专利名称：测定人细胞色素p4501a2基因多态性的方法
技术领域：
本发明涉及诊断与药物代谢有关酶的基因的方法，特别是测定人细胞色素P4501A2基因(此后缩写为CYP1A2)多态性的方法。
人细胞色素P450具有重要的功能，包括解毒，药物或外源性物质的代谢活化，甾类激素及胆汁酸的生物合成。CYP1A2是细胞色素P450分子种类之一，且已知有代谢药物如茶碱、非那西汀的功能。CYP1A2的活性可通过所谓的咖啡因试验证实，即摄入咖啡后定量地测定尿中其咖啡因的代谢物。已知咖啡因试验证明，有弱代谢者(以后缩写为PMs)和广泛代谢者(以后缩写为EMs)。
如果某药物作为一种CYP1A2的特异性底物，那么认为对PMs用药导致过分强的效应(副作用)，因为PMs可保持在血液中药物具有高浓度。事实上，当对PMs用茶碱时，约30％服用茶碱者证明有副作用。为预防此类型的副作用，根据药物代谢活性的多态性可充分明确此类型副作用，即在用药之前，通过基因诊断，如果能区分广泛的代谢者和弱代谢者，就能使每个患者达到较好的药物定向疗法。
在其它药物代谢酶，如CYP1A1，CYP2D6，和N-乙酰转移酶观察到类似的多态性。据报道，这种药物代谢活性的多态性属于基因多态性，因此，患者是PM还是EM可容易地通过基因诊断确定。然而，对于CYP1A2，还未发现基因多态性。
本发明弄清了CYP1A2的新突变，提供了一种新的测定CYP1A2基因多态性的方法。
本发明人进行了健康人的CYP1A2基因的分析，并发现了基因的多态性。他们也成功地开创了此多态性的测定方法，致使此方明得此完善。
因此，本发明提供了一种测定CYP1A2基因多态性的方法，此方法的特征是测定在CYP1A2基因的非转译区中第2064碱基(突变1)处的取代基。
本发明也提供了一种测定CYP1A2基因多态性的方法，此方法的特征是测定在CYP1A2基因的非转译区中第2640碱基(突变2)处的取代基。
本发明进一步提供了测定CYP1A2基因多态性的方法，此方法的特征是测定在CYP1A2基因的非转译区中第-1569碱基(突变3)处的缺失。
图1说明基因多态性类型与血中茶碱的半衰期的关系。
在图1中，纵坐标表示茶碱的半衰期，横坐标表示基因多态性的类型。曲线(A)和曲线(B)分别表示第2640多态性和第-1549多态性的测定结果。图1中显示的多态性类型如下C/CC的纯合子C/AC和A的杂合子A/AA的纯合子T/TT的纯合子T/delT和T-缺失的杂合子
del/delT-缺失的纯合子在本发明中，核苷酸序列由符号表示，以符合由IUPAC-IUB给定的定义和本领域的一般名词或一般用法。上述突变1和突变2的核苷酸数按CYP1A2基因组DNA(Mol.Endocrinol，3(9)，1399-1408(1989))表示，而突变3的核苷酸数按CYPlA2基因组DNA(Mol.Pharmacol.，36(1)，66-71(1989))表示。在此编入分子内分泌学3(9)，1399-1408(1989)和分子药理学36(1)，66-71(1989)的内容，仅供参考。
本发明叙述的基因突变特征是第2064碱基(T)和第2640碱基(C)，都是在CYP1A2基因的5’非转译区，分别被G和A取代，而且第1569碱基(T)缺失。本发明提供了一种新基因，其至少具有这些类型的突变之一。
本发明的方法的特征是检测上述特异性类型的突变，用于基因诊断，以检测CYP1A2基因的多态性。只要此方法能检测上述提到的特异类型的突变，这些突变用本发明明确定义和定性，则用于此方法中的技术便不受限制。例如，可以广泛使用多种常规方法。由于本发明在此弄清和定性了待测基因突变的类型，显而易见，本领域的技术人员通过阅读此说明书的公开内容，可以采用合适的方法测定它们。根据本发明，特异类型突变的检测包括测定三种类型突变之一，测定两种类型任意的合并，测定所有三种类型的突变。
例如，本发明的方法可以通过分析在上述特定位置的核苷酸序列进行。此分析在本发明的范围之内。其它的方法，优先使用的包括，根据由突变或限制酶位点差异导致的物化差异的主法，例如，使用在不同的电泳中揭示的差异的方法，例如凝胶电泳和毛细管电泳，使用的DNA样品包含一或多个本发明定义的突变点；使用合适的探针测定本发明一个或多个突变点的方法；及这些方法的混合方法。检测突变点的探针无特别限制，只要其含有上述特异性突变点，并保证在与待测DNA样本杂交中有一定水平的特异性，以便测定突变点。一般地，探针可以是由数打碱基组成的核苷酸序列的DNA片段，优选为10-30个碱基，包括突变点或其互补DNA片段。
具体地说，检测方法可以是，如Southern杂交方法或点杂交方法(J.Mol.Biol.，98.，503-517(1975)，etc)，PCR(聚合酶链式反应)-RFLP(限制性片段长度多态性)方法，PCR-SSCP(单链构象多态性)方法(Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，86，2766-2770(1989)，etc.)PCR-SSO(特异序列寡核苷酸)方法，及使用PCR方法，结合DNA扩增技术的方法，例如，ASO(等位基因特异的寡聚体)方法，其中采用了PCR-SSO方法及点杂交方法中(Nat-ue，324，163-166(1986)etc)。这些方法可合并使用。尤其推荐PCR方法，因为其仅需要小量DNA样品，但能提供高灵敏度和精确度的简单而容易的检测。
特别是，在本发明中，由于其简便，强烈建议用RFLP方法。此后，本发明将更详细地叙述用RFLP方法的例子。
许多处理方法可用于本发明的测定方法中，如部分DNA的化学合成，用酶处理来切割，删去，填加及合并DNA；分离、纯化、复制及DNA的选择可根据常规方法进行。(“Experimental Techniquesfor Molecular Genetics”，Kgoritsu Shuppan K.K.，1983；“PCR Technolo-gy″，Jakara Shuzo K.K.，1990；etc.)。例如，可经琼脂糖凝胶电泳进行DNA纯化和分离，用双脱氧方法(Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，74，5463--5467(1977)，a Maxum--Gilbert Method(Methodin Enzymology，65，499-560(1980))等进行DNA测序。通过使用市售测序试剂盒也可容易地进行DNA核苷酸的测序。根据常规方法(例如，Science，230，1350-1354(1985))也可进行扩增某一DNA区的PCR方法。在本说明书引用的参考文献中采纳了这些必要的方法，并且在此后所述的实施例中它们会被一并提及。
在本发明的测定方法中，测定了来源于人的样品中的基因组DNA，其没有限制，只要其含有基因组DNA。例如，体液，如血液、骨髓液、精液、腹水和尿液；组织细胞，如肝组织，体毛，如头发。通过提取和纯化这些样品可制备基因组DNA。
从基因组DNA中，可扩增含本发明突变点的DNA区，以获得用于测定的大量浓缩的样本。这种类型的样品，即通过扩增含本发明突变点的DNA区获得的样品，特别优先用于作为测定材料。例如，可按PCR方法，使用引物进行扩增，此引物经合理设计以便仅扩增含多态性的非转译区的部分。这种引物可经常规方法制备。待扩增区的碱基长度不受限制。在一般情况下，碱基长度约100bp至500bp。在以后的实施例部分将特别叙述如此制备的引物的优选的例子。当按本发明所述制备引物时，可获得适宜的测定样品，其作为扩增的DNA片段，每一个都含一个多态性片段并具有特异性长度。
进行PCR-RFLP方法时，欲扩增的DNA被设计成含能适用于此后RFLP方法的任一酶切位点。
对此设计无限制，只要用酶切割DNA区获得的片段长度在突变基因和野生型基因的两种情形中不同。可使用通过本发明的突变产生或丢失的限制酶位点。当它们单独使用时，如果变化的碱基不能作为限制酶识别的位点，通过在引物中放置一个错误配对可任一引入一个所需的限制性酶点。
因此，根据PCR方法扩增的所需DNA区，通过上述合理选择的限制酶得以设计。酶切产生的片段通过电泳证实，它们显示特定的条带。
根据在上述方法中获得的带型，可测定CYP1A2基因多态性(根据本发明突变的存在)。这用于不同药物代谢活性多态性的基因诊断中，所说药物作为CYP1A2基因的特定底物。
在进行本发明的基因诊断时，优选使用用于测定根据本发明的突变类型存在的诊断试剂，其包括作为活性成分的试剂。因此，本发明也提供了用于测定药物代谢活性的多态性的一种诊断物，药物是指和CYP1A2基因有关的。诊断试剂包括作为必要成分的特定试剂，其对应于用于测定本发明突变类型的方法。特定的试剂按采用的测定方法来适宜地选择。试剂的特征是，组成测定由本发明定义的突变类型的手段是必要的，如，DNA片段/和/或作为用于测定的探针的特异限制酶。试剂，例如特定制备的用于PCR扩增步骤的引物，该步骤用于包含本发明的突变点的特定扩增区，不被认为是本发明诊断试剂的必要成分。象制备用于进行杂交的试剂一样，它们也可包含于本发明的诊断试剂之中。实施例本发明将进一步通过实施例更详细地得以叙述，但不意味着限制本发明。
用于下列实施例中表示试剂的符号如下。需要时，用高压釜(121℃，20分钟)灭菌
EDTA乙二胺四乙酸二钠盐SDS十二烷基硫酸钠TE10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM EDTA(pH8.0)10×PCR缓冲液100mM Tris-HCl(pH8.3)，500mM KCl，15mM氯化镁(MgCl2)0.01％(W/V)白明胶dNTP脱氧核苷三磷酸甲酰胺颜料95％去离子甲酰胺，0.05％葡聚糖蓝LB介质胰蛋白胨(10g)，NaCl(10g)酵母提取物(5g)，溶于纯水中，总体积为1升。
LBamp介质在上述培养基中加入氨基苄青霉素，使终浓度达到50单位/ml获得的培养基。
LBamp平皿通过加入15g琼脂粉在上述LBamp培养基中获得的培养基。
ddNTP双脱氧核苷三磷酸APS过硫酸铵10×TBETris(108g)，硼酸(55g)，EDTA2Na(9.3g)，溶于纯水中，总体积为1升。实施例1CYP1A2突变基因的核苷酸序列分析(1)根据下列方法，用人外周血制备基因组DNA。在抗凝剂ED-TA存在下，将收集的10ml人外周血在2500rpm，离心分离30分钟除去血清。接着加入0.2％NaCl溶液，使总体积为50ml。轻轻振荡溶液5-6次，并使其放置于冰上15分钟。此后，在2500rpm离心分离30分钟，借此收集丸状物。用0.2％的NaCl溶液，以类似于前面的方式再进行洗涤。在如此获得的丸状物中，加入10mMTris-HCl(pH8.0)和10mM EDTA(4ml)，以悬浮该丸状物。将10％SDS、25mg/ml的蛋白酶K和10mg/ml的RNaseA加入悬液中，其加入量分别为4ml、16μl和20μl，接着上下颠倒悬液轻轻混合。此后，在37℃过夜温育悬液。
其次，加入4ml酚/Tris溶液，上下颠倒混合物混合所得的混合物。以3000rpm进行离心分离10分钟除去水层。将水层和4ml酚/氯仿溶液混合，接着逆混合并以3000rpm离心分离10分钟。除去水层。最后，用氯仿提取两次，以获得水相，往其中加1/10，3M NaAC(pH5.2)，两倍量的冷乙醇，使DNA沉淀。用70％的乙醇洗涤这样获得的DNA，以获得基因组DNA。使基因组DNA溶解于TE中，然后定量测定混合物在260nm的吸收率。
(2)PCR-SSCP分析(a)引物的测定所有CYP1A2基因的外显子及外显子-内含子分成十一个。定位在CYP1A2基因转译起始位点上游约900bp的非转译区分为6个，测定每个特定扩增了六个片段的每一个的引物。使用DNA合成仪(Pharmacia LKB Gene Assembler Plus)合成了引物。
引物的核苷酸序列显示如下。
(外显子和外显子-内含子的引物对)F15-CCTCCTTTTTTCCCTGCAGT-3’R15’-TCATCCTTGACAGTGCCAGG-3’F25’-ATGTGCTGACCCTGGGGAA-3’
R2 5-GCTGAAGGTCAAGCTCTGG-3’F3 5’-CCTCCACCCTCATCACTGA-3’R3 5’-TGTAAGGGTCGAAGTGCCC-3’F4 5’-TGCAGGAGCTGATGGCAGG-3’R4 5’-CGAAGGATGGGGAAGAAGT-3’F5 5’-TCATGAGTTCGTGGAGACTG-3’R5 5’-AAGGTGCCCCTTGCCACC-3’F6 5’-AGTGCCAGAGTGCCCCTAA-3’R6 5’-TGAACAGCAGGCATGTGGAT-3’F7 5’-TCCTCACCTTACACTACACG-3’R7 5’-TGGGTTTCAAGGCTTCTCCT-3’F8 5’-CTGCTTGTCCTCTGTGTTCT-3’R8 5’-TGGCAAGCACTTTAGAGGTG-3’F9 5’-GCAACACATGCCCCAGCTT-3’R9 5’-ACTGCTGAACCTGCACACAT-3’F105’-ATCTCCTGCTGTTCCTCTTG-3’R105’-AACTCCAGTTGCTGTAGCAG-3’F115’-CCAAGTGGGAGATCTTCCTC-3’R115’-GGAAGAGAAACAAGGGCTGA-3’(5’非转译区引物对)5’F15’-AACCAGGCCAATCTGATAGG-3’5’R15’-AGCTTCCAGGTTCTATAGTTG-3’5’F25’-GTACCTTTCTTGGGACCAAT-3’5’R25’-AATGGCTTAGTCCAAACTGC-3’
5’F35’-CTACCCAGCTCTTGACTTCT-3’5’R35’-CAGGGCATTCTTTATCAATA-3’5’F45’-GTGAGAGGATGGGGACTCAT-3’5’R45’-GTACCAAAGAGTCCCTGCCA-3’5’F55’-CCCTTGGGTATATGGAAGGT-3’5’R55’-CAACATGAACGCTGGCTCT-3’5’F65’-CCCAGAAGTGGAAACTGAGA-3’5’R65’-GGGTTGAGATGGAGACATTC-3’b)通过PCR扩增CYP1A2基因的外显子、外显子-内含子及5’-非转译区通过PCR扩增CYP1A2基因的外显子、外显子-内含子及5’-非转译区叙述如下简而言之，往100ng上述步骤1制备的基因组DNA溶液中加入5μl10x PCR缓冲液、4μl10mM dNTP、1.25单位Taq DNA聚合酶和50pmol上述步骤(a)叙述的每种引物。接着，加入纯水，使总体积为50μl。最后，在产生的混合物上放置矿物油。反应在95℃1分钟，58℃1.5分钟，72℃1.5分钟，进行40个循环。反应完成后，将10μl每种PCR反应液在7.5％的聚丙烯酰胺凝胶上电流获得了单一的条带。
(c)PCR-SSCP分析往10μl这样获得的PCR反应液中加入10μl甲酰胺颜料。混合物在95℃加热变性5分钟。此后，将混合物立即在冰上冷却，形成单链DNA。将其全部在7.5％的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，恒定电泳为15mA。用2μg/ml溴化乙锭(ethidium Aromide)为染色物质。
(3)多态性区的亚克隆和其核苷酸序列的分析具有与其它单链DNA不同迁移率的单链DNA带被切下，它被测定作为上述(2)-(c)所述的PCR-SSCP步骤的结果，用50μlTE溶解，接着混合5分钟。使用与上述所用同一的引物对5μl其上清液进行PCR扩增，以形成双链DNA。
将1μl PTT Blue-T载体(Novagen的产品)、12μl DNA连接试剂盒(Takara Shuzo的产品)的液体A、3μlDNA连接试剂盒(Takara Shu-zo的产品)的液体B加入到1μl PCR反应液中并混合。将混合物于16℃培养12小时，以进行连接。取1μl混合物并与20μl JM109活性细胞(Takara Shuzo的产品)混合。将产生的混合物在冰上放置30分钟，然后在42℃热震振45秒。加入80μl LB培养基，在37℃培育1小时。在LBamp平皿上，于37℃培养过夜，产生转化子。
回收转化子克隆，并在3μl LBamp培养基上培养。此后，按照质粒Purprep试剂盒(Takara Shuzo的产品)所附的说明书制备小量质粒DNA。获得30μl质粒DNA溶液。使用限制酶BamHI和PstI使部分溶液(5μl)接受酶切，以便夹入克隆位点。用3％的琼脂凝胶电泳证实插入了目标DNA片段。
由此获得克隆的核苷酸序列得以分析，首先用自动测序试剂盒(Pharmacia的产品)进行测序反应，然后通过电泳测定核苷酸序列并使用DNA自动测序仪(ALF DNA Sequencer，Pharmacia的产品)分析数据。
(4)分析的结果对来自60个健康人的样品的CYP1A2基因的外显子和外显子-内含子进行的PCR-SSCP分析不能证实基因多态性。然而，在CYP1A2的5’-非转译区，有2个片段证实有不同于其它片段的迁移，即含有突变位点。
当分析这些片段的核苷酸序列时，发现在第2064个碱基和第2640个碱基分别由T替换了G和C替换了A。实施例2通过PCR-RFLP测定CYP1A2基因的多态性(1)引物的测定依赖在5’非转译区第2064和第2640个碱基的多态性类型设计了4种引物对，以便在PCR扩增后用限制酶进行消化。当不同的碱基独自不足以作为限制酶识别的位点时，在引物中放置错配碱基以人工引入限制酶识别位点。
如此设计的引物对的核苷酸序列所示如下2064TF5’-GAGCCTGGGCTAGGTGACGGGG-3’2064TR5’-GGCTGCCCTTGTGCTAAG-3’2064GF5’-AAAGACGGGGAGCCTGGGCTAGGTG-3’2064GR5’-AGCCAGGGCCAGGGCTGCCCTTGTGCTAAG-3’2640CF5’-CCCAGAAGTGGAAACTGAGA-3’2640CR5’-GGGTTGAGATGGAGACATTC-3’2640AF5’-AAGGGTGAGCTCTGTGTGC-3’2640AR5’-GGGTTGAGATGGAGACATTC-3’(2)通过PCR扩增CYP1A2基因的5’-非转译区往500ng实施例1步骤(1)中制备的基因组DNA溶液中加入5μl 10x PCR缓冲液、4μl10mM dNTP、1.25单位Taq DNA聚合酶、和50pmol上述步骤(1)中叙述的四种有义引物和反义引物的每一种。接着，加入纯水，使总体积为50μl。最后，在产生的混合物上加入矿物油。在95℃1分钟、58℃1.5分钟、72℃1.5分钟进行PCR反应，40个循环。反应完毕，将PCR反应液在7.5％的聚丙烯酰胺凝胶上电泳。获得了单一的条带。
(3)通过用限制酶处理PCR反应产物测定CYP1A2基因5’-非转译区的多态性往10μl上述步骤(2)中扩增的PCR反应产物中加入1μl限制酶反应缓冲液、1μl限制酶，并在37℃消化过夜。此后，在7.5％的聚丙烯酰胺凝胶上电泳。多态性的测定如下。
简而言之，使用2064TF和2064TR分别为有义引物和反义引物进行PCR。结果，扩增了148bp的片段。用限制酶AspI处理片段。在第2064个碱基是T的基因出现129bp和19bp的条带，而第2064个碱基是G的基因出现了148bp的条带。
同样，使用2064GF和2064GR分别为有义引物和反义引物进行PCR，扩增了169bp的片段。当此片段用限制酶StuI处理时，在第2064个碱基为T的基因出现了169bp的条带，而在第2064个碱基为G的基因出现了137bp和32bp的条带。
而且，使用2640CF和2640CR分别为有义和反义引物进行PCR，扩增了243bp的片段。当此片段用限制酶ApaI处理时，在第2640个碱基为C的基因出现了124bp和119bp的条带，而在第2640个碱基为A的基因出现了243bp的条带。
类似地，分别以2640AF和2640AR为有义和反义引物进行PCR，扩增了145bp的片段。当此片段用限制酶ApaLI处理时，第2640个碱基为C的基因出现了145bp的条带，而第2640个碱基为A的基因出现了129bp和16bp的条带。
从上述结果可知，能够测定CYP1A2基因的多态性。实施例3以类似于实施1叙述的方式，和实施例1研究的区比较，将更上游侧非转译区分为18个片段。设计了特异性扩增它们的引物。研究了CYP1A2基因的所有区。
结果，发现了含突变点的片段，它们在由5’10F(5’-GTC-CCAGCTACTCAGGACGC-3’)和5’10R(5’-AGGAGTCTT-TAATATGGACCCAG-3’)引物对扩增的区内。
这些片段的核苷酸序列分析证实了突变点，第1569碱基T缺失。实施例4通过PCR-RFLP测定(CYP1A2基因在-1569碱基处的多态性根据在5’-非转译区(其存在多态性)第-1569碱基的多态性类型，设计了引物对，以便在进行PCR扩增后用限制酶消化。当改变的碱基独自不足以作为限制酶识别的位点时，在引物中引入一种错配，以人为引入限制酶识别位点。
这样设计的引物对核苷酸序所示如下-1569 TF5’-TGAGCCATGATTGTGGCATA-3’-1569 TR5’-AGGAGTCTTTAATATGGACCCAG-3’以类似于实施例2中叙述的方式，进行PCR扩增，使用限制酶处理PCR产物测定多态性。
简之，经PCR扩增了167bp的片段。当此片段用限制酶Ndel处理时，在第-1569个碱基为T的基因出现了148bp和19bp的条带，而有第-1569个碱基缺失的基因出现了167bp的条带。
因此，可测定此位置基因的多态性。实施例5健康人CYP1A2基因多态性分布接着实施2和4的方法测定52个健康人的基因多态性。
结果，52个人在第2064个碱基有多态性，发现46个人有T的纯合子(88％)，5个人有T和G的杂合子(10％)，1个人有G的纯合子(2％)。
更具体讲，51个人在第2640个碱基有多态性发现6个人有C的纯合子(12％)，33个人有C和A的杂合子(64％)，12个人有A的纯合子(24％)。
再者，40个人，在第-1569个碱基有多态性发现14个人有T的纯合子(35％)，20个人有T和T-缺失的纯合子(50％)，6个人有T缺失的纯合子(15％)。实施例6在给茶碱的患者中茶碱代谢和CYP1A2基因多态性在需要茶碱的32个患者中，连续给其用药茶碱制剂至少4天，以便血液中茶碱浓度保持稳定，使用血茶碱浓度(Journal of Pharma-co Kinetics and Biopharmaceutics，22(1)，59-71(1994))计算茶碱代谢的能力(半衰期T1/2(hr))。
单独地，根据实施例2和4及实施例1中从外周血制备的基因组DNA研究基因多态性。
结果示于图1(A)和图1(B)。
从附图可知，在第2640和第-1569个碱基的基因多态性在统计学上与茶碱的代谢活性显著相关。即，已知当第1640个碱基为C时，代谢意味着减少，当碱基为A时，代谢意味着加速，而且，当第-1569个碱基为T时，代谢意味着减少，当该碱基缺失时，代谢意味着加速。在第2064多态性和茶碱的代谢活性之间没有发现相关性。
如上所述，得出结论，CYP1A2基因在第2064和-1569个碱基的多态性引起了茶碱代谢活性的多态性。因此，根据本发明，测定此多态性，当茶碱给患者用药时，可用于进行基因诊断。
本发明叙述了CYP1A2基因的新突变点，并提供了一种测定CYP1A新基因多态性的方法。而且，根据本发明，只需要少量DNA样品就足以测定CYP1A2基因的新的多态性。测定简单易行，并有高度灵敏度和精确度。结果，本发明提供了一种在茶碱或类似物质代谢活性方面测定多态性的基因诊断方法。
权利要求
1.测定人细胞色素P4501A2基因多态性的方法，其特征在于测定人细胞色素P4501A2基因非转译区存在的第2064碱基的取代。
2.根据权利要求1的方法，其中的取代是从T到G。
3.测定人细胞色素P4501A2基因多态性的方法，其特征在于测定人细胞色素P4501A2基因非转译区存在的第2640碱基的取代。
4.根据权利要求3的方法，其中的取代是从C到A。
5.测定人细胞色素P4501A2基因多态性的方法，其特征在于，测定人细胞色素P4501A2基因非转译区存在的第-1569碱基的缺失。
全文摘要
本发明提供了测定人细胞色素P4501A2(CYP1A2)基因多态性的方法，测定了人细胞色素P4501A2基因非转译区第2064碱基的取代、第2640碱基的取代及/或第-1569碱基的缺失。根据本发明的方法，可测定CYP1A2基因新类型的多态性，且简单易行，灵敏度和精确度高，而且此方法只需要少量的DNA样品。
文档编号C12Q1/68GK1151188SQ9519061
公开日1997年6月4日 申请日期1995年7月6日 优先权日1994年7月6日
发明者福井崇史, 葛城肃典, 木下盛敏, 申贞均 申请人:大制药株式会社