专利名称：包含表没食子儿茶素没食子酸酯与长春新碱的抑制肿瘤细胞增殖的组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药及基因工程领域，涉及抑制肿瘤细胞增殖的组合物，尤其涉及由表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Vincristine (长春新碱)制成的抑制肿瘤细胞增殖的组合物。
背景技术：
长春新碱是一种双吲哚型生物碱。分子式C46H58N409。存在于夹竹桃科植物长春花中。甲醇中重结晶时为针状结晶。熔点211 216°C，比旋光度+42° (氯仿)。溶于氯仿、丙酮和乙醇。其硫酸盐熔点观4 285°C，一 28° (甲醇)；盐酸盐熔点244 246°C (分解)。长春新碱能抗癌，疗效比长春碱约高10倍，可用于治疗急性淋巴细胞性白血病， 疗效较好，对其他急性白血病、何杰金氏病、淋巴肉瘤、网状细胞肉瘤和乳腺癌也有疗效。与长春花碱(vinblastine)、泛洛洛新及泛洛洗汀等一起含在蔓长春花(Vincamajor)中的生物碱。具有使细胞分裂(有丝分裂)在中期停止的作用，这与秋水仙素相似，但其作用比秋水仙素更强。与秋水仙素一样可以与微管蛋白结合而抑制其生物活性，但结合部位不同。另外它与秋水仙素不同的是对微管蛋白以外的蛋白质如肌动蛋白及10纳米细丝蛋白等也起作用。在临床医学上作为抗癌剂之一而被应用，特别是对造血器官的肿瘤比较有效。长春碱硫酸盐可用于治疗何杰金氏病和绒毛膜上皮癌，疗效较好；对淋巴肉瘤、网状细胞肉瘤、 急性白血病(VP，VDLP方案中的"V"为长春新碱，D为柔红霉素，"L"为门冬酰胺酶，"P"为泼尼松)、乳腺癌、肾母细胞瘤、卵巢癌、睾丸癌、神经母细胞瘤和恶性黑色素瘤等也有一定疗效。长春新碱虽然抗肿瘤作用良好，但毒副作用大，主要是神经毒性。长春新碱制备方法长春花粗粉加水搅拌，放置片刻，加苯冷浸，渗漉。取渗漉液加酒石酸萃取，过滤。滤液加氨水碱化，氯仿提取。氯仿液，减压回收氯仿。总生物碱加甲醇放置过夜，析晶过滤，结晶是异长春碱，滤液减压回收甲醇。纯化总生物碱加无水乙醇及5% 硫酸无水乙醇溶液，放置两天析晶过滤。结晶(长春碱，长春新碱混合物)加水溶解，氨水碱化，氯仿萃取。氯仿液加无水硫酸钠脱水，浓缩，拍松，干燥，经氧化铝柱色谱，用苯，氯仿混合液洗脱，分段收集。前段蒸干加5%硫酸无水乙醇为硫酸长春碱，中段为次长春碱，后段蒸干加5%硫酸无水乙醇为硫酸长春新碱。茶叶(tea ,camellia sinensis)是深受人们喜爱的饮品之一。全世界每年生产大约250万吨，其中20%为绿茶、78%为红茶、洲为乌龙茶。茶叶的种类虽然很多，但以绿茶为人瞩目。大量的体外研究及动物实验证明绿茶提取物有多种生物活性和药理效应，如防癌抗癌、抗血管生成、抗突变、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗炎、降血脂、抗血小板聚集等等，其中与癌症的关系是研究最为广泛、也是最复杂的有意义的重要课题。绿茶中的主要成分为茶多酚，占茶叶干重的30%左右，茶多酚中大部分为儿茶素， 表没食子儿茶素没食子酸酯〔(-)epigallocatechin gallate ( EGCG)〕含量最高，占儿茶素的80%左右。EGCG分子式为C22H18O11,分子量为458. 4。它是一种高效广谱无毒副作用的生物抗氧化剂，俗称没食子儿茶素没食子酸酯。没食子酸酯能有效清除引发多种疾病和衰老的体内自由基和过氧化物，提高人体免疫力，延缓衰老，具有优异的抗病毒、降血脂、 保鲜、美容等效能，在医药、保健、食品、日化等行业有广泛的用途。但是绿茶提取物毕竟不是细胞毒类药物，在体外对肿瘤细胞的直接杀伤作用不明显。绿茶提取物及其主要成分不会也不能取代现有的抗肿瘤药物，其独特价值在于作为肿瘤化疗中的生化调节剂，有望增强现有抗肿瘤药物的抗肿瘤活性，降低抗肿瘤药物的毒性。到目前为止，尚未见有关EGCG与Vincristine联合使用的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种抑制肿瘤细胞增殖的组合物，尤其涉及由表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Vincristine (长春新碱)制成的抑制肿瘤细胞增殖的组合物。本发明实验证实，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Vincristine (长春新碱) 制成的组合物，或在给予Vincristine (长春新碱)时联合使用表没食子儿茶素没食子酸酯可显著提高Vincristine抑制肿瘤细胞增殖的治疗效果。本发明所述的抑制肿瘤细胞增殖的组合物，包括活性成分和药剂学上必要的辅料，其特征在于，所述的活性成分是以下物质1)表没食子儿茶素没食子酸酯，2) Vincristine ；所述的表没食子儿茶素没食子酸酯和Vincristine的摩尔比为4000 :3 4
Io本发明中，所述的表没食子儿茶素没食子酸酯，其分子式为C22H18O11,分子量为 458. 4，可以通过市场销售途径获得。例如，本发明的EGCG购自Sigma公司，货号5(^99，英文全禾尔( )-cis-2- (3, 4, 5-Trihydroxyphenyl) -3, 4-dihydro-l (2H) -benzopyran-3, 5, 7 -triol 3-gallate, ( )-cis-3, 3' , 4' ,5,5' , 7-Hexahydroxy-flavane-3-gallate, EGCG ；CAS 号989-51-5。MDL 号MFCD00075940。本发明中，所述的Vincristine通用名长春新碱；Vincristine是作用于β微管V位点的促微管解聚药。本发明的长春新碱(盐)购自Sigma公司，货号为V8388，又禾尔为:22-0xovincaleukoblastine sulfate salt, Leurocristine sulfate salt, VCRj Vincristine sulfate salt。其结构式和相关信息如下
权利要求
1.一种抑制肿瘤细胞增殖的组合物，包括活性成分和药剂学上必要的辅料，其特征在于，所述的活性成分是以下物质1)表没食子儿茶素没食子酸酯，2)长春新碱；所述的表没食子儿茶素没食子酸酯和长春新碱的摩尔比为4000 :3 4 :1。
2.如权利要求1所述的抑制肿瘤细胞增殖的组合物，其特征在于，表没食子儿茶素没食子酸酯和长春新碱的摩尔比为400 1 8 1。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，表没食子儿茶素没食子酸酯和长春新碱的摩尔比为200:1 20:1。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，表没食子儿茶素没食子酸酯和长春新碱的摩尔比为80:1 60:1。
5.权利要求1所述的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征是，所述的肿瘤是肝癌。
7.一种抑制肿瘤细胞增长的方法，其特征在于，在肿瘤细胞中加入权利要求1所述组合物。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的肿瘤细胞是SK-Hep-1、YYl或者 SMMC7721 细胞。
全文摘要
本发明属于医药和基因工程领域，提供了一种抑制肿瘤细胞增殖的组合物。所述的抑制肿瘤细胞增殖的组合物，包括活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯和长春新碱以及药剂学上必要的辅料，所述的表没食子儿茶素没食子酸酯和长春新碱的摩尔比为40003～41。本发明实验证实，所述的表没食子儿茶素没食子酸酯与Vincristine制成的组合物，或在给予Vincristine时联合使用表没食子儿茶素没食子酸酯可显著提高Vincristine抑制肿瘤细胞增殖的治疗效果。对裸鼠肝脏和肾脏基本没有毒性，且活性成分中的表没食子儿茶素没食子酸酯资源丰富，价格低廉，在提高肿瘤的抑制率的同时，降低了肿瘤患者的治疗成本。
文档编号A61P35/00GK102526053SQ20101060250
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月23日 优先权日2010年12月23日
发明者余龙, 刘祖龙, 张明君, 朱恒锐 申请人:复旦大学