专利名称：哌嗪类衍生物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属化合物合成，主要涉及具有CCR5拮抗活性的哌嗪类衍生物及其可药用盐的制备方法，以及所述化合物在制备治疗由CCR5介导的如HIV感染、自身免疫性等疾病的药物中的用途。
背景技术：
获得性免疫缺陷综合征(又称艾滋病，AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的以T细胞免疫功能缺陷为主的一组综合症。虽然目前高效抗逆转录病毒治疗(逆转录酶抑制剂加蛋白酶抑制剂)的普遍实施，使HIV相关疾病的发病率大大降低，AIDS得到了一定程度的控制，但是HIV病毒的耐药问题、抗HIV药物的毒性和不良反应以及长期用药的费用问题，使得寻求更安全，更有效的抗HIV药物迫在眉睫。
研究表明，TH细胞上的CD4分子对HIV-1的侵入必不可少，但仅有CD4仍不足以介导HIV与细胞的融合。进一步研究发现CCR5和CXCR4是HIV-1的协同受体，只有当细胞同时表达CD4和CCR5或CXCR4时，HIV-1才能进入细胞(Goto T,Nakai M，Ikuta K.Micron.1998，29，123-138)。研究还发现，当特殊人群的两个CCR5等位基因都发生32个碱基对缺失(CCR5-Δ32纯合子)时，这些人群对HIV-1感染有很强的抵抗作用，并不表现任何的免疫缺陷。若只有一个等位基因发生缺失的人(CCR5-Δ32杂合子)，也不易被HIV-1感染或感染后发病的进程明显慢于正常个体(Liu R，Paxton WA，Choe S.et al.Cell1996，86，367-377；Proudfoot AEI，Power CA，Rommel C et a1.Semin Immunol，2003，15，121-132；Hara BMO，Olson WC.Curr Opin Pharmcol.2002，2，523-528)。以上发现说明以CCR5为靶点的抑制剂可有效地阻断HIV-1感染。
CCR5(chemokine receptor 5)是趋化因子受体的一种亚型，属于G蛋白偶联受体超家族(GPCR)。它由325个氨基酸组成，包括细胞外N-末端、三个胞外环、跨膜区和胞内C-末端部分。CCR5主要表达于原始单核巨噬细胞、静止T细胞和小神经胶质细胞等。β趋化因子RANTES，MIP-1α和MIP-1β是其天然配体。
在HIV-1进入宿主细胞时，HIV-1包膜糖蛋白gp120和细胞表面CD4受体结合，导致gp120构象改变，继而与协同受体CCR5结合，使得HIV-1的包膜糖蛋白gp41构象变化，从而启动HIV-1与宿主细胞的融合。因此，CCR5拮抗剂可直接与CCR5结合，使CCR5构象发生改变，导致gp120与CCR5的亲和力降低，降低HIV-1的感染能力，从而起到了抗HIV的作用。
综上所述，开发具有结构新颖的CCR5拮抗剂在抗HIV的药物中将发挥极其重要的作用。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一类结构新颖的具有拮抗CCR5活性的的哌嗪类衍生物及其可药用的盐，所述衍生物具有以下结构通式
其中 (1)R1为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8环烷基氧基、CF3、卤素、胺基、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、羟基、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基； (2)G为CO、SO2、SO或OCO中的一种； (3)R2和R3相同或不同，选用氢原子、C1-6烷基、C3-8环烷基、C5-10芳香性杂环基、C4-7饱和杂环基、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、羟基，乙酰基、氰基、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基； (4)X为C1-6的烷基或者不存在。
根据本发明的一个优选实施方案是具有式(IX)化合物及其可药用的盐，结构式为
其中 (1)R1为氢原子、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子，含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基； (2)R3为氢原子、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、乙酰基、氰基、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基； (3)R4和R5相同或者不同，为氢、卤素或甲基中的一种。
本发明式(IX)优选下列化合物及其可药用的盐 N-(1-苯基-3-(4-(4-甲苯基哌嗪-1-基)丙基)苯甲酰胺； 4-氟-N-(1-苯基-3-(4-(4-甲苯基哌嗪-1-基)丙基)苯甲酰胺； 4-氟-N-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺； N-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺； N-(3-(4-(4-氨基甲酰苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺； N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺； N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺； N-(1-(4-氯苯基)-3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)丙基)-4-氟苯甲酰胺； 4-氯-N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺； N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-三氟甲基苯甲酰胺； N-(1-(4-氯苯基)-3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)丙基)-4-氟苯甲酰胺盐酸盐。
本发明的第二个目的是提供具有上述通式(IX)的化合物及其可药用的盐的制备方法 (1)化合物I与丙二酸、醋酸铵在极性溶剂(如乙醇，甲醇，N，N-二甲基甲酰胺等)中回流下经缩合和脱羧反应，经过滤得到滤渣为化合物II，反应8-12小时； (2)化合物II与四氢铝锂在无水溶剂(如四氢呋喃，乙醇，甲醇等)中回流反应6-8小时，过滤，滤液浓缩即得化合物III； (3)化合物III与相应的酰氯在三乙胺存在的条件下，以二氯甲烷为溶剂，室温反应得到化合物IV，反应时间为2-4小时，产物经柱层析分离可得纯品； (4)所得的化合物IV与草酰氯在无水二氯甲烷中，分别加入二甲基亚砜、三乙胺，经斯文氧化，得到化合物V，反应温度为-40--78℃，以-70--78℃为最佳，反应时间为6-8小时，产物经柱层析分离可得纯品； (5)化合物VI与二氯亚砜在无水氯仿中，反应可直接得到氮芥化合物VII，反应温度为室温，反应时间为3-5小时； (6)化合物VII与相应的伯胺在极性溶剂(如N，N-二甲基甲酰胺，乙二醇单甲醚，乙二醇二甲醚等)中，经环合得到化合物VIII，反应温度为120-160℃，以135-150℃为最佳，反应时间为18-20小时，产物经柱层析可得纯品； (7)化合物VIII与化合物V在溶剂(如乙醇，二氯甲烷，1，2-二氯乙烷等)中，经硼氢化钠还原胺化反应得到目标化合物IX，反应温度为室温，反应时间为12-15小时，产物经柱层析可得纯品。
化合物VII可参照文献方法(Yin H，Xu YF，Qian XH.Bioorg.Med.Chem.2007，15，1356-1362)合成得到。反应式为
本发明的第三个目的是提供哌嗪类衍生物及其可药用的盐在制备抗HIV药物中的应用。初步的药理实验发现一些化合物对转染了质粒pCDNA-DnaE-C-rLuc-C，pCDNA-CCR5，pCMV-flag-CD4的HEK294细胞和转染了质粒pCAGGS-SF162-gp160，pCDNA-rLuc-N-DnaE-N的CHO细胞的融合具有较好的抑制作用，IC50值在0.64-3.7μtM之间，这些数据说明了这类化合物具有较好的抗HIV的作用。
所述药物由所述的哌嗪类衍生物及其可药用的盐与制剂允许的药物赋形剂或载体制备而成。所述药物的制剂形式为固体制剂或液体制剂，包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、滴丸、注射剂、透皮贴剂、气雾剂、控释或缓释剂、或纳米制剂。
本发明的特点是以TAK-220和Maraviroc为先导化合物，采用电子等排的原理，将二者结构中的哌啶环用哌嗪环来代替，并且引入与Maraviroc类似的支链，从而得到一类结构全新的化合物。初步的药理活性筛选表明这些化合物具有较好的抗HIV活性。
具体实施例方式 本发明结合实施例作进一步的说明。以下的实施例是说明本发明的，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1 3-氨基-3-苯基丙酸(II a) 参照文献方法(Torre O，Gotor V，Gotor V.TetrahedronAsymmetry.2006，17，860-866)制得化合物Ia与丙二酸、醋酸铵在乙醇中回流，反应9小时，经过滤得到滤渣为化合物II a。M.p.218-220℃。
实施例23-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸(II b) 参照文献方法(Torre O，Gotor V，Gotor V.TetrahedronAsymmetry.2006，17，860-866)制得化合物Ib与丙二酸、醋酸铵在乙醇中回流，反应9小时，经过滤得到滤渣为化合物II b。M.p.242-244℃。
实施例33-氨基-3-苯基丙醇(IIIa) 参照文献方法(Torre O，Gotor V，Gotor V.TetrahedronAsymmetry.2006，17，860-866)制得化合物II a与四氢铝锂在无水四氢呋喃中回流反应7小时，经过滤可得到的滤液为化合物IIIa。M.p.75-77℃。
实施例4 3-氨基-3-(4-氯苯基)丙醇(IIIb) 参照文献方法(Torre O，Gotor V，Gotor V.TetrahedronAsymmetry.2006，17，860-866)制得化合物II b与四氢铝锂在无水四氢呋喃中回流反应7小时，经过滤可得到的滤液为化合物IIIb。M.p.54-56℃。
实施例5 N-(3-羟基-1-苯基丙基)苯甲酰胺(IVa) 将化合物III a 1.51g(10mmol)、苯甲酰氯1.41g(10mmol)、三乙胺2.02g(20mmol)、二氯甲烷20ml加入反应瓶中，室温下搅拌，TLC跟踪反应。反应结束，减压回收溶剂得粗品，柱层析(洗脱剂乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)分离，得淡黄色固体2.31g，收率90％。M.p.85-87℃。
1HNMR(δ，CDCl3)7.77-7.26(m，10H，Ar)，7.11(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.42-5.38(m，1H)，3.75-3.69(m，2H)，3.42(s，1H，OH)，2.22-2.18(m，1H)，1.97-1.92(m，1H). 实施例64-氟-N-(3-羟基-1-苯基丙基)苯甲酰胺(IVb) 操作过程如例5，只是用对氟苯甲酰氯代替苯甲酰氯。得到白色固体，收率88％。M.p.90-92℃。
1HNMR(δ，CDCl3)7.97-7.25(m，9H，Ar)，7.05(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.40-5.36(m，1H)，3.72-3.65(m，2H)，3.65(s，1H，OH)，2.24-2.19(m，1H)，1.95-1.90(m，1H). 实施例74-氯-N-(3-羟基-1-苯基丙基)苯甲酰胺(IVc) 操作过程如例5，只是用对氯苯甲酰氯代替苯甲酰氯。得到白色固体，收率92％。M.p.108-110℃。
1HNMR(δ，CDCl3)7.83-7.29(m，9H，Ar)，7.08(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.35-5.31(m，1H)，3.69-3.62(m，2H)，3.73(s，1H，OH)，2.29-2.23(m，1H)，1.91-1.85(m，1H). 实施例8 N-(3-羟基-1-苯基丙基)-4-三氟甲基苯甲酰胺(IVd) 操作过程如例5，只是用对三氟甲基苯甲酰氯代替苯甲酰氯。得到白色固体，收率85％。M.p.109-111℃。
1HNMR(δ，CDCl3)7.81-7.20(m，9H，Ar)，7.14(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.40-5.37(m，1H)，3.75-3.70(m，2H)，3.54(s，1H，OH)，2.22-2.19(m，1H)，1.96-1.92(m，1H). 实施例9 N-(1-(4-氯苯基)-3-羟基丙基)-4-氟苯甲酰胺(IVe) 操作过程如例5，只是用对三氟甲基苯甲酰氯代替苯甲酰氯，用化合物IIIb代替化合物IIIa。得到黄色固体，收率92％。M.p.127-129℃。
1HNMR(δ，CDCl3)7.93-7.28(m，8H，Ar)，7.05(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.40-5.36(m，1H)，3.77-3.73(m，2H)，3.64(s，1H，OH)，2.24-2.20(m，1H)，1.93-1.90(m，1H). 实施例10 N-(2-醛基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(Va) 将草酰氯0.5ml(6mmol)溶于二氯甲烷40ml中，在-78℃下搅拌10分钟，然后将二甲基亚砜0.8ml(12mmol)溶于15ml二氯甲烷后加入，加料完毕以后，反应3min，将化合物IVa 1.27g(5mmol)溶于15ml二氯甲烷后加入，反应40min，加入三乙胺3.6ml，搅拌10min后自然升至室温，TLC跟踪反应。反应结束，减压回收溶剂，柱层析(洗脱剂(乙酸乙酯∶石油醚＝3∶2)分离，得淡黄色固体1.07g，收率92％。M.p.112-114℃。
1HNMR(δ，CDCl3)9.74(s，1H，CHO)，7.76-7.30(m，10H，Ar)，6.89(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.73-5.69(m，2H)，3.24-3.19(m，1H)，3.09-3.05(m，1H). 实施例114-氟-N-(2-醛基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(V b) 操作过程如例10，只是用化合物IVb代替化合物IVa。得到淡黄色固体，收率90％。M.p.85-88℃。
1HNMR(δ，CDCl3)9.53(s，1H，CHO)，7.95-7.26(m，9H，Ar)，6.82(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.68-5.64(m，2H)，3.25-3.21(m，1H)，3.09-3.06(m，1H)。
实施例12 4-氯-N-(2-醛基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(V c) 操作过程如例10，只是用化合物IVc代替化合物IVa。得到淡黄色固体，收率95％。M.p.120-122℃。
1HNMR(δ，CDCl3)9.83(s，1H，CHO)，7.86-7.29(m，9H，Ar)，6.93(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.63-5.60(m，2H)，3.30-3.25(m，1H)，3.04-3.01(m，1H)。
实施例13 N-(2-醛基-1-苯基乙基)-4-三氟甲基苯甲酰胺(V d) 操作过程如例10，只是用化合物IVd代替化合物IVa。得到淡黄色固体，收率98％。M.p.131-133℃。
1HNMR(δ，CDCl3)9.73(s，1H，CHO)，7.80-7.25(m，9H，Ar)，7.01(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.74-5.69(m，2H)，3.24-3.20(m，1H)，3.08-3.03(m，1H)。
实施例14 N-(1-(4-氯苯基)-2-醛基乙基)-4-氟苯甲酰胺(V e) 操作过程如例10，只是用化合物IVe代替化合物IVa。得到黄色固体，收率92％。M.p.127-129℃。
1HNMR(δ，CDCl3)9.56(s，1H，CHO)，7.91-7.30(m，8H，Ar)，6.95(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，5.73-5.67(m，2H)，3.21-3.17(m，1H)，3.12-3.07(m，1H). 实施例15 β，β-二氯代二乙基胺盐酸盐(VII) 参照文献方法(Yin H，Xu YF，Qian XH.Bioorg.Med.Chem.2007，15，1356-1362)制得。
M.p.212-215℃。
实施例16 1-(4-甲基苯基)哌嗪盐酸盐(VIIIa) 参照文献方法(Liu KG，Robichaud AJ.Tetrahedron Letters.2005，46，7921-7922)制得。
M.p.179-182℃。
实施例17 1-(4-氟苯基)哌嗪盐酸盐(VIIIIb) 参照文献方法(Liu KG，Robichaud AJ.Tetrahedron Letters.2005，46，7921-7922)制得。
M.p.182-185℃。
实施例18 4-(哌嗪-1-)苯甲酰胺盐酸盐(VIIIc) 参照文献方法(Liu KG，Robichaud AJ.Tetrahedron Letters.2005，46，7921-7922)制得。
M.p.240-243℃。
实施例19 4-(哌嗪-1-)苯甲腈盐酸盐(VIId) 参照文献方法(Liu KG，Robichaud AJ.Tetrahedron Letters.2005，46，7921-7922)制得。
M.p.160℃(dec)。
实施例20 N-(1-苯基-3-(4-(4-甲苯基哌嗪-1-基)丙基)苯甲酰胺(IXa) 将化合物V a 253mg(1mmol)、化合物VIIIa 21.2mg(1mmol)溶于二氯甲烷2ml中，室温搅拌0.5小时，然后加入硼氢化钠424mg(2mmol)，TLC跟踪反应。反应结束，减压回收溶剂，柱层析(洗脱剂乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)分离，得到黄色固体248mg，收率60％。M.p.165-167℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.91(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.91-6.84(m，14H，Ar)，5.38-5.35(m，1H)，3.23-3.16(m，4H，piperazinyl-H)，2.74-2.60(m，4H，piperazinyl-H)，2.60-2.57(m，1H)，2.47-2.44(m，1H)，2.31(s，3H，CH3)，2.28-2.23(m，2H).ESI-MS m/z415[M+H]+。
实施例214-氟-N-(1-苯基-3-(4-(4-甲苯基哌嗪-1-基)丙基)苯甲酰胺(IXb) 操作过程如例20，只是用化合物Vb代替化合物Va。得到黄色固体，收率62％。M.p.171-173℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.85(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.95-6.90(m，13H，Ar)，5.37-5.34(m，1H)，3.21-3.13(m，4H，piperazinyl-H)，2.72-2.59(m，4H，piperazinyl-H)，2.61-2.57(m，1H)，2.48-2.44(m，1H)，2.30(s，3H，CH3)，2.27-2.22(m，2H).ESI-MS m/z433[M+H]+。
实施例224-氟-N-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺(IXc) 操作过程如例20，只是用化合物Vb代替化合物V a，化合物VIIIb代替化合物VIIIa，得到黄色固体，收率53％。M.p.157-159℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.74(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.95-6.85(m，13H，Ar)，5.36-5.32(m，1H)，3.24-3.15(m，4H，piperazinyl-H)，2.82-2.68(m，4H，piperazinyl-H)，2.67-2.59(m，2H)，2.28-2.25(m，1H)，2.11-2.06(m，1H).ESI-MS m/z437[M+H]+。
实施例23 N-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺(IXd) 操作过程如例20，只是用化合物VIIIb代替化合物VIIIa，得到黄色固体，收率54％。M.p.152-154℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.75(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，7.93-6.88(m，14H，Ar)，5.40-5.37(m，1H)，3.23-3.11(m，4H，piperazinyl-H)，2.79-2.67(m，4H，piperazinyl-H)，2.66-2.60(m，1H)，2.55-2.50(m，1H)，2.31-2.26(m，1H)，2.05-2.00(m，1H).ESI-MS m/z419[M+H]+。
实施例24 N-(3-(4-(4-氨基甲酰苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺(IXe) 操作过程如例20，只是用化合物Vb代替化合物V a，化合物VIIIc代替化合物VIIIa，得到淡黄色固体，收率65％。M.p.185℃(dec)。
1HNMR(δ，CDCl3)8.53(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.87-6.87(m，13H，Ar)，5.71(s，2H，NH2)，5.36-5.33(m，1H)，3.37-3.26(m，4H，piperazinyl-H)，2.70-2.54(m，4H，piperazinyl-H)，2.56-2.54(m，1H)，2.46-2.42(m，1H)，2.25-2.20(m，2H).ESI-MSm/z462[M+H]+。
实施例25 N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺(IXf) 操作过程如例20，只是用化合物Vb代替化合物V a，化合物VIIId代替化合物VIIIa，得到深黄色固体，收率67％。M.p.160-162℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.26(d，1H，J＝6.5Hz，NH)，7.86-6.85(m，13H，Ar)，5.33-5.30(m，1H)，3.38-3.29(m，4H，piperazinyl-H)，2.69-2.57(m，4H，piperazinyl-H)，2.56-2.43(m，2H)，2.30-2.19(m，1H)，2.08-2.01(m，1H).ESI-MSm/z444[M+H]+. 实施例26 N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺(IXg) 操作过程如例20，只是用化合物VIIId代替化合物VIIIa，得到淡黄色固体，收率63％。M.p.152-155℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.68(d，1H，J＝7.0Hz，NH)，7.83-6.82(m，14H，Ar)，5.38-5.34(m，1H)，3.27-3.14(m，4H，piperazinyl-H)，2.78-2.64(m，4H，pipe-razinyl-H)，2.62-2.59(m，1H)，2.50-2.45(m，1H)，2.31-2.24(m，2H).ESI-MS m/z426[M+H]+. 实施例27 N-(1-(4-氯苯基)-3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)丙基)-4-氟苯甲酰胺(IXh) 操作过程如例20，只是用化合物Ve代替化合物Va，用化合物VIIId代替化合物VIIIa，得到黄色固体，收率45％。M.p.121-123℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.63(d，1H，J＝6.5Hz，NH)，7.81-6.79(m，12H，Ar)，5.39-5.35(m，1H)，3.26-3.11(m，4H，piperazinyl-H)，2.70-2.60(m，4H，piperazinyl-H)，2.57-2.53(m，1H)，2.49-2.44(m，1H)，2.30-2.27(m，2H).ESI-MSm/z479[M+H]+. 实施例28 4-氯-N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺(IXi) 操作过程如例20，只是用化合物V c代替化合物V a，用化合物VIIId代替化合物VIIIa，得到深黄色固体，收率60％。m.p.143-145℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.59(d，1H，J＝6.5Hz，NH)，7.86-6.82(m，13H，Ar)，5.35-5.31(m，1H)，3.37-3.29(m，4H，piperazinyl-H)，2.69-2.54(m，4H，pip-erazinyl-H)，2.52-2.45(m，2H)，2.30-2.21(m，1H)，2.08-2.03(m，1H).ESI-MS m/z460[M+H]+. 实施例29 N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-三氟甲基苯甲酰胺(IXj) 操作过程如例20，只是用化合物Vd代替化合物Va，用化合物VIIId代替化合物VIIIa，得到深黄色固体，收率68％。M.p.158-160℃。
1HNMR(δ，CDCl3)8.68(d，1H，J＝6.0Hz，NH)，7.81-6.82(m，13H，Ar)，5.37-5.32(m，1H)，3.39-3.26(m，4H，piperazinyl-H)，2.65-2.53(m，4H，pipe-razinyl-H)，2.51-2.44(m，2H)，2.27-2.20(m，1H)，2.10-2.04(m，1H).ESI-MS m/z494[M+H]+. 实施例30 N-(1-(4-氯苯基)-3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)丙基)-4-氟苯甲酰胺盐酸盐(IXk) 将化合物IXh 9.5mg(0.02mmol)溶于盐酸饱和的乙酸乙酯中，室温搅拌12小时，有白色固体析出，抽滤得到10mg.产率为90％。
实施例31抗HIV融合抑制活性测量方法 (1)从蓝球藻菌株Anacystis nidulans R2(PCC7942)基因组DNA中克隆DnaE基因的N端(DnaE-N)和C端(DnaE-C)；从人巨噬细胞基因组中克隆CCR5基因，CD4基因； (2)将Anacystis nidulans R2DnaE-C(1-36aa)分别与两种Renilla荧光素酶基因C端(rLuc-C，111-311aa)通过overlap PCR将DnaE-C与rLuc-C拼接起来，在DnaE-C与rLuc-C之间加入CFNGT 5个氨基酸序列；将两种Renilla荧光素酶基因N端(rLuc-N，1-110aa)与Anacystis nidulans R2DnaE-N(37-152aa)通过overlap PCR将rLuc-N与DnaE-N拼接起来，在rLuc-N与DnaE-N之间加入GS两个氨基酸序列； (3)将上述构建的DnaE-C-rLuc-C及rLuc-N-DnaE-N，CCR5分别插入到质粒pCDNA3.1中，便可获得融合表达载体IpCDNA-DnaE-C-rLuc-C和融合表达载体IIpCDNA-rLuc-N-DnaE-N，重组表达载体pCDNA-CCR5；将CD4基因插入到表达载体pCMV-flag中获得重组载体pCMV-flag-CD4；从NIHAIDSResearch and Reference Reagent Prog-ram免费获取质粒pCAGGS-SF162-gp160； (4)HEK293细胞以3×105密度传代于96孔细胞培养板中，在含10％胎牛血清的DMEM培养基中，37℃，5％CO2环境培养。24小时后用磷酸钙转染试剂(invitrogen公司)共转染质粒pCDNA-DnaE-C-rLuc-C，pCDNA-CCR5，pCMV-flag-CD4，转染后继续培养12小时。CHO细胞以3×105密度传代于6孔细胞培养板中，在含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中，37℃，5％CO2环境培养。24小时后用Lipofect-amine 2000(invitrogen公司)共转染质粒pCAGGS-SF162-gp160，pCD NA-rLuc-N-DnaE-N，转染后继续培养12小时。
(5)将转染后的HEK293细胞和CHO细胞在96孔板中混合培养4小时，混合前培养基中加入待筛选的细胞融合拮抗药物。
(6)吸去上述培养板中的培养基，用PBS洗两次，再用Renilla LuciferaseAssay System(Promega公司)裂解液裂解细胞15min，按试剂盒要求加入反应底物，用化学发光检测仪(Berthold公司)测定荧光强度(延时1s，检测2s)，所得数据用于计算IC50。所得结果见表1 表1部分化合物对两种细胞膜融合抑制的初步结果
从上表可以看出，1)所合成的化合物中有5个化合物对两种细胞融合有极强的抑制活性，其中1个化合物达到了纳摩尔级的水平，另外6个化合物具有中等程度的抑制作用。2)从结构上分析，发现苯环对位具氰基取代对抑制融合是有益的。3)该类化合物有较好的抗HIV应用前景，因而具良好的商业价值。
权利要求
1.一种哌嗪类衍生物及其可药用的盐，具有以下结构通式(A)
其中
(1)R1为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8环烷基氧基、CF3、卤素、胺基、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、羟基、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基；
(2)G为CO、SO2、SO或OCO中的一种；
(3)R2和R3相同或不同，选用氢原子、C1-6烷基、C3-8环烷基、C5-10芳香性杂环基、C4-7饱和杂环基、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、羟基、乙酰基、氰基、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基；
(4)X为C1-6的烷基或者不存在。
2.根据权利要求1所述的一种哌嗪类衍生物及其可药用的盐，具有以下结构通式(IX)
其中
(1)R1为氢原子、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基；
(2)R3为氢原子、无取代、单取代、二取代或三取代的苯基中的一种，所述苯基的苯环上的取代基为氢原子、卤原子、乙酰基、氰基、含1-3个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧基；
(3)R4和R5相同或者不同，为氢、卤素或甲基中的一种。
3.根据权利要求2述的一种哌嗪类衍生物及其可药用的盐，其特征在于，具有下列化合物或其可药用的盐
N-(1-苯基-3-(4-(4-甲苯基哌嗪-1-基)丙基)苯甲酰胺；
4-氟-N-(1-苯基-3-(4-(4-甲苯基哌嗪-1-基)丙基)苯甲酰胺；
4-氟-N-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺；
N-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺；
N-(3-(4-(4-氨基甲酰苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺；
N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-氟苯甲酰胺；
N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺；
N-(1-(4-氯苯基)-3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)丙基)-4-氟苯甲酰胺；
4-氯-N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)苯甲酰胺；
N-(3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)-1-苯基丙基)-4-三氟甲基苯甲酰胺；
N-(1-(4-氯苯基)-3-(4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基)丙基)-4-氟苯甲酰胺盐酸盐。
4.根据权利要求2所述的哌嗪类衍生物及其可药用的盐的制备方法其特征在于，通过以下步骤实现
(1)化合物I与丙二酸、醋酸铵在极性溶剂中回流下经缩合和脱羧反应，过滤得到滤渣为化合物II，反应8～12小时；
(2)化合物II与四氢铝锂在无水溶剂中回流反应6～8小时，过滤，滤液浓缩得化合物III；
(3)化合物III与酰氯在三乙胺存在下，以二氯甲烷为溶剂，室温反应得到化合物IV，反应时间为2～4小时，产物经柱层析分离可得纯品；
(4)所得的化合物IV与草酰氯在无水二氯甲烷中，分别加入二甲基亚砜、三乙胺，经斯文氧化，得到化合物V，反应温度为-40～78℃，以-70～78℃为最佳，反应时间为6～8小时，产物经柱层析分离可得纯品；
(5)化合物VI与二氯亚砜在无水氯仿中，反应可直接得到氮芥化合物VII，反应温度为室温，反应时间为3～5小时；
(6)化合物VII与相应的伯胺在极性溶剂中，经环合得到化合物VIII，反应温度为120～160℃，反应时间为18～20小时，产物经柱层析可得纯品；
(7)化合物VIII与化合物V在溶剂中，经硼氢化钠还原胺化反应得到目标化合物IX，反应温度为室温，反应时间为12～15小时，产物经柱层析可得纯品；
反应式为
5.根据权利要求1或2所述的哌嗪类衍生物及其可药用的盐在制备抗HIV药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的哌嗪类衍生物及其可药用的盐的应用，其特征在于，所述药物由所述的哌嗪类衍生物及其可药用的盐与制剂允许的药物赋形剂或载体制备而成。
7.根据权利要求5所述的哌嗪类衍生物及其可药用的盐的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为固体制剂或液体制剂。
全文摘要
本发明提供一类哌嗪类衍生物及其可药用的盐，是以TAK-220和Maraviroc为先导化合物，采用电子等排的原理，将二者结构中的哌啶环用哌嗪环来代替，并且引入与Maraviroc类似的支链，从而得到一类哌嗪类衍生物。初步的药理活性筛选表明这些化合物具有拮抗CCR5活性，可在制备治疗由CCR5介导的如HIV感染、自身免疫性等疾病的药物中的应用；本发明具有以下结构通式
文档编号A61K31/495GK101768139SQ20101003979
公开日2010年7月7日 申请日期2010年1月15日 优先权日2010年1月15日
发明者周耐明, 刘滔, 胡永洲, 翁志勇 申请人:浙江大学