专利名称：一种基于人源化抗体的用于肿瘤诊断的磁共振对比剂的制作方法
技术领域：
本发明属于诊断领域，更具体地，本发明公开了一种用于肿瘤诊断的磁共 振对比剂及其制备方法。
背景技术：
随着单克隆抗体技术的发展，已经制备了很多针对肿瘤相关标志的单克隆 抗体，抗体在肿瘤治疗中起到越来越重要的作用。要使抗体治疗发挥更有效的 作用，必须明确病人肿瘤的分子分型。尤其是对于不适合手术的病人，研究敏 感的无创诊断手段用于肿瘤分子诊断特别重要。
磁共振成像技术(Magnetic Resonance Imaging, MRI)是一种可反复使用 的无创诊断技术，具有很好的空间分辨率和对比度。常规的MRI对于肿瘤组织 与正常组织的分辨能力仍然不够，因此必须研究新的成像方法，将具有肿瘤靶 向性能的分子探针交联于合适的MRI成像对比剂，即可能通过MRI对肿瘤进行 分子影像诊断，这要求选择合适的高效对比剂和高特异性的肿瘤探针。
纳米粒子在生物医学中已有广泛应用，超细超顺磁性氧化铁颗粒 (ultrasmall superparamagnetic iron oxide particle, USPIO)用作MRI成像 对比剂的研究已有超过十年的历史，与传统的MRI成像对比剂钆剂相比，USPIO 有低毒性，高敏感性的优点。近来，人们还通过对USPIO的结构及组成进行优 化，制备出比传统USPIO磁性更强的USPIO。 USPIO作为MRI成像对比剂，已被 用于胃肠道、肝脏、脾脏的成像，以及良、恶性淋巴结肿大的鉴别，但在这些应用中，USP工O是通过被动靶向被单核巨噬细胞系统吞噬而发挥增强作用的，不 能用于肿瘤的分子分型。
目前用于研制肿瘤靶向MRI对比剂的肿瘤耙向探针较少，主要是几种抗体
及其他的特异性不高的受体类分子，如黄体生成素、叶酸等。突出的问题是耙 向性不高，特异性差。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的发明人将人源化的SM5--1单克隆抗体交联至 制备的纳米粒子USPIO上，制备得到具有靶向性的MRI对比剂，命名为SM-USPIO。 通过流式细胞术、共聚焦显微镜观察及体外培养细胞的MRI证实在体外SM-USP10 可通过交联的抗体与SM5-1抗原阳性的肿瘤细胞特异性结合，并可被肿瘤细胞 内吞；荷瘤小鼠体内注射SM-USP工O后，MRI结果显示肿瘤组织的T2信号明显降 低，因此SM--USP工O可用于SM5-1抗原阳性肿瘤的体内诊断。
更具体地，本发明公开了
1. 一种基于人源化抗体的磁共振对比剂SM-USPIO，为人源化SM5-1抗 体与超顺磁性氧化铁颗粒USP工O交联而得。
2. 上述1所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，包括以下步骤 步骤a:制备超顺磁性氧化铁颗粒USPIO，
步骤b:制备人源化抗体，
步骤c:制备磁共振对比剂SM-USPIO。
3. 上述2所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中步骤a中超 顺磁性氧化铁颗粒USPIO的制备通过共沉淀方法得到.-
步骤A:将葡聚糖溶解于水中，加入铁盐，搅拌；步骤B:在加热的条件下将聚乙烯醇溶解在水中；
步骤C:将步骤B得到的溶液加入歩骤A得到的溶液中混合，用碱 调pH至10 — 12，继续搅拌后加热得到沉淀； 歩骤D:收集沉淀物并对其进行后处理。
4. 上述3所述的磁共振对比剂SM--USPIO的制备方法，其中步骤A中使 用的铁盐为FeCl:,'6H20和FeS0WH20，其中三价铁和二价铁的摩 尔比是为3: 2。
5. 上述3所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中步骤C中所 述的碱为氨水。
6. 上述3所述的磁共振对比剂SM- USPIO的制备方法，其中步骤D中利 用磁场收集沉淀物。
7. 上述3所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中后处理步骤 包括利用水洗、用柠檬酸溶液重悬沉淀、超声、在去离子水中透析 去除多余的柠檬酸。
8. 上述2所述的磁共振对比剂SM--USPIO的制备方法，其中步骤c制备 磁共振对比剂SM-USPIO的歩骤包括将UPSIO进行活化，分离活化后 的粒子，将粒子和含抗体的PBS混合，搅拌，经磁柱处理而得。
9. 上述1的磁共振对比剂SM-USPIO在肿瘤诊断方面的用途。
10. 上述9的用途，其中肿瘤为SM5-l结合蛋白阳性的肿瘤。 本发明的发明人将人源化的SM5-1抗体与共沉淀法获得的超顺磁性氧化铁
颗粒(USPIO)交联，获得了一种纳米尺度的靶向MRI对比剂，命名为SM-USPIO。 其平均水化直径为25. 3nm，该纳米尺度保证了它的体内长循环周期及靶向效率本发明的发明人利用多种方法检测了 SM--USPIO特异性结合能力。流式细胞 术结果显示，与游离的人源化SM5-1单克隆抗体相比，SM-USPIO具有相似的与 SM5-1结合蛋白阳性人肝癌细胞ch-h印-3结合的能力，而对照品H-USPIO的结 果是阴性的。在不同细胞株中，SM-USPI0处理后的平均荧光强度与各细胞的 SM5-1结合蛋白的表达水平正相关；共聚焦显微镜的结果显示SM-USPIO可特异 性结合于SM5-1结合蛋白阳性的肿瘤细胞，且可被该细胞内吞。MRI检测证实 SM-USPIO处理过的阳性肿瘤细胞有明显的T2信号减弱，而对照对比剂H-USPIO 及空白对比剂USPIO加人源化SM5-1单克隆抗体无此效果。以上的结果提示 SM-USPIO可通过抗体介导的内吞作用进入并积累于SM5-1结合蛋白阳性人肝癌 细胞；荷瘤小鼠内注射SM-USPI0后山现肿瘤区域的T2信号减弱，且1251标记的 SM-USPIO也明显聚集于肿瘤细胞内，因此，在体内SM-USPIO同样能通过抗体介 导的内吞作用进入并积累T肿瘤局部，发挥MRI造影对比剂的作用。
上述实验的结果表明，交联了人源化SM5-1单克隆抗体的USPIO可用于 SM5-1结合蛋白阳性的肿瘤的诊断。
其他有肿瘤高特异性靶向抗体也可以按本发明公开的方法和USPIO进行交 联从而应用于肿瘤的诊断，这些肿瘤高特异性靶向抗体包括但不限于 高亲和力抗Her-2单克隆抗体、高亲和力抗EGFR单克隆抗体等。
图1: SM-USPIO透射电镜检测的照片和激光散射粒径分析仪测定SM-USPIO 的粒径，图l一l: SM-USPIO透射电镜检测的照片，显示粒子核径在8 — 10nm之 间，图l一2:激光散射粒径分析仪测定SM-USPIO的粒径，显示其水合半径为 25. 3土2. lnm。图2:流式细胞术结果，图2 — 1: ch-hep-:3细胞的流式细胞术结果，其中 深色虚线代表PBS处理组，细实线为H-USP工0处理组，粗实线为SM-USPIO处理 组，而浅色虚线为游离抗体处理组，图2 — 2: SM-USP工O与三种不同的细胞结合 能力的流式细胞术结果，图2-2-1为ch-h印-1细胞，图2-2-2为ch-h印-6细 胞，图2-2-3为ch-h印-3细胞，其中浅色实线代表PBS处理的细胞，深色实线 代表SM-]SPIO。
图3:共聚焦显微镜检SM5-1结合蛋白内吞结果，其中A为PBS处理的细胞， B为SM-USPIO处理的细胞，C为H-USPIO处理的细胞；第一列为荧光视野，第 二列为相差视野，第三列为二者叠加。
图4:磁共振成像实验结果，图示为其矢状位T2加权图像。从左到右分别 是ch-h印-l、 ch-h印-6和ch-h印-3，每种细胞从上到下各层分别是经PBS、 USPIO、 USPI0 +游离抗体、SM-USPIO和H-USPIO处理的样品。
图5:体内成像实验结果，图为其T2加权图像。第一行为注射SM--USPIO的 动物，第二行为注射H USPT()的动物，第一列为注射前的图像，第二列为注射 后8小时的图像，第三列为注射后72小时的图像。
图6:体内分布实验结果，图6 — 1为8小时处死组动物的脏器放射性分布结 果，图6 — 2为72小时处死组动物的脏器放射性分布结果，图6 — 3为,标记的 SM-USPIO和^I标记的HHJSPIO在血液屮的清除曲线。
具体实施例方式
以下实施例、实验例仅仅对本发明进行进一步说明，不应理解为对本发明 的限制。
材料与方法
8细胞、抗体及其他材料
肝癌细胞系ch-h印1、 ch h印-3和ch-hep 6由第二军医大学肿瘤研究所 建立并提供，这些细胞系各自的SM5 ]结合蛋白的表达水平不同，其中ch-h印-3 高表达，ch-h印-6中等水平表达，而ch-h印-l为阴性，其公开资料参见Zhao J， Wang H, Wei L， et al. The cytotoxic effect of EIB 55-kDa mutant adenovirus on human hepatocellular carcinoma cell lines, Cancer Gene Ther 2001; 8:333-341，人源化的SM5-l抗体按文献方法制备Li B, Wang H， Zhang D， et al. Construction arid characterization of a high—affinity humanized SM5—1 monoclonal antibody. Biochcm Biophys Res Commun 2007; 357:951-6。 FITC 标记的羊抗人IgG (H十L)购自Zymed公司(San Francisco, CA)。人源化的 anti-Her2抗体按照中国发明专利申请号01132225.X，发明名称为《人源化抗 服R2单克隆抗体及其制法和药物组合物》中公开的方法制备。实验中用到的有 机溶剂均为HPLC级，其他试剂均为可购买到的最高级别。
实验用小鼠为6 — 8周龄的Balb/c裸鼠(18 — 22克)购自第二军医大学实验 动物中心，按 SPF级别饲养于该中心。所有动物实验均获得第二军医大学实 验动物管理委员会批准。
透射电镜JEM-100CX，日本JE0L公司；
激光散射粒径分析仪Zeta Sizer 3000HS， Malvern Instruments, UK; 流式细胞仪Becton _ Dickinson, San Jose, CA; 共聚焦显微镜Zeiss CLSM 510， 德国Zeiss公司；
4.7T Bruker Biospec" "小动物磁共振成像系统Bruker Biosciences, Germany;
9伽马计数器HPGe ADCAMTM918型，美国ORTEC公司。 实施例l USPIO， SM-USPIO及H-USPIO的制备
USPIO是在含有葡聚糖的溶液中通过共沉淀方法制备的，它包括氧化铁的核 心及外层包裹的低分子量的葡聚糖。1克葡聚糖(分子量40kDa)溶解于15ml 去离子水中，加入FeCb 6I-W) 24. 35mg和FcSO., 7^0 16. 68mg，在氮气保护 下搅拌。聚乙烯醇(Polyvinyl Alcohol,分子量]750±50)在8(TC的条件下 加入去离子水中配制饱和溶液，取10ml与上述溶液混合，在氮气保护和持续搅 拌的情况下，滴加7X的氨水调节pH至10—12。当有黑色氧化铁颗粒出现后， 继续搅拌10分钟，之后加热至85。C维持60分钟；通过磁场收获沉淀物，去离 子水洗涤数遍以去除可溶性铁离子。用柠檬酸溶液(1克柠檬酸溶解于30ml去 离子水)30ml重悬沉淀，700w超声20分钟，得到的产物于1L去离子水中透析 48小时以去除多余的柠檬酸；最终，获得的USPIO按铁浓度调整至0.25mol/L 备用。
人源化的SM5-1抗体按下述方法交联于制备的人源化的SM5-皿1抗体上，抗体 按5mg/ml的浓度溶解于pH 7.4的PBS (5醒ol/L磷酸盐，0.9%氯化钠)中，EDC (l-Ethyl-3--[3-dimethylami卿ropyl]carbodiimide Hydrochloride,卜乙基 -3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺)和NHS (N-hyd皿ysu丄fosuccinimide, N— 羟基琥珀酰亚胺)均按50 mg/m]的浓度溶解于pH 6. 0的PBS (5ramol/L磷酸盐， 0.9%氯化钠)中，取lml USPI0悬液，与上述EDC/NHS溶液2. 5ml混合，室温搅 拌30分钟以活化粒子；之后反应液上PD-IO脱盐柱去除多余的活化剂，分离活化 后的粒子，粒子分散于3ml的PBS中，立即加入300pl上述制备的抗体，室温搅拌 2小时，粒子经磁柱(Miltenyi Biotech GmbH， Germany)(按说明书操作，不超过磁柱流速限制)并去离子水洗多遍以去除未结合的抗体，最后结合了人源
化的SM5-l抗体的USPIO (命名为SM-USPIO)重悬于pH7. 4的10mmol/L PBS中， 并再次按铁浓度调整至O. 25mol/L备用。未结合的SM5- l人源化抗体的浓度通过 MicroBCA蛋白测定试剂盒(Pierce， Rockford， IL)测定磁柱流穿上清中的蛋 白浓度获得，并可因此计算出抗体的交联效率及粒子上抗体的交联量；相同的 方法在USPIO上交联人源化anti-Her2抗体，获得粒了命名为H--USPIO。
纳米粒子的粒径和结构通过透射电镜和激光散射粒径分析仪获得。 透射电镜结果显示SM-USPI0的铁核直径为8-10mn (图1-1)，激光散射粒 径分析仪显示其水合半径为25. 3±2. lnm(98。/。在17服 50皿之间)(图1-2)。 SM-USPIO调整至浓度为14mg Fe/ml，即0. 25mmol/ml的铁浓度保存，抗体浓度 为10±2|_ig/mg Fe，抗体的交联率为60%;保存时，体系中添加了 4. 16mg/ml 的柠檬酸水溶液及60mg/ml的甘露醇作为稳定剂；结果证明SM-USPIO在室温条 件下可稳定6月。
实验例l靶向USPIO的放射性标记实验
通过氯氨一T方法(Hunter WM， Greenwood FC (1962). Preparation of iodine, mI-labelled human growth hormone of high specific activity. Nature 194: 495—496 )用125工-Na对SM-USPIO和H-USPIO进行标记，标记后仍采用磁柱 (Miltenyi Biotech GmbH， Germany)分离去除游离的125I-Na ，标记后的 SM-USPIO和H--USPIO用于代谢实验。
实验例2流式细胞术检测SM-USPI0与SM5-l结合蛋白高表达细胞的结合活性实 验
lX10(i /ml的细胞(ch-hcp-3)与0. lml的PBS fC孵育l小时，分别含有10)ug/ml的人源化SM5-1、 SM USPIO或H-USPIO (均以抗体量计算，包括游离的和 结合在粒子上的)，细胞洗涤后与FITC标记的羊抗人IgG (H + L) 4。C孵育30分 钟，细胞再次洗漆后用FACScan流式细胞仪上机检测。
结果表明见图2-1，结果表明用H-USPIO处理的细胞与PBS处理组之间无 显著性差异，SM-USPIO及人源化SM5-1抗体处理的ch-h印-3细胞显示有很高的 荧光强度，而PBS和H-USPIO处理组均为阴性，提示SM USPIO和SM5-1结合蛋 白的结合能力与游离抗体相似，该结果提示人源化SM5-1抗体结合到USPIO后 依然保持了其与SM5'1结合蛋白的高亲和力。
之后，我们又在三株SM5-1结合蛋白表达水平不同的人肝癌细胞ch-h印-l、 ch-h印-3、 ch-h印-6上检测了 SM-USPIO的结合能力(方法同上)，结果如图 2-2所示，结果表明SM-USPIO处理的细胞的平均荧光强度与细胞的SM5-1结合 蛋白表达水平相吻合。Ch-h印3的SM5-1结合蛋白表达水平最高，其平均荧光 强度也最高；ch-h印-1的SM5-1结合蛋白表达阴性，其平均荧光强度为阴性； ch h印-6的SM5■ l结合蛋白表达水平中等，其平均荧光强度介于二者之间。该 结果显示SVhUSPIO与靶细胞结合具有良好的特异性。 实验例3利用共聚焦显微镜检测SM5-1结合蛋白内吞SM-USPIO实验
为验证Ch-h印-3细胞是否会通过SM5-1结合蛋白内吞SM-USPIO，我们对其进 行了共聚焦显微镜观察Ch-h印-3细胞(lX10s)与10吗/ml的SM-USPIO、 H-USP1U 或PBS (以抗体量计)各O. lml 3TC共孵育1小时，PBS洗涤，以4%多聚甲醛4丌 固定10分钟，之后以O. 1% TritonX 100室温孵育5分钟进行破膜处理，随后以l %的牛血清白蛋白封闭30分钟；再与FITC标id的羊抗鼠lgG在室温下孵育2小时， PBS洗涤，细胞经固定、封片并通过Zeiss 510激光扫描共聚焦显微镜观察并拍摄照片。
结果如图3所示，结果表明ch h印--3细胞单纯与FITC标记的二抗孵育， 细胞无明显背景荧光出现，但在二抗孵育前，细胞与SM-USPI0在37'C共孵育1 小时，则在细胞胞浆内出现明显的荧光，而H-USPIO处理的细胞则与阴性细胞 无差异，这说明SM-USPTO可特异性地与ch-七印--3细胞结合并被细胞内化。 实验例4磁共振成像实验
对于体外成像，1Xia'的细胞(分别为ch-h印-1， ch-h印-3， ch-h印-6)在 37。C条件下与以下成分孵育l小时SM-USP1:0、 II USPIO、 USPIO、 USPIO加人源 化SM5-1抗体及PBS，细胞经三次洗涤，胰酶消化后以4%多聚甲醛固定，1000rpm 离心5分钟使之在离心管中成为一个细胞团，在上面添加一层1%琼脂糖。不同 条件的同一种细胞收集在同一管的不同层面。磁共振成像在4.7T Bruker Biospec",小动物磁共振成像系统上进行，采用螺旋回波序列。对于T2加权矢 装位图像，采用以下成像参数matrix二128X 128iim, F0V=45X45mm， section thickness二l鹏，TE=45ms , TR二3000ms， number of average=l。
实验结果如图4所示，显示的是琼脂糖中细胞团矢状面的T2加权图像。细 胞收集前与5(Vg/ml的SM-USPIO(按铁含量计算)孵育1小时，对照组包括PBS、 USPIO、 H-USPIO及USPI0加人源化SM5-1抗体，其浓度均按铁含量或抗体量计 算，与SM-USPIO剂量一致。在ch-h印-3细胞管的图像上，SM-USPIO处理的细 胞团显示明显的低信号，而其他四个细胞团均表现为高信号。在ch-h印-l细胞 管的图像上，5个细胞团显示相同的高信号。在ch-h印-3细胞管的图像上， SM-USPIO处理的细胞团的信号较其它四个细胞团的信号略低，但远没有对应的 ch-h印-3细胞的明显。在三种细胞中，USPIO加人源化SM5-1抗体处理的细胞均没有出现信号的下降，这说明在相对短的培养时间内，细胞既不能主动吞噬
游离的USPIO，游离的人源化SM5-1抗体也不会介导细胞吞噬USPIO。因此，只 有交联了人源化SM5-1抗体的USP工0才会被SM5--1结合蛋白阳性的细胞特异性 地结合并吞噬。 实验例5体内成像实验
体内成像实验中用的是接种人肝细胞肝癌ch-七印-3的荷瘤Baib/c裸鼠。 Balb/c裸鼠皮下接种2 X 1(f的ch-h印-3细胞，接种后25天后肿瘤直径约5鹏。 此时尾静脉注射制备的MRI对比剂SM-USPIO或II USPIO，剂量为200mg Fe/kg。 MRI 检查前动物以巴比妥钠腹腔麻醉，造影分别在注射前及注射后2小时、8小时、 24小时及72小时进行，同样用4. 7TBniker Biospec"",小动物磁共振成像系统， 参数如下TKK)00ms， TE-52ffls， n圆ber of avei.age二2， F0V=3. 5X 3. 5cm， mat r i x=128 X 128 pim 。每组动物三只。
实验结果见图5结果显示肿瘤组织与附近的肌肉组织的信号差别不大，注 射后8小时，肿瘤区域的信号出现下降，注射后72小时，肿瘤区域的信号明显 下降，且肿瘤的边界清晰。实验对照组采用在相同的模型中注射相同剂量的 H-USPIO，结果显示注射前后，肿瘤区域的信号无明显变化，提示在该模型中 H-USPIO无靶向增强作用，而SM-USPIO有明显的靶向增强作用。 实验例6生物学分布实验
'251标记SM-USPIO的生物学分布也在接种人肝细胞肝癌ch-h印-3的荷瘤 Balb/c裸鼠上进行。接种后25天，12只动物随机分为2组， 一组经尾静脉1. 0 ^Ci的1251标记的SM-USPIO，另一组注射同样剂量的^I标记的H-USPI0。每组 动物分别在注射后8小时和72小时各处死动物3只，取肿瘤组织及各正常组织，
14包括肺、心、肝、脾、胰、胃、结肠和肾，称重并测定放射性。72小时处死的 各动物，分别在注射后5分钟、l小日寸、4小时、8小时、24小时和72小时经 剪尾取血测定放射性。放射性通过伽马计数器测定。各器官的放射性以注射剂 量的百分数来表示。
统计学分析采用t检验，以P〈0.05作为统计学差异的标准。试验结果见图6。
图6显示与12nI标记的H USP工O相比，"I标记的SM-USPI0注射后8小时及 72小时肿瘤局部积累明显增多(P<0.05)(图6-1、 6-2)。肿瘤局部的累积 是逐步的，与时间相关的，注射后72小时后可达8. 9±2. 3% ID g-1 (ID指注射 剂量，IDg-'指平均每克组织注射剂量)，远远高于同一时间的肝脏及脾脏的略 累积水平。相反，',标记的H USP工O在肿瘤局部的累积明显低，且注射后72 小时的水平低于注射后8小时的水平。标记的SM-USPIO和'"I标记的H-USPIO 在正常组织中的分布一致，，注射后72小时的水平均低于注射后8小时的水平 (图6-1、 6-2) 。 "I标记的SM-USP工O和'251标记的H-USPIO在血液中的清除 曲线一致(图6-3)。为比较"5工标记的SM-USPIO和121—'I标记的H-USPIO在肿瘤 组织中特异性累积的差别，我们计算了同一时间肿瘤组织与血液中放射性比值。 注射后72小时，1251标记的SM-USPIO组动物的瘤./血比值为4. 93±0. 79，而'251 标记的H—USPTO组动物的瘤/血比值为1. 26±0. 47，前者远大于后者(P〈0. 01)。
权利要求
1. 一种基于人源化抗体的磁共振对比剂SM-USPIO，为人源化SM5-1抗体与超顺磁性氧化铁颗粒USPIO交联而得。
2. 权利要求1所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，包括以下步骤 步骤a:制备超顺磁性氧化铁颗粒USPIO，步骤b:制备人源化抗体，步骤c:制备磁共振对比剂SM -USPIO。
3. 权利要求2所述的磁共振对比剂SM--USPIO的制备方法，其中步骤a中超顺磁 性氧化铁颗粒USPIO的制备通过共沉淀方法得到，包括以下步骤歩骤A:将葡聚糖溶解于水中，加入铁盐，搅拌； 步骤B:在加热的条件下将聚乙烯醇溶解在水中-，步骤C:将步骤B得到的溶液加入步骤A得到的溶液中混合，用碱调pH至 10—12，继续搅拌后加热得到沉淀； 步骤D:收集沉淀物并对其进行后处理。
4. 权利要求3所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中步骤A中使用的 铁盐为FeCl:, 和FeSCWiLO，其中三价铁和二价铁的摩尔比是为3: 2。
5. 权利要求3所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中歩骤C巾所述的 碱为氨水。
6. 权利要求3所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中步骤D中利用磁 场收集沉淀物。
7. 权利要求3所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中后处理步骤包括 利用水洗、柠檬酸溶液重悬沉淀、超声后，在去离子水中进行透析去除多余的 柠檬酸。
8. 权利要求2所述的磁共振对比剂SM-USPIO的制备方法，其中步骤c制备磁共 振对比剂SM-USPIO的步骤包括将UPSIO进行活化，分离活化后的粒子，将粒子 和含抗体的PBS混合，搅拌，经磁柱处理而得。
9. 权利要求1所述的磁共振对比剂SM USPIO在肿瘤^断中的用途。
10. 权利要求9所述的用途，其中肿瘤为SM5丄结合蛋白阳性的肿瘤。
全文摘要
本发明属于诊断领域，更具体地，本发明公开了一种用于肿瘤诊断的磁共振对比剂及其制备方法，为人源化抗体的磁共振对比剂SM-USPIO，通过人源化SM5-1抗体与超顺磁性氧化铁颗粒USPIO交联而得。本发明公开的SM-USPIO具有特异性强的优点。
文档编号A61K49/16GK101480494SQ20081018531
公开日2009年7月15日 申请日期2008年12月15日 优先权日2008年1月8日
发明者盛 侯, 健 赵, 郭亚军, 菁 马, 洁 高 申请人:上海中信国健药业有限公司