表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体、其应用、构建方法及脱髓鞘疾病的治疗系统的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体、其应用、构建方法及脱髓鞘疾病的治疗系统。该用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。使用该用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体感染脱髓鞘部位，使光敏感型腺苷酸环化酶基因序列只在少突胶质细胞和施万细胞中表达，在光刺激下，能定向调节上述两种细胞中的cAMP水平，从而促进髓鞘再生和稳定成髓，实现细胞特异性治疗脱髓鞘疾病的目的。
【专利说明】表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体、其应用、构建方法及脱髓鞘疾病的治疗系统
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物工程【技术领域】，特别是涉及一种表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体、其应用、构建方法及脱髓鞘疾病的治疗系统。
【背景技术】
[0002]脱髓鞘疾病是以神经髓鞘脱失为主要或始发病变的神经系统疾病。可发生于中枢神经系统或周围神经系统，中枢神经系统的髓鞘由少突胶质细胞构成，而周围神经系统髓鞘由Schwann细胞构成。脱髓鞘疾病分为髓鞘破坏和髓鞘形成障碍两种类型，髓鞘破坏型是后天获得的脱髓鞘疾病，髓鞘形成障碍型是遗传代谢缺陷引起的脱髓鞘疾病。脱髓鞘疾病是当今临床医学尤其是神经学所面临的难以克服的挑战之一。近年来，伴有髓鞘损伤的病例数目明显增加。
[0003]目前临床上对于脱髓鞘疾病尚无特异有效的治疗药物或措施。一般采用调整体内免疫状态的药物治疗，也有针对各种并发症的一般性治疗。常规药物治疗方法包括:皮质内固醇、大剂量免疫球蛋白IgG静脉滴注(IVIG)以及血浆置换(PE)等。其中皮质内固醇只对慢性炎性脱髓鞘疾病有一定效果，而急性炎性脱髓鞘疾病往往因为用药“偏晚”而丧失了时机，无法中断免疫反应过程。血浆置换(PE)和大剂量免疫球蛋白(IgG)滴注治疗费用较高。LgG为血液制品，PE需用外源血浆，都有可能带来应用血液制品发生的问题，如肝炎等。两者都会增加复发的几率。而且，无论是皮质内固醇、免疫球蛋白还是血浆置换，这些药物或治疗手段均无细胞特异性，存在作用时间一过性的弊端，只能缓解急性期症状，但是不能改变疾病的进展和病程，难以实现髓鞘再生。
[0004]近年来对于髓鞘再生的分子机制已经有了比较清楚的认识。在多发性硬化症中，少突胶质细胞和施万细胞内的cAMP水平是髓鞘再生成功的一个关键性步骤。因此，能够特异性作用于少突胶质细胞和施万细胞、调节cAMP水平的的药物对于脱髓鞘疾病的治疗至
关重要。
【发明内容】
[0005]基于此， 有必要提供一种具有细胞特异性治疗脱髓鞘疾病疗效的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。
[0006]进一步，还提供上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体在制备用于治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。
[0007]此外，还提供一种光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法及脱髓鞘疾病的治疗系统。
[0008]一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体，包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。[0009]在其中一个实施例中,所述病毒载体为腺病毒或慢病毒。
[0010]上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体在制备用于治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。
[0011]一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法，包括如下步骤:
[0012]将少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子进行PCR扩增后插入到带有EYFP的质粒中，经验证蛋白表达正常且具有细胞特异性；
[0013]合成光敏感型腺苷酸环化酶基因序列，并将所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入到所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的下游，得到包括所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列后并将其插入到穿梭质粒中，得到携带包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒；
[0014]将携带包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒与病毒载体进行LR体外重组得到重组体，将所述重组体线性化后转染至293细胞中，包装所述重组体并进行扩增，3飞天后收集病毒，得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。
[0015]一种脱髓鞘疾病的治疗系统，包括包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂、定位装置、注射装置和光刺激装置，其中，
[0016]所述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子；
[0017]所述定位装置用于确定脱髓鞘部位；
[0018]所述注射装置用于将所述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂注射入所述脱髓鞘部位；
[0019]所述光刺激装置用于对所述注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激。
[0020]在其中一个实施例中，所述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂为浓度为109"l0n/particles/mL的水溶性制剂。
[0021]在其中一个实施例中，所述定位装置选自放射性核素计算机断层扫描装置、磁共振成像装置、皮层电极装置、偶极子定位装置、磁共振波谱扫描装置、单光子发射计算机体层扫描装置及正电子发射体层扫描装置中的一种。
[0022]在其中一个实施例中，所述注射装置为微量注射泵或立体定位注射仪。
[0023]在其中一个实施例中，所述光刺激装置用于发出波长为441纳米的蓝光对所述注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激，所述441纳米的蓝光以500ms为间隔进行闪烁。
[0024]上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的病毒载体包括带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的质粒，该光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子，使用该用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体感染脱髓鞘部位，使光敏感型腺苷酸环化酶基因序列只在少突胶质细胞和施万细胞中表达，在光刺激下，能定向调节上述两种细胞中的cAMP水平，从而促进髓鞘再生和稳定成髓，实现细胞特异性治疗脱髓鞘疾病的目的。
【专利附图】
【附图说明】
[0025]图1为一实施方式的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的结构示意图；
[0026]图2为使用一实施方式的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体治疗脱髓鞘疾病的原理示意图；
[0027]图3为一实施方式的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法流程图；
[0028]图4为实施例1的MBP启动子重组质粒PCR、双酶切鉴定结果电泳图；
[0029]图5为实施例1的MBP启动子重组质粒在混合培养细胞中特异性表达的示意图；
[0030]图6为实施例1的bPAC插入到MBP启动子的下游PCR鉴定结果电泳图。
【具体实施方式】
[0031]为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实 施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
[0032]一实施方式的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体，包括病毒载体和包装于病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。
[0033]光敏感型腺苷酸环化酶(Beggiatoaphotoactivated adenylyl cyclase, bPAC)是一种对蓝光敏感的腺苷酸环化酶。在有光的环境下的活性是黑暗中的活性300倍，将其导入宿主细胞中，可以通过光刺激来调控细胞内的cAMP水平，从而调控细胞内各种蛋白磷酸化或基因的表达。
[0034]在光敏感型腺苷酸环化酶基因序列前面插入少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子(如图1所示)，使该基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子，少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子引导光敏感型腺苷酸环化酶基因在少突胶质细胞和施万细胞中表达。
[0035]少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子优选为MBP (髓鞘碱性蛋白)启动子。
[0036]病毒载体中较为常用的有腺病毒载体、慢病毒载体等。其中腺病毒载体的免疫反应小，优选为腺病毒载体。
[0037]慢病毒载体表达快，有利于缩短治疗时间。慢病毒载体是由人体免疫缺损病毒、乳多空病毒、牛痘病毒、疱疹病毒和逆转录病毒组成的物质组中选择的一种。
[0038]优选地，病毒载体为经过基因工程改造的病毒载体，采用基因工程改造使病毒载体的生活周期的复制能力失活，在病毒DNA不整合至宿主细胞染色体的情况下实现病毒表达，由此减小了插入诱变的风险，以提高使用该用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体导入细胞中治疗脱髓鞘疾病的安全性。
[0039]上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的病毒载体包括带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，该光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子，使用该用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体感染脱髓鞘部位，使光敏感型腺苷酸环化酶基因序列只在少突胶质细胞和施万细胞中表达，在光刺激下，能定向调节上述两种细胞中的cAMP水平，从而促进髓鞘再生和稳定成髓，实现细胞特异性治疗脱髓鞘疾病的目的。
[0040]使用上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体进行细胞特异性治疗脱髓鞘疾病的原理如图2所示。将上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体导入少突胶质细胞或施万细胞群中，通过光刺激，使光敏感型腺苷酸环化酶(bPAC)的活性大大提高，下游的cAMP水平上调，从而调控细胞的增殖与分化。施万细胞内的cAMP的水平不仅是促进成髓的因素，对维持髓鞘的稳定也起着非常重要的作用。在脊髓损伤后，cAMP的水平对促进受损神经元恢复、以及促进损伤部位脱髓神经复髓至关重要。cAMP同样可以调节少突胶质细胞分化的时间点和增殖的比率。
[0041 ]目前在体外神经元-施万细胞共培养体系中，直接或间接升高cAMP水平已经成为一种诱导成髓的有力工具。而将上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体进行导入细胞中以调节cAMP水平而诱导成髓，能够克服传统用药治疗脱髓鞘疾病没有细胞特异性的特点，并且无毒副作用，可以治疗所有的伴有髓鞘脱失症状的疾病。
[0042]上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体可应用于制备用于治疗脱髓鞘疾病的药物中。例如，将该用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体导入靶细胞中(如大肠杆菌、酵母，哺乳动物细胞或人体组织靶细胞)，使目的基因在靶细胞中得到表达，通过发酵或细胞繁殖来 生产出足够量多肽或蛋白质，最后将表达的多肽、目的蛋白质提纯及做成制剂，从而成为多肽、蛋白类药物或疫苗。使用该多肽、蛋白类药物或疫苗治疗脱髓鞘疾病。
[0043]请参阅图3，一实施方式的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法，包括如下步骤:
[0044]步骤SllO:将少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子进行PCR扩增后插入到带有EYFP的质粒中，经验证蛋白表达正常且具有细胞特异性。
[0045]选择MBP启动子作为少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。将MBP启动子进行PCR扩增后，采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法，将扩增后的MBP启动子插入到带有EYFP的质粒中，并进行测序，测序成功后转染原代混合培养细胞，将验证目的蛋白特异性表达正常。
[0046]步骤S120:合成光敏感型腺苷酸环化酶基因序列，并将光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入到少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的下游，得到包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列后并将其插入到穿梭质粒中，得到携带包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒。
[0047]合成光敏感型腺苷酸环化酶基因序列，并采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接将光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入到MBP启动子的下游，测序成功，得到包含MBP启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列，将包含MBP启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入到穿梭质粒中，得到携带包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒。
[0048]步骤S130:将携带包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒与病毒载体进行LR体外重组得到重组体，将重组体线性化后转染至293细胞中，包装重组体并进行扩增，3飞天后收集病毒，得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。
[0049]携带包含MBP启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒与病毒骨架载体在LR克隆酶II的作用下进行LR体外重组反应得到重组体，用PacI酶切重组体，用酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，获得线性化重组体，将线性化重组体转染至293细胞中，用Metafectene脂质体转染试剂，按DNA:脂质体=1:3的比例对达到50%~70%融会度的293细胞进行转染，此后每天观察细胞病变效应(CPE)，当细胞有明显的CPE现象，且有> 50%脱壁时，即收集细胞进行裂解收集病毒，得到包装重组体。
[0050]将包装重组体进行扩增，3飞天后收集病毒，得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。
[0051]上述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法在光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入有少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子，并将其插入穿梭质粒中，用病毒载体包装该穿梭质粒得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子引导光敏感型腺苷酸环化酶基因在少突胶质细胞和施万细胞中表达，因而，采用上述方法能够制备得到能够具有细胞特异性治疗脱髓鞘疾病疗效的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。
[0052]一实施方式的脱髓鞘疾病的治疗系统，包括包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂、定位装置、注射装置和光刺激装置。
[0053]包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂为浓度为109~10n/particles/mL的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的水溶性制剂。
[0054]其中，用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体包括病毒载体和包装于病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。
[0055]少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子优选为MBP (髓鞘碱性蛋白)启动子。
[0056]病毒载体为腺病毒载体或慢病毒载体。病毒载体为经过基因工程改造、使其生活周期的复制能力失活的病毒载体。
[0057]包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂作为细胞特异性治疗脱髓鞘疾病的药物制剂。
[0058]定位装置用于确定脱髓鞘部位，以将上述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂靶向注入脱髓鞘部位的细胞中。
[0059]定位装置选自放射性核素计算机断层扫描装置、磁共振成像装置、皮层电极装置、偶极子定位装置、磁共振波谱扫描装置、单光子发射计算机体层扫描装置及正电子发射体层扫描装置中的一种。
[0060]注射装置用于将包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂注射入脱髓鞘部位。
[0061]优选地，注射装置为微量注射泵或立体定位注射仪。微量注射泵能够将微量制剂均匀、持续地泵入脱髓鞘部位，能够定时定量，准确、安全。立体定位注射仪可以较好地控制注射深度，有利于提高注射的靶向性。
[0062]光刺激装置用于对注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激。
[0063]光敏感型腺苷酸环化酶在有光的环境下的活性是黑暗中的活性300倍，用光刺激装置进行光刺激，以激发光敏感型腺苷酸环化酶的活性。
[0064]光敏感型腺苷酸环化酶在波长为441纳米的蓝光刺激下，活性较强。
[0065]优选地，光刺激装置用于发出波长为441纳米的蓝光对注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激，441纳米的蓝光以500ms为间隔进行闪烁，以较好地刺激光敏感型腺苷酸环化酶，提高活性。
[0066]采用上述脱髓鞘疾病的治疗系统治疗脱髓鞘疾病时，按需要的浓度将构建的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体制成制剂，用定位装置确定脱髓鞘部位，再用注射装置将包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂注射于脱髓鞘部位，待用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体在脱髓鞘部位的细胞中表达稳定后，用光刺激装置对脱髓鞘部位进行照射，以对光敏感型腺苷酸环化酶进行光刺激提高其活性。光敏感型腺苷酸环化酶通过调节细胞内的cAMP的水平而促进成髓、维持髓鞘的稳定及促进损伤部位脱髓神经复髓，从而实现治疗脱髓鞘疾病的目的。
[0067]采用上述脱髓鞘疾病的治疗系统治疗脱髓鞘疾病，在定位装置的辅助下，使用注射装置能够将包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂准确地注射入脱髓鞘部位，并且由于用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体只在少突胶质细胞和施万细胞中表达，从而能够实现具有细胞特异性地治疗脱髓鞘疾病。
[0068]向脱髓鞘部位注入包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂后，20-30天后，用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体在细胞中表达稳定，用光刺激装置进行光刺激时，采用时间间隔为500ms的闪烁光，并且IOms照光，间隔90ms黑暗，每天进行光刺激一小时即可，无需住院，治疗较为方便。
[0069]以下为具体实施例
[0070]实施例1
[0071]构建用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体
[0072](I)将MBP启动子作为少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子，将MBP启动子PCR扩增后，采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法，将扩展后的MBP启动子插入带有EYFP的质粒(如图4所示),得到MBP启动子重组资料,验证其表达情况,如图5所示，目的蛋白特异性表达正常。
[0073](2)人工合成光敏感性腺苷酸环化酶(bPAC)基因序列，将bPAC基因序列插入到MBP启动子的下游。测序成功，得到包含MBP启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列(如图6所示)，表示为MBP-bPAC。将MBP-bPAC插入到穿梭质粒中，得到携带包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒。
[0074](3)将携带包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒与病毒载体进行LR体外重组得到重组体，将重组体线性化后转染至293细胞中，包装重组体并进行扩增，5天后收集病毒，得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体
[0075] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【权利要求】
1.一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体，其特征在于，包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。
2.根据权利要求1所述的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体，其特征在于，所述病毒载体为腺病毒或慢病毒。
3.如权利要求1所述的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体在制备用于治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。
4.一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤: 将少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子进行PCR扩增后插入到带有EYFP的质粒中，经验证蛋白表达正常且具有细胞特异性； 合成光敏感型腺苷酸环化酶基因序列，并将所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入到所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的下游，得到包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列后并将其插入到穿梭质粒中，得到携带包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒； 将携带包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒与病毒载体进行LR体外重组得到重组体，将所述重组体线性化后转染至293细胞中，包装所述重组体并进行扩增，3飞天后收集病毒，得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。
5.一种脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，包括包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂、定位装置、注射装置和光刺激装置，其中， 所述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子； 所述定位装置用于确定脱髓鞘部位； 所述注射装置用于将所述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂注射入所述脱髓鞘部位； 所述光刺激装置用于对所述注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激。
6.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂为浓度为109~10n/partiCles/mL的水溶性制剂。
7.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述定位装置选自放射性核素计算机断层扫描装置、磁共振成像装置、皮层电极装置、偶极子定位装置、磁共振波谱扫描装置、单光子发射计算机体层扫描装置及正电子发射体层扫描装置中的一种。
8.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述注射装置为微量注射泵或立体定位注射仪。
9.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述光刺激装置用于发出波长为441纳米的蓝光对所述注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部 位进行光刺激，所述441纳米的蓝光以500ms为间隔进行闪烁。
【文档编号】C12N15/861GK103898160SQ201210572743
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2012年12月25日 优先权日:2012年12月25日
【发明者】谢维娇, 王丹, 冯晓娜, 秋云海 申请人:中国科学院深圳先进技术研究院