专利名称：抗人肝癌单克隆抗体HAb18放射免疫治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术及细胞工程。
肝癌是我国及东南亚常见的恶性肿瘤，尤其在中国，每年有11.2万肝癌患者死亡，占全世界肝癌死亡人数的43％，九十年代以来肝癌已上升为第二癌症杀手。肝癌发病凶险，进展迅速，有“癌王”之称，除部分病例可以进行手术和介入化疗外，仍有相当一部分难治性肝癌(弥漫型、多发型、巨块型、复发型肝癌及肝癌转移灶)得不到有效治疗。八十年代发展起来的导向治疗，已成为综合治疗的有效手段之一。放射免疫导向治疗是集介入治疗的优点，利用特异性载体-抗肝癌单克隆抗体较集中地把标记的放射性核素带到并较长时间停留在肝癌肿瘤部位，而全身其它组织器官较少甚至无标记抗体的放射性核素的聚集。因此，放射免疫治疗较常规介入放疗或化疗，大大减低了毒付作用，并降低了用量。有关肝癌细胞膜抗原方面的肝癌单抗及其导向药物研究报道较少，仅Markham等用结肠癌单抗(因与肝细胞癌有交叉反应)在人体无肝硬化的肝癌中部分显像，阳性率较低，仅为50％(8/11)，使其应用受到限制，而有关导向治疗来见报道。上海细胞所的HepamaI经肝动脉插管导向治疗病人，其中PR(部分缓解)达66.6％。经国内外专利与非专利文献检索，未见有关本项目同类产品的报道。
本发明的目的是研制高亲和性和高特异性及杀伤力强的放射免疫治疗制剂，对难治性肝癌、术后复发性肝癌和肝癌转移灶具有一定疗效，从而成为具有临床价值的新型综合治疗导向药物。
本发明实施的技术方案是以外科手术切除的新鲜人体肝癌细胞为免疫原，免疫小鼠，融合获得高分泌杂交瘤细胞株HAb18，其染色体在81-106间，众数为93-98，其分泌特异性抗人肝癌单抗。抗体亚型为小鼠IgG1，其相应抗原为61KD的单位膜蛋白抗原，与甲胎蛋白、铁蛋白无竞争抑制，亲和常数为8.17×109L/mol，其抗原谱较为特异，主要针对肝癌，和部分胃癌、肠癌有交叉，但和正常组织无交叉反应。
用酶切法将HAb18 IgG分割为F(ab′)2，分子量减小，更易穿透到达肿瘤部位。
本发明中采用的放射性核素为131I，其半衰期为8.04天，主要发射中程β-和γ射线，采用溴代琥珀酰亚胺法将131I和HAb18或HAb18 F(ab′)2偶联。
体内导向治疗选择临床或病理诊断明确的中、晚期肝癌或复发性肝癌病例，患者提前2-3天服用卢戈氏碘液，3滴，每日3次。采用选择性插管或埋入微型泵至腹腔动脉或肝动脉定期给药，每月一次，每次1110MBq，连续2-3次。选择性插管时，采用Seldinger技术，经皮从股动脉穿刺插管，逆入导管(Cobra，6.5F)，在IA-DSA(动脉法数字减影血管造影，德国西门子公司Polydorso-100系统)电视监视下，导管探索向前，直到靶血管，注入泛影葡胺，确认为是肝总动脉，即注入地塞米松和碘标记物。经治疗后，有效病例肿瘤体积有所缩小或不扩展，AFP水平下降51％-100％，总体有效率为66.7％(18/27)。
临床前研究1.药效学研究(模型为荷肝癌裸鼠移植瘤)有效剂量为2.8mCi/kg。
2.药代动力学研究131I-HAb18 IgG整体排泄物的T1/2为42.65h，血液清除的T1/2为48.07h。131I-HAb18 F(ab′)2整体排泄的T1/2a为5.29h，T1/2β为39.37h；血液清除的T1/2a为4.20h，T1/2β为34.6h。
3.急性毒性试验给药2周内，小鼠无一死亡，行为正常，体重增加，内脏未见异常改变。
4.长期毒性试验经5个月观察，低、中、高三个剂量组分别显示不同程度的反应，符合长期毒性试验的要求。
临床观察用碘标记的HAb18单抗经肝动脉插管注入或药泵埋入，并定期注入该导向药物，每次剂量为1110-1850MBq，疗程为1次/3-4周，连续2-3次。经治疗后，有效病例肿瘤体积缩小或不扩展，AFP水平下降51％-100％，总体有效率为66.7％(18/27)。部分缓解(PR)为51.9％(14/27)，稳定(NC)为14.8％(4/27)，无效(PD)为33.3％(9/27)。
血像、胃肠道、肝肾功能均无明显毒性反应，1例在治疗后T3低于正常值，但未出现甲低症状。
权利要求
1.抗人肝癌单抗HAb18放射免疫治疗剂。其特征在于以外科手术的新鲜人体肝癌细胞为免疫原，免疫小鼠，融合后获得HAb18杂交瘤，其分泌高特异性抗人肝癌单克隆抗体HAb18，用放射性核素131I标记HAb18单抗，组成抗人肝癌单抗HAb18交联物。
2.根据权利要求1所述的抗人肝癌单抗HAb18放射免疫治疗剂，其特征在于HAB18杂交瘤细胞株染色体在81-106间，众数为93-99，其分泌特异性抗人肝癌单抗HAb18。
3.根据权利要求1或2所述的抗人肝癌单抗HAb18放射免疫治疗剂，其特征在于HAb18单抗的亚型为小鼠IgG1，其相应抗原为61KD的单位膜蛋白抗原，与甲胎蛋白，铁蛋白无竞争抑制，亲和常数为8.17×109L/mol，其抗原谱较为特异，主要针对肝癌，和部分胃癌、肠癌有交叉，但和正常组织无交叉反应。
4.根据权利要求3所述的抗人肝癌单抗HAb18放射免疫治疗剂，其特征在于还可用酶切法将HAb18 IgG分割为F(ab′)2片断，使抗体分子量减小，更易穿透到达肿瘤部位。
5.根据权利要求4所述的抗人肝癌单抗HAb18放射免疫治疗剂，其特征在于所述的抗人肝癌单抗HAb18交联物具体为以下两种制剂[131I]-HAb18IgG；[131I]-HAb18F(ab′)全文摘要
抗人肝癌单抗HAb18放射免疫治疗剂，涉及生物技术及细胞工程领域，其主要技术特征为以外科手术的新鲜人体肝癌细胞为免疫原，免疫小鼠，融合后获得HAb18杂交瘤，其分泌高特异性抗人肝癌单抗HAb18，用酶切法将Hab18 IgG分割为F(ab′)
文档编号C12N15/02GK1166989SQ97108619
公开日1997年12月10日 申请日期1997年7月11日 优先权日1997年7月11日
发明者陈志南, 米力, 朱平, 仇凯, 刘彦仿, 隋延仿, 刘成刚, 边惠洁 申请人:中国人民解放军第四军医大学