% ),i-C16:1G(14% ), ai-C17:0(15% )和 ai_C17:1A(12% )。G+C 摩尔含量为 71.6(±0.5)%。2、分子生物学鉴定常规PCR扩增菌株SCSIO 03032的16S rDNA并测序，其序列如SEQ ID NO. I所示，而后提交到GenBank中，对16S rDNA核苷酸序列进行BLAST分析,结果显示,该菌株与Streptomyces specialis GW41_1564T的相似度为97 %,重新构建该属系统发育树显示菌株SCSIO 03032聚在该类群，说明该菌株SCSIO 03032为链霉菌属。如图I所示，通过邻接法清晰地掲示了该菌株与ー组链霉菌属物种的系统进化关系，表明该菌属于链霉菌属的一种。根据以上形态学、生理学、化学等分析,其与已知最接近的菌株与Streptomycesspecialis GW41_1564T有较大的差异，且基因组杂交显示其杂交值为23%，远低于种内差异不不准的 70% (Stackebrandt, E. & Ebers, J. Taxonomic parameters revisited tarnished gold standards. Microbiol Today. (2006). 33,152-155.);因此，综合分析多项分类数据，鉴定此菌株为链霉菌属(Streptomyces)的一个新种，命名为链霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO 03032，该菌于2011年7月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO M 2011258。本发明的链霉菌(Streptomyces sp. ) SCSIO 03032能够产生4种具有新颖结构的抗肿瘤化合物 Spiro-indimycin A-D。
因此本发明的第二个目的是提供化合物Spiro-indimycin A_D,其结构式如式(I)
所示
权利要求
1.链霉菌(Streptomycessp.) SCSIO 03032，其保藏编号为 CCTCC NO M 2011258。
2.化合物Spiro-IndimycinA-D,其结构式如式(I)所示
3.权利要求2所述的化合物Spiro-indimycinA-D在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinA在制备治疗人急性淋巴细胞白血病药物中的应用。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinB在制备治疗人黑色素瘤、人肺癌或人急性淋巴细胞白血病药物中的应用。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinC在制备治疗人肝癌或人肺癌药物中的应用。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycinD在制备治疗人黑色素瘤、人肝癌或人肺癌药物中的应用。
8.权利要求I所述的链霉菌(Streptomycessp.) SCSIO 03032在用于制备化合物Spiro-indimycin A、B、C 或D 的应用。
9.ー种化合物Spiro-indimycin A、B、C或D的制备方法,其特征在于,所述的化合物Spiro-indimycin A、B、C 或 D 是从权利要求 I 所述的链霉菌(Streptomyces sp.) SCSIO03032的发酵培养物中制备分离得到的。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下 a)制备链霉菌(Sti^ptomycessp.) SCSIO 03032的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经大孔树脂吸附，后用丙酮洗脱大孔树脂，洗脱液回收丙酮后剰余的水混合液用こ酸こ酯萃取，こ酸こ酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏A ;菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剰余的水混合液再用こ酸こ酯萃取，こ酸こ酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏B ； b)将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100 : O O : 100进行梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比95 5梯度洗脱下来的馏分Fr. 1，后经ODS反相中压液相色谱，用水/甲醇作为洗脱剂，从体积比100 : O O : 100进行梯度洗脱，收集水/甲醇体积比30 70梯度洗脱下来的馏分Fr. 1-1，再过LH-20凝胶柱，以氯仿/甲醇体积比I : I作为流动相洗脱，用薄层层析追踪分离，收集薄层板上用氯仿/丙酮体积比为9 I作为展开剂时Rf值为0.8的馏分，即为Spiro-indimycin B，Rf值为O. 6的懼分，即为Spiro-indimycin A ;收集薄层板上用石油醚/こ酸こ酯体积比为 .40 60作为展开剂时Rf值为O. 8的懼分，即为Spiro-indimycin C ;收集薄层板上用石油 醚/こ酸こ酯体积比为50 50作为展开剂时Rf值为O. 8的馏分，即为Spiro-indimycinD0
全文摘要
本发明公开了一种链霉菌、抗肿瘤化合物Spiro-Indimycin A-D及其制备和应用。链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 03032于2011年7月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NOM 2011258。本发明提供了一种新的链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 03032，该菌可以生产结构新颖的具有抗肿瘤活性的化合物Spiro-Indimycin A、B、C和D，化合物Spiro-Indimycin A、B、C和D除具有罕见的螺环结构外，还对肿瘤细胞有选择性的、高效的活性，是开发成为高效、低毒的抗肿瘤化合物理想的候选化合物。
文档编号C12N1/20GK102643765SQ20121008753
公开日2012年8月22日 申请日期2012年3月28日 优先权日2012年3月28日
发明者张偲, 张庆波, 张文军, 张海波, 张长生, 李苏梅, 田新朋, 鞠建华, 马亮 申请人:中国科学院南海海洋研究所