专利名称：：作为通道活化蛋白酶抑制剂的化合物和组合物的制作方法
技术领域：
：本发明一般而言涉及通道活化蛋白酶(CAP)抑制剂。
背景技术：
：前列腺蛋白酶是一种存在于多种哺乳动物组织中的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。它是在细胞的胞外膜表达的膜锚定蛋白酶，但是也可以分泌到体液中，所述的体液例如精液、尿液和气道表面液体。前列腺蛋白酶(PRSS8)与蛋白酶例如蛋白裂解酶(matriptase)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、PRSS22、TMPRSSll、组织蛋白酶A和嗜中性细胞弹性蛋白酶可以刺激阿米洛利敏感的上皮钠通道(ENaC)的活性。抑制这些酶可以诱导上皮离子转运的改变，并且因而诱导穿过上皮细胞膜的液体内稳态的改变。例如，肾中的CAP抑制被认为促进利尿，而气道中的CAP抑制促进肺中粘液和痰的清除。因此，肾中的CAP抑制可以治疗性地用于治疗高血压。气道中的CAP抑制阻止了呼吸分泌物的停滞，否则会使患者易受继发的细菌感染。
发明内容本发明提供了化合物、药物组合物以及应用该化合物调节通道活化蛋白酶(CAP)的方法。例如，本发明的化合物和组合物可以用于调节前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A和嗜中性细胞弹性蛋白酶,一方面，本发明提供了式(l)化合物或其可药用盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>B是Y是-S02-、-NHCOJ是NH(CR2)广R6或5;-CO-或-0-C(:0)-;NH(CR2),-OR6、NH(CR2),-S02-R6、NH-CR[(CR2)'R612、OH或OR6;R1A-(CR2)m-NR2、-(CR2)m-NRC(=NR)-NR2或-(CR2)m-C一NR)隱NR2或任选取代的5-7元含氮杂环；或者R'是C^烷基或(CR2)m-X，其中X是C3_7环烷基或芳基，其各自任选地被-(CR2)m-NR2、-(CR2)m—NRC(=NR)-NR2或—(CR2)m—C(=NR)-NR2取代；W是在环A任何位置上的取代基而且是-0-(CR2)p-R"或-L-NR8R9，其中L是S、S(O)、S02或OC(0);R3是Ci6烷基、<:2-6链烯基、(:2.6炔基或-(CR2)「R7;R4是H、Cw烷基、<:2_6链烯基、-CR=CR-R6、<:2-6炔基或任选取代—CR=CE^)的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；或者W是^，其中环E是任选取代的5-12元单环或稠合的碳环或杂环；RS和I^独立地是任选取代的5-7元碳环、杂环、芳基或杂芳基；!^是C,-6烷基、C^6链烯基、C2—6炔基或任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；R8和R9独立地是H、C,—6烷基、Cz-6链烯基、C2-6炔基，或-(012)广议7;或R8和R9同氮一起可以形成任选取代的5-7元杂环；每一个R是H或d—6烷基、C2_6链烯基或C2-6炔基；l是0-6;且k、m、n和p独立地是l-6。在以上式(1)中，R'可以是d-6烷基、-(CH2)m-NH2、—(CH2)m—NHC(=NH)-NH2、或(CH2)m-X，其中X是哌咬基、Cw环烷基或苯基。在其它例子中，R2A-0-(CH2)-W并且I^是卤代的苯基。在一个实施方案中，本发明提供了具有式(2)的化合物甘—士D8^D9—^,"ff4A/tf^4.瓦7/VAAS7"S".A翁在琉.aRR1"7TI，1、'I1、/v^〃ij^7、I\4hJ,,"口X、7JT"1、,71IV、IX、R3、R4、Y、J和n如式(l)所定义。在另一个实施方案中，本发明提供了具有式(3)的化合物其中q是l-5;'R"是卤素、C,-6烷基或0(C^烷基)；并且R、R1、R3、R4、Y、J和n如式(l)所定义。在以上式(2)和式(3)中，Y可以是S02或-O-C(=0)-。在某些实例中，(H2)6q是l且R"是对-氯。在以上的式(2)和式(3)中，R1可以是-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NHC(-NH)-NH2或(CH2)m-X，其中X是哌啶基。在其它实例中，W是d-6烷基或任选取代的环己基，或节基。在其它例子中，R"是H、C,—6烷基、C2—6链烯基或-CI^CR-R6,其中！^是d-6烷基或任选取代的苯基；或者R4是任选取代的苯基、哌啶基、环己基、基、羟基、0W或NR2任选地取代。在特别的例子中，W是哌啶基。在某些实施方案中，本发明提供了具有式(3)的化合物，其中W是C,-6烷基或(CR2)m-X，其中X是C3—7环烷基或苯基；R"是任选取代的5-7元含氮杂环；并且Y是S02。在另一个实施方案中，本发明提供了具有式(4)的化合物其中q是l-5;r5是5-7元含N、o或S的杂环；R"是卣素、C,-6烷基或0(C,—6烷基)；并且R、R1、R5、J和k如式(l)所定义。在以上式(4)中，W可以是被NRSR"任选取代的噻唑基。在某些实例中，rs是被哌淀基任选取代的蓬唑基。在以上式(l)、(2)、(3)和(4)中,J可以是OH、OCH3、NH—CH(苯基)2、NH(CH2),-OR6、NH(CH2),-S02—R6或NH(CR2)rR6，其中R6是C"烷基或苯基、吡淀基、环丙基、环己基、苯并塞唑基、2，3-二氢-lH-茚基、吗啉基、/;其中每个任选取代的部分被C,-6烷咪唑基、四氢吡喃基、哌啶基、噻吩基、2，3-二氢苯并[W[l，4卜二噁烯基或苯并噻吩基，其各自任选地被烷基、卤素、羟基、C"烷氧基、0(CR2),R5、S02NR2、CONR(CR2),R6或CONR8R9取代。另一方面，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物和可药用的赋形剂。本发明还提供了调节通道活化蛋白酶的方法，该方法包括向系统或哺乳动物施用治疗有效量的具有式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物或其可药用盐或药物组合物，从而调节所述通道活化蛋白酶。在一个实施方案中，本发明提供了抑制通道活化蛋白酶的方法，该方法包括向细胞或组织系统或哺乳动物施用治疗有效量的具有式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物或其可药用盐或药物组合物；其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP画1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶，从而抑制所述通道活化蛋白酶。在特别的实例中，本发明提供了抑制前列腺蛋白酶的方法。另一方面，本发明提供了改善或治疗由通道活化蛋白酶介导的病症的方法，该方法包括向细胞或组织系统或哺乳动物施用有效量的具有式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物或其可药用盐或药物组合物，以及任选的第二治疗剂，从而治疗所述病症；其中所述的通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。此外，本发明提供了用于治疗由通道活化蛋白酶介导的病症的方法的式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物。本发明也提供了式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物以及任选的第二治疗剂在制备治疗由通道活化蛋白酶介导的病症的药物中的用途。在具体实例中，本发明的化合物可以用来治疗前列腺蛋白酶介导的病症。在一个实施方案中，第二治疗剂可以是抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、镇咳药、抗生素或DNA酶，并且可在施用式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物之前给药、同时给药或者之后给药。在某些实例中，本发明化合物施用于支气管上皮细胞，特别是人类的支气管上皮细胞。应用本发明化合物可以改善或治疗的病症的实例包括但不限于与液体穿过离子转运上皮细胞的移动或呼吸组织中粘液和痰的蓄积或它们的组合有关的病症。在某些实例中，应用本发明化合物可以调节的病症是嚢性纤维化、原发性纤毛运动障碍、肺癌、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病、哮喘或呼吸道感染。定义"烷基"指的是基团或作为其它基团的结构元件，所述的其它基团例如囟素-取代的烷基和烷氧基，并且可以是直链的或支链的。本文所用的任选取代的烷基、链烯基或炔基可以是任选卣代的(例如CF3)，或者可以具有一个或多个被杂原子(如NR、O或S)取代或代替的碳(例如-OCH2CH20-、烷基硫醇、硫代烷氧基、烷基胺等)。"芳基"指的是包含碳原子的单环或稠合双环的芳环。例如芳基可以是苯基或萘基。"亚芳基"指的是衍生自芳基的二价基团。本文所用的"杂芳基"如以上芳基所定义，其中一个或多个环成员是杂原子。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、卩引味基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并漆喃基、苯并1，31二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噢汾基等。本文所用的"碳环"指的是包含碳原子的饱和或部分不饱和的单环、稠合二环或桥连的多环，其可以任选被取代，例如被=0取代。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙烯、环己酮等。本文所用的"杂环，，如以上碳环所定义，其中一个或多个环碳是杂原子。例如，杂环可以包含N、O、S、-N=、-S-、曙S(O)、-S(0)2-或画NR-，其中R可以是氢、Cw烷基或保护基。杂环的实例包括但不限于吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌咬基酮、1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.51癸-8-基等。除非另有说明，否则当取代基被认为是"任选取代"时，其意味着所述取代基为可以被一个或多个各自独立地选自下述的基团所取代的基团例如，任选卣代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷基胺、烷硫基、炔基、酰胺、氨基(包括单-和二取代的氨基)、芳基、芳氧基、芳硫基、羰基、羧基、氰基、环烷基、卣素、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基、杂环、羟基、异氰酸酯、异硫氰酸酯、巯基、硝基、O-氨基甲酰基、N-氨基曱酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-亚磺酰氨基、N-亚磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、全面代烷基、全氟代烷基、甲硅烷基、磺酰基、硫代羰基、硫氰酸酯、三卣代曱磺酰基及其受保护的化合物。可以形成上述取代基的受保护化合物的保护基是本领域技术人员公知的并且可见于参考文献,如Greene和Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,第三版.，JohnWiley&Sons,NewYork,NY,1999，和Kocienski，ProtectiveGroups,ThiemeVerlag，NewYork,NY，1994,这些文献整体《I入本文作为参考。本文所用的术语"共同施用"或"组合施用"等指的是包括给单个患者施用选择的治疗剂，并意欲包括其中药物不必须通过相同施用途径或在相同时间施用的治疗方案。本文所用的术语"药物组合"指的是通过将活性成分混合或组合而获得的产物，并且包括活性成分的固定组合和非固定组合。术语"固定组合"指的是将活性成分例如式(1)化合物与共同药物以单一实体或剂型的形式同时施用于患者。术语"非固定组合"指的是将活性成分例如式(l)化合物与共同药物以分开的实体同时、共同或者依次施用于患者，并且没有特别的时间限制，其中此类施用在患者体内提供了治疗有效水平的活性成分。后者也应用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。术语"治疗有效量"指的是研究者、兽医、医生或其它临床医生所寻求的在细胞、组织、器官、系统、动物或人类中引起生物学或医学响应的主题化合物的量。术语"施用"主题化合物应当被理解为指的是给需要治疗的个体提供本发明化合物，包括本发明化合物的前药。本文所用的术语"治疗"指的是减轻或緩和疾病和/或其伴随症状的方法。术语"前列腺蛋白酶"也可以称为人通道活化蛋白酶(hCAP);通道活化蛋白酶-l;和PRSS8，MERPOPSIDS01.159。实施本发明的方式本发明提供了化合物、药物组合物以及应用该化合物调节通道活化蛋白酶(CAP)的方法。在一方面，本发明提供了式(l)的化合物或其可药用盐Y是键、-S02-、-NHCO-、-CO-或-O-C(=0)-;J是NH(CR2)广R6、NH(CR2)rOR6、NH(CR2)'-S02—R6、NH-CR[(CR2),R62、OH或OR6;R1是-(CR2)m-NR2、-(CR2)m-NRC(=NR)-NR2或-(CR2)m-C^NR)-NR2或任选取代的5-7元含氮杂环；或者W是C,-6烷基或(CR2)m-X，其中X是C3.7环烷基或芳基，其各自任选地被-(CR2)m-NR2、—(CR2)m—NRC(=NR)-NR2或—(CR2)m-C(=NR)-NR2取代；其中W是在环A任何位置上的取代基而且是-O-(CR2)p-R或-L-NR8R9，其中L是S、S(O)、S。2或OC(0);或R2是Q.6烷基、(:2.6链烯基或C2_6炔基；R3是d—6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)，-R7;R4是H、d—6烷基、C2-6链烯基、-CR=CR-R6、C2-6炔基或任选取代—CR=CE，的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；或者议4是^，其中环E是任选取代的5-12元单环或稠合的碳环或杂环；RS和R"独立地是任选取代的5-7元碳环、杂环、芳基或杂芳基；RG是C,-6烷基、Cw链烯基、C2—6炔基或任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；R8和R9独立地是H、。_6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基，或-(CR2)广R7;或rS和r9同氮一起可以形成任选取代的5-7元杂环；每一个R是H或Cw烷基、C2—6链烯基或(:2-6炔基；且k、1、m、n和p独立地是0-6。在特殊实例中，Y是一SO广、—NHCO—、—CO—或—O-C(=0)—;R2是—0-(cr2)p—R7或—L-NR8r9,其中L是S、S(o)、S02或oc(());l是0-6;并且k、m、n和p独立地为1-6。在其它实例中，相应于W的取代基可以位于环A的3位。在一个实施方案中，本发明提供了具有式(2)的化合物H(2)其中RS和RS—起形成任选取代的5-7元含氮杂环；并且R、R1、R3、R4、Y、J和n如式(l)所定义。在另一个实施方案中，本发明提供了具有式(3)的化合物:'(R10)a(CH2)i(3)其中q是l-5;R"是卣素、C^烷基或0(d—6烷基)；并且R、R1、R3、R4、Y、J和n如式(l)所定义。在另一个实施方案中，本发明提供了具有式(4)的化合物:(R10)qR5—(CR2)2乂k(4)其中q是l-5;rS是5-7元含N、o或S的杂环；R"是卣素、C"烷基或0(C,—6烷基)；并且R、R1、R5、J和k如式(l)所定义。在上述式(l)、(2)、(3)和(4)中，每个任选取代的部分可以;故以下基团取代卤素、=0、C^烷氧基、氨基、C^烷基、Q-6链烯基或C2—6炔基，其各自可以任选被卣代或可以任选具有可以被N、0或S代替或取代的碳；C02R"、0-(CR2)r"C(O)-R11;-(CR2)「R"、-(CR2)「C(0)-R11或-(CR2)「SOrR"，或其组合，其中每个R"是H、氨基、d—6烷基或任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基。例如，J可以是被一个或多个卣素、Cw烷氧基、S02NH2或-(CR2)广C(0)-R"取代的苯基，其中R"是5-7元杂环如吗啉基。在另一实例中，W可以是被一个或多个d-6烷基取代的噻唑基，或5-7元杂环如哌咬基。在另外的实例中，R"可以是被C"烷氧基取代的苯基，或是被氨基取代的亚甲基环己烷。本发明还包括本发明化合物的所有合适的同位素变体或其可药用盐。本发明化合物的同位素变体或其可药用盐被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子量与自然界常见的原子量不同的原子替换。可掺入本发明化合物及其可药用盐的同位素的实例包括但不限于氢、碳、氮和氧的同位素，诸如211、3H、"C、13C、14C、15N、170、180、35S、18F、36C1和123I。本发明化合物和其可药用盐的某些同位素变体，例如其中掺入放射性同位素如3H或14C的那些，可用于药物和/或底物的组织分布研究。在特殊实例中，可以使用SH和"C，原因是它们容易制备和检测。在其他实例中，用同位素如2H进行替代可以提供某些因代谢稳定性更高而产生的治疗优势，例如增加体内半衰期或减少剂量需求。本发明化合物或其可药用盐的同位素变体一般来说可以利用合适试剂的适当同位素变体通过常规方法制备。本发明的化合物和组合物可以用于调节通道活化蛋白酶。可以应用本发明的化合物和组合物调节的通道活化蛋白酶的实例包括但不限于前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。本发明的化合物还可以抑制刺激离子通道(如上皮钠通道)活性的蛋白酶的活性，并且可以用于治疗CAP相关疾病。药理学和用途本发明化合物调节通道活化蛋白酶的活性、特别是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶例如前列腺蛋白酶的活性，并且因此用于治疗其中例如前列腺蛋白酶对疾病的病理学和/或症状学起作用的疾病或病症。通过抑制通道活化蛋白酶、特别是通过抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶如前列腺蛋白酶来调节的疾病包括与穿过上皮细胞膜的液体体积调节有关的疾病。例如，气道表面液体的体积是粘膜纤毛清除和保持肺健康的关键调节因素。通道活化蛋白酶的抑制将促进气道上皮粘膜侧的液体蓄集，从而促进粘液清除并且防止呼吸组织(包括肺气道)中粘液和痰的蓄集。此类疾病包括呼吸疾病如嚢性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哞喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌。通过抑制通道活化蛋白酶介导的疾病还包括除呼吸疾病外的疾病，该疾病与经过上皮的异常液体调节有关，可能涉及在它们表面上的保护性表面液体的异常生理学，例如口干燥症(口干)或干燥性角膜结膜炎(干眼症)。另夕卜，肾中ENaC的CAP调节可以用于促进利尿并且因此诱导降血压作用。慢性阻塞性肺病包括慢性支气管炎或与之相关的呼吸困难、肺气肿以及其它药物治疗(特别是其它吸入药物治疗)后的气道高反应性恶化。本发明还适用于治疗任何类型或起源的支气管炎，包括例如急性、花生仁吸入性、卡他性、格鲁布性、慢性或结核性支气管炎。哞喘包括内源性(非过敏性)哞喘和外源性(过敏性)哮喘、轻度哞喘、中度译喘、重度哮喘、支气管津喘、运动诱发的哞喘、职业性哞喘和细菌感染后诱导的哞喘。哮喘还包括被称为"喘鸣嬰儿综合征"的病症，其中包括出现哮鸣症状并且被确诊或可被诊断为"喘鸣婴儿"的小于4或5岁的个体，这类患者是已确定的主要医疗关注的一类患者类别，并且常被确诊为初期或早期哞喘。用于治疗由抑制通道活化蛋白酶介导的疾病的通道活化蛋白酶抑制剂知的下列方法通过测定通道活化蛋白酶抑制剂的抑制作用来检验。根据上述，本发明进一步提供了在需要该治疗的个体中预防或治疗上述任何疾病或病症的方法，该方法包括给所述个体施用治疗有效量的式(1)、(2)、(3)或(4)的化合物或其可药用盐。对于以上任何用途，所需剂量将根据施用方式、待治疗的具体病症和所需的作用而不同。(参阅下文的"施用和药物组合物")。施用和药物组合物通常，本发明化合物以治疗有效量通过本领域已知的任何常规的和可接受的方式单独施用或与一种或多种治疗剂组合施用。本发明的通道活化蛋白酶抑制剂还用作共同治疗剂，用于与另一种治疗剂组合。例如，通道活化蛋白酶抑制剂可以用于与抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药或镇咳药、抗生素或DNA酶治疗剂组合。通道活化蛋白酶抑制剂和其他治疗剂可在相同或不同的药物组合物中。通道活化蛋白酶抑制剂可在固定的药物组合物中与其他治疗剂混合，或者其可以在其它治疗剂施用之前、同时或之后单独施用。所述组合特别是可用于治疗嚢性纤维化或者阻塞性或炎性气道疾病(例如上文提及的那些)，例如作为此类药物治疗活性的增效剂或者作为减少此类药物所需剂量或潜在副作用的方法。适合的抗炎治疗剂包括类固醇，特别是糖皮质激素如布地奈德、丙酸倍氯米松、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松，或在国际专利申请WO02/88167、WO02/12266、WO02/100879、WO02/00679(例如，实施例3、11、14、17、19、26、34、37、39、51、60、67、72、73、卯、99和IOI)、WO03/35668、WO03/48181、WO03/62259、WO03/64445、WO03/72592、WO04/39827和WO04/66920中描述的类固醇;非类固醇类糖皮质激素受体激动剂，如在DE10261874、WO00/00531、WO02/10143、WO03/82280、WO03/82787、WO03/86294、WO03/104195、WO03/101932、WO04/05229、WO04/18429、WO04/19935和WO04/26248中描述的那些；LTD4拮抗剂，例如孟鲁司特和扎鲁司特；PDE4抑制剂例如西洛司特(ARIFLOGlaxoSmithKline)、ROFLUMILAST⑧(BykGulden)、V-11294A(Napp)、BAY19画8004(Bayer)、SCH-351591(Schering画Plough)、AROFYLLINE(AlmirallProdesfarma)、PD189659/PD168787(Parke-Davis)、AWD-12-281(AstaMedica)、CDC-801(Celgene)、SdCID(TM)CC画10004(Celgene)、VM554/UM565(Vernalis)、T-440(Tanabe)、KW-44卯(KyowaHakkoKogyo),以及在WO92/19594、WO93/19749、WO93/19750、WO93/19751、WO98/18796、WO99/16766、WO01/13953、WO03/104204、WO03/104205、WO03/39544、WO04/000814、WO04/000839、WO04/005258、WO04/018450、WO04/018451、WO04/018457、WO04/018465、WO04/018431、WO04/018449、WO04/018450、WO04/018451、WO04/018457、WO04/018465、WO04/019944、WO04/019945、WO04/045607和WO04/037805中公开的那些；以及腺甘A2B受体拮抗剂如在WO02/42298中描述的那些，所述文献各自以其整体并入本文。适合的支气管扩张治疗药包括P-2肾上腺素受体激动剂，如沙丁胺醇(舒喘灵)、奥西那林、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、丙卡特罗、福莫特罗、卡莫特罗或其可药用盐，和WO00/75114(其整体并入本文作为参考)中所述的式(l)化合物(游离形式或盐或溶剂化物形式)，例如下式的化合物或其可药用盐，以及WO04/16601的式(l)化合物(游离形式或盐或溶剂化物形式)，以及还有EP1440966、JP05025045、W()93/18007、WO99/64035、US2002/0055651、WO01/42193、WO01/83462、WO02/66422、WO02〃04卯、WO02/76933、WO03/24439、WO03/42160、WO03/42164、WO03/72539、WO03/91204、WO03/99764、WO04/16578、WO04/22547、WO04/32921、WO04/33412、WO04/37768、WO04/37773、WO04/37807、WO04/39762、WO04/39766、WO04/45618、WO04/46083和WO04/80964的化合物，所述文献各自以其整体并入本文。适合的支气管扩张药还包括抗胆碱能药或抗毒蕈碱药，特别是异丙托溴铵、氧托溴铵、噻托溴铵和CHF4226(Chiesi)、格隆溴铵，以及在EP424021、US3714357、US5171744、WO01/04118、WO02/00652、WO02/51841、WO02/53564、WO03/00840、WO03/33495、WO03/53966、WO03/87094、WO04/018422和WO04/05285中描述的那些，所述文献各自以其整体并入本文。适合的双重抗炎和支气管扩张药包括双重的P-2肾上腺素受体激动剂/毒蕈碱拮抗剂，如在US2004/0167167、WO04/74246和WO04/74812中公开的那些。适合的抗组胺药包括盐酸西替利溱、对乙酰氨基酚、富马酸氯马斯汀、异丙溱、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和盐酸非索非那定、activastine、阿司咪唑、氮萆斯汀、依巴斯汀、依匹斯汀、咪唑斯汀和特芬那定(tefenadine),以及在JP2004107299、WO03/099807和WO04/026841中公开的那些，所述文献各自以其整体并入本文。适合的抗生素包括大环内酯类抗生物，例如妥布霉素(TOBFM)。适合的DNA酶治疗剂包括阿法链道酶(PULMOZYMETM)，其是重组人DNA酶I(rhDNase)的高纯度溶液，其选择性裂解DNA。阿法链道酶用于治疗嚢性纤维化。通道活化蛋白酶抑制剂和抗炎药的其它有用的组合是与趋化因子受体拮抗剂的组合，所述的趋化因子受体例如CCR-1、CCR-2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR國6、CCR-7、CCR-8、CCR-9和CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5，特别是CCR-5的拮抗剂，如先灵-葆雅公司(Schering画Plough)拮抗剂SC-351125、SCH-55700和SCH-D，Takeda公司拮抗剂如N-4-[[[6，7-二氢-2-(4-甲基-苯基)-5H-苯并-环庚烯-8-基羰基]氨基I苯基j-甲基1四氢-N，N-二甲基-2H-吡喃-4-氯化铵(TAK-770)和在US6166037、WO00/66558、WO00/66559、WO04/018425和WO04/026873中描述的CCR-5拮抗剂，所述文献各自以其整体并入本文。在根据本发明治疗由抑制前列腺蛋白酶介导的疾病中，游离形式或可药用盐形式的本发明的通道活化蛋白酶抑制剂可以通过任何适合的途径施用，例如口服，例如以片剂、胶嚢剂或液体形式施用；肠胃外，例如以可注射溶液剂或混悬剂形式施用；或鼻内，例如用适合的鼻内递送装置以气雾剂或其它可雾化制剂形式施用，例如鼻腔喷雾剂，如本领域已知的那些；或通过吸入施用，特别是用喷雾器施用。通道活化蛋白酶抑制剂可以在药物组合物中与可药用稀释剂或载体一起施用。此类组合物可以是例如干粉、片剂、胶嚢剂和液体，还可以是注射溶液剂、输注液或吸入混悬剂，其可以用本领域已知的其它配制成分和技术制备。游离形式或可药用盐形式的通道活化蛋白酶抑制剂的剂量可能取决于多种因素，如活性成分的活性和作用持续时间、待治疗病症的严重程度、施用方式、个体的种类、性别、种族起源、年龄和体重和/或其个体情况。通常施用例如口服施用于温血动物、特别是重约75kg的人的日剂量估计约0.7mg至约1400mg;更特别是约5mg至约200mg。所述剂量可以以一次剂量进行施用或以数个分次剂量例如5至200mg进行施用。当组合物包含气雾剂时，其可以包含例如氢-氟-烷(HFA)抛射剂如HFA134a或HFA227或它们的混合物；并且可以包含一种或多种本领域已知的共溶剂如乙醇(至多20。/。重量)；和/或一种或多种表面活性剂例如油酸或失水山梨醇三油酸酯；和/或一种或多种填充剂例如乳糖。当组合物包含干粉制剂时，其可以包含例如粒径至多IO微米的通道活化蛋白酶抑制剂，以及任选的所需粒度分布的稀释剂或载体(如乳糖)，以及有助于保护产物性能免受湿气破坏的化合物(例如硬脂酸镁)。当组合物包含雾化制剂时，其可以包含例如溶于或悬浮于含水载体中的通道活化蛋白酶抑制剂、共溶剂(如乙醇或丙二醇)以及稳定剂(其可以是表面活性剂)。在特别的实施方案中，本发明提供可吸入形式的式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物，例如气雾剂或其它可雾化组合物或可吸入颗粒，例如微粒化的形式。本发明还提供包含可吸入形式的本发明化合物的可吸入药物；包含可吸入形式的本发明化合物以及吸入装置的药物产品；以及包含可吸入形式的本发明化合物的吸入装置。制备本发明化合物的方法
技术领域：
：本发明化合物可依照实施例中例举的下述方法制备。在描述的反应中，在终产物中所需的反应性官能团(例如羟基、氨基、亚氨基、硫代或羧基)可以应用本领域已知的保护基保护，以避免它们参与不希望的反应。常规的保护基可以根据标准操作而使用，例如参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts的"ProtectiveGroupsinOrganicChemistry(有机化学中的保护基)"，JohnWiley和Sons,1991。本发明化合物还可以通过将游离碱形式的化合物与可药用的无机或有机酸反应制备成可药用的酸加成盐。或者，可以通过将游离酸形式的化合物与可药用无机或有机的碱反应制备本发明化合物的可药用碱加成盐。或者，可利用起始材料或中间体的盐制备本发明化合物的盐形式。游离酸或游离碱形式的本发明化合物可以分别从相应的碱加成盐或酸加成盐制备。例如通过用适合的碱(例如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理，可以将酸加成盐形式的本发明化合物转化为相应的游离碱。通过用适合的酸(例如盐酸等)处理，可以将碱加成盐形式的本发明化合物转化为相应的游离酸。在0。C至80。C下，在适合的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、含水二恶烷等)中，通过用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理，可以从本发明化合物的N-氧化物制备非氧化形式的本发明化合物。本发明化合物的前药衍生物可以通过本领域普通技术人员已知的方法制备(伊H口，详见Saulnier等人(1994),BioorganicandMedicinalChemistryLetters,第4巻，第1985页)。例如，适合的前药可以通过将非衍生化的本发明化合物与适合的氨甲酰化试剂(例如l，l-酰基氧基烷基碳酰氯(carbanochloridate)、碳酸对-硝基苯基酯等)反应而制备。法制备。可应用于保护基的引入和脱去的技术的详细描述可参见T.W.Greene,"ProtectingGroupsinOrganicChemistry(有机化学中的保护基)"，第3版，JohnWiley和Sons,Inc.,1999。本发明化合物可以在本发明的制备过程中方便地制备或形成溶剂化物(例如水合物)。本发明化合物的水合物可以通过应用有机溶剂(如二氧芑、四氢呋喃或甲醇)从水/有机溶剂混合物中重结晶而方便地制备。本发明化合物可以通过以下方法制备成其单独的立体异构体将化合物的外消旋混合物与旋光活性的拆分试剂反应以形成一对非对映异构体化合物，将非对映异构体分离并且回收旋光纯的对映异构体。尽管对映异构选用可离解的配合物(例如结晶的非对映异构体盐)进行拆分。非对映异构体具有不同的物理学特性(例如熔点、沸点、溶解度和反应性等)并且可以利用这些不同容易地分离。可以通过色语或者通过基于溶解度不同的分离/拆分技术将非对映异构体分离。然后，通过不会引起外消旋化的任何实用的方法，回收旋光纯的对映异构体以及拆分试剂。可用于将化合物的立体异构体从它们的外消旋混合物中拆分出来的技术的更详细描述可参见JeanJacques,AndreCollet,SamuelH.Wilen，"Enantiomers，RacematesandResolutions(对映异构体、夕卜消旋体和拆分)"，JohnWiley和Sons,Inc.,1981。简而言之，本发明化合物可依照实施例中例举的方法制备，而且式(l)、(2)、(3)或(4)的化合物可以通过下述方法制备(a)任选将本发明化合物转化为可药用盐；(b)任选将本发明化合物的盐形式转化为非盐形式；(c)任选将本发明化合物的非氧化形式转化为可药用的N-氧化物；(d)任选将本发明化合物的N-氧化物形式转化为其非氧化形式；(e)任选将本发明化合物的单一异构体从异构体混合物中拆分出来；(f)任选将非衍生化的本发明化合物转化为可药用的前药衍生物；以及(g)任选将本发明化合物的前药衍生物转化为其非衍生化形式。在原料的制备没有特殊描述的范围内，所述化合物为已知的或可以通例中公开的方法制备。本领域的技术人员应意识到以上转化仅是制备本发明化合物的方法的代表，而且其它众所周知的方法同样可以使用。通过以下阐述制备本发明化合物的中间体(参考化合物)和实施例对本发明作进一步说明，但不限制本发明的范围。在一个实施方案中，本发明化合物具有式(l)，其中R1是-(CR。m-NR2、—(CR2)m-NRC(=NR)-NR2或—(CR2)m—C(=NR)-NR2或任选取代的5-7元含氮杂环；或R1是(CR2)m-X，其中X是被-(CR2)m-NR2、-(CR2)m—NRC(=NR)-NR2或-(CR2)m—C(=NR)-NR2取代的C3—7环烷基或芳基。代表性的化合物可以采用下列参考化合物和实施例来制备。参考化合物1将/>-高苯丙氨酸乙酯盐酸化物(5.00g，20.5mmol)和DIPEA(8.7mL，51.25mmol)溶于THF(100mL)并在室温下搅拌。逐滴加入曱磺酰氯(1,67mL，21.52mmol)，并在室温下搅拌反应6小时。蒸发THF;将粗物质溶于EtOAc(100mL)中，用水(100mL)、INHCl(2x100mL)和盐水(100mL)洗涤并干燥(MgSC)4)。真空下除去溶剂并将粗产物用快速色谱纯化(己烷:EtOAc)以得到该乙酯。将该乙酯溶于二S恶烷(50mL)并在室温下搅拌。将溶于水(20mL)的LiOH'H2O(1.00mg，24mmol)加入，搅拌反应直到该乙酯消失(通过TLC和LCMS监测)。真空下除去溶剂并将粗物质分配在EtOAc(50mL)和INHCl(50mL)中。水层用EtOAc(2x50mL)萃取，合并的有机相用1MNaHS04(2x50mL)和盐水(50mL)洗涤，用MgS04干燥。蒸发溶剂并将粗产物通过快速色谱纯化(EtOAc:己烷梯度)，得到参考化合物l，为白色粉末。Me一S一Nii、OI参考化合物2在用于参考化合物2的反应流程中，试剂和条件是(a)TBTU/CH2Cl2/CH3OH，Et3N，23。C;(b)DIBAL-H，CH2C12，-78。C;(c)NaCN，TEBAC(催化剂)，Ac20，CH2C12/H20，-20。C;(d)3MHCl(气态)在Et20中，CH3OH，4°C然后是H20，pHll,0°C;(e)Boc2(),DMF，Et3N，23。C;(f)H2，MeOH,Pd/C10%,23。C，12小时。2-B:通过加入Et3N将Cbz-Lys(Boc)-OH(28g，73.60mmol)和TBTU(23.5g，73.60mmol)在500mL的CH2Cl2:MeOH(9:l)中的溶液调至pH8.0。在室温下搅拌该反应物2小时。用冷的INHC1溶液、水、5%NaHC03溶液和水连续洗涤该混合物，并用Na2S04干燥。蒸发滤液，并将残余物通过硅胶色镨纯化(庚烷:EtOAc，4:1)以得到2-B。TLC(EtOAc:庚烷，3:1)R广0.85。2-C:在-78。C下向2-B(10.5g，26.6mmol)在CH2C12(350mL)的溶液中加入DIBAL-H(80mL，1M的己烷溶液)，并在此温度下搅拌该溶液1小时。加入柠檬酸(5。/。水溶液)猝灭该反应，并将其在室温下搅拌10分钟。分离CH2Cl2层，并用CH2C12(2x200mL)洗涤水层。将合并的有机层用水洗涤，用Na2S04干燥并过滤。蒸发滤液，残余物2-C立即用于下一步骤。2-D:将2-C(9.6g，26.6mmol)在CH2C12(350mL)中的粗溶液冷却到-20。C，加入NaCN(15g，306mmo1)、三乙基千基氯化铵(1.75g，7.67mmol)在245mL水中的溶液。在剧烈搅拌下历经10分钟逐滴加入乙酸酐(7.7mL，81.6mmol)。再搅拌该反应混合物10分钟，然后分离CH2Cl2层。水层用CH;jCl2萃取。用水洗涤合并的有^L层，用Na2S04干燥并过滤。蒸发滤液，并将残余物2-D通过自动化的硅胶色谱纯化(30-40。/。乙酸乙酯在己烷中的溶液)。收集包含所需物质的流份得到2-D。TLC(CH2Cl2:EtOAc，7:3)R,=0.6。2-E:将中间体2-D溶于无水MeOH(80mL)和乙醚(200mL)中，冷却到-20。C。将HC1气体通入该溶液中直至其重量升至36g。将温度保持在0°C以下过夜，然后加入水，维持反应温度为0°C。将反应物在室温下搅拌16小时，通过LC/MS监测反应。在真空中除去乙醚并通过加入NaOH水溶液将pH调至11.0,期间维持反应温度为0°C。反应混合物用乙酸乙酯萃取，用Na2S04干燥并过滤。2-E的粗物质直接用于下一步骤。LC/MS(预测值325.2(M+l)，实测值325.1)。2-F:将中间体2-E(4.94g,15.2mmol)溶于DMF(250mL)中。加入三乙胺(6.5mL，45mmol)将pH调至8.0。一次性加入二碳酸二叔丁酯(5.0g,23mmol)并将该反应物在室温下搅拌过夜。真空下除去溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯，用水和盐水洗涤，用Na2S04干燥，过滤并蒸发。将残余物2-F通过自动化的硅胶色谱纯化(40。/。乙酸乙酯在己烷中的溶液)。收集包含所需物质的流份得到2-F。参考化合物2:将化合物2-F(3.7g,8.73mmol)溶于乙醇(50mL)。加入Pd/C(10。/。，湿重，Degussa型)，将烧瓶放置在Parr振荡器上过夜并通入40psi的氢气。通过硅藻土滤除催化剂，并在真空下除去溶剂。真空下除去溶剂得到所需的参考化合物2，为无色油状。LC/MS(预测值291.2(M+H)，实测值291.4)。参考化合物3在参考化合物3的反应流程图中，试剂和条件是(a)Cbz-OSu,Et3N，THF,水，23°C;(b)对硝基苯基氯曱酸酯，吡啶，CH2C12，23°C;(c)哌啶，CH2C12，230C，72%;(d)H2Pd/C(40psi)，"BuOH,H20,230C。3-B:将化合物3-A(H-Hyp-OMe'HCl)(3.19g，17.55mmol)和TV-(千氧基羰基氧基)-琥珀酰亚胺(Cbz-OSu)(4.37g，17.55mmol)加入装有THF(60mL)和水(20mL)的圆底烧瓶中。将该混合物在室温下搅拌并加入Et3N(11.6mL，70.2mmol)，将该反应物在室温下搅拌过夜。用EtOAc(200mL)稀释该澄清溶液，并用INHCI(3x100mL)和盐水(lxlOOmL)洗涤，用MgS04干燥。真空蒸发溶剂，得到所需产物，为澄清油状物，其不需进一步纯化直接「使用。MS280.1(M+1)。3-C:将4-硝基苯基氯曱酸酯(1.514g，7.51mmol)加入3-B(1.92g，6.83mmol)和吡。定(663nl，8.19mmol)在CH2C12(100ml)的溶液中。搅拌反应混合物过夜。用三批1M的NaHS04溶液和两批盐水洗涤该混合物；干燥(MgS04)并真空浓缩，得到化合物3-C，为黄色油状物；MS附々445.1(M+1)。3-D:将哌淀(320mg，3.76mmol)加入3画C(1.4g，3.14mmol)在DCM(100ml)的溶液中，并在室温下搅拌该溶液混合物3小时。然后用三批1M的NaHS04水溶液、3批饱和NaHC03水溶液和两批盐水洗涤该混合物。干燥(MgS04)有机层，并真空浓缩。残余物经自动化的硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷，0-100。/o)得到化合物3-D，为油状物。MS附々391.3(M+l)。参考化合物3:化合物3-D(883mg,2.26mmol)溶于t-BuOH和水4:1混合物(50mL)的溶液。加入Pd/C(10。/。，湿重，Degussa型)，将烧瓶」改置在Parr振荡器上过夜并通入40psi氢气。通过硅藻土滤除催化剂，并在真空下除去溶剂。分离得到的参考化合物3为无色油状物。LC/MS(预测值257.2(M+H)，实测值257.4)。参考化合物4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>上述反应的试剂和条件是(a)Cbz-OSu，Et3N，THF,水，99%。将D-高苯丙氨酸4-A(3.22g，18.0mmol)和N-(节氧基羰基氧基)-琥珀酰亚胺(Cbz-OSu)(4.49g，18.0mmol)加入装有THF(60mL)和水(20mL)的圆底烧瓶中。在室温下搅拌该混合物并加入Et3N(10.1mL，72.0mmol)，将该反应物在室温下搅拌过夜。用EtOAc(200mL)稀释该澄清溶液并用1NHC1(3x100mL)和盐水(lxl00mL)洗涤，用MgS04干燥。真空蒸发溶剂，得到所需产物，为白色固体，其不经进一步纯化直接使用。参考化合物5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>参考化合物5按照类似于参考化合物4所述的条件进行制备，使用环己基羰基-OSu代替Cbz-OSu。参考化合物6、Me-^-N、〇0H参考化合物6按照类似于参考化合物1所述的条件进行制备，使用￡>-烯丙基甘氨酸曱酯盐酸化物。参考化合物7参考化合物7按照类似于参考化合物4所述的条件进行制备，使用Z)-烯丙基甘氨酸作为试剂。参考化合物8<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>8-B:将4-哌咬乙醇(8画A)(5g，39.7mmol)溶于THF(120mL)中。力口入三乙胺(5.6mL,40mmol)并将该溶液冷却到0°C。加入Boc20(9.59g，44mmol)，并在室温下搅拌该反应物过夜。真空除去溶剂，并将粗的残余物溶于乙酸乙酯(120mL)。用0.1NHC1(3x100mL)和盐水(lxlOOmL)洗涤该溶液；用MgS04干燥；过滤并真空蒸发溶剂，得到化合物8-B,为无色油状物。8-C:将三氯异氰尿酸(2.66g，11.46mmol)加入乙醇(2.39g，10.42mmol)在CH2Ch的溶液中，并维持在0°C下搅拌该溶液，然后加入催化量的TEMPO。加完后，将该混合物加温至室温并搅拌1小时，然后通过珪藻土过滤。有机相用饱和Na2C03水溶液，然后用1NHC1和盐水洗涤。干燥有机层(MgS04)并蒸发溶剂，得到化合物8-C。，HNMR(CDC13，400MHz)59.72(1H，s)，4.07-4.01(2H，m)，2.70-2.57(2H，m)，2.35-2.31(2H,m),2.05-1.94(1H，m)，1.64-1.46(2H，m),1.39(9H，s)，1.30-1.02(2H，m)。8-D:在-78。C下向Cbz-a-膦酰基甘氨酸三曱酯(2.8g，8.45mmol)在THF的溶液中加入l，l，3,3-四曱基胍(1.022ml，8.14mmo1)。10分钟后，加入醛8-C(1.76g，7.76mmo1)。将该溶液置于0。C的冰浴中1小时，然后将其加温至室温并再搅拌l小时。用EtOAc稀释该溶液，用1MNaHS04洗涤，干燥(MgS04)并真空浓缩。残余物经自动化的硅胶色谱用EtOAc/己烷(0-100%)洗脱纯化，得到8-D，为无色油状。MSm/z333.2(M+1)，HNMR(CDC13,400MHz)5.7.35-7.33(5H，m)，6.63(1H，t，J=8Hz),6.30(1H，bs)，5.12(2H，s)，4.10-4.04(2H，m)，3.73(3H，s)，2.67-2.62(2H，m),2.14(2H,t，J=6.8Hz)，1.63-1.46(3H，m)，1.43(9H，s)，1.14-1.06(2H，m)。8-E:在氮气中将8-D(lg，2.31mmol)和MeOH(100ml)装入一个Parr瓶中。将该溶液经过三次循环的真空和通入氮气后，加入催化剂(R，R)-乙基-DuPHOS-Rh(COD)三氟甲磺酸盐(30mg，0.04mmol)。在室温下将该混合物置于60psi氢气中24小时。24小时后转化8-E完全，具有〉99%对映异构体过量，真空下除去溶剂，粗产物通过硅胶色镨纯化(己烷/EtOAc)。8-F:将中间体8-E溶于MeOH中，用氮气冲洗该溶液，加入Pd/炭(5%重量，Degussa)。在室温下将该混合物置于50psi氢气中并振荡24小时。用氮气冲刷该混合物并经硅藻土过滤。用MeOH洗涤滤饼，并将合并的有机溶液真空浓缩。加入己烷，然后共沸蒸发残留的曱醇，得到8-F，为油状物，其不需进一步纯化直接用于下一步骤。8-G:将粗的中间体8-F(0.6g，1.99mmol)溶于THF(10mL)中，并向该溶液中加入2，4，6-三甲基吡啶(315mg，2.38mmol)和甲磺酰氯(0.170ml，2.19mmol)并搅拌2小时。用EtOAc(50mL)稀释该反应物，并用1MNaHS04(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤该溶液，干燥(MgS04)。真空下除得到所需产物8-G。参考化合物8:将化合物8-G(0.70g，1.84mmol)溶于二^恶烷(7mL)中，加入溶于水(4mL)中的LiOH*H20(232mg，5.55mmol)。在23°C下搅拌反应混合物1小时。蒸发溶剂；并用EtOAc(25mL)稀释该残余物，用INNaHS04(25mL)和盐水(25mL)洗涤，用MgS04干燥并过滤。真空下除去溶剂并将粗物质经硅胶色谱(己烷/EtOAc梯度)纯化，得到所需产物参考化合物8，为白色固体。参考化合物9NHBoc参考化合物9通过对应的环己酮的烯化作用来制备。在23°C下搅拌曱基三苯基溴化锈(156mg，0.44mmol)和KHMDS(880pL的0.5M在曱苯中的溶液，0.44mmol)在THF(10mL)中的溶液1小时。加入4-7V-Boc-氨基-1-环己酮(75mg，0.35mmol)在5mL的THF中的溶液，在23°C下搅拌该反应物直至LC/MS指示反应完全。用水猝灭反应；蒸发THF并再次溶于EtOAc中，分离各层。用2xl0mLEtOAc洗涤水相，并用水、饱和NaCl溶液洗涤合并的有机层，用MgS04干燥并过滤。真空下除去溶剂并将粗物质经硅胶色i普(己烷/EtOAc梯度)纯化，得到所需产物参考化合物9，为无色油状物。LC/MS实测值212.M+Hj。参考化合物10门BocHNNBocCbzNHBocHN人NBoc10-BO、CbzNHBocHN人NBoc10-CH2NOO、oBocHNNBoc10-ECbzC(SCH3)3NHBocHNNBoc10-DNHBocHN人NBoc10在上述反应流程中，试剂和条件是(a)TBTU/CH2Cl2/CH3OH，Et3N，230C;(b)DIBAL-H，CH2Cl2，-780C;(c)w画BuLi，HC(SCH3)3，THF，-650C;(d)HgCI2，HgO，MeOH，H20，230C;(e)H2，MeOH，Pd/C10%，23。C，12小时。:EN(>=i〔中间体10-B和10-C按照类似于参考化合物2所述的条件进行制备，分别使用7V-二-Boc精氨酸(10-A)和中间体10-B作为试剂。10-D:在-65。C下历经10分钟将w-BuLi(6.4mL的2.5M在己烷中的溶液，15.94mmol)加入搅拌中的三(甲硫基)甲烷(2.24mL，16.74mmol)在THF(45mL)的溶液中。20分钟后，历经30分钟的时间将醛10-C(1.83g，3.71mmol)在THF(20mL)中的为-65。C的溶液加入。将该溶液在-65。C下搅拌5小时。通过加入400mL的NH4C1饱和溶液和CH2C12(1:12)来猝灭该反应混合物。分离各层，用CH2C12(3x100mL)洗涤水层。用H20、盐水洗涤合并的有机层，用MgS04干燥，过滤并蒸发至干。通过自动化的硅胶色傳用0-10%EtOAc在CH2C12中的溶液洗脱得到IO-D，为无色油状。LC/MS实测值647.M+Hj。10-E:在持续72小时剧烈搅拌下于23°C向溶于MeOH(30mL)和H20(2.2mL)中的10-D(1.0g，1.55mmol)溶液中加入氯化汞(11)(1.42g，5.23mmol)和氧化汞(11)(422mg，1.95mmol)。将反应混合物经石圭藻土过滤，并用CH2C12(75mL)、MeOH(10mL)和水(10mL)洗涤该残余物。分离滤液，水层用CH2C12(50mL)萃取。用饱和NH4OAc水溶液(3x50mL)和饱和NH4C1水溶液(2x75mL)洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥，干燥并蒸发，以得到粗的10-E。通过自动化的珪胶色语用0-100%的EtOAc在己烷中的溶液洗脱得到10-E,为无色油状。LC/MS实测值553.3[M+H|。参考化合物10按照类似于参考化合物2所述的条件进行制备，使用中间体10-E作为试剂。实施例1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>实施例1在实施例1中，试剂和条件是(a)KOH，4-氯节基氯，DMSO，0oC-23oC;(b)TMS-CHN2，CH2CI2/MeOH，230C;(c)TFA/CH2C12(50:50)，23。C;(d)HATU/DIPEA/CH2C12,参考化合物1，23。C;(e)LiOH，二喷烷/水(4:1)，23。C;(f)HATU/DIPEA/CH2C12，参考化合物2，23。C;(g)LiOH，二嗜、烷/7JC(4:l)，23。C(h)HATU/DIPEA/CH2C12，4画氨基甲基吡啶，23°C;(h)Dess-Martin过硪烷，CH2C12，23。C;(j)TFA/CH2C12(20:80)，23°C，随后通过质谱指导的HPLC纯化，23。C。l-B:将KOH(19.4g，0.346mol)细粉溶于DMSO中，并在室温下搅拌20分钟，然后冷却到0。C。将7V-Boc-^^-4-羟基-L-脯氨酸(Boc-Hyp-OH，l-A)(10g，43.3mmol)溶于DMSO(10mL)中并加入上面的溶液，在0。C下再搅拌该反应混合物10分钟。然后，加入4-氯苄基氯(33g，0.204mol)，并在0。C下再搅拌该反应混合物15分钟，然后移去水浴，将反应混合物加温至室温，并搅拌4小时。将反应混合物倒入水(300mL)中，并用额外等量的水(300mL)沖洗该反应瓶。用乙醚(2x300mL)萃取合并的水层并丢弃。用87%H3P04将水层酸化至pH2.3，然后用乙醚(3x300mL)萃取。用水(2x400mL)和盐水(2x400mL)洗涤合并的乙醚萃取物，然后用MgS04干燥，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱用EtOAc/己烷(梯度0-100%)洗脱纯化，得到化合物l-B，为无色油状物。MSm/z256.1(M+1-Boc);NMR(DMSO-D6，400MHz)S7.39-7.31(4H，m)，4.52-4.40(2H,m)，4.16-4.10(2H，m)，3.48-3.41(2H，m)，2.40-2.30(1H，m)，2.03-1.94(1H,m)，1.39-1.34(9H，m)。l-C:在室温下将(三甲基硅烷基)重氮曱烷(2M乙醚溶液)(4.7ml，9.45mmol)溶液加入溶于CH2Cl2/MeOH5:1(25mL)的羧酸l-B(2.4g，8.6mmol)中。通过LC/MS监测起始原料耗尽时，反应混合物用乙酸猝灭，真空浓缩，并将粗的残佘物通过快速色谱纯化(梯度EtOAc:己烷)以得到甲酯1-C，为无色油状物。l-D:在圆底烧瓶中装入搅拌棒和l-C(1.03g，2.80mmol)。加入TFA(50%)在CH2C12(6mL)中的溶液，并将该溶液在室温下搅拌1小时。真空下除去溶剂，加入己烷，然后再次真空蒸发至干，如果需要的话，重复操作以共沸除去残留的TFA。粗物质不需进一步纯化直接用于下一步骤。1画E:粗物质l-D溶于CH2C12(30mL)，将参考化合物1(1.02g，2.80mmol)和HATU(1.12g，2.94mmol)加入，并将该溶液在室温下搅拌10分钟。用注射器加入DIPEA(1.5mL，8.4mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。真空下除去溶剂，并将粗物质直接通过快速色谱纯化(40g硅胶，己烷/EtOAc梯度)。真空下除去溶剂得到l-E，为油状半固体。l-F:将曱酉旨1-E(1.15g,1.86mmol)溶于二^悉烷(15mL)。将氬氧化锂一水合物(120mg，2.00mmol)溶于7jC(15mL)中，并逐滴加入曱酯l-E的溶液中，在室温下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩以除去二喷、烷，然后用1MNaHS04酸化。用EtOAc萃取，并用盐水洗涤合并的有机层，用MgS04干燥。真空下除去溶剂得到羧酸1-F，为蜡状固体。l-G:将羧酸l-F(385mg，0.78mmol)溶于CH2C12(10mL)。加入参考化合物2(151mg，0.52mmol)和HATU(356mg，0.94mmol)，并在室温下搅4半该混合物IO分钟。用注射器加入DIPEA(0.27mL，1.56mmol)，然后在室温下搅拌该反应混合物3小时。真空下除去溶剂，将粗物质重新溶于EtOAc(50mL)中并用1MHC1(2x25mL)，然后用饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na;jS04干燥。真空下除去溶剂，并将粗物质直接通过快速色谱纯化(40g硅胶，CH2CI2/MeOH梯度)。真空下除去溶剂得到l-G，为油状半固体。l-H:将曱酯l-G(300mg，0.39mmol)溶于二喷、烷(18mL)。将氢氧化锂(12mg,0.47mmol)溶于水(7.5mL)中并逐滴加入曱酯l-G溶液中，将其在室温下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩以除去二嗜、烷，然后用1MNaHS04酸化。用EtOAc萃取，并用盐水洗涤合并的有机层，用MgS04干燥。真空下除去溶剂得到羧酸1-H,为蜡状固体。1-1:将羧酸l-H(72mg，0.10mmol)溶于CH2C12(2mL)。加入4-氨基曱基吡啶(13mg，0.11mmol)和HATU(54mg，0.14mmol)，并在室温下搅拌该混合物10分钟。用注射器加入DIPEA(50nL，0.29mmol)，并在室温下搅拌该反应混合物3小时。真空下除去溶剂，将粗物质重新溶于EtOAc(50mL)中，并用1MHCl(2x25mL),然后用饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na2S04干燥。真空下除去溶剂，并将粗物质1-1直接用于下一反应。l-J:将粗的醇1-I(80mg,0.10mmol)溶于CH2C12(2mL)中并加入Dess-Martin过不典烷(65mg，0.15mmol)。在室温下搅4半该反应混合物2小时。真空下除去溶剂，将粗物质重新溶于EtOAc(50mL)中，并用饱和Na2S203(2x25mL)溶液，然后用饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na2S04干燥。粗物质通过快速色语纯化(40g硅胶柱)，使用CH2Cl2:MeOH梯度洗脱以得到酮l-J,为白色泡沫。实施例1:将中间体l-J(42mg，0.05mmol)溶于20%TFA在CH2C12(3mL)的溶液中。在室温下搅拌该反应物2小时，真空下除去溶剂。粗物质通过反相HPLC纯化，并将溶剂冻干得到l，为白色粉末，为其单-TFA盐。实施例2-9使用与合成实施例1所述类似的方法来合成实施例2-7，在步骤h中使用合适的试剂实施例2，使用甲基胺；实施例3，使用千基胺；实施例4，使用苯乙基胺；实施例5，使用苯胺；实施例6，使用环丙基甲基胺；和实施例7，使用环己基曱基胺。实施例8和9按照类似于实施例1所述的方法制备，使用参考化合物1和参考化合物3作为试剂。对于步骤(h),分别在实施例8和9中使用苯乙基胺和3-苯基丙基胺。实施例10NHBoc参考化合物2NHBoc10-CNHBoc10-DNHBoc10-ENHBoc10-F在实施例10中，所述试剂和反应条件是(a)HATU/DIPEA/CH2C12，参考化合物2，23。C;(b)LiOH，二S悉烷/7Jc(4:l),23°C;(c)LiOH，二噁烷/7jc(4:l),23。C;(d)HATU/DIPEA/CH2C12，苯乙基胺，23。C;(e)H2，Pd/C，EtOH，230C;(f)HATU/DIPEA/CH2C12,230C。中间体10-A至10-D按照类似于实施例1的步骤(d)、(e)、(g)和(h)所述的方法制备，使用参考化合物4、IO-A和10-B分别作为步骤(d)、(e)和(g)的试剂。在步骤(h)中，中间体10-C用作酸组分且苯乙基胺用作胺组分。中间体IO-E按照类似于实施例2的步骤f所述的方法制备，使用10-D作为进行脱保护的底物。中间体10-F按照类似于实施例1步骤h所述的方法制备，使用IO-B作为酸组分，且中间体IO-E作为胺组分。Dess-Martin氧化反应和Boc-脱保护与实施例1的步骤(i)和(j)相同。实施例11-12实施例11和12按照类似于实施例10所述的方法制备，分别使用参考化合物5和参考化合物6作为酸组分。实施例13<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>在实施例13中，试剂和反应条件是(a)Hoveyda-Grubbs复分解反应催化剂，4-亚曱基-7V-Boc-哌啶，13-A,CH2C12，40°C;65%;(b)TFA:CH2C12(1:1),23°C，HPLC纯化，30%。13-A:将该化合物按照实施例12合成路线中的中间体进行制备。13-A的合成类似于实施例1步骤(i)的方法。13-B:在氮气中用注射器向13-A(108mg，0.137mmol，1.0当量)、Hoveyda-Grubbs二代复分解催化剂[1，3-二-(2，4，6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)《二氯'(《A-异丙氧基苯基亚曱基)钉II二氯化物l(10mg，0.013mmol,10mol。/。)中加入无水二氯曱烷(5mL)。用注射器加入7V-Boe-4-亚曱基哌啶(lOOpL,0.507mmol,3.5当量)，并将该反应物装上回流冷凝器，加热至40°C持续12小时。通过LC/MS判断反应完全后，该反应混合物直接通过自动化硅胶色谱纯化(80-100%乙酸乙酯在己烷中的溶液)以得到13-B，为深绿色油3犬物。MSm/z859.5(M-Boc+l)。实施例13:该化合物按照类似于实施例1步骤(j)所述的方法制备，使用中间体13-B作为试剂。实施例14-57实施例14-19、22-25、29-30按照类似于实施例1所述的方法制备，在步骤(h)中使用合适的胺组分，例如，分别在实施例14-16中使用(/)-曱基节基胺、W-曱基苄基胺和2-氨基曱基苯并噻唑。实施例20-21、27-28、45和52使用类似于制备实施例13所述的方法制备，在步骤(a)中使用合适的烯烃交叉复分解反应配偶体，例如实施例20，4吏用叔丁基乙烯；实施例21，使用4-乙烯基苯曱醚；实施例27，4吏用实施例26中相应的中间体；实施例28，使用实施例26中相应的中间体，其中苯乙基胺用对-曱氧基苯乙基胺代替；实施例45，使用参考化合物9;以及实施例52，使用4-亚甲基环己烯。实施例26按照类似于实施例IO所述的方法制备，在步骤(b)中使用参考化合物7作为酸组分。实施例31-44和46按照类似于实施例1所述的方法制备，在步骤(d)中使用合适的酸組分并在步骤(f)和(h)中使用合适的胺组分。实施例47使用类似于实施例26所述的方法制备，除了在步骤(d)中的胺组分不同。实施例48-51和53-54按照类似于实施例1所述的方法制备，使用参考化合物10并在步骤(f)和(h)中分别使用合适的胺组分。实施例55和56按照类似于实施例1所述的方法制备，分别直接在中间体l-H和l-G上来完成步骤(i)和(j)。实施例57使用类似于实施例1所述的方法制备，使用参考化合物3作为试剂。实施例58-60使用类似于实施例1所述的方法制备，在步骤(d)中使用合适的酸组分，并在步骤(f)和(h)中使用合适的胺组分。表1显示如实施例1-60中所述的式(l)化合物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>ll-B:将醇11-A(2.0g，7.0mmol)溶于CH2C12(15mL)中并将该溶液冷却到0。C。加入三氯异氰尿酸(1.71g,7.36mmol)，然后加入TEMPO(11mg，0.07mo1)。然后将该反应物加温至室温并在室温下搅拌15分钟。沉淀形成，将反应混合物经硅藻土过滤，并用CH2Ch洗涤。用饱和NaHC03水溶液(2x50mL)、1MHC1(2x50mL)和盐水(50mL)洗涤合并的CH2C12溶液(100mL)，然后干燥(MgS04)并蒸发溶剂，其不需进一步纯化直接用于下一步骤。ll-C:在-65。C下历经10分钟的时间向搅拌中的三(曱硫基)曱烷(2.8mL，21.0mmol)在THF(50mL)的溶液中加入w-BuLi(7.84mL的2.5M己烷溶液，19.6mmol)。20分钟后，历经30分钟的时间加入醛ll-B(2.0g，7.0mmol)在THF(20mL)中的-65。C溶液。在-65。C搅拌该溶液5小时。通过加入400mL饱和NH4C1和CH2C12(1:12)溶液来猝灭反应混合物。分离各层并用CH2C12(3x100mL)洗涂水层。用H20、盐水洗涤合并的有4几层，用MgS04干燥，过滤并蒸发至干。自动化的硅胶色谱用0-10%EtOAc的CH2Cl2溶液洗脱得到ll-C，为无色油状。LC/MS实测值438.1[M+Hj。ll画D:在持续72小时剧烈搅拌下于23°C向ll-C(1.23g,2.83mmol)溶于MeOH(55mL)和H20(4.0mL)的溶液中加入氯化汞(II)(2.69g，9.9mmol)和氧化汞(II)(795mg,3.67mmol)。反应混合物用珪藻土过滤，并用CH2C12(75mL)、MeOH(10mL)和水(10mL)洗涤该残余物。分离滤液，并用CH2C12(50mL)萃取水层。用饱和NH4OAc(3x50mL)水溶液和饱和NH4C1(2x75mL)水溶液洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥，过滤并蒸发以得到粗的ll-D。自动化的硅胶色傳用0-100%EtOAc的己烷溶液洗脱得到ll-D，为无色油状。LC/MS实测值344.11M+H。参考化合物ll:化合物ll-D(150mg，0.44mmol)溶于曱醇中(8mL)。加入50mg的Pd/C(10%,湿重，Degussa型)，并将烧并瓦置于氪气压下。催化剂通过硅藻土过滤，并在真空下除去溶剂。真空下除去溶剂得到参考化合物ll，为无色油状物。LC/MS实测值210.2(M+H)。12-A12-B12在上述参考化合物12的反应流程中，试剂和条件是(a)HATU/DIPEA/CH2C12，苯乙基胺，23。C;(b)TFA/CH2C12(50:50)，23。C。将羧酸12-A(250mg，0.94mmol)溶于CH2C12(5mL)。加入苯乙基胺(140mg，1.13mmol)和HATU(540mg，1.42mmol),并在室温下搅拌该混合物10分钟。用注射器加入DIPEA(0.5mL，2.84mmol),并在室温下搅拌该反应混合物3小时。真空下除去溶剂，将粗物质重新溶于EtOAc(50mL)中并用1MHC1(2x25mL),然后用饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na2S04干燥。真空下除去溶剂，并将粗物质直接通过快速色谱纯化(40g硅胶，0-30%EtOAc的CH2Cl2溶液梯度洗脱)。真空下除去i^剂得到12-B，为油状物。LC/MS实测值369.2。将中间体12-B(37mg，0.01mmol)溶于3mL的25%TFA的CH2C12溶液中。在23°C下搅拌该反应物1小时，真空下除去溶剂以得到参考化合物12，为其单三氟乙酸盐。LC/MS实测值269.21M+HJ。参考化合物1313-D13-E"在上述参考化合物14的反应流程中，试剂和条件是(a)(i)异丁基氯甲酸酉旨，Et3N，THF,-10。C;(ii)NaBH4，H20，0oC，77%;(b)三氯异氰尿酸，TEMPO,CH2C12，0。C;(c)w-BuLi，HC(SCH3)3，THF,-65。C;(d)HgCl2，HgO，MeOH，H20，23。C;(e)TFA/CH2C12(1:1)，23。C,12小时。将市售的化合物13-A(3.6g，15.72mmol)溶于THF(50mL)中并在冰盐浴中冷却到-10。C。用注射器加入三乙胺(2.62mL，18.86mmol)，然后用注射器历经10分钟的时间逐滴加入异丁基氯曱酸酯(2.26mL，17.58mmol)。白色沉淀形成，在0。C将该反应物再搅拌20分钟。过滤该混合物并用THF洗涤；将滤液在冰浴中冷却到0。C，緩慢逐滴加入溶于30mL水的硼氢化钠(1.5g，39.3mmol)溶液。将该冒泡的溶液加温至室温并真空除去THF。将残余物重新溶于EtOAc，用水、盐水洗涤，用MgS04干燥，过滤并真空浓缩。自动化的硅胶色谱(0-40%EtOAc的己烷溶液)纯化得到13-B,为无色油状物。LC/MS实测值216.M+Hj。中间体13-C至13-E分别按照类似于制备参考化合物11中步骤a-c的方法制备。将中间体13-E(268mg，0.98mmol)溶于5mL的25%TFA的CH2Ch溶液中。在23°C下搅拌该反应物1小时，真空下除去溶剂以得到参考化合物13，为其单三氟乙酸盐。LC/MS实测值174.1[M+HJ。参考化合物14参考化合物14按照类似于制备参考化合物13的方法制备，在步骤a中使用(5)-7V-Boc-Cha-OH作为相应的氨基酸起始原料。参考化合物15参考化合物15按照类似于制备参考化合物3的方法制备，在步骤a中使用吗啉作为相应的胺起始原料。实施例61<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>在上述反应流程中，试剂和条件是(a)KOH，4-氯千基氯，DMSO，0oC-23oC;(b)TMS-C跳，CH2Cl2/MeOH，230C;(c)TFA/CH2C12(50:50)，23。C;(d)HATU/DIPEA/CH2C12，参考化合物8，23。C;(e)LiOH，二喷、烷/水(4:1)，23。C;(f)HATU/DIPEA/CH2C12，参考化合物11，23°C;(g)LiOH，二5恶烷/7jC(4:l)，23。C;(h)HATU/DIPEA/CH2C12,苯乙基胺，230C;(h)Dess-Martin过硤烷，CH2C12，23°C;(j)TFA/CH2C12(20:80),23°C，然后通过质谱指导的HPLC纯化。61-B:将KOH(19.4g,0.346mol)细粉溶于DMS()中，并在室温下搅拌20分钟，然后冷却到0。C。将7V-Boc-^4-4-羟基-丄-脯氨酸(Boc-Hyp-()H,61-A)(10g，43.3mmol)溶于DMSO(10mL)中并加入，将反应混合物在0。C下再搅拌10分钟。然后加入4-氯千基氯(33g，0.204mol)，在0。C下再搅拌该反应混合物15分钟，然后移去冰浴，将该反应混合物加温至室温，并搅拌4小时。将该反应混合物倒入水(300mL)中，并用额外等量的水(300mL)沖洗反应瓶。用乙醚(2x300mL)萃取合并的水层并丢弃。用87%H3P04酸化水层至pH2.3，然后用乙醚(3x300mL)萃取。用水(2x400mL)和盐水(2x400mL)洗涤合并的乙醚萃取物，然后用MgS04干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色语用EtOAc/己烷(梯度0-100%)洗脱纯化得到化合物61-B，为无色油状物。MSm/z256.1(M+1-Boc);NMR(DMSO-D6，400MHz)37.397.31(4H，m)，4.52-4.40(2H，m)，4.164.10(2H,m),3.48-3.41(2H，m)，2.40-2.30(1H，m)，2.03-1.94(1H，m)，1.39-1.34(9H，m)。61-C:在室温下将(三曱基硅烷基)重氮甲烷(2M的乙醚溶液)(4.7ml，9.45mmol)溶液加入到羧酸61-B(2.4g，8.6mmol)溶于CH2Cl2/MeOH5:1(25mL)的溶液中。通过LCMS测定起始原料耗尽时，用乙酸猝灭反应混合物，真空浓缩，并将粗的残余物通过快速色语纯化(梯度EtOAc:己烷)以得到曱酯61-C，为无色油状物。61-D:在圆底烧瓶中装入搅拌棒和61-C(1.03g，2.80mmol)。加入TFA(S0。/。)的CH2Cl2(GmL)溶液，将该溶液在室温下搅拌1小时。真空下除去溶剂，加入己烷，然后再次真空蒸发至干，如果需要的话，重复蒸发以共沸除去残留的TFA。粗物质61-D不需进一步纯化直接用于下一步骤。61-E:将粗物质61-D(3.06g，8.0mmol)溶于CH2C12(50mL)，向其中加入参考化合物8(1.5g，4.12mmol)和HATU(3.2g,8,0mmol)，在室温下搅拌该溶液10分钟。用注射器加入DIPEA(2.5mL，12.4mmol)并在室温下搅拌该反应混合物过夜。真空下除去溶剂，并将粗物质直接通过快速色谦纯化(120g硅胶，己烷/EtOAc梯度)。真空下除去溶剂得到61-E,为油状半固体。LC/MS实测值616.M+HI。61-F:将甲酯61匿E(3.0g，4.9mmol)溶于二喷、烷(50mL)。将LiOH(234mg，9.8mmol)溶于7)C(50mL)，并将该溶液逐滴加入曱酯61-E的溶液，在室温下搅拌3小时。反应混合物真空浓缩以除去二恶烷，然后用1MNaHS04将其酸化。用EtOAc萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，再用MgS04干燥。真空下除去溶剂得到羧酸61-F,为蜡状固体。LC/MS实测值602.M+H]。61-G:将羧酸61-F(170mg,0.28mmol)溶于CH2C12(5mL)。加入参考化合物11(89mg，0.43mmol)和HATU(162mg，0.43mmol)，将混合物在室温下搅拌10分钟。通过注射器加入DIPEA(250pL，1.28mmol)，在室温下搅拌该反应混合物3小时。真空下除去溶剂。粗物质重新溶于EtOAc(50mL)，并用1MHC1(2x25mL)、饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na2S04干燥。真空下除去溶剂，并将粗物质直接通过快速色镨纯化(40g硅胶，0-5%MeOH/CH2Cl2梯度洗脱)。真空下除去溶剂得到61-G,为油状半固体。LC/MS实测值793.3[M+Hj。61-H:将曱酯61-G(155mg，0.20mmol)溶于二嗜、烷(5mL)。将氢氧化锂(7.1mg，0.29mmol)溶于水(5mL)中,并逐滴加入甲酯61-G溶液中，在室温下搅拌3小时。将该反应混合物真空浓缩以除去二^恶烷，然后用1MNaHS04酸化。用EtOAc萃取，合并的有机层用盐水洗涂，并用MgS04干燥。真空下除去溶剂得到羧酸61-H，为蜡状固体。LC/MS实测值779.3[M+司。61-1:将羧酸61-H(50mg，0.07mmol)溶于CH2C12(5mL)。加入苯乙基胺(19^L,0.13mmol)和HATU(50mg，0.13mmol)，并在室温下搅拌该混合物10分钟。用注射器加入DIPEA(35L,0.20mmol),在室温下搅拌该反应混合物3小时。真空下除去溶剂；将粗物质重新溶于EtOAc(50mL),并用1MHC1(2x25mL)，然后用饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na2S04干燥。真空下除去溶剂，并将粗物质61-1直接用于下一反应。LC/MS实测值882.4[M+H。61-J:将粗的醇61-1(62mg，0.07mmol)溶于CH2C12(5mL)，加入Dess-Martin过碘烷(55mg,0.13mmol)。在室温下搅拌该反应混合物2小时。真空下除去溶剂，将粗物质重新溶于EtOAc(50mL)，并用饱和Na2S203(2x25mL)水溶液，然后用饱和NaHC03水溶液(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用无水Na2S04干燥。粗物质通过自动化快速色i普纯化(40g硅胶柱)，使用0-5%MeOH的CH2Cl2溶液梯度洗脱以得到酮61-J,为白色泡沫。LC/MS实测值902.4[M+Naj。实施例61:将中间体61(42mg,0.05mmol)溶于20%TFA的CH2C12(2mL)溶液中。在室温下搅拌该反应物30分钟，真空除去溶剂。粗物质经反相HPLC纯化并冻干溶剂得到实施例61,为白色粉末，为其单TFA盐。实施例62-66实施例62-66按照类似于实施例61所述的方法制备，在步骤h的酰胺形成步骤中使用合适的胺组分。例如，在实施例62中，使用4-氨基甲基四氢吡喃代替4-氨基甲基吡啶作为胺组分。实施例67-74实施例67-74按照类似于实施例61所述的方法制备，在步骤(h)和(i)中寸吏用合适的胺组分，例如实施例67，在步骤f和h中分别使用参考化合物13和12;实施例68，在步骤f和h中分别使用参考化合物14和4-氨基乙基四氢吡喃；实施例69-73，在步骤f中使用参考化合物13作为胺组分，且在步骤h中使用合适的胺组分。实施例74按照类似的方法制备，分别在步骤f和h中使用合适的胺组分。表2显示了如实施例61-74所述的式(l)化合物。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>试验通道活化蛋白酶抑制剂例如前列腺蛋白酶抑制剂在治疗通道活化蛋白酶的抑制介导的疾病中的适宜性可以通过确定通道活化蛋白酶抑制剂对以下的抑制作用而测定(l)天然的、分离的、纯化的或重组的通道活化蛋白酶，应用适合的生物化学试验形式，应用Shipway等人；BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications2004;324(2):953画63中描述的方法；和/或(2)在适合的分离细胞或融合上皮中的离子通道/离子转运功能，应用Bridges等人；AmericanJournalofPhysiologyLungCellMolecularPhysiology2001;281(l):L16-23和Donaldson等人；JournalofBiologicalChemistry2002;277(10):8338-45中描述的方法。生物化学试-验重组人前列腺蛋白酶和蛋白裂解酶以及豚鼠前列腺蛋白酶是根据Shipway等人；Biochem.andBiophys.Res.Commun.2004;324(2):953-63中描述的方法产生的。将重组酶在适合的多孔试验板例如96或384孔板上在包含试验化合物或溶媒的电解质緩沖液中孵育。在酶与化合物或溶媒混合后的指定时间下，将适合的荧光肽底物加入试验混合物中。当底物被活性酶裂解后，荧光(用适合的荧光板读数器测定)增加并且底物的转换率(即酶活性)可以被定量，并且因此任何试验化合物的抑制作用可以被定量。试验化合物的效力表示为诱导酶活性(Ki)降低50%时的浓度。通常，本发明化合物的Kj值可以为0.1nM至5|iM。在某些实施例中，本发明化合物的Kj值可以为0.1nM至500nM;0.1nM至50nM;0.1nM至5nM;或0.1nM至0.5nM。在特别的实施例中，本发明化合物的Kj值可以为0.1nM至0.5nM;0.5nM至5nM;5nM至50nM;50nM至500nM;或500nM至5jaM。在其它实施例中，化合物的Kj值可以小于0.1nM或大于5(iM。上皮离子转运才艮才居Danahay等人，Am.丄Physiol.LungCellMol.Physiol.2002;282(2):L226-36中描述的方法培养人支气管上皮细胞。当适当分化(形成顶端空气界面后14-21天)时，将上皮细胞用溶媒、抑肽酶(200lag/mL)或试验化合物处理90分钟。然后将上皮放入Danahay等人的上述文献描述的室中，保持上皮顶端侧的溶^f某、抑肽酶或试验化合物的浓度。然后通过电压钳上皮至零毫伏来测定短路电流(ISC)。然后将阿米洛利(IOfiM)加入至上皮的顶侧表面来测定阿米洛利敏感的ISC。试验化合物的效能表示为诱导阿米洛利敏感的ISC的总的抑肽酶敏感性分量抑制50%的浓度。通常，本发明化合物的ICso值可以为1nM至10)iiM。在某些实施例中，本发明化合物的ICs。值可以为1nM至1)uM;或更特别的是lnM至100nM。在其它实施例中，本发明化合物的ICso值可以为100nM至1fiM，或1juM至10fiM。在其它实施例中，本发明化合物的ICso值可以小于1nM或大于10pM。气管电位差(体内)将豚鼠用短效的吸入麻醉剂如氟烷和1\20麻醉。在短效的麻醉下，将经口的管饲针头通过口咽途径插入至气管中。一旦进入气管，将在适合的基于水的稀释剂中的小体积(50-200pL)溶媒或试验化合物灌入气道中。然后动物复苏并且变得完全能走动。或者，可以将试验化合物用气雾剂或干粉给药施用于动物。在给药后的指定时间，将动物用适合的麻醉剂如氯胺酮和赛拉溱外科麻醉。然后将气管暴露并且将塑料的琼脂桥电极插入气管腔中。将参比电极也插入动物颈部的肌肉层中。然后用Takahashi等人，ToxicolApplPharmacol.1995;131(1):31-6中描述的适合的高阻抗伏特计测定气管电位差。试验化合物的效能表示为诱导气管电位差的敏感性分量降低50%的剂量。应当理解的是，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，对它一々<3的W甲，a围以及所附权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请并入本文作为参考并用于所有目的。权利要求1.式(1)的化合物或其可药用盐，其中B是id="icf0002"file="A2008800038800002C2.tif"wi="39"he="30"top="77"left="45"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或(CR2)kR5；Y是-SO2-、-NHCO-、-CO-或-O-C(＝O)-；J是NH(CR2)l-R6、NH(CR2)l-OR6、NH(CR2)l-SO2-R6、NH-CR[(CR2)lR6]2、OH或OR6；R1是-(CR2)m-NR2、-(CR2)m-NRC(＝NR)-NR2或-(CR2)m-C(＝NR)-NR2或任选取代的5-7元含氮杂环；或者R1是C1-6烷基或(CR2)m-X，其中X是C3-7环烷基或芳基，其各自任选地被-(CR2)m-NR2、-(CR2)m-NRC(＝NR)-NR2或-(CR2)m-C(＝NR)-NR2取代；R2是在环A任何位置上的取代基而且是-O-(CR2)p-R7或-L-NR8R9，其中L是S、S(O)、SO2或OC(O)；R3是C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)l-R7；R4是H、C1-6烷基、C2-6链烯基、-CR＝CR-R6、C2-6炔基或任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；或者R4是id="icf0003"file="A2008800038800002C3.tif"wi="33"he="12"top="207"left="134"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中环E是任选取代的5-12元单环或稠合的碳环或杂环；R5和R7独立地是任选取代的5-7元碳环、杂环、芳基或杂芳基；R6是C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；R8和R9独立地是H、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)l-R7；或R8和R9同氮一起可以形成任选取代的5-7元杂环；每一个R是H或C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基；l是0-6；且k、m、n和p独立地是1-6。2.权利要求1的化合物，其中J是OH、OCH3、NH-CH(苯基)2、NH(CH2)rOR6、NH(CH2)广S02-r6或NH(CR2),-R6,其中r6是C,.6烷基或苯基、吡"定基、环丙基、环己基、苯并噻唑基、2，3-二氢-lH-茚基、吗啉基、咪唑基、四氢吡喃基、哌啶基、噻吩基、2,3-二氢苯并[All，4卜二噁烯基或苯并噻吩基,其各自任选地被C,_6烷基、卤素、羟基、C，_6烷氧基、0(CRAR5、S()2NR2、CONR(cr2),R6或CONR8r9取代。3.权利要求l的化合物，其中Y是S02或-O-C(O)-。4.权利要求1的化合物，其中R1是d-6烷基、-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NHC^NH)-nh2或(ch2)m-X，其中X是哌咬基、(:3-7环烷基或苯基。5.权利要求l的化合物，其中112是-0-((:112)-1^且117是卤代苯基。6.权利要求l的化合物，其中所述化合物具有式(2):oR1〇R3-Y-N0丄(2)其中RS和W—起形成任选取代的5-7元含氮杂环。7.权利要求l的化合物，其中所述化合物具有式(3):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中q是l-5;且R"是卤素、Cw烷基或O(C"烷基)。8.权利要求7的化合物，其中R1是-(CH2)m_NH2、-(CH2)m-NHC^NH)-NH2或(CH2)m-X，其中X是哌啶基。9.权利要求7的化合物，其中只3是d—6烷基或任选取代的环己基，或千基。10.权利要求7的化合物，其中R"是H、Cw烷基、(:2_6链烯基或-CR=CR-R6，其中Re是C,-6烷基或任选取代的苯基；或者R"是任选取代-，-CH=^、或-，-CH==<(/\lH的苯基、哌啶基、环己基、\~~/\_/;其中每一个任选取代的部分被Cw烷基、羟基、ORe或NR2任选地取代。11.权利要求10的化合物，其中R"是哌咬基。12.权利要求7的化合物，其中F^是d—6烷基或(CR2)m-X，其中X是C3—7环烷基或苯基；W是任选取代的5-7元含氮杂环；且Y是SCh。13.权利要求l的化合物，其中所述化合物具有式(4):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中q是l-5;R5是包含N、0或S的5-7元杂环；且R"是卤素、d-6烷基或0(C"烷基)。14.权利要求13的化合物，其中R5是任选地被NR8l^取代的噻唑基。15.权利要求1的化合物，其选自下述化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage10</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>16.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-15中任一项所述的化合物。17.权利要求1-15中任一项所述的化合物用于抑制细胞或组织系统或哺乳动物的通道活化蛋白酶的用途，其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。18.权利要求1-15中任一项所述的化合物以及任选的第二治疗剂在制备治疗细胞或组织系统或哺乳动物中由通道蛋白活化蛋白酶介导的病症的药物中的用途，其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。19.权利要求18的用途，其中所述病症与液体穿过离子转运上皮细胞的移动或呼吸组织中粘液和痰的蓄集或它们的组合有关。20.权利要求18的用途，其中所述病症是嚢性纤维化、原发性纤毛运动障碍、肺癌、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病、哮喘或呼吸道感染。21.权利要求18的用途，其中所述第二治疗剂是抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、镇咳药、抗生素或DNA酶，并且在权利要求1-15中任一项所述的化合物之前给药、同时给药或者之后给药。22.权利要求17或18的用途，其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶。23.权利要求17或18的用途，其中所述细胞或组织系统包括支气管上皮细胞。全文摘要本发明提供了用于调节通道活化蛋白酶的化合物和其药物组合物，以及使用所述化合物治疗、缓解或预防与通道活化蛋白酶有关的病症的方法，所述的蛋白酶包括但不限于前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。文档编号A61K31/4523GK101600428SQ200880003880公开日2009年12月9日申请日期2008年1月7日优先权日2007年2月9日发明者A·K·查特吉,D·C·塔利,王志伟申请人:Irm责任有限公司