专利名称：低聚糖分子在制备避孕药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体涉及低聚糖分子在制备避孕药物中的新用途。
背景技术：
顾名思义，避孕药是用来避免怀孕，控制生育的药物，最早于l 9 5 4年研 制出来的。避孕药应用很广，主要为女用，有阴道栓剂、胶冻、泡沫剂等阴道内 用药及口服或注射避孕药物，如雌激素与孕激素制剂。现在世界上有数千万的人 在使用女用口服避孕药，其药效非常高， 一般可达9 9%。长期避孕药是由长效 雌激素和人工合成的孕激素配伍而成的，它从胃肠吸收后存储于脂肪组织内缓慢 释放起长效避孕作用，服药一次可避孕一个月，有效率达9 6%到9 8%。除了 女性避孕药之外还有男性避孕药，如棉酚是从棉花根，茎和种子中提取的一种黄 色酚类物质，它可以减少精子直至无精，停药即可恢复。但是避孕药不是没有禁 忌和副作用，有严重心血管疾病，肝肾炎，内分泌疾病，肿瘤或血液病患者均不 宜服用，头晕，恶心，呕吐，月经周期紊乱等副作用也会伴随服药不当或服药种 类而产生。
发明内容
本发明目的是提供低聚糖分子在制备避孕药物中的新用途。
本发明提供了低聚糖分子在制备避孕药物中的新用途，所述的低聚糖是 C4-C2。的糖分子，聚合度为1-1000。
本发明中，所述的低聚糖可以是C4-Cs的糖分子。
本发明中，所述的糖可以是聚合度为i-ioo的糖分子。 本发明中，所述的低聚糖可以是聚合度为i-io的糖分子。
本发明中，所述的低聚糖可以是下列糖分子中的任一种(C8H13N05)n， (C14H21N0u)n， (C6H1(105)n， (C5H804)n， (C14H17Br08)n， (C5H804)n ， (C5H804) ， (C5H1004) ，(C6H1406) ， (C4H603)n， (C6H,。05)n， (Cefi。04h， (C6H1()04)n， (C6H1206)n， (C6H1207)n， (C6H1206)n，其中n=l 1000。
本发明中，所述的避孕药物可以是精卵结合抑制药物。
研究表明，LYC3蛋白(NCBI登录号AF099029)是精子内在精卵结合过程 中不可缺少的蛋白，抑制了 LYC3蛋白的活性就会造成精子和卵子不能结合。结 构模拟显示，本发明的低聚糖分子可与LYC3的蛋白三维模型结合，并在大分子 互作仪上证明了这一点。实验表明，本发明的低聚糖分子可降低LYC3的活性， 而且随着糖加入量的增加，LYC3蛋白的活性有逐步下降的趋势。精卵结合实验 则明确的显示，加入本发明的低聚糖分子可以明显抑制精子和卵子形成受精卵。
本发明的低聚糖分子在制备避孕药物时，可以与合适的药学上可接受的载 体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的低聚糖分子化合物和药学上可接受的 载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、 乙醇、羟甲基淀粉、乳化剂及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的 低聚糖分子可以被制成膏剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水 溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方 法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性 成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。 此外，本发明的低聚糖分子还可与其他治疗剂一起使用。
当本发明的低聚糖分子被用作药物时，可将治疗有效剂量的该分子施用于 哺乳动物，其中该治疗有效剂量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情 况下不超过约80毫克/千克体重，较佳地该剂量是约500微克/千克体重-约2毫克/ 千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、用药人健康状况等因素，这些都 是熟练医师技能范围之内的。
本发明的低聚小分子糖为天然化合物，分子量小，结构简单，制作成避孕 药物，效率高、水溶性好、成本低廉、(外用)使用方便、而且不改变激素或者 生理结构，对人体副作用小，可以进一步提高人们的生活质量和健康指数。
图1是分子互作仪上依聚岩藻糖与LYZ3的结合曲线图。
具体实施例方式
实施例l结构模拟实验
本发明采用同源模建(Modeller8.0程序)方法得到LYC3蛋白三维结构， 并采用Gromacs程序进行3ns分子动力学模拟，对模建结构进行进一步优化，最 终用Ramachandran图进行氨基酸侧链进行评价，发现除甘氨酸外所有残基均处 于合理范围内。模拟结果显示，能与LYC3蛋白结构结合的低聚糖多为本发明的 C4-C2。、聚合度1-1000的糖分子。由于LYC3被认为是精子内在精卵结合过程中 不可缺少的蛋白，因此，作为LYC3抑制剂的这些糖具有制备成避孕药物的潜质。
实施例2分子互作实验
本发明进一步采用BIACore3000大分子互作仪(Biacore AB， Uppsala， Sweden)考察了二者间的结合强度。首先将LYZ3蛋白储存液分别用pH分别为 5, 5，5. 0，4. 5，4. 0的醋酸纳缓冲液(醋酸-醋酸钠)配成20 50ug/ml的溶液80ul， 考察它们与CM5标准传感芯片(研究级，分子互作仪配套，BiacoreAB, Uppsala, Sweden, 1161036)的预结合试验，结果发现pH为5. 0时结合量及动力学最佳， 故采用该条件进行蛋白耦联。采用Biacore公司标准氨基耦联试剂盒进行耦联， 即先用NHS/EDC (N — 丁二酰亚胺/[l一乙基一3— (3 — 二甲胺基丙基) 一甲酰二 胺盐酸盐])活化芯片表面，控制时间及流速使耦联蛋白达到尽可能多的量，剩 余活化表面用盐酸乙醇胺(pH8. 5)进行封阻，最终偶联的LYZ3蛋白量为2516RU; 将D-甘露糖、D(+)-氨基葡萄糖盐酸盐、L(-)-岩藻糖、半乳糖醇、D-果糖、D-半乳糖、纤维二糖及依聚岩藻糖等多种糖在96孔板第一孔中用朋S-EP缓冲液(由 BiacoreAB, Uppsala, Sweden提供，成分含0. 01M HEPES， pH7. 4; 0. 15MNaCl; 3mM EDTA; 0.005% Surfactant P20)配成约10—5M的溶液200ul，然后等比稀 释成7个浓度梯度(从前一孔取100ul稀释至预装100ul缓冲液的孔中，混匀， 离心脱气)，分别考察它们与耦联的LYC3蛋白的亲和力。结果发现所选用的岩 藻糖、纤维二糖、依聚岩藻糖等均与LYC3蛋白有结合。
实施例3精卵结合实验
首先，本发明制备了 LYC3的抗体用五只成年雌兔用以产生抗人LYZ3基 因的抗体。先通过心脏穿刺方法获得免疫前血清，接着每只兔注射经用等体积的 完全Freund佐乳剂乳化的50 200ug/0. 2ml纯化重组SLLP1蛋白，14天后用非 完全Freund佐乳剂乳化的同样抗原注射以加强免疫。每隔14天进行一次加强免 疫，至少进进行两次。每次免疫时， 一半抗原在兔腿部肌肉内注射，另一半于背 部两侧皮下注射。最后一次免疫注射后第9天通过心脏穿剌方法获得免疫后血 清，采集收于分离管(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) 1750Xg离心 10min获得的抗血清用ID SDS — PAGE Western bloting印迹法检测效价。结果 确定有效且效价较高。
然后，利用小鼠卵体外受精系统进行糖对精卵结合的竞争抑制试验，进一 步探讨与精卵识别有关的单糖和多糖分子。8 12周龄雌鼠作为供卵鼠，超排处 理后由输卵管采集成熟卵母细胞，用O. 1%的透明质酸酶除去卵周围的卵丘细胞， 再用培养液洗卵四遍；10 12周龄KM雄鼠作为供精鼠，从两侧附睾尾采集精子放 入lml不含BSA(牛血清白蛋白，Sigma)的TB培养液中，37。C, 5%C02、 95%湿润 空气下孵育30min，使精子分散，精于计数确定浓度。然后吸一定体积的精子悬 液加人到O. 3mlT6 (Qiagene) +83厶(301^/1111)培养液液滴中，使精子浓度呈106 /ml培养1.5h使其获能。
将获得的卵母细胞用TALP-HEPES洗三遍，单糖组(浓度约50mM)、多糖组 (约lmg/ml)和凝集素用T6培养液稀释至所需浓度，空白培养液作对照分别进行 精卵结合竞争抑制试验。
各组试验中含不同抑制物的培养液在培养皿中分别做成O. 3ml的液滴，其上 加液体石腊油覆盖。每滴中加入10枚卵，然后各组每滴加入O. 05ml获能后的精子 悬液，使受精时精子浓度约为107ml于C02培养箱中37'C孵育30min后又将卵用 TALP-HEPES液洗五遍，装片，在相差显微镜下放大400倍统计结合在每个卵透明 带上的精子数。
结果显示,单糖组及多糖组中大部分均具有阻断精卵结合的功能。
权利要求
1.低聚糖分子在制备避孕药物中的应用，其特征在于，所述的低聚糖是C4-C20的糖分子，聚合度为1-1000。
2. 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述的低聚糖为C厂Cs的糖 分子。
3. 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述的聚合度为1-100的 糖分子。
4. 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述的聚合度为1-10的糖 分子。
5. 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述的糖分子为下列的一 种(C8HuNOs)n， (C14H21NO )n， (C6H10O5)n， (C5H804)n， (C14H17BrO-8)n，(C5H804)n ， (C5H804)n，(C5H10O4)n，(C6H1406)n， (C4H603)n， (C6H10O5)n，(C6H10O4)n，(C6H10O4)n，(C6H1206)n， (C6H1207)n， (C6H1206)n，其中n=l 1000。
6. 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述的避孕药物为精卵结 合抑制药物。
全文摘要
本发明属于医药领域，具体涉及低聚糖分子在制备避孕药物中的新用途。避孕药种类很多，但是有严重心血管疾病，肝肾炎，内分泌疾病，肿瘤或血液病患者均不宜服用，头晕，恶心，呕吐，月经周期紊乱等副作用也会伴随服药不当或服药种类而产生。本发明提供了低聚糖分子在制备避孕药物中的新用途，所述的低聚糖是C<sub>4</sub>-C<sub>20</sub>的糖分子，聚合度为1-1000。本发明的低聚小分子糖为天然化合物，分子量小，结构简单，制作成避孕药物，效率高、水溶性好、成本低廉、(外用)使用方便、而且不改变激素或者生理结构，对人体副作用小，可以进一步提高人们的生活质量和健康指数。
文档编号A61K31/702GK101352447SQ20071004425
公开日2009年1月28日 申请日期2007年7月26日 优先权日2007年7月26日
发明者龙 余, 唐丽莎, 胡海荣 申请人:复旦大学