专利名称：一种固定化酶法制备高f值紫苏低聚肽的方法
技术领域：
本发明涉及的是一种功能性食品的生产方法，具体是一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法。
背景技术：
紫苏是一种传统药食两用植物，同时它的果实及紫苏子是一种含油率高的油料资源，目前常用于提取紫苏油，其副产物紫苏柏常用于作动物饲料，尚未有同步制取紫苏油与紫苏蛋白或多肽产品的研究。本发明以紫苏子为原料，脱皮粉碎后与蒸馏水按比例混合，先用能水解蛋白质特定位点的内切酶，切下肽段的N-末端或C-末端的芳香族氨基酸，酶解后经灭酶离心得到紫苏油、混合的多肽液及残渣，然后向多肽液中加入另外一种能切下芳香族氨基酸基团的外切酶，将芳香族氨基酸残基从肽链中释放出来，经灭酶离心、活性炭吸附纯化得到低聚肽混合液，再经透析、超滤、冷冻干燥得到纯度高达90%的高F值低聚肽。使用的内切酶、外切酶均使用油交联-吸附法制得的固定化酶，增加了酶的可回收率及重复利用率，减少了资源浪费。
发明内容
本发明提供一种新型的高F值紫苏低聚肽制备技术，即首先采用脱壳粉碎的紫苏子，与水混合后流入装有一定量固定化内切酶的连续搅拌罐反应器，反应一段时间后将酶解液流出并进行灭酶离心，分离出紫苏油、多肽液、残渣；将多肽液流入另一装有一定量固定化外切酶的连续搅拌罐反应器，反应一段时间后将酶解液流出并进行灭酶离心，分离得到低聚肽溶液，加入活性炭吸附除去芳香族氨基酸，经进一步的分离纯化即可得到高F值低聚肽。 一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法，方法步骤如下
步骤一对紫苏子脱壳粉碎，与水混合得到混合液，所述加水量为物料质量的6倍。步骤二 将步骤一中所得混合液放入装有固定化Alcalase2. 4L碱性蛋白酶的连续搅拌罐反应器中，反应3h后流出产物进行离心，分离出紫苏油、多肽液及残渣。步骤三将步骤二收集的多肽液放入装有固定化木瓜蛋白酶连续搅拌罐反应器，反应2h后流出产物进行灭酶，高速离心分离出混合液。步骤四将步骤三中的混合液加入一定量的活性炭，吸附除去芳香族氨基酸，经超滤脱盐得到高F值的紫苏低聚肽。所述步骤一中紫苏子的粉碎粒度在60-90目。所述步骤二中固定化Alcalase2. 4L碱性蛋白酶由3%壳聚糖、0. 5%戊二醛经交联-吸附法交联时间4h后，调pH=9在给酶量950u/g的载体上固定化8h制得，其添加量为底物浓度的0. 5-3%，温度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，灭酶条件为灭酶条件为沸水中加热5min，离心条件为转速4500rpm，温度4°C，时间20min。
所述步骤三中固定化木瓜蛋白酶的制备方法同Alcalase2. 4L，添加量为底物浓度的0. 5-3%，温度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，灭酶条件为灭酶条件为沸水中加热5min，离心条件为转速4500rpm，温度4°C，时间20min。所述步骤四中活性炭添加量为底物质量的5-15倍，pH=2_5，温度为25_50°C，超滤膜孔径为2-8微米，截留分子量在100-1000，操作压差在1-2. 5MPa。本发明的有益点是本发明采用一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽，首先采用脱壳粉碎的紫苏子，与水混合后流入装有一定量固定化内切酶的连续搅拌罐反应器，反应一段时间后将酶解液流出并进行灭酶离心，分离出紫苏油、多肽液、残渣；将多肽液流入另一装有一定量固定化外切酶的连续搅拌罐反应器，反应一段时间后将酶解液流出并进行灭酶离心，分离得到低聚肽溶液，加入活性炭吸附除去芳香族氨基酸，经进一步的分离纯化即可得到高F值低聚肽。
附图是本发明工艺路线图
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式的步骤如下
步骤一对紫苏子脱壳粉碎，粉碎粒度为60目，与水按1:6的比例混合。步骤二 将步骤一中所得物料放入装有固定化Alcalase2. 4L碱性蛋白酶的连续搅拌罐反应器，反应3h后流出产物进行灭酶离心，分离出紫苏油、多肽液及残渣。固定化Alcalase2. 4L碱性蛋白酶的添加量`为底物浓度的1%，温度55°C，pH=8. 5 ;灭酶条件为沸水中加热5min ;离心条件为转速4500rpm,温度4°C,时间20min。步骤三将步骤二收集的多肽液放入装有固定化木瓜蛋白酶连续搅拌罐反应器，反应2h后流出产物进行灭酶离心，分离出低聚肽混合液。固定化木瓜蛋白酶的添加量为底物浓度的1%，温度50°C，pH=6 ;灭酶条件为沸水中加热5min ;离心条件为转速8000rpm，温度 4°C，时间 IOmin0步骤四将步骤三中的低聚肽混合液按1:5的比例加入活性炭,吸附40min,pH=3,温度20°C，去除芳香族氨基酸。步骤五将步骤四中的物料经超滤得到肽分子量在10(T1000的高F值低聚肽。具体实施方法二 本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤一中紫苏子的粉碎粒度在70目。其它组成和步骤与具体实施方法一相同；
具体实施方法三本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤二中Alcalase2. 4L的添加量为2%，温度50°C，pH=8 ；
具体实施方法四本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤三中木瓜蛋白酶的添加量为底物浓度的2%，温度60°C，pH=6. 5。其它组成和步骤与具体实施方法一相同；
具体实施方法五本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤四中活性炭添加量为1:10，吸附60min，pH=4，温度30°C。其它组成和步骤与具体实施方法一相同。
权利要求
1.一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法，其特征在于所述方法步骤如下 步骤一对紫苏子脱壳粉碎，与水混合得到混合液，所述加水量为物料质量的6倍； 步骤二 将步骤一中所得混合液放入装有固定化Alcalase2. 4L碱性蛋白酶的连续搅拌罐反应器中，反应3h后流出产物进行离心，分离出紫苏油、多肽液及残渣； 步骤三将步骤二收集的多肽液放入装有固定化木瓜蛋白酶连续搅拌罐反应器，反应2h后流出产物进行灭酶，高速离心分离出混合液； 步骤四将步骤三中的混合液加入一定量的活性炭，吸附除去芳香族氨基酸，经超滤脱盐得到高F值的紫苏低聚肽。
2.根据权利要求1所述的一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法，其特征在于所述步骤一中紫苏子的粉碎粒度在60-90目。
3.根据权利要求1所述的一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法，其特征在于所述步骤二中固定化Alcalase2. 4L碱性蛋白酶由3%壳聚糖、0. 5%戊二醛经交联-吸附法交联时间4h后，调pH=9在给酶量950u/g的载体上固定化8h制得，其添加量为底物浓度的0.5-3%，温度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，灭酶条件为灭酶条件为沸水中加热5min，离心条件为转速4500rpm,温度4°C,时间20min。
4.根据权利要求1所述的一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法，其特征在于所述步骤三中固定化木瓜蛋白酶的制备方法同Alcalase2. 4L，添加量为底物浓度的0.5-3%，温度40-60°C，pH=7. 5-9. 5，灭酶条件为灭酶条件为沸水中加热5min，离心条件为转速4500rpm,温度4°C,时间20min。
5.根据权利要求1所述的一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的方法，其特征在于所述步骤四中活性炭添加量为底物质量的5-15倍，pH=2-5，温度为25-50°C，超滤膜孔径为2-8微米，截留分子量在100-1000，操作压差在1-2. 5MPa。
全文摘要
本发明提供一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽的新工艺，采用一种固定化酶法制备高F值紫苏低聚肽，首先采用脱壳粉碎的紫苏子，与水混合后流入装有一定量固定化内切酶的连续搅拌罐反应器，反应一段时间后将酶解液流出并进行灭酶离心，分离出紫苏油、多肽液、残渣；将多肽液流入另一装有一定量固定化外切酶的连续搅拌罐反应器，反应一段时间后将酶解液流出并进行灭酶离心，分离得到低聚肽溶液，加入活性炭吸附除去芳香族氨基酸，经进一步的分离纯化即可得到高F值低聚肽。
文档编号C12P21/06GK103060408SQ20121055777
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月20日 优先权日2012年12月20日
发明者江连洲, 李杨, 齐宝坤, 冯红霞, 王欢, 曹亮 申请人:东北农业大学