专利名称：一种拓扑替康脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种拓扑替康脂质体及其制备方法，该制剂可以作为多种肿瘤，如非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、血液病、淋巴瘤等的治疗药物。
背景技术：
拓扑替康(Topotecan，TPT)是一种新型喜树碱半合成衍生物，它对多种肿瘤，如非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、血液病、淋巴瘤等均有治疗作用。喜树碱类药物是通过抑制细胞存活中一种必需酶DNA拓扑异构酶I(DNATopo I)来实现其细胞毒作用的。Topo在生物体内广泛存在，参与DNA复制、转录、重组、修复等关键的核内过程。Topo在复核细胞中分为两类，即Topo I和Topo II，主要解决DNA分子内在的拓扑限制。Topo I通过暂时切断其中的一条单链而使DNA超螺旋结构解旋。拓扑替康与Topo I-DNA复合物结合，阻碍断裂DNA单链的重新连接，最后使DNA复制停滞，导致癌细胞死亡。
拓扑替康于1990年合成，由史克必成公司(Smithkline Beecham)生产，1996年5月28日美国FDA批准史克必成公司(Smithkline Beecham)研制的盐酸拓扑替康冻干粉针制剂(商品名为Hycamtin)上市，用于初中期化疗失败后的转移型卵巢癌的二线治疗，随后在欧洲许多国家获得许可上市，并获准增加了新的适应症。对SCLC的治疗TPT单药和联合用药对小细胞肺癌(SCLC)有较好的疗效。欧洲肿瘤治疗中心对治疗过的SCLC进行了评价(作为二线治疗)。92例病人分为两组，难治组47例(一线治疗无效)和敏感组45例(一线治疗有效，停药后复发)，总有效率为22％，其中难治组为6％，敏感组为37％，总的平均缓解时间为33周。这一结果还高于其它一线药物对初治病人的治疗效果。对48例初治进展期SCLC治疗，结果19例获得部分缓解(39％)，17例稳定。这一单药一线治疗的有效率比以往的依托泊苷(VP-16)和顺铂(Cisplatin)的疗效好。另外，进一步试验，在这经过TPT治疗的48例病人中对34例病人再给予VP-16+卡铂治疗，其中1例病人完全缓解，7例部分缓解，总有效率24％。但在34例中有17例是对TPT治疗没有效的，这17例中的4例(24％)对VP-16+卡铂治疗仍有效，这一结果与TPT单药治疗铂类耐药的SCLC有效率相接近，说明它没有交叉耐药。这为本品作为一线治疗提供了使用基础。鉴于SCLC的临床特性，本品的临床应用应以一线治疗为佳，二线治疗或耐药的病人宜选用含TPT的联合方案。
对卵巢癌的治疗作用国外研究采用该药治疗卵巢癌139例，其中81％为铂类耐药。总有效率为13.7％，其中铂类耐药病人的有效率为12.4％，铂类敏感病人的有效率为19.2％。为了比较TPT和紫杉醇(Taxol)单药对复发卵巢癌的治疗作用，一项随机研究进行了比较，应用TPT组的112例病人中，总有效率为20.5％，其中完全缓解5例，部分缓解18例。有人研究了TPT一线治疗卵巢癌的疗效。使用顺铂和TPT43例晚期病人有效率93％，其中20例完全缓解，20例部分缓解。使人鼓舞的是13例中的5例病人手术证实病理缓解。美、欧进行的226例一线铂类治疗失败的病人，112例用TPT治疗，另114例用紫杉醇治疗，从其中又选了对紫杉醇治疗无效的61例再用TPT做三线治疗，选了对TPT治疗无效的49例再用紫杉醇作三线治疗。结果表明，TPT作为三线治疗的有效率为13.1％，紫杉醇为10.2％。
作为肿瘤化疗药物，拓扑替康骨髓抑制最常见的是剂量限制性毒性是主要为3～4度的中性粒细胞减少和血小板减少。TPT非血液学毒性最常见的不良反应有脱发、疲乏、恶心、呕吐、食欲下降，少数病人出现腹痛、腹泻、便秘、口腔炎和呼吸困难。这些毒副作用，给患者带来了痛苦，大大影响拓扑替康的治疗效果，有的患者还因此放弃了治疗。
我国专利200510080061.4等有关拓扑替康的专利都没有对以上问题的提出建议，其他公知技术也没有改善以上缺陷的建议。
发明内容
本发明的目的是针对以上不足之处提供一种拓扑替康脂质体及其制备方法，拓扑替康脂质体含有拓扑替康和至少一种生物可接受的磷脂，磷脂作为拓扑替康脂质体的膜材料，可以在人体内很快降解，不仅无毒，而且对人体还有营养作用，和拓扑替康组成拓扑替康脂质体，对肿瘤细胞具有靶向作用，可以作为多种肿瘤，如非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、血液病、淋巴瘤等的治疗药物，该药物抗肿瘤作用更有效、更持久，降低了毒副作用，增强了药物活性，提高了药物治疗指数，具有可观的经济和社会效益。
一种拓扑替康脂质体及其制备方法是采用以下方案实现一种拓扑替康脂质体，其特征在于含有拓扑替康，以及至少一种生物可接受的磷脂，拓扑替康与磷脂的重量配比为1∶0.5～100。
一种拓扑替康脂质体，其特征在于拓扑替康的化学名称为(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4，9-二羟基-1H，一吡喃[3`，4`6，7]中氮茚并[1，2，-b]-喹啉-3-14(4H，12H)-二酮盐酸盐，结构式为 分子式为C23H23N3O5·HCI，分子量457.91。
所述的生物可接受的磷脂选自天然磷脂、氢化大豆磷脂和合成磷脂中的一种。
所述的拓扑替康脂质体，还可以含有胆固醇。
所述的拓扑替康脂质体，还可以含有支持剂，所述的支持剂选自葡萄糖、甘露醇、蔗糖、山梨醇、右旋糖苷、乳糖和海藻糖中的一种。
所述的拓扑替康脂质体中的磷脂与支持剂的重量配比为1∶0.01～500。
所述的拓扑替康脂质体，可以制成注射液、冻干粉针和大输液的制剂形式。
所述的拓扑替康脂质体的制备方法包括薄膜分散法、注入法、超声波分散法、冷冻干燥法、冻融法、高压挤出法、均质机制备法和高压微射流制备法。
所述的拓扑替康脂质体采用冻融法的制备工艺为取磷脂置圆底烧瓶中，加入溶剂使之溶解，溶剂选用二氯甲烷和氯仿中的一种，水浴60℃～70℃加热，减压旋转蒸发得到均匀的混合磷脂薄膜，再加入磷酸盐缓冲液，水浴60℃～70℃加热搅拌水化20～50min，置冻干机内，迅速降温至-45～-35℃，保温2～3小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温7～10小时，得磷脂冻干粉，另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成盐酸拓扑替康溶液，在磷脂冻干粉中加入盐酸拓扑替康溶液，水浴60℃～70℃加热并快速震荡30～50min，用挤出器对上述溶液挤出均质，25000～50000rpm超速离心，将底部的沉淀用磷酸盐缓冲液混和均匀，即得拓扑替康脂质体。
本发明一种拓扑替康脂质体，较之普通的拓扑替康制剂，大大减少了3～4度的中性粒细胞减少和血小板减少、脱发、疲乏、恶心、呕吐、食欲下降等不良反应的发生，减轻了化疗给肿瘤患者和家人的痛苦，避免患者因不堪痛苦而放弃治疗，延长了肿瘤患者的生命，改善了患者的生存质量。同时，拓扑替康脂质体的抗肿瘤作用更有效、更持久，降低了毒副作用，增强了药物活性，提高了药物治疗指数，有利于拓扑替康更为广泛的临床使用。本发明制备工艺简单，方便可行，重复性好，成本较低，很容易实现工业化大生产，从而产生可观的经济和社会效益。
具体实施例方式
下面通过实施例来进一步说明本发明。应该正确理解的是本发明的实施例仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。
实施例1取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成1mg/ml的盐酸拓扑替康溶液。另取氢化大豆磷脂2g溶于乙醇中，在搅拌状态下慢慢滴于50ml保温在55～65℃的盐酸拓扑替康溶液中(拓扑替康与大豆磷脂的重量配比为1∶40)，蒸去乙醇，继续搅拌2h，即得拓扑替康脂质体。
实施例2取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成1mg/ml的盐酸拓扑替康溶液。取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.3g置圆底烧瓶中，加入无水乙醇20ml，水浴65～70℃加热，搅拌，充分溶解后置旋转蒸发仪上旋转成膜，减压除去乙醇即得磷脂膜。取盐酸拓扑替康溶液50ml(拓扑替康与大豆卵磷脂的重量配比为1∶20)，倒入上述烧瓶中，水浴65～70℃加热搅拌水化20min，所得脂质体溶液于室温下搅拌60min，即得拓扑替康脂质体。
实施例3取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成2mg/ml的盐酸拓扑替康溶液。取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.3g置圆底烧瓶中，加入无水乙醇20ml，水浴65～70℃加热，搅拌，充分溶解后置旋转蒸发仪上旋转成膜，减压除去乙醇即得磷脂膜。取盐酸拓扑替康溶液50ml(拓扑替康与大豆卵磷脂的重量配比为1∶10)，倒入上述烧瓶中，水浴65～70℃加热搅拌水化20min，所得脂质体溶液于室温下搅拌60min，即得拓扑替康脂质体。
实施例4取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成3mg/ml的盐酸拓扑替康溶液。取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.3g置圆底烧瓶中，加入无水乙醇20ml，水浴65～70℃加热，搅拌，充分溶解后置旋转蒸发仪上旋转成膜，减压除去乙醇即得磷脂膜。取盐酸拓扑替康溶液50ml(拓扑替康与大豆卵磷脂的重量配比为1∶6.67)，倒入上述烧瓶中，水浴65～70℃加热搅拌水化20min，所得脂质体溶液于室温下搅拌60min，即得拓扑替康脂质体。
实施例5取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成4mg/ml的盐酸拓扑替康溶液。取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.3g置圆底烧瓶中，加入无水乙醇20ml，水浴65～70℃加热，搅拌，充分溶解后置旋转蒸发仪上旋转成膜，减压除去乙醇即得磷脂膜。取预热至65～70℃的枸橼酸缓冲液50ml，倒入上述烧瓶中，水浴65～70℃加热搅拌水化20min，所得溶液于室温下搅拌60min，再加入上述盐酸拓扑替康溶液20ml、NaHCO3溶液10ml(拓扑替康与大豆卵磷脂的重量配比为1∶25)，混匀，70℃水浴中保温25min，用冷水迅速冷却，即得拓扑替康脂质体。
实施例6取二棕榈酰磷脂酰胆碱1.6g和二豆蔻酰磷脂酰甘油脂0.1g置圆底烧瓶中，加入氯仿使之溶解。水浴65℃加热，减压旋转蒸发得到均匀的混合磷脂薄膜。再加入30ml磷酸盐缓冲液，水浴65℃加热搅拌水化30min，置冻干机内，迅速降温至-40℃，保温2小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温7～10小时，得磷脂冻干粉。另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成2mg/ml的盐酸拓扑替康溶液，在磷脂冻干粉中加入盐酸拓扑替康溶液30ml(拓扑替康与磷脂的重量配比为1∶28.3)，水浴65℃加热并快速震荡40min。用挤出器对上述溶液挤出均质。25000rpm超速离心，将底部的沉淀用磷酸盐缓冲液混和均匀，即得拓扑替康脂质体。
实施例7取氢化大豆磷脂1g、胆固醇0.2g置圆底烧瓶中，加入二氯甲烷20ml搅拌使充分溶解搅拌，另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成3mg/ml的盐酸拓扑替康溶液20ml(拓扑替康与大豆磷脂的重量配比为1∶16.7)，加入上述溶液中混合、乳化，水浴65～70℃加热，减压除去二氯甲烷即得拓扑替康脂质体。
实施例8取二棕榈酰磷脂酰胆碱3.3g和二豆蔻酰磷脂酰甘油脂0.2g置圆底烧瓶中，加入氯仿使之溶解。水浴60℃加热，减压旋转蒸发得到均匀的混合磷脂薄膜。再加入30ml磷酸盐缓冲液，水浴60℃加热搅拌水化30min，置冻干机内，迅速降温至-40℃，保温2小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温8～9小时，得磷脂冻干粉。另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成1mg/ml的盐酸拓扑替康溶液，在磷脂冻干粉中加入盐酸拓扑替康溶液35ml(拓扑替康与磷脂的重量配比为1∶100)，水浴60℃加热并快速震荡40min。用挤出器对上述溶液挤出均质。50000rpm超速离心，将底部的沉淀用磷酸盐缓冲液混和均匀，即得拓扑替康脂质体。
实施例9取二棕榈酰磷脂酰胆碱0.3g和二豆蔻酰磷脂酰甘油脂0.05g置圆底烧瓶中，加入氯仿使之溶解。水浴70℃加热，减压旋转蒸发得到均匀的混合磷脂薄膜。再加入30ml磷酸盐缓冲液，水浴70℃加热搅拌水化40min，置冻干机内，迅速降温至-40℃，保温2小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温8小时，得磷脂冻干粉。另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成4mg/ml的盐酸拓扑替康溶液，在磷脂冻干粉中加入盐酸拓扑替康溶液80ml(拓扑替康与磷脂的重量配比为1∶1.1)，水浴70℃加热并快速震荡50min。用挤出器对上述溶液挤出均质。30000rpm超速离心，将底部的沉淀用磷酸盐缓冲液混和均匀，即得拓扑替康脂质体。
实施例10取氢化大豆磷脂0.5g、胆固醇0.1g置圆底烧瓶中，加入氯仿15ml搅拌使充分溶解搅拌，另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成4mg/ml的盐酸拓扑替康溶液50ml(拓扑替康与大豆磷脂的重量配比为1∶2.5)，加入上述溶液中混合、乳化，水浴65～70℃加热，减压除去氯仿即得拓扑替康脂质体。
实施例11取拓扑替康脂质体30ml，加入蔗糖3g，于无菌环境下用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，封口，即得拓扑替康脂质体注射液。
实施例12取拓扑替康脂质体30ml，加入蔗糖6g，于无菌环境下用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，置冻干机内，迅速降温至-40℃，保温2小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温7～10小时，充氮，压塞，出箱，轧盖，即得拓扑替康脂质体冻干。
实施例13取拓扑替康脂质体30ml，加入甘露醇4g，于无菌环境下用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，置冻干机内，迅速降温至-40℃，保温2小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温7～10小时，充氮，压塞，出箱，轧盖，即得拓扑替康脂质体冻干。
实施例14取拓扑替康脂质体30ml，加入右旋糖苷2g，于无菌环境下用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，置冻干机内，迅速降温至-40℃，保温2小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温7～10小时，充氮，压塞，出箱，轧盖，即得拓扑替康脂质体冻干。
权利要求
1.一种拓扑替康脂质体，其特征在于含有拓扑替康，以及至少一种生物可接受的磷脂，拓扑替康与磷脂的重量配比为1∶0.5～100。
2.根据权利要求1所述的拓扑替康脂质体，其特征在于拓扑替康的化学名称为(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4，9-二羟基-1H，一吡喃[3`，4`:6，7]中氮茚并[1，2，-b]-喹啉-3-14(4H，12H)-二酮盐酸盐，结构式为 分子式为C23H23N3O5·HCI，分子量457.91。
3.根据权利要求1所述的拓扑替康脂质体，其特征在于所述的生物可接受的磷脂选自天然磷脂、氢化大豆磷脂和合成磷脂中的一种。
4.根据权利要求1所述的拓扑替康脂质体，其特征在于还可以含有胆固醇。
5.根据权利要求1所述的拓扑替康脂质体，其特征在于还可以含有支持剂。
6.根据权利要求5所述的拓扑替康脂质体，其特征在于所述的支持剂选自葡萄糖、甘露醇、蔗糖、山梨醇、右旋糖苷、乳糖和海藻糖中的一种。
7.根据权利要求6所述的拓扑替康脂质体，其特征在于所述的磷脂与支持剂的重量配比为1∶0.01～500。
8.根据权利要求1所述的拓扑替康脂质体，其特征在于可以制成注射液、冻干粉针和大输液的制剂形式。
9.权利要求1所述的拓扑替康脂质体的制备方法包括薄膜分散法、注入法、超声波分散法、冷冻干燥法、冻融法、高压挤出法、均质机制备法和高压微射流制备法。
10.根据权利要求9所述的拓扑替康脂质体的制备方法，其特征在于采用冻融法的制备工艺为取磷脂置圆底烧瓶中，加入溶剂使之溶解，溶剂选用二氯甲烷和氯仿中的一种，水浴60℃～70℃加热，减压旋转蒸发得到均匀的混合磷脂薄膜，再加入磷酸盐缓冲液，水浴60℃～70℃加热搅拌水化20～50min，置冻干机内，迅速降温至-45～-35℃，保温2～3小时，然后以每小时5度的温度升温升华干燥，最后在10℃保温7～10小时，得磷脂冻干粉，另取盐酸拓扑替康，用磷酸盐缓冲液配成盐酸拓扑替康溶液，在磷脂冻干粉中加入盐酸拓扑替康溶液，水浴60℃～70℃加热并快速震荡30～50min，用挤出器对上述溶液挤出均质，25000～50000rpm超速离心，将底部的沉淀用磷酸盐缓冲液混和均匀，即得拓扑替康脂质体。
全文摘要
本发明涉及的是一种拓扑替康脂质体及其制备方法，该制剂可以作为多种肿瘤，如非小细胞肺癌、肝癌、胃癌、血液病、淋巴瘤等的治疗药物。一种拓扑替康脂质体，其特征在于含有拓扑替康，以及至少一种生物可接受的磷脂，拓扑替康与磷脂的重量配比为1∶0.5～100。所述的生物可接受的磷脂选自天然磷脂、氢化大豆磷脂和合成磷脂中的一种。还可以含有胆固醇和支持剂。所述的支持剂选自葡萄糖、甘露醇、蔗糖、山梨醇、右旋糖苷、乳糖和海藻糖中的一种，磷脂与支持剂的重量配比为1∶0.01～500。其制备方法包括薄膜分散法、注入法、超声波分散法、冷冻干燥法、冻融法、高压挤出法、均质机制备法和高压微射流制备法。
文档编号A61K47/36GK101015526SQ20071002006
公开日2007年8月15日 申请日期2007年2月9日 优先权日2007年2月9日
发明者叶东, 宗在伟, 戴艳 申请人:江苏奥赛康药业有限公司