一种阿扎那韦中间体的生物制备方法
【专利摘要】本发明涉及阿扎那韦中间体的生物制备方法，其以(S)-叔丁基(4-氯-3-羰基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯为底物，实施如下：在反应器中加入底物、助溶剂及葡萄糖，搅拌均匀，称取酮还原酶酶粉，葡萄糖脱氢酶和辅因子溶于pH8～9的水相缓冲溶液中，将所得混合溶液加入反应器中，搅拌，控制温度32℃～34℃，开始反应，反应开始时，底物的质量体积比浓度为0.05～0.2g/ml，酶、辅因子、葡萄糖、底物三者的投料质量比为0.02～0.03∶0.001～0.005∶0.8～1.2∶1。与已有方法相比，本发明实现了高反应效率和更加绿色、温和的生物转化过程，具有重要的应用价值。
【专利说明】一种阿扎那韦中间体的生物制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物制药和生物化工【技术领域】，具体涉及一种阿扎那韦中间体的生物制备方法。
【背景技术】
[0002]阿扎那韦(Atazanavir, CAS: 198904-31-3)是美国施贵宝公司研究开发的一种蛋白酶抑制剂类抗病毒药物，商品名锐艾妥(英文商品名Reyataz)，通常与其它药物一同使用于治疗艾滋病。2003年FDA批准上市后，2009年该药全球销售额为52亿美元，排名第70位。随着全球范围内“非典”、“甲流”和禽流感等疫情的频繁爆发和艾滋病防控工作的深入，人们对抗病毒药物的需求不断加大。可以预见的是，该类药物的销售额和排名还会进一步上升。
[0003]阿扎那韦的主要活性成分分子结构较为复杂，但是其分子核心的两个手性中心可以由式I化合物(化学名称:叔丁基((2S，3R)-4-氯-3-羟基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯)提供。式I化合物可以由式II化合物(化学名称:(S)-叔丁基(4-氯-3-羰基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯)通过还原反应获得。
[0004]
【权利要求】
1.一种阿扎那韦中间体的生物制备方法，所述阿扎那韦中间体为叔丁基((2S, 3R) -4-氯-3-羟基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯，所述方法以(S)-叔丁基(4-氯-3-羰基-1-苯丁基-2-基)氨基甲酸酯为底物，使该底物在酮还原酶作用下发生不对称还原反应生成阿扎那韦中间体，并利用葡萄糖脱氢酶与葡萄糖进行辅酶循环，其特征在于，所述的方法实施如下:在反应器中加入所述底物、助溶剂以及葡萄糖搅拌均匀，另称取酮还原酶酶粉，葡萄糖脱氢酶和辅因子溶于PH8~9的水相缓冲溶液中，并将所得混合溶液加入至反应器中，搅拌，控制温度在32°C~34°C之间，开始反应，HPLC检测反应转化率，至转化率大于等于96%时，结束反应，其中反应开始时，底物的质量体积比浓度为0.05~0.2g/ml，酶、辅因子、葡萄糖、底物三者的投料质量比为0.02~0.03:0.001~0.005:0.8~1.2:1，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH，所述的助溶剂为乙腈或甲苯或二者的组合。
2.根据权利要求1所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:反应结束后，加入乙酸乙酯继续搅拌萃取，合并有机相，干燥过滤，浓缩得到固体产物，即为纯度大于等于97%、光学纯度大于等于99.5%的阿扎那韦中间体。
3.根据权利要求1所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:反应开始时，底物的质量体积比浓度为0.1~0.2g/ml。
4.根据权利要求3所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:反应开始时，底物的质量体积比浓度为0.13~0.2g/ml。
5.根据权利要求1所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:助溶剂的用量为I~10ml/g底物。
6.根据权利要求5所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:助溶剂的用量为I~5ml/g底物。.
7.根据权利要求1所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:酶、辅因子、葡萄糖、底物三者的投料质量比为0.02~0.03:0.001~0.004:0.9~1.1:1。
8.根据权利要求1所述的阿扎那韦中间体的生物制备方法，其特征在于:所述的水相缓冲液为三乙醇胺缓冲溶液。
【文档编号】C12P13/02GK103468757SQ201310429886
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月18日 优先权日:2013年9月18日
【发明者】尹将来, 鞠鑫, 李斌, 陶军华 申请人:苏州汉酶生物技术有限公司