新型s-dabo类hiv-1逆转录酶抑制剂的制备及其用途的制作方法

专利名称：：新型s-dabo类hiv-1逆转录酶抑制剂的制备及其用途的制作方法新型S-DABO类HIV-1逆转录酶抑制剂的制备及其用途
技术领域：
本申请涉及以非核苷类HIV-1(人类免疫缺陷病毒-l)逆转录酶抑制剂3，4-二氢-2-烷氧基-6-苄基尿嘧啶类(DABO)和l-[(2-羟基乙氧)甲基]-6-苯硫基胸腺嘧啶类(HEPT)为先导物，参照与该类化合物作用的HIV-1逆转录酶(HIV-1RT)底物构象，设计、合成了一系列新型的S-DABO类化合物，并进行了生物活性测试。非核苷类HIV-l型逆转录酶抑制剂目前已经发展到30多种结构各异的化合物，其中奈韦拉平(Neviapine)、地拉韦啶(Delavirdine)及依非韦伦(Efavirenz)3个化合物已经用于临床，还有多种非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)正处于临床试验阶段。其中DABO类化合物自1992年首次被发现以来，即成为非核苷类HIV-1型逆转录酶抑制剂中一类重要的化合物，活性浓度已达皮摩尔级别，显示出很好的发展前景。为进一步提高该类化合物的活性及选择性，降低化合物毒性及耐药性，本发明人以硫尿嘧啶衍生物为基础，在嘧啶环2，C4,C5位上进行荦构改造，连接上具有不同立体和电性效应的基团，得到了一系列新型的S-DABO类化合物，经活性测试显示出很好的HIV-1逆转录酶抑制活性。本发明属于生物医药领域。
背景技术：
：艾滋病又称获得性免疫缺陷综合征(AIDS),是由于感染人类免疫缺陷病毒(HIV)所导致的以CD4+T淋巴细胞减少为特征的免疫衰竭，患者常于感染后10-15年因并发各种机会性感染或恶性肿瘤而死亡。自1981年美国发现首例艾滋病患者以来，HIV病毒已在全球范围内迅速蔓延，根据联合国艾滋病规划署和世界卫生组织的统计数据，截至2007年底，全球艾滋病病毒感染人数已经达3320万(306O"3610万)。自1995年我国首次发现艾滋病感染病例，近年来感染人数增加迅速，根据国务院防治艾滋病工作委员会办公室、卫生部、联合国艾滋病中国专题组2007年11月联合举行《中国艾滋病防治联合评估报告(2007年)》专题新闻发布会发布的数据显示，目前我国艾滋病病毒感染人数已达70万(55万85万)人，其中艾滋病病人8.5万(8万9万)人。这直接威胁着人类的生命和健康，成为当今最危险的流行病之一。到目前为止，还没有能治愈艾滋病的药物，而且国内临床上所用的抗艾滋病药物几乎全部是进口药，价格十分昂贵。因此，研发具有自主产权的高效低毒的价格便宜的抗HIV药物是摆在我国政府和科学家面前的一个十分迫切和重要的课题。目前发现的HIV有HIV-1和HIV-2两种类型，其中，HIV-1是艾滋病的主要致病原。现有的药物主要是针对HIV-1，按其作用机制分为五类核苷类逆转录酶抑制剂，非核苷类逆转录酶抑制剂，蛋白水解酶抑制剂，融合抑制剂及整合酶抑制剂。现在临床应用的这些药物可以在一定程度上延缓病人病情的恶化，但不能彻底清除患者体内的病毒，大部分病人一直生活在病毒低水平复制的状态中，长期用药患者易产生耐药性，而且一旦停止用药，病人体内的病毒水平很快又恢复到甚至超过用药前的水平。同时这些药物在杀伤病毒的同时，也破坏了身体内正常的生理机能，使病人产生很大的药物反应。且这些药物价格不菲，很多患者没有能力负担。目前，抗病毒组合疗法(又称鸡尾酒疗法)是临床上较为有效的疗法。该疗法是让病人同时服用作用于不同靶点的多种药物，主要为HIV-1逆转录酶抑制剂和蛋白水解酶抑制剂，从而对病毒的复制产生更有效的抑制。其疗效明显优于单药处方，并能延缓药物抗药性的产生。但它用药剂量大，药物与药物之间相互作用而产生的副作用往往使病人难以忍受；更重要的是昂贵的价格使得病人特别是发展中国家的病人无法承担。在HIV的复制循环中，逆转录酶(RT)在完成RNA指导的DNA合成、RNA水解反应和DNA指导的DNA合成过程中起着十分重要的作用，且为病毒所特有。因此，HIV逆转录酶是抗艾滋病药物发展中的一个重要生物靶点。目前临床上所用药物中，主要为核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)和非核苷类逆转录酶抑制剂两类。核苷类逆转录酶抑制剂是合成DNA的天然底物的衍生物，通过阻断病毒RNA的逆转录，即阻止病毒双链DNA形成，病毒失去复制的模板而起作用。它们首先进入被感染的细胞，然后磷酸化，形成具有活性的三磷酸化合物。这些三磷酸化合物是HIV逆转录酶的竞争抑制剂，当插入长的DNA链时，可导致病毒DNA合成受阻，从而抑制病毒复制，长期大剂量使用可使004+细胞计数升高。属于NRTIs的抗人免疫缺陷综合征病毒药物共有9个品种，即齐多夫定(AZT)、去羟肌苷(ddl)、扎西他滨(ddC)、司他夫定(d4T)、拉米夫定(3TC)、阿巴卡韦(abacavir)、泰诺福韦(tenofovir)及复合制剂双肽芝-combivir(AZT+3TC)和三协维-trivizir(AZT+3TC+ABC)。它们作用于逆转录酶与天然底物核苷结合的活性部位，但这些核苷类药物也抑制宿主细胞DNA的多聚酶活性，因此具有依赖剂量的特异毒性。非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)是一组与核苷无关、化学结构完全不同的特异性抑制HIV-1逆转录酶的化合物，一般对HIV-2无活性。这组化合物的共同特点是可高度抑制HIV-1，但并不抑制HIV-2和其他逆转录病毒；不是HIV-1逆转录酶底物竞争抑制剂，而是通过与酶活性点附近的p66疏水区结合，并取代聚合酶结合位点的具有催化作用的天门冬氨酸残基，而达到抑制HIV-1复制的作用；不抑制其他的DNA聚合酶，故毒性很小，有很高的抗病毒选择指数，不足之处在于体内外使用迅速产生耐药毒株。这类药物多半与核苷类药物联合应用。属于NNRTIs的抗人免疫缺陷综合征药物目前有3个，即奈韦拉平(Neviapine)、地拉韦啶(Delavirdine)及依非韦伦(Efavirenz)，其抑制HIV-1的作用很强，但对HIV-2和猴艾滋病毒(SIV)均无抑制活性。这类药物易产生耐药性，只需一个核苷酸变异，即产生耐药，且与其他NNRTIs产生交叉耐性。由于抑制HIV-1作用强，依非韦伦被选为一线药物，与其他NRTIs联合用药。非核苷类逆转录酶抑制剂具有结构多样、高效、低毒以及与其他药物的协同作用等特性,加之酶的结构清楚，药物作用位点明确，因而一直是寻找新的抗艾滋病毒药物的重要方向之一。3，4-二氢-2-烷氧基-6-苄基-4-羰基嘧啶(DABO)类化合物作为NNRTIs的典型代表之一，自1992年发现以来就成为抗HIV-1RT的研究热点，近年来合成了一系列新的衍生物，并显示出较强的抗病毒活性，同时生物活性结果显示，这类化合物对HIV-2也具有一定的抑制作用。
发明内容发明人以非核苷类逆转录酶抑制剂HEPT类和DABO类化合物为先导化合物，结合本实验课题组已取得研究成果，按照药物合理设计中先导化合物优化的方法，将其各自的结构和活性关系联系起来，根据生物电子等排原理等设计了一类新型S-DABO化合物，根据所设计化合物的结构，完成了该类化合物方便的制备、分离、纯化及活性测定方法。本发明是在保持DABO这一类化合物基本结构特征，结合本研究组对该类化合物的研究结果，对嘧啶环不同部位进行了化学修饰，比如C5位的卤代，适当延长C2取代基链长度及C4-NH2取代都会提高化合物活性。我们所进行的新的结构设计，其目的是在保持或加强瞎啶环N3或C4位有利于与靶点酶上氨基酸残基形成氢键、在C6位上保持有利于与酶中亲月旨性基团作用的苯环外，又在C2及C5位上进行了具有不同电性和立体效应基团的结构变换以取得更好的与酶结合能力。所设计的目标化合物将上述结构和活性关系较好地体现在同一个分子中，因此，新化合物有可能会产生更好的抗HIV-1RT活性。最终活性实验数据与我们预测的结果有较好的吻合，5位卤代、适当延长或修饰2位侧链及C4-NH2取代，都能较大的提高该类化合物抗HIV-1RT的活性，其中活性最好的化合物ICso值达到0.18nM,相比目前临床上所用的奈韦拉平，活性提高了23倍。通过与靶点酶对接比较研究，合成的新化合物的构象更有利于与HIV-1逆转录酶结合，从而又发现了新一类高活性的HIV-1逆转录酶抑制剂。根据实验结果，可以看出该类化合物通过7i电子重叠、氢键及位阻作用，能更好地与HIV-1逆转录酶的疏水性口袋周围的氨基酸Tyr181、Tyrl88、Trp229，Phe227、Val179、Val106、Pro236、Pro95、Lysl01等相互作用，从而影响酶的构象而产生对酶的高度抑制。本发明还进一歩涉及了此类新化合物的合成以及作为HIV-1逆转录酶抑制剂的应用的研究。本发明的部分化合物可按照路线l,路线2和路线3的合成路线制备，通过此路线将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。路线l试剂与条件(a)R=H，CH3;C6H5CH2CN，Zn/THF，回流。(b)NH2CSNH2，Na/EtOH,回流。。)含不同基团的卤代物，甲醇钠，室温。路线2试剂与条件(d)X2,Pb02,HOAC,室温，反应过夜。路线3试剂与条件(e)POCl3，室温，反应过夜。(f)NH3'H20，80-卯。C，12-24小时。具体实施方式为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。如无特殊说明，下述实施例中"减压旋干溶剂"一般指"水泵减压条件下用旋转蒸发仪蒸干溶剂。'实施例l化合物1:3-氧代-4-苯基丁酸乙酯Ethyl3-oxO"4-phenylbutyrate将活化后的Zn粉(18g,依次用3N的盐酸、H20、无水EtOH、无水Et20洗涤三次，然后真空抽干干燥)，混悬于干燥的THF(125ml)中加热回流，滴入20滴BrCH2COOEt,45分钟后(溶液出现绿色物质)一次性加入C6H5CH2CN(3.12ml，27mmo1),滴加BrCH2COOEt(6.6ml，60mrno1),1小时后滴加完毕再回流10分钟。用THF(125X3ml)稀释，力卩K2C03(50%，54ml)水溶液快速搅拌45分钟，静置分层，倾倒出上层有机溶剂，用THF(2X100ml)洗涤剩下残余物，合并有机相加入盐酸(10%，50ml)室温搅拌45分钟，用NaHC03调PH"7静置分层。取上层有机层旋干THF得红色混合物，加CH2Cl2(300ml)稀释，加饱和NaHC03溶液(200ml)洗涤，然后用无水Na2S04干燥。取有机层旋干得红褐色油状物3-氧代~4-苯基丁酸乙酯5.28g，产率95%。MS(ESI)207[M+H]+，229[M+Na]+实施例2化合物2:2-甲基-3-氧代-4-苯基丁酸乙酯Ethyl-2-methyl-3-oxo~Plienylbutanoate将活化后的Zn粉(13g,依次用3N的盐酸、H20、无水EtOH、无水Et20洗涤三次，然后真空抽干干燥)，混悬于干燥的THF(45ml)中加热回流，滴入20滴溴代乙酸乙酯，45分钟后(溶液出现绿色物质)一次性加入苄腈(1.3ml,10mmol)，滴加BrCH(CH3)COOEt(5.5ml,50rnrno1),1小时后滴加完毕再回流10分钟。用THF(45X3ml)稀释，加K2C03(50%,15ml)水溶液快速搅拌45分钟，静置分层，倾倒出上层有机溶剂，用THF(2X50ml)洗涤剩下残余物，合并有机相加入盐酸(10%,12ml)室温搅拌45分钟，用NaHC03调PH"7静置分层。取上层有机层旋干THF得黄绿色混合物，加CH2C12(150ml)稀释，加饱和NaHC03溶液(100ml)洗涤，然后用无水Na2S04干燥。取有机层旋干得黄绿色油状物2-甲基-3-氧代-4-苯基丁酸乙酯1.87g，产率85%。MS(ESI)ffi/z:221[M+H]+实施例3化合物3:6-节基硫尿嘧啶6-benzyl-2-thioxO"2，3-dihydropyrimidiii-4(lH)~one将金属钠(4g,174mmol)溶于无水EtOH(90ml)中，加入SO(NH2)2(9.28g,120腿o1)，和化合物l(1.64g，8.0mmo1)，反应混合物加热回流6小时。在40-50'C减压旋至几乎全干，剩余物溶于水(80ml)中。加入浓盐酸(14ml)析出沉淀，加HOAC调节直到pH&4，用抽滤漏8斗过滤出沉淀，用10XEtOH溶液洗涤，干燥后得白色固体1.53g，产率86.5%。MS(ESI)/m/z:219[M+H]+实施例4化合物4:5-甲基-6-苄基硫尿嘧啶6-benzyl-5-methyl-2-thioxo~2j3-dihydropyrimidin~4(lH)~one将金属Na(lg，43.5mmol)溶于无水EtOH(20ml)中，力口入SO(NH2)2(1.8g,23mmol)，和化合物2(0.4g，1.8mmol)，反应混合物加热回流2小时。在40-5(TC减压旋至几乎全干，剩余物溶于水(20ml)中。加入浓盐酸(4ml)析出沉淀，加HOAC调节直到pH"4，用抽滤漏斗过滤出沉淀，用10XEtOH溶液洗涤，干燥后得白色固体256mg,产率61%。MS(ESI)ot/z:233[M+H]+，255[M+Na]+实施例5化合物1a:2-苄基硫-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-2-(benzylthio)pyrimidi]i~4(3H)~one将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加入C6HsCH2Br(132ul，1.1mmol)，常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，旋干溶剂，加H20(30ml)溶解，此时可能出现浑浊，然后滴加HOAC调PH"7，析出白色固体，静置58小时，过滤，得白色固体。通过硅胶柱色谱纯化(CH2C12:EtOAc=5:1),最后得纯品250mg,产率80%,Rf=0.45(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp188.8-190.5。C。MS(ESI)jw/z:309.0[M+l〗+，331[M+Na]+NMR(300固z,CDC13)S:3.84(s,2H，C6H5CH2)，4.38(s，2H，CH2S)，5.94(s,1H，C5-H)，7.11-7.51(m，10H，Ar墨H).13C蘭R(75MHz,CDC13)S:34.61(C6H5CH2S)，43.96(C6H5CH2),108.46(C-5)，126.84,127.51,128.51,128.63，129.14，129.45,136.51，136.70(C-arom)，160.21(C-6)，165.32(C-2),167.94(CM).Anal.(C18H16N2OS),C,H,N，O，S.实施例6化合物1b:2-苯乙基硫-6-苄基嘧啶酮6~beiizyl-2-(phenethylthio)pyrimidiii~4(3H)~one.将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg,1mmol),溶解后加入C6H5(CH2)2Br(200ul，1.5mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体248mg，产率77%，Rf=0.37(CH2C12:EtOAc=3:1),mp139-140°C。MS(ESI)m/z:323.0[M+l〗十，345.0[M+Na]十'HNMR(300MHz，CDC13)S:2,95-3.00(t,2H，SCH2),3.37-3.42(t，2H，SCH2CH2)，3.86(s，2H,C6H5CH2),6.01(s，1H，tVH)，7.18-7.34(m，IOH，Ar-H)，12.75(brs，1H,N3-H).13C腹R(75MHz，CDC13)&31.78(CH2S),35.73(C6H5CH2)，44.00(C6H5￡H2CH2S)，108.41(C-5)，126.59，126.86,128.53，128.58，128.62，129.42，137.05，139.74(C-arom)，160.61(C-6)，165.35(C-2)，168.01(C-4).Anal.(C19H18N2OS)，C，H,N，O，S.实施例7化合物lc:2-(3-苯基)丙基硫-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-2-(3~phenylpropylthio)pyrimidin~4(3H)~one将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg,1mmol)，溶解后加入CfiH5(CH2)3Br(152ul，1.2mmol),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体254mg,产率88%,Rf=0.5(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp149-150T。MS(ESI)m/t:337.1[M+l]+，359.0[M+Na]+'H画R(500MHz,CDC13)S:2.00-2.06(m，2H,CH2CH2CH2)，2.72-2.75(t，2H，C6H5CH2CH2)，3.17-3.20(t,2H,CH2CHiS)，3.81(s,2H,C6H5CH2)，6.00(s,1H,C5-H),7.18-7.33(m,10H，Ar-H).13CNMR(125MHz,CDC13)S:30.09(CH2S),30.61(SCH2￡H2),34.67(QLCH2CH2S)，43.98(C6H5CH2)，108.23(C-5)，126.05，126.82,128.43，128.47，129.43，137.10,140.99(C-arom)，160.68(C-6),165.24(C-2),167.98(CM).Anal.(C20H20N2OS)，C,H，N，O，S.实施例8化合物1d:2-(2-甲基)苄基硫-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-2-(2-niethylbenzylthio)pyrimidin-4(3H)~one将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加A(o-CH3)C6H4CH2Br(145ul，1.2mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体254mg,产率88%，Rf=0.47(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp170-172°C。MS(ESI)/m/z:323.1[M+l]+&NMR(300MHz,CDC13)S:2.36(s，3H,C6H4CH3)，3.98(s，2H，C6H5CH2)，4.67(s，2H，CH2S)，6.10(s，1H，C5-H)，7.00-7.63(m，9H，Ar-H),12.96(brs,1H，N3-H).13C画R(75MHz,CDC13)S:19.37(C6H4CH3)，33.09(CH2S)，43.87(C6H5CH2),108.38(C-5)，126.15，126.92,128.01，128.66，129.52，130.27，130.46，133.67，136.83，136.99(C-arom)，160.68(C-6),165.33(C-2)，167.82(C-4).Anal.(C19Hi8N2OS),C,H,N,0,S.实施例9化合物1e:2-(3-甲基)苄基硫-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-2-(3-methyl-benzylthio)pyrimidin-4(3H)-oiie将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml),加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加A(i-CH3)C6H4CH2Br(162ul,1.2mrno1)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体190mg,产率59%,Rf=0.47(CH2C12:EtOAe2:1),mp148.5-149.5。C。MS(ESI)wi/z:323.1[M+l]+'H蘭R(300MHz,CDC13)S:2.33(s,3H，C6H4CH3)，3.87(s，2H,C6H5CH2),4.39(CH2S),6.00(s,1H，C5-H)，7.07-7.36(m，9H，Ar-H),13.20(brs，1H，N3-H).13C腿R(75MHz,CDC13)S:21.34(C6H4CH3),34.70(CH2S),44.01(C6H5CH2)，108.39(C-5)，126.25，126.87，128.33,128.43，128.65，129.47,129.89，136.31，137.06，138.22(C-咖m),160.49(C-6)，165.63(C-2),168.05(C-4).Anal.(C19H18N2OS),C，H,N，O,S.实施例10化合物1f:2-(3-甲氧基)苄基硫-6-节基嘧啶酮6"benzyl-2-(3-methoxybenzy他io)pyrimidin>4(3H)-o]ie将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml),加入化合物3(218mg,1mmol)，溶解后加A(/w-OCH3)C6H4CH2Br(162ul,1.2mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体243mg,产率78%，Rf=0.37(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp159-160°C。MS(ESI):338.9[M+l]+，361[M+Na]+^腿R(500MHz,CDC13)S:3.79(s，3H，OCH3)，3.87(s,2H,C6H5CH2)，4.40(s,2H,CH2S)，5.99(s，1H，C5-H)，6.80-7.35(m，9H,Ar陽H).13CNMR(125MHz,CDC13)5:34.75(CH2S)，43.93(C6H5CH2)，55.22(OCH3)，108.39(C-5)，114.66，121.51，128.67，129.46，129.57，136.94,137.88，160.40(C-arom)，159.70(C-6)，165.47(C-2)，168.00(C-4).Anal.(C19H18N202S)，C，H，N，O,S.11实施例11化合物1g:2-(4-叔丁基)苄基硫-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-2-(4-tert-butylbenzylthio)pyrimidin-4(3H>one将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加入(p-t-Bu)C6H4CH2Br(170ul，1.2腿ol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体288mg，产率79%，Rf=0.4(CH2C12:EtOAc=3:l),mp169-170。C。MS(ESI)m/z:365.0[M+l]+，387.0[M+Na]+'H丽R(500MHz,CDC13)S:1.34(s，9H，(CH3)3C)，3.87(s，2H，C6H5CH2),4.39(s,2H,CH2S)，6.00(s，1H，C5-H)，7.06-7.56(m，9H,Ar-H).13C薩R(125MHz,CDC13)S:31.30((￡H3)3C),34.40(CH2S)，34.51恥44.01((CH3)3Q:108.46(C-5)，125.47，126.83，128.64，128.89,129.49，133.36,137.10，150.55(C-咖m)，160.50(C-6)，165.35(C-2)，167.91(C4).Anal.(C22H24N2OS)，C,H，N,O,S.实施例12化合物1h:2-(2-萘基)甲基硫-6-苄基嘧啶酮6"benzyl曙2-(naphthalen-2-ylmethylthio)pyrimidiii"4(3H)-oiie将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml),加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加入j9-溴甲基萘(130rng,l.OSmmol),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得纯品220mg,产率65%，Rf=0.38(CH2C12:EtOAc=3:1)，mp213-214°C。MS(ESI)to/z:359.1[M+l]+，381.2[M+Na〗+丽R(500MHz,DMSO-<4)S:3.84(s，2H,C6H5CH2),4.55(s，2H,CH2S)，6.02(s,1H,Cs-H)，7.23-7.33(m,5H，Ar-H)，7.45-7.53(m，3H，Ar-H),7.80-7.87(m,4H，Ar-H).13CN證(75MHz,Pyridine-d5)5:34.73(CH2S)，43.75(C6H5CH2),107.61(C-5),126.15,126.43，126.79,127.53，127.85,127.96，128.02，128.51，128,75,129.62，132.93，133.61,138.38(C-arom)，162.91(06)，165.06(C-2)，167.06(C-4).Anal.(C22Hi8N2OS),C，H,N，O，S.实施例13化合物1i:2-(l-苯基)乙基硫-6-苄基嘧啶酮6-benzyl誦2-(l-phenylethylthio)pyrimidin誦4(3H)-one将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg,1mmol)，溶解后加入C6H5(CH3)CHBr(220ul,1.15mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体209mg，产率65%,Rf=0.56(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp213-214°C。MS(ESI)m/z:323.0[M+lf，H醒R(500MHz,CDC13)S:1.72-1.74(d，3H，QbCH),3.86(s,2H，C6H5CH2),5.11-5.15(q，1H，CH3￡H),6.00(s，1H,C5-H),7.24-7.38(m,IOH，Ar-H).13C腿R(125MHz,CDC13)S:22.01(CH3CH)，44.00(CH3￡HS),44.63(C6H5CH2),108.32(C-5),126.85，127.54,128.50,128.64，129.49,137.13,141.97(C-arom),160.37(C-6)，165.72(C-2),168.14(C-4).AnaL(C19H18N2OS)，C，H，N，O，S.实施例14化合物1j:2-(乙氧甲基硫)-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-2-(ethoxymethylthio)pyrimidin~4(3H)~one将金属Na(175mg)溶于无水MeOH(12ml)，加入化合物3(218mg,1mmol),溶解后加入C2H5OCH2Cl(285ul，3mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体146mg，产率53%，Rf=0.38(CH2Cl2:EtOAc=、2:1),mp130-131°C。MS(ESI)m/z:277.3[M+l]+!HNMR(500MHz,CDC13)S:1.18-1.21(t，3H,CH2CH3)，3.54-3.59(q，2H，OCH2CH3),3.86(s，2H，CH2C6H5)，5.44(s，2H，SCH20)，6.02(81H,C5-H)，7.267.35(m，5H，Ar-H)，12.80(brs,1H，N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)8:14.69(CH2￡H3),43.91(C6H5CH2)，65.40(SCH20)，72.25(0￡H2CH3)，109.00(C-5)，126.89，128.63,129.48，136.92(C-arom)，159.67(C-6)，165.18(C-2)，168.05(C-4).Anal.(C14H16N202S),C，H,N,O,S.实施例15化合物1k:2-(苄氧甲基硫)-6-苄基嘧啶酮6"benzyl-2-(benzyloxyinethylthio)pyrimidin~4(3H)"One将金属Na(46mg)溶于无水MeOH(3ml)，加入ft合物3(43.6mg,0.2mmol),溶解后加入C6H5CH20CH2C1(56ul，4mmol),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体34mg，产率50%，Rf=0.55(CH2C12:EtOAc=2:l)，mp132-133°C。MS(ESI)m/z:339.0[M+l]+，361.0[M+Na]+JHNMR(300MHz，CDC13)S:3.78(s，2H,CH2C6H5)，4.60(s,2H，OCH2C6H5),5.46(s，2H，SCH20)，6.01(s，1H,Cs-H)，7.26-7.55(m，IOH，Ar-H)，12.40(brs，1H,NrH).13CNMR(125MHz,CDC13)&43.87(CH2C6H5)，71.19(SCH20),71.54(OCH2C6H5)，109.19(C-5)，126.93，128.12，128.40，128.53，128.67，129.31,129.47，136.47,136.86(C-arom),159.33(C-6),164.77(C-2)，167.99(C-4).Anal.(Ci9H18N202S)，C，H,N,O，S.实施例16化合物11:2-烯丙基硫-6-苄基嘧啶酮2-(allylthio)-6"benzylpyrimidin"4(3H)-one将金属Na(32mg)溶于无水MeOH(6ml)，加入化合物3(218mg，1mmol),溶解后加ACH2=CHCH2Br(176ul,2.2mmol),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体159mg,产率61%，Rf=0.55(CH2C12:EtOA(=2:1)，mp132-133'C。MS(ESI)m/z:259.2[M+l]+，291.2[M+Na]+JH画R(500MHz,CDC13)5:3.83-3.84(d，4H，CH2S，CH2C6H5,信号有重叠)，5.11-5.26(q，2H,CH-賜，5.85-5.92(m，1H,CH=CH2)，6.00(s，1H,C5-H)，7.26-7.35(m,5H，Ar國H)，13.26(brs，1H，N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)8:33.31(SCH2),43.97(CH2C6H5)，108.34(C-5),118.79(CH=￡H2)，132.39(￡H=CH2),126.86，128.61,129.48，137.00(C-arom)，160.23(C-6),165.74(C-2),168.15(C-4).Anal.(C14H14N2OS),C，H，N,O，S.实施例17化合物2a:2-苄基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-5-metIiyl-2-(benzylthio)pyi*imidin-4(3H)-one将金属Na(120mg)溶于无水MeOH(10ml)，加入化合物4(232mg，1mmol),溶解后加AC6H5CH2Br(145ul，1.2mrno1)，常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，旋干溶剂，加H20(30ml)溶解，此时可能出现浑浊，然后滴加HOAC调PH^7，析出白色固体，静置58小时，过滤，得白色固体。通过硅胶柱色谱纯化，最后得白色固体95mg，产率30%，Rf=0.58(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp176.5-177.5°C。MS(ESI)m/z:323.0[M+l]+，345.0[M+Na]十画R(300MHz,CDC13)S:2.04(s,1H，C5-CH3)，3.96(s，2H，C6H5gH2),4.38(s，2H,CH2S),7.23-7.32(m，IOH，Ar-H)，12.44(brs，1H，N3-H).13C薩R(75MHz,CDC13)S:10.73(C5-CH3)，34.54(C6H5CH2)，41.04(C6H5CH2S),116.58(C-5)，126.50，127.41，128.51，128.98,129.09，136,97,137.70(C-arom)，155.90(C-6),162.07(C-2),165.30(C-4).Anal.(C19H18N2OS)，C,H，N,O,S.化合物2b:2-苯乙基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-2-(benzyl也io)-5-methylpyrimidin隱4(3H)-one将金属Na(69mg)溶于无水MeOH(5ml),加入化合物4(70mg,0.3mmol)，溶解后加入C6H5(CH2)2Br(47ul，0.36mrno1)，常温下反应，经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体53mg,产率52%,Rf=0.58(CH2Cl2:EtOAc=2:1),mp156.5-157.5°C。MS(ESI):337.5[M+l]+，359.4[M+Na]+力NMR(500MHz,CDC13)S:2.14(s，3H,C5-CH3),2.95-2.982H，SCH2)，3.35-3.382H，SCH2CH2)，3.98(s,2H,C6H5CH2)，7.16-7.32(m,10H,Ar-H).13CN證(125MHz,CDC13)S:10.72(C5-CH3),31.81(CH2S),35.83(C6H5CH2)，41.05(C6H5GH2CH2S),116.59(C-5)，126.50,126.53,128.49，128.51,128.59,128.91,137.95,139.88(C-arom)，156.15(C-6),162.06(C-2)，165.06(C-4).Anal.(C20H20N2OS),C，H，N，O,S.实施例19化合物2c:2-(3-苯基)丙基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6"beiizyl-5-inethyl垂2-(3-phenylpropy他io)pyrimidin-4(3H)-one将金属Na(69mg)溶于无水MeOH(5ml),加入化合物4(70mg，0.3mmol)，溶解后加入C6H5(CH2)3Br(55ul，0.36mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体66mg，产率62%，Rf=0.47(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp152-153。C。MS(ESI)i/z:351.4[M+l]+，373.4[M+Na]+，HNMR(300MHz,CDC13)S:2.12(s,1H,C5-(H3)，1.94-2.05(p，2H，CH2CH2CH2),2.67-2.72(t，2H，C6H5CH2CH2)，3.11-3.16(t，2H，CH2CH2S),3.91(s，2H，C6H5CH2),7.15-7.31(m，10H，Ar-H).13CNMR(75MHz,CDC13)S:10.68(C5-CH3)，30.06(CH2S),30.81(SCH2￡H2)，34.72(CH2CH2CH2S),41.01(C6H5CH2),116.32(C-5)，126.00，126.43，128.40，128.44,128.95，137.95，141.07(C墨arom)，156.23(C-6)，162.03(C-2),165.34(C-4).Anal.(C21H22N2OS)，C,H，N，O,S.实施例20化合物2d:2-(2-甲基)苄基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6陽benzyl曙5-methyl-2-(2-methylbenzylthio)pyrimidin-4(3H)"One将金属Na(150mg)溶于无水MeOH(10ml)，加入化合物4(232mg，1mmol),溶解后加入(o-CH3)CeH4CH2Br(148ul，1.1mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体249mg，产率74%,Rf=0.60(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp173-174°C。MS(ESI)m/z:337.2[M+l]+，359.1[M+Na]+NMR(500MHz,CDC13)S:1.93(s,3H,C5-CH3),2.36(s，3H，C6H4CH3)，3.98(s，2H，C6H5CH2),4.41(CH2S),7.05-7.33(m,9H，Ar-H).13C画R(125MHz,CDC13)5:10.74(C5-CH3)，19.33(C6H4CH3)，32.84(CH2S)，41.05(C6H5CH2),116.56(C-5),126.14,126.51，127.86，128.50，128.99,130.13，130.45，134.27,136.97,137.92(C-咖m)，156.11(C-6)，162.06(C-2)，165.28(C-4).Anal.(C20H20N2OS)，C,H，N，O，S.实施例21化合物2e:2-(3-甲基)苄基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-5_methyl-2_(3-methylbenzylthio)pyrimidin-4(3H)~one将金属Na(225mg)溶于无水MeOH(15ml)，加入化合物4(232mg，1mmol),溶解后加A(w-CH3)C6H4CH2Br(162ul,1.2mmol),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体225mg，产率67^,Rf-0.48(CH2Cl2:EtOA(^2:l),mp198-199.5°C。MS(ESI)、m/z:337.1[M+l]+，359.1,Na]十力NMR(300MHz,DMSCW6)S:1.95(s，3H，C5-CH3),2.22(s，3H，CfiliiCHs),3.90(s，2H,C6H5CH2)，4.29(CH2S),7.02-7.31(m,9H，Ar-H)，12.54(brs，1H，N3-H).13CNMR(125MHz,Pyridine-rf5)S:10.79(C5-CH3)，21.00(C6H4CH3),34.34(C6H5CH2)，40.93(CH2S)，115.84(C-5),126.45，126.52,128.17,128.63,128.69,129.24，123.00，138.04,138.13,138.86(C-arom),157.88(C-6)，161.22(C-2)，164.67(C-4).Anal.(C20H20N2OS)，C，H，N，O，S.实施例22化合物2f:2-(3-甲氧基)苄基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-5-methyl-2-(3-methoxybenzylthio)pyrimidin-4(3H)"Oiie16将金属Na(30mg)溶于无水MeOH(2ml),加入化合物4(46.4mg，0.2mmol),溶解后加入(加-OCH3)C6H4CH2Br(34ul，0.24mrno1),审温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体30mg,产率43%，Rf=0.6(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp162-163。C。MS(ESI)i/z:353.0[M+l]+，374.9[M+Na]+&NMR(300MHz,CDC13)S:2.10(s,3H，CrCH3),3.77(s,3H，C6H线)，3.96(s,2H,OCH3)，4.37(s，H，CH2S)，6.79-6.89(m，3H,Ar-H)，7.14-7.32(m，6H，Ar-H).13C薩R(75固z，CDC13)S:10.74(C5-CH3)，34.67(C6H5CH2),41.09(CH2S)，55.21(OCH3)，121.44(C-5),113.09，114.54,116.64，126.50，128.50,139.55,137.82，138.30，159.67(C-arom),155.93(C-6)，162.03(C-2),165.24(CM).Anal.(C2oH20N202S)，C，H，N，O,S.实施例23化合物2g:2-(4-叔丁基)苄基硫一5-甲基-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-5-methyl-2-(4-tert-butylbenzylthio)pyrimidin~4(3H)~one将金属Na(45mg)溶于无水MeOH(3ml),加入化合物4(70mg，0.3mmol)，溶解后加入(^t-Bu)C6H4CH2Br(47ul,0.332mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体63mg，产率55X，Rf-0.48(CH2Cl2:EtOA(^2:l),mpl88-189。C。MS(ESI)m/z:379.0[M+l〗+，401.0M+Na]+.，HNMR(300MHz，CDC13)S:1.34(s9H,(CH3)3C)，1.70(s3H,C5-CH3),3.972H,C6H5CH2)，4.36(s,2H，CH2S)，7.20-7.34(m，9H，Ar-H).13CNMR(75MHzCDC13)&10.72(C5《H3)，31.30((QH3)3C),34.33)，34.50(CH2S),41.00((CH3)3￡)，116.64(C-5),125.46,126.47，128.49，128.80,128.98,133.69,137.89,155.95(C-arom)，150.45(C-6)，161.88(C-2)，164.87(C4).Anal.(C23H26N2OS),C，H，N，O,S.实施例24化合物2h:2-(2-萘基)甲基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-5-methyl-2-(naphthalen-2-ylmethy他io)pyrimidin-4(3H)-one将金属Na(30mg)溶于无水MeOH(2ml)，加入化合物4(46.4mg,0.2mmol),溶解后加入》-溴甲基萘(50mg，0.22mrno1),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体55mg，产率74%，Rf=0.48(CH2C12:EtOAc=3:1)，mpl卯.5-191.5°C。MS(ESI)/m/z:373.1[M+l+，395.1[M+Na]十力NMR(500MHz,DMS(W6)S:1.96(s，3H，C5-CH3)，3.92(s,2H，C6H5CH2)，4.52(s，2H，CH2S),7.19-7.26(m,5H,Ar-H),7.43-7.50(m，3H，Ar-H)，7.76-7.89(m,4H,Ar-H),12.61(brs,1H，N3-H).13CNMR(125MHz，)S:10.79(C5-CH3),34.55(C6H5CH2)，40.96(CH2S)，115.86(C-5)，126.13，126.40,126.53,127.56,127.84,127.94,128.00,128.47，128.71，129.25，132.93，133.62,135.89，138.84(C-arom),157.85(C-6)，161.32(C曙2)，164.72(C-4).Anal.(C23H20N2OS)，C，H，N，O，S.实施例25化合物2i:2-(l-苯基)乙基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶酮6>benzyl-5-methyl-2-(l-phenylethyltIiio)pyrimidin~4(3H)~one将金属Na(45mg)溶于无水MeOH(3ml)，加入化合物4(70mg，0.3mmol)，溶解后加入C6H5(CH3)CHBr(63ul,0.33mmol),常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体50mg，产率50%,Rf=0.44(CH2C12:EtOAc=2:1),mp165-166°C。MS(ESI)zw/z:337.0[M+l]+，359.0[M+Na〗+NMR(300MHz,CDC13)S:1.67-1.70(d，3H，Qi3CH)，2.03(s,3H,C5-CH3)，3.94(s,2H,C6H5CH2)，5.02-5.10(q，1H，CH3￡H)，7.22-7.35(m,10H,Ar-H).13C醒R(75MHz,CDC13)S:10.68(C5-CH3),22.06(CHaCH)，40.96(C6H5CH2),44.73(CH3￡HS)，U6.65(C-5),126.45，127.41，128.46，128.52，128.98，137.91,142.08(C-arom)，155.75(C-6)，161.93(C-2)，164.88(CM).AnaL(C20H2oN2OS)，C，H，N，O，S.实施例26化合物2j:2-(乙氧甲基硫-5-甲基6-苄基嘧啶酮6~benzyl-2-(ethoxymethylthio)-5-inethylpyrimidin-4(3H)-one将金属Na(60mg)溶于无水MeOH(10ml)，加入化合物4(88mg，O.38mmol)，溶解后加AC2H5OCH2Cl(152ul,1.55mrno1)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体36mg，产率33%，Rf=0.31(CH2C12:EtOAc=3:1)，mp129-130°C。MS(ESI)/m/z:291.0,1]+，312.9[M+Na]+力NMR(500MHz,CDC13)S:1.17-1.20(t,3H，CH2CH3),2.13(s，1H，C5-CH3)，3.53-3.57(q,2H,OCH2CH3),3.95(s，2H,CH2C6H5)，5.38(s,2H，SCH20),7.22-7.32(m，5H,Ar-H),11.99(brs,1H，N3-H)."C腿R(125MHz,CDC13)5:10.78(C5-CH3)，14.70(CH2￡H3)，40.97(C6H5CH2),65.19(SCH20),72.32(0￡H2CH3),117.40(C-5)，126.50,128.47，128.56，128.91，129.18，137.84(C-arom)，155.36(C-6),161.90(C-2)，164.82(C-4).Anal.(C15H18N202S)，C，H，N，O,S.实施例27化合物2k:2-(苄氧甲基硫)-5-甲基6-苄基嘧啶酮6-benzyl-2-(benzyloxymethylthio)-5-methylpyrimidin~4(3H)-one将金属Na(60mg)溶于无水MeOH(10ml)，加入化合物4(88mg,0.38rnrno1)，溶解后加AC6H5CH2OCH2Cl(162ul，0.75mmol)，常温下反应。经TLC监测,待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体50mg，产率38%,Rf=0.42(CH2C12:EtOAc=3:l),mp153-155°C。MS(ESI);w/z:353.0[M+l]+,391.0[M+K]+NMR(500MHz,CDC13)S:2.14(s，3H，C5-H)，3.95(s,2H,CH2C6H5),4.59(s，2H,OCH2C6H5)，5.43(s，2H，SCH20),7.12-7.52(m,10H，Ar-H)，11.57(brs，1H，N3-H).13'CNMR(125MHz,CDC13)S:10.80(C5-CH3)，40.95(CH2C6H5),71.08(SCH20)，71.75(OCH2C6H5),117.63(C-5)，126.53，127.87，128.36，128.43,128.63,128.90，129.33,136.55，137.76(C-arom),154.97(C-6),161.84(C-2)，164.49(04).Anal.(C20H20N2O2S)，C，H，N,O，S.实施例28化合物2I:2-烯丙基-5-甲基-6-苄基嘧啶酮2-(allylthio)~6~benzyl-5-niethylpyrimidin~4(3H)-one将金属Na(115mg)溶于无水MeOH(10ml)，加入化合物4(109Ag,0.5rnrno1),溶解后加入CH2=CHCH2Brl(85ul，1.1mmol)，常温下反应。经TLC监测，待原料点消失后，处理方法同上。最后得白色固体72mg，产率53%，Rf=0.50(CH2Cl2:EtOAc=3:1),mp150.5-151.5°C。，MS(ESI)im/z:273.0[M+l]+画R(500MHz,CDC13)S:2.12(s，2H，C5-CH3)，3.94(s,2H，CH2C6H5),3.79-3.80(d，2H，CH2S)，5.11-5.24(q，2H，CH=Cfl2),5.84-5.91(m，1H,CH=CH2),7.23-7.33(m，5H,Ar-H),12.61(brs，1H，N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)S:10.68(C5-CH3)，33.31(CH2C6H5),41.05(SCH2),118.45(C-5),116.49(CH=￡H2)，132.80(￡H=CH2)，126.47，128.44,128.95,137.91(C-arom)，155.81(C-6),162.6(C-2)，165.4(C-4).Anal.(C15H16N2OS)，C，H，N,O,S.实施例29化合物3a:2-苄基硫-5-碘-6"苄基嘧啶酮6"benzyl-2-(benzy他io)-5-iodopyrimidin-4(3H)-one将la(31mg，1mmol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg，0.06mmol)搅拌，然后加入l2(16mg,0.06腿o1)，常温下反应。经TLC检测，原料点消失后，加水40ml，析出沉淀，静置，然后过滤得黄褐色固体，用CH2Cl2溶解固体，过滤得滤液，旋去部分溶剂，通过制备性薄层板分离，得白色固体40mg，产率92%，Rf=0.37(CH2Cl2:Et2O-2:1)，mp175-177。C。MS(ESI)iii/z:435.0M+1]+'HNMR(500MHz,CDC13)S:4.23(s，2H，C6H5CH2)，4.37(s，2H，CH2S)，7.11-7.51(m，10H,Ar-H),12,00(brs,1H，N3-H).13CNMR(75MHz,CDC13)S:34,99(C6H5CH2),47.12(C6H5CH2S)，85.64(C-5)，126.87，127.64，128.50,128.62，129.02，136.28,137.00(C-arom),159.63(C-6)，161.82(C-4)，168.62(C-2).Anal.(C18H15N2OSI)，C,H,N,O，S,I.实施例30化合物3b:2-苯乙基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6"benzyl-5-iodO"2-(phenethylthio)pyrimidin~4(3H)-one将lb(50m&0.16mmol)溶于冰HOAC(1.5ml)中，完全溶解后加入PbO2(24mg，0.1mmol)搅拌OOOO.，然后加入12(25111&0.1mmol),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体25mg，回收原料19mg，产率70%，Rf=0.65(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01),mp175-177。C。MS(ESI)wi/z:449.2[M+l]+，471.2[M+Na]+'HNMR(500MHz,CDC13)S:2.93-2.96(t，2H,SCH2),3.34-3.37(t，2H,SCH2CH2),4.24(s,2H,C6H5CH2)，7.13-7.40(m,1OH,Ar-H),11.60(brs，1H,N3-H).13CNMR(125MHz，CDC13)S:32.19(CH2S)，35.55(C6H5CH2)，47.16(C6H5￡H2CH2S)，85.61(C-5),126.68，126.87,128.47，128.57,129.24，137.10，139.46(C-arom)，159.94(C-6)，161.69(C-2),168.66(CM).Anal.(Ci9H17N2OSI)，C，H,N，O，S，I.实施例31化合物3c:2-(3-苯基)丙基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-5-iodO"2-(3-phenylpropylthio)pyrimidin"4(3H)-one将lc(34mg，0.1腿ol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg，0.06mmol)搅拌，然后加入l2(16mg，0.06mmo1),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体18mg,回收原料5mg，产率45%，Rf=0.67(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01)，mp155-156°C。MS(ESI)m/z:463.1[M+l]+，485.1[M+Na]+NMR(500MHz,CDC13)S:1.93-2.00(p，2H,CH2CH2CH2)，2.67-2.70(t,2H,C6H5CH2CH2),3.10-3.13(t，2H，CH2CH2S)，4.17(s，2H，C6H5CH2),7.13-7.37(m，10H,Ar-H),11.65(brs,1H,N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)S:30.46(CH2S)，30.60(CeH5CH2)，34.64(SCHafilfc),47.10(￡H2CH2CH2S),85.26(C-5),126.11，126.81，128.40，128.44，128.46，129.30,137.12，140.82(C-咖m)，160.07(C-6)，161.74(C-2)，168.62(C-4).Anal.(C2oHl9N2OSI)，C，H，N,O,S，I.实施例32化合物3d:2-(2-甲基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6"benzyl-2-(2-methylbenzylthio)-5-iodopyrimidin"4(3H)"One将Id(420.13mmol)溶于冰HOAC(1.5ml)中，完全溶解后加入Pb02(19mg,0.08mmol赠拌，然后加入l2(20m&0.08mmo1),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体20mg,回收原料15mg，产率53%,Rf=0.63(CH2C12:Et20:HOAC-2:1:0.01),mp176-178'C。MS(ESI)ifi/z:449.1[M+l]+,471.1[M+Nal+力NMR(300MHz,CDC13)S:2.34(s,3H，C6H4CH3)，4.23(s,2H,0^5012)，4.38(s，2H，CH2S),7.03-7.40(m，9H,Ar-H)，11.72(brs，1H,N3-H).13C醒R(75MHz,CDC13)S:19.28(CeH4CH3)，33.36(CH2S)，47.13(C6H5CH2)，85.60(C-5)，126.22，126.87，128.01，128.48,129.31，130.07,130.54，133.54，136.94，137.04(C-arom)，159.82(C-6)，161.82(C-2),168.58(C-4).Anal.(Ci9H17N2OSI)，C，H，N,O，S,I.实施例33化合物3e:2-(3-甲基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6-benzyl-5-iodo-2-(3-methylbenzylthio)pyrimidin"4(3H)-onele(64.5mg，0.13mmol)溶于冰HOAC(2ml)中，完全溶解后加入Pb02(31mg，0.13mmol)搅拌，然后加入l2(33mg,0.13mmo1)，常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体78mg,产率78%,Rf=0.67(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01),mp182-183。C。MS(ESI)im/z:449.1[M+l]+&醒R(300MHz,CDC13)S:2.31(s，3H，C6H4CH3),4.21(s,2H，CeH5CH2)，4.34(s，2H,CH2S)，7.02-7.24(m,4H，Ar陽H)，7.26-7.40(m，5H,Ar-H),12.04(brs，1H，N3-H).13C腿R(75MHz,CDC13)S:21.33(C6H4CH3)，35.03(C6H5CH2),47.10(CH2S),85.54(C-5)，126.10，126.85,128.48,128.52，129.30,129.69,136.07,136.31，136.99，138.35(C-arom)，159.88(C-6),162.06(C-2),168.63(C-4).AnaL(c19h17n2osi)，c，h,n,o，s，i.实施例34化合物3f:2-(3-甲氧基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6~beiizyl~2-(3~methoxybenzylthio)~5~iodopyrimidiii~4(3H)~one将If(34mg,0.1mmol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg，0.06mmol)搅袢，然后加入l2(16mg，0.06mmol),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体70mg,产率76%,Rf=0.45(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01),mp161.5-163°C。MS(ESI)/z:465.0[M+l]+NMR(500MHz,CDC13)S:3.79(s,3H,OCH3),4.21(s,2H，C6H5CH2)，4.35(s，2H，CH2S)，6.82-6.87(m，3H，Ar-H),7.16-7.19(m，1H,Ar-H),7.26-7.39(m,5H,Ar-H)，12.08(brs，1H，N3-H).13CNMR(125固acdc13)&35.06(ch2s)，47.11(C6H5ch2>,55.23(och3),85.59(c-5)，113.23,114.57，121.36,126.85，129.29,129.64，136.94,137.62(C-arom)，159.76(C-6)，162.05(C-2)，168.66(C-4).Anal.(C19H17N202SI)，C，H，N,O,S,I.实施例35化合物3g:2-(4-叔丁基)苄基硫一5-碘-6-苄基嘧啶酮6"benzyl-2-(4画tert-butylbenzylthio)-5-iodopyrimidin-4(3H)-one将lg(36mg,0.1腿ol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg,0.06mmol)搅拌，然后加入l2(16mg，0.06mmo1),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体23mg，回收原料15mg，产率48%，Rf=0.66(CH2C12:Et20:HOAC-2:1:0.01),mp180-181°C。MS(ESI)/m/z:491.3[M+l]十，513.2[M+Na]十画R(500MHz,CDC13)S:1.32(s,9H,(CH3)3C)，4,24(s，2H，C6H5CH2),4.34(s，2H，CH2S),7.17-7.40(m，9H，Ar-H)，11.42(brs，1H，NrH).13CN證(125固z，CDC13)S:31.29((￡H3)3C)，34.53(C6H5CH2),34.75(CH2S)，47.13((CH3)3￡)，85.70(C-5),125.57，126.85，128.50，128.77，129.33，133.07,137.04，150.72(C-arom)，159.69(C-6)，161.54(C-2)，168.53(C-4).Anal.(C22H23N2OSI),C,H，N，O，S,I.实施例36化合物3h:2-(2-萘基)甲基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6~benzyl-5~iodo~2-(naphthalen-2-ylmethylthio)pyrimidin-4(3H)~one将lh(50mfe0.14腿ol)溶于冰HOAC(1.5ml)中，完全溶解后加入PbOz(20mg,0.08mmol)搅拌，然后加入12(21111&0.0811111101),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体40mg,回收原料15mg,产率85%,Rf=0.51(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01)，mp205-206°C。MS(ESI)m/::483.3[M-l]-'H腿R(500MHz,DMSO-A)S:4.33(s，2H，C6H5CH2)，4.67(s，2H，CH2S)，7.18-7.34(m,3H，Ar誦H)，7.45-7.60(m,5H，Ar-H)，7.82-7.92(m,4H，Ar隱H)，8.71(brs，1H，N3-H).13CNMR(75MHz,Pyridine-c5)8:34.88(C6H5CH2)，47.01(CH2S),87.28(C-5)，126.23，126.48，126.86，127.96,128.02，128.56，128.68，129.59，132.97，133.61，135.36，135.57,138.04(C-arom)，161.32(C-6),162.07(C-2)，167.39(C4).AnaL(C22H|9N2OSI)，C,H，N,O,S，I.实施例37化合物3i:2-(l-苯基)乙基硫-5-碘-6-苄基嘧啶酮6"benzyl-5-iodo-2-(l-phenylethylthio)pyrimidin-4(3H)"One将li(32mg，0.14mmol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(14mg,0.06mmol)搅拌，然后加入l2(15mg,0.06mmol),常温下反应。经TLC检测，待原料点消失后，处理方法同上，得白色固体42mg,产率94%，Rf=0.68(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01)，mp178-179。C。MS(ESI)w/z:449.0[M+l]+，471.0[M+Na]+N證(500MHz,CDC13)5:1.66-1.68(d，3H，CH3CH)，3.86(q，2H,C6H5CH2),4.99-5.03(q,1H，CH3￡H)，7.26-7.37(m，10H,Ar邻，11.80(brs，1H,N3-H).23"C画R(125MHz,CDC13)S:22.03(CIi3CH)，45.30(C6H5CH2)，47.13(CH3￡HS),85.53(C-5),126.82，127.40，127.68，128.46，128.62，129.36，137.11，141.56(C-arom),159.65(C-6),161.卯(C-2)，168.70(C-4).Anal.(C19H17N2OSI),C，H，N,O，S，I.实施例38化合物4e:2-(3-甲基)苄基硫-4-氯-6-苄基嘧啶2-(3-methylbenzyltliio)-4-beiizyl-6~chIoropyrimidine将化合物le(80mg，0.25mmol)溶于POCh(0.35ml)中反应过夜，经TLC检测，待原料点消失后，加入碎冰，然后加入水(20ml)，用CH;jCl2(15X3ml)萃取，合并有机层，经无水NaS04干燥，通过硅胶柱色谱纯化，得淡黄色油状物80mg,产率94%,Rf=0.5("-hexane:EtOAc=10:1)。MS(ESI)m/z:363.3[M+l]+,365.2[M+3]+'HNMR(300MHz，DMSOA)8:2.25(s，3H，C6H4CH3),4.05(s，2H,C6H5CH2)，4.33(CH2S)，7.03-7.32(m，10H，Ar-H，C5-H，信号有重叠)，13CNMR(75MHz，DMSO-rf6)S:21.39(C6H4CH3)，34.79(CH2S)，43.01(QHsCHz),116.43(C-5),126.53，127.26,128.30,128.75，129.08,129.44，129.67,130.06，137.66,137.76,137.97(C-arom)，160.67(C-4)，171.45(C-6)，172.34(C-2).Anal.(C19H17N2SC1),C,H，N，S,CI.实施例39化合物5d:2-(2-甲基)苄基硫-4-氨基-6-苄基嘧啶2-(2-metfaylbenzyltfaio)-6-l>enzylpyrimidin~4~amJne将化合物4d(68mg，0.20mmol)溶于二氧六环(3ml)，加浓NHyH20(4ml)，于密封管中90'C反应llh，减压常温下旋干溶剂，通过制备薄层色谱分离纯化，得白色固体60mg，产率94%，Rf=0.40(PE:EtOAc=2:1)，mp101.5-103.5°C。MS(ESI)/m/z:322.1[M+l]+4NMR(500MHz,CDC13)5:2.43(s，3H,C6H4CH3)，3.93(s，2H，C6H5CH2),4.41(CH2S),4.85(s,2H，C4-NH2),5.85(s，1H，C5-H)，7.11-7.39(m,9H，Ar-H).13C醒R(125MHz,CDC13)S:19.40(C6H4CH3),33.20(CH2S),43.78(C6H5CH2),99.44(C-5)，125.95，126.68,127.31，128.60,129.46,130.05,130.32，135.71,136.97,137.84(C-arom)，162.95(C-4),168.54(C-6)，170.69(C-2).Anal.(C19H19N3S)，C，H，N，S.实施例40化合物5e:2-(3-甲基)苄基硫-4-氨基-6-苄基嘧啶2-(3-me也ylbenzylthio)-6陽benzylpyrimidin-4-amiiie将化合物4e(27mg,0.11mmol)溶于二氧六环(3ml)，加浓NH3'H20(4ml)，于密封管中90'C反应llh，减压常温下旋干溶剂，通过制备薄层色谱分离纯化，得白色固体24mg，产率95%，Rf=0.48(PE:EtOAc=2:l)，mp126-128°C。MS(ESI)wi/z:322.0[M+l]+!HNMR(500MHz,CDC13)S:2.34(s,3H，C6H4CH3)，3.92(s，2H，C6H5CH2)，4.38(CH2S),4.77(s，2H，C4-NH2)，5.85(s,1H，C5-H)，7.06-7.35(m，9H,Ar-H).13C画R(125MHz,CDC13)S:21.37(C6H4CH3),35.00(CH2S),43.78(C6H5CH2),99.38(C-5)，126.13,126.68，127.71，128.24,128.59,129.44，129.80,137.83，137.96,138.21(C-arom),162.89(CM),168.58(C-6)，170.63(C-2).AnaL(C19Hi9N3S)，C，H，N，S.实施例41化合物5h:2-(2-萘)甲基硫-4-氨基-6-苄基嘧啶6~benzyl-2-(naphthalen-2-yImethylthio)pyrimidin>4~ainine将化合物4h(60mg，0.16mmol)溶于二氧六环(2ml)，加浓NH3'H20(3ml)，于密封管中90X:反应20h,减压常温下旋干溶剂，通过制备薄层色谱分离纯化，得白色固体40mg,产率70%，Rf=0.52(PE:EtOAc=2:1)，mp151.5-152.5C。MS(ESI)w/z:358.0[M+l]+4NMR(500MHz，CDC13)8:3.93(s，2H，C6H5CH2),4.57(s，2H，CH2S)，4.77(s，2H,C4-NH2),5.85(s，1H，C5-H),7.26-7.33(m，5H，Ar-H)，7.45-7.50(m，2H，Ar陽H)，7.54-7.56(m，1H,Ar-H)，7.79-7.8l(m，4H,Ar-H).13CNMR(125MHz，CDC13)S:35.26(CH2S)，43.79(C6H5CH2)，99.48(C-5)，125.64,126.00，126.69,127.38，127.54，127.63，127.73，128.06，128.60，129.44，132.55，133.35,135.88，137.80(C-arom),162.92(C-4)，168.62(C-6),170.45(C-2).Anal.(C22H19N3S)，C,H，N，S.实施例42化合物5i:2-(1-苯基)-乙基硫-4-氨基-6-苄基嘧啶6"benzyl陽2-(l-phenylethylthio)pyrimidin-4-amine将化合物4i(40mg，0.12mmol)溶于二氧六环(2ml)，加浓NHyH20(3ml),于密封管中80'C反应22h，减压常温下旋干溶剂，通过制备薄层色谱分离纯化，得白色固体22mg，产率58%，Rf=0.46(PE:EtOAc=2:1)，mpll5-116。C。MS(ESI)m/z:322.0[M+l]+，HNMR(500MHaCDC13)s:1.74-1.75(43H,CHaCH)，3.89(s,2H，C6H5CH2),4.85(s,2H，C4-NH2)，5.07-5.10(q，1H,CH3￡H)，5.82(s，1H，C5-H)，7.24-7.46(m，認，Ar-H).13C腿R(125MHz，CDC13)5:22.45(CH3CH)，43.77(CH3￡HS)，43.82(C6H5CH2)，99.38(C-5)，126.64，126.91,127.53，128.32，128.56，129.44，137.91，134.70(C-咖m)，162.95(C陽4)，168.47(C國6)，170.48(C-2).Anal.(C19HI9N3S)，C,H,N，S.实施例43对所合成的化合物进行HIV-1逆转录酶的生物活性评价一实验原理1.逆转录酶逆转录酶是以单链RNA为模板，合成双链DNA的DNA聚合酶。是多功能酶，拥有分别以RNA或DNA为模板合成聚合酶及核糖核酸酶H活性。2.核苷酸微孔板共价键交联核酸分子杂交按作用环境分为固相杂交和液相杂交两种类型。固相杂交是将参加反应的一条核酸固定在固相支持物上，另一条核酸反应链游离在溶液中。本实验将作为引物的0ligo(dThs的5'端磷酸化后与NUNC公司的96孔氨基板的表面发生共价交联，从而使反应在固相支持物上进行。CovaLinkTMNH:是一种在聚苯乙烯的表面附有NH2基团的微孔板。在微孔表面大约含有10"个NH2基团/cm2,蛋白质和多肽可以通过C端或N端结合到微孔板上，核苷酸的5'端磷酸化后可以结合到微孔板表面上，使得整个反应在固相支持物上进行。3.反应原理以oligo(dT)u为引物，polyA(mRNA3'端聚腺苷酸)为模板，dTTP和生物素标记的dUTP为底物，在逆转录酶的作用下，掺入合成DNA。生物素标记的dUTP和碱性磷脂酶(ALP)标记的链亲合素(SA)特异性结合，而与链亲和素共轭的碱性磷脂酶与PNPP能发生显色反应，在405nm可根据吸光度的大小，判定逆转录酶的反应活性。二材料与方法2.1材料与仪器HIV-1逆转录酶HIV-1RT为基因工程重组酶；AMV逆转录酶(AMV-RT)由SIGMA公司提供；膦甲酸钠(PFA，由江苏正大天晴制药有限公司生产，批号0406012);奈韦拉平26(NVP，上海迪赛诺制药有限公司，批号DH027-4-0409016)。01igo(dT)15(5，末端磷酸化的寡聚胸苷，由大连宝生物工程有限公司合成)；96孔酶标板(CovaLinkNH，丹麦NUNC公司)；biotin-ll-dUTP性物素标记的三磷酸脱氧尿苷，上海申友)，其它试剂均为进口试剂。酶标仪(Bio-Rad，BenchmarkPlus,USA)。2.2实验方法2.2.101igo(dT)15包被板的制备将01igo(dT)15溶于100mM的1-甲基-咪唑的盐酸缓冲液中(pH=7.4)，加入96孔酶标板中，与水溶性碳化二亚胺混匀，于5(TC水浴中反应4小时，反应结束后用洗液(50mmol/LTris-HCl，pH7.5)洗三遍，除去未结合的Oligo(dT)15，将包被后的96孔板置4'C保存。2.2.2HIV-1RT活性检测反应系统总体积为100ul，含50mmol/LTris-HCl,pH=8.3，3mmol/LMgCl2，75mmol/LKC1，5mmol/LDTT,0.13mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)，10ug/mlpoly(A)，0.75^biotin-ll"dUTP,1.5^iMdTTP及适量酶，37'C水浴1小时，用洗液(50mmol/LTris-HCl,pH=7.5，0.15mol/LNaCl，0.05mmol/LMgCl2，0.02%Tween20)洗三次，除去未结合的游离底物；每孔加入100ul1%BSA，室温封闭30分钟，阻止生物素与链亲和素蛋白的非特异性结合，洗板；每孔加入50nl的SA-ALP稀释液(100ng/ml)，37。C水浴1小时，洗板；每孔加入50nlPNPP(1mg/ml，pH=9.5)，37'C水浴30分钟；每孔加入0.5mol/L的NaOH终止反应，酶标仪测定405nm波长处A值，以确定HIV-1RT的活性；同时设置不加酶的阴性对照，计算实验孔A暫阴性孔A值(P/N值)。三实验结果(见表l)表l<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>bNA:表示没有活性。eIC50值范围为100-400pM。由上实验结果可看出，在C5位上为卤素取代基时，整个系列的化合物对HIV-1逆转录酶的抑制率最高，同时适当延长C2侧链的长度，C4位NH2取代OH后活性都可以提高化合物活性。上述所得新化合物的活性与目前临床上使用的奈韦拉平(NVP)相比相当或者高出23倍。可进一步研究此类化合物的构效关系，以合成出活性更高的抗HIV-1逆转录酶的化合物，而具有很好的发展应用前景。权利要求1.通式I化合物上述通式中R含1-4个碳结构的烷基。R1OH，SH，NR’R”.R2H，F，Cl，Br，I，CF3，NO2，CN，R，RO，(CH2)nOH，(CH2)nCOOR，(CH2)nCOOH，(CH2)nOCOR，(CH2)nOCOH，(CH2)nNR’R”，(CH2)nCONR’R”，(CH2)nNR’COR，R3R，RO，CN，OH，NH2，CF3，F，Cl，Br，I，NO2.R4(CH2)nCOCH2COCH2COOR，RO(CH2)n，Ph(CH2)nO(CH2)n，R’，R”H，R，(CH2)nPh.XO，S，N.n0，1，2，3，4.某些所保护化合物举例2-苯乙基硫-6-苄基嘧啶，2-(3-苯基)丙基硫-6-苄基嘧啶，2-(苄氧甲基硫)-6-苄基嘧啶，2-烯丙基硫-6-苄基嘧啶，2-苯乙基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶，2-(3-苯基)丙基硫-5-甲基-6-苄基嘧啶，2-(苄氧甲基硫)-5-甲基6-苄基嘧啶，2-苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-苯乙基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(3-苯基)丙基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(2-甲基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(3-甲基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(3-甲氧基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(4-叔丁基)苄基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(2-萘基)甲基硫-5-碘-6-苄基嘧啶，2-(1-苯基)乙基硫-5-碘-6-苄基嘧啶2.合成上述通式中化合物的条件及试剂为路线l，路线2，路线3所描述的方法。3.权力要求上述化合物作为HIV-1逆转录酶抑制剂的应用。路线l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>试剂与条件(a)R=H，CH3;C6H5CH2CN，Zn/THF，回流。(b)NH2CSNH2，Na/EtOH,回流。(c)含不同基团的卤代物，甲醇钠，室温。路线2试剂与条件(d)X2,Pb02，HOAC，室温，反应过夜。路线3R3R3&<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>试剂与条件(e)P0Cl3,室温，反应过夜。(f)NH3.H20,80-90°C,12-24小时。全文摘要本发明涉及以非核苷类HIV-1逆转录酶抑制剂3，4-二氢-2-烷氧基-6-苄基-4-羰基嘧啶类(DABO)和1-[(2-羟乙氧基)甲基]-6-苯硫基胸腺嘧啶(HEPT)为先导化合物，结合本课题组的研究结果，按照药物合理设计基本原理，将其各自结构和活性关系联系起来并融合在一个分子中，设计出一类新型S-DABO化合物，见通式I，式中各个基团的定义如权利要求书所述。本发明重点在嘧啶环C2、C4、C5位上，通过各种不同基团的修饰，所得到的新化合物的构象更有利于与HIV-1逆转录酶结合，经过抗HIV-1RT的活性测试，发现具有较高活性，其中一化合物活性高于目前临床上使用的奈韦拉平23倍，这类化合物很有可能成为潜在的新一类抗艾滋病的药物。文档编号A61P31/18GK101597263SQ200810110478公开日2009年12月9日申请日期2008年6月5日优先权日2008年6月5日发明者刘俊义,华覃申请人:首都医科大学