专利名称：一种化合物、其制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物。本发明还涉及该化合物的制备方法。本发明还涉及了该化合物在制备L型钙电流抑制药物中的应用。
背景技术：
自从1929年弗莱明从真菌中发现青霉素以来，真菌的代谢产物成为了药物的丰富来源，绝大多数临床应用的抗生素都来源于真菌和细菌，真菌的代谢产物还有其他的药用价值，如抗肿瘤，治疗心血管疾病，免疫调节剂，酶抑制剂等。由于海洋环境的特殊性，海洋真菌能提供陆生真菌无法提供的代谢产物。国际上已从海洋真菌中发现了一些结构独特的化合物，分别具有抗菌，抗病毒，抗肿瘤和神经心血管方面的活性。例如从Acremonium ehrysogenum产生的头孢菌素，已发展为一大类半合成抗生素的先导，广泛应用于临床，还有其他的一些例子见Kerstin Liberra的文章《Marine fungi a profile resource ofbiologically active natural products？》(Pharmazie 50(1995)，H.9583)。国际上这方面的研究从八十年代以来呈加速发展的趋势，国内从海洋微生物也发现一批新的活性物质(Lin YC et alTetrahedron 2000，Lin YC et al Tetrahedron Letters，2000，LinYC et al J.Org.Chem.2001)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的具有药用价值的化合物。
本发明的另一目的在于提供上述该化合物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供了上述化合物在制备L型钙电流抑制药物中的应用。
本发明的技术方案如下
本发明的化合物，具有以下的结构式 本发明的化合物可以从真菌2508的发酵液中提取分离而得到，所用的的真菌2508已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉大学校内)，保藏号为CCTCC NOM202029；，保藏日为2002年08月03日。制备上述化合物的方法由以下步骤组成a.真菌2508的种子培养培养基(按重量比)葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、琼脂1-1.5、氯化钠3-5、水100，制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35℃培养5-7天；b.真菌2508的发酵培养发酵培养基(按重量比)葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、氯化钠3-5、水100，将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基，于室温25-35℃静置1-2月，或者于200L全自动发酵罐培养90小时；c.将上述培养好的发酵液过滤除去菌体；d.将发酵液加热浓缩至原液体积的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取3-6次，浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂梯度洗脱；
e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脱液，纯化，即为本发明的化合物。
本发明的化合物对L型钙电流有明显的抑制作用。由于在四个类型的钙通道中L型通道的电导较大，在心、脑血管疾病的治疗中具有重要的意义(二氢吡啶类就选择性地作用于L型通道)，因而上述化合物可作为在心、脑血管病的治疗方面的钙拮抗剂。
图1为实施例3中所得化合物的晶体结构图。
具体实施例方式
以下的实施例将有助于本领域的普通技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。
实施例1化合物可以通过以下步骤制备得到a.真菌2508的种子培养培养基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、琼脂1、氯化钠3、水100，制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，30℃培养5天；b.真菌2508的发酵培养发酵培养基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、氯化钠3、水100，将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基，于室温25℃静置1月；c.将上述培养好的发酵液过滤除去菌体；d.将发酵液加热浓缩至原液体积的1/3，用乙酸乙酯萃取4次，浓缩浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂梯度洗脱；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脱液，再在同样条件下反复色谱纯化得到化合物。
实施例2
化合物可通过以下步骤制备a.真菌2508的种子培养培养基(按重量比)葡萄糖1.5、酵母提取物0.15、蛋白胨0.3、琼脂1.5、氯化钠5、水100，制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，35℃培养7天b.真菌2508的发酵培养发酵培养基(按重量比)葡萄糖1.5、酵母提取物0.15、蛋白胨0.3、氯化钠5、水100，将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基，于室温35℃静置2月c.将上述培养好的发酵液过滤除去菌体d.将发酵液加热浓缩至原液体积的1/5，用乙酸乙酯萃取6次，浓缩浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂梯度洗脱；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脱液，再在同样条件下反复色谱纯化得到化合物。
实施例3化合物可通过以下步骤制备a.真菌2508的种子培养培养基(按重量比)葡萄糖1.0、酵母提取物0.1、蛋白胨0.2、琼脂1.0、氯化钠4、水100，制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，33℃培养6天；b.真菌2508的发酵培养发酵培养基(按重量比)葡萄糖1.0、酵母提取物0.1、蛋白胨0.2、氯化钠4、水100，将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基，于室温30℃静置1.5个月；c.将上述培养好的发酵液过滤除去菌体；d.将发酵液加热浓缩至原液体积的1/4，用乙酸乙酯萃取5次，浓缩浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂梯度洗脱；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脱液，再在同样条件下反复色谱纯化得到化合物。
实施例4化合物可以通过以下步骤制备得到a.真菌2508的种子培养培养基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、琼脂1、氯化钠3、水100，制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，30℃培养5天；b.真菌2508的发酵培养发酵培养基(按重量比)葡萄糖0.5、酵母提取物0.05、蛋白胨0.1、氯化钠3、水100、将斜面中培养好的菌株，于有同样发酵培养基的200L全自动发酵罐培养90小时；c.将上述培养好的发酵液过滤除去菌体；d.将发酵液加热浓缩至原液体积的1/3，用乙酸乙酯萃取4次，浓缩浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂梯度洗脱；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脱液，再在同样条件下反复色谱纯化得到化合物。
实施例5对实施例3所制得的化合物进行结构分析试验，得以下试验数据实施例3的化合物的试验数据mp 160-162℃，[α]25D＝-50.6，FABMS705(M+1)，IR v/cm-1(KBr)3351，2955，2929，1615，1460，1381，1340，1311，1207，1115，1076，1004，869。UV λmax226(ε15411)，273(ε2475)，元素分析(w/％，C41H52O10)C69.91，H 7.57，Found.C 69.99，H 7.39。
表1化合物的NMR数据(CDCl3，TMS，ppm)碳位号 δC DEPT ΔH(mult.JHz) HMBC H-HCOSY2 107.5 C4 74.0CH2a.4.14(t，8)C-2，6，11 a.H-4b，5b.3.50 b.H-4a，55 35.2CH 2.13(m) C-4，7 H-4，6，116 47.5CH 1.87(dd，7，11) C-2，5，8，11 H-5，77 19.2CH2a.2.86(d，18) C-2，5，6，8.9 a.H-6，7bb.2.72(dd18，7)b.H-6，7a8 100.1 C9 150.2 C10 22.9CH31.48(s) C-2，611 15.9CH31.02(d，6.5)C-4，5，6 H-512 152.5 C13 106.2 C14 17.2CH23.72(s) C-9，9′，12，132′ 109.3 C4′ 74.5CH2a.4.30(t，6)C-2′，6′，11′ a.H-4′b，5′b.3.61(t，8) b.H-4′a，5′5′ 35.3CH 2.13(m) C-4′，7′ H-4′，6′，11′6′ 47.5CH 1.91(dd，7，11) C-2′，5′，8′，11′ H-5′，7′7′ 19.2CH2a.2.84(d，18) C-2′，5′，6′，8′，9′ a.H-6′，7′bb.2.60(dd，7，18) b.H-6′，7′a8′ 98.1C9′ 148.1 C10′22.3CH31.58(s) C-2′，6′
11′15.8CH31.04(d，6.5)C-4′，5′，6′ H-5′OH OH 8.40(s)用X-射线单晶衍射实验得到实施例3制得的化合物的晶体结构和数据附图1为该化合物的晶体结构图。
以下为所得的数据化合物的晶体数据和结构精化Identification code11052mEmpirical formula C41 H52 010Formula weight 704.83Temperature293(2)KWavelength 0.71073 ACrystal system，space groupOrthorhombic，P2(1)2(1)2(1)Unit cell dimensions a＝11.225(6)A alpha＝90deg.
b＝17.437(9)A beta＝90deg.
c＝20.327(11)A gamma＝90deg.
Volume 3979(4)A^3Z，Calculated density 4，1.177Mg/m^3Absorption coefficient 0.083mm^-1F(000) 1512Crystal size 0.50×0.26×0.16mmTheta range for data collection1.54 to 27.05deg.
Limiting indices -14<＝h＜＝13，-19＜＝k＜＝22，-25＜＝l＜＝24Reflections collected/unique 23646/8603[R(int)＝0.0287]Completeness to theta＝27.05 99.0％
Absorption correctionNoneMax.and min.transmission 0.9868 and 0.9595Refinement methodFull-matrix least-squares on F^2Data/restraints/parameters 8603/0/461Goodness-of-fit on F^2 1.066Final R indices[I>2sigma(I)] R1＝0.0428，wR2＝0.1020R indices(all data) R1＝0.1009，wR2＝0.1307Absolute structure parameter -0.2(10)Extinction coefficient 0.0037(4)Largest diff.peak and hole 0.229 and-0.160 e.A^-3实施例6采用全细胞膜片钳技术检验实施例3制得的化合物的大鼠海马神经细胞L型钙电流抑制试验1、材料和方法体外原代培养新生大鼠海马神经细胞。采用全细胞膜片钳技术，应用CEZ-2300型膜片钳放大器(Nihon kohden公司)，PCLAMP6.0软件进行采集和分析。记录用玻璃电极的制作采用日本产垂直拉力器，分二步拉成尖端内径1μm，充填电极内液后电极电阻为8～12MΩ。玻璃电极内液(mmol/L)天冬氨酸钾(K-asparatate)125、KCl 20、MgCl21、HEPES 5、EGTA 10，pH 7.35。按特定程序加以钳制电压及指令电压。钳制电压-40mv，指令电压-70～10mv，阶跃10mV。
2.实验结果表2不同浓度受试物对新生大鼠海马神经细胞L型Ca电流的影响(n＝8～10)
*p＜0.001 vs给药前结果表明本发明的化合物对L型钙电流有明显抑制作用。
权利要求
1.一种化合物，其特征在于该化合物具有以下的化学结构式
2.制备权利要求1所述化合物的方法，依次由以下步骤组成a.真菌2508的种子培养培养基葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、琼脂1-1.5、氯化钠3-5、水100，以上的数值皆为重量比，以下同，制成试管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35℃培养5-7天；b.真菌2508的发酵培养发酵培养基葡萄糖0.5-1.5、酵母提取物0.05-0.15、蛋白胨0.1-0.3、氯化钠3-5、水100，将斜面中培养好的菌株挑入发酵培养基，于室温25-35℃静置1-2月，或者于200L全自动发酵罐培养90小时；c.将上述培养好的发酵液过滤除去菌体；d.将发酵液加热浓缩至原液体积的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取3-6次，浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以1％-100％乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂梯度洗脱；e.收集20％的乙酸乙酯/石油醚洗脱液，纯化。
3.权利要求1所述的化合物在制备L型钙电流抑制药物中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于权利要求1所述的化合物在制备治疗心、脑血管病钙拮抗剂药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种具有新颖化学结构式的化合物。本发明还公开了该化合物的制备方法，同时公开了该化合物在制备L型钙电流抑制药物中的应用。本发明的化合物对L型钙电流有明显的抑制作用，由于在四个类型的钙通道中L型通道的电导较大，在心、脑血管疾病的治疗中具有重要的意义，因而上述化合物可作为在心、脑血管病的治疗方面的钙拮抗剂。
文档编号A61K31/351GK1537857SQ200310111830
公开日2004年10月20日 申请日期2003年10月20日 优先权日2003年10月20日
发明者林永成, 吴雄宇, 佘志刚, 李厚金, 刘晓红, 罗景慧, 周世宁, 王焕章, 瞿东方, 关利平 申请人:中山大学