专利名称：用作丙型肝炎病毒ns3-丝氨酸蛋白酶抑制剂的新型肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的丙型肝炎病毒(“HCV”)蛋白酶抑制剂、包含一种或多种所述抑制剂的药用组合物、制备所述抑制剂的方法和使用所述抑制剂治疗丙型肝炎和相关疾病的方法。本发明特别公开用作HCV NS3/NS^丝氨酸蛋白酶抑制剂的新的肽化合物。
背景技术：
丙型肝炎病毒(HCV)为一种(+)_有义单链RNA病毒，它为非甲非乙型肝炎 (NANBH)的主要病原体，尤其是血液相关性NANBH(BB-NANBH)(参见国际专利申请公布号WO 89/04669和欧洲专利申请公布号EP 381 216)。NANBH不同于其它类型的病毒诱导性肝疾病，例如甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丁型(δ)肝炎病毒(HDV)、巨细胞病毒 (CMV)和埃-巴二氏病毒(EBV)、以及不同于其它形式的肝疾病，例如酒精中毒性肝疾病和原发性胆汁性肝硬化。最近，已经鉴定、克隆和表达出了多肽加工和病毒复制所必需的HCV蛋白酶(参见例如美国专利号5，712，145)。这种约3000个氨基酸的多蛋白自氨基末端至羧基末端包含核壳蛋白(C)、包膜蛋白(El和Ε2)以及几种非结构蛋白(NSl、2、3、4a、5a和5b)。NS3为约 68kda的蛋白，由HCV基因组约1893个核苷酸编码，并且具有2个不同的结构域(a)由约 200个N-末端氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶结构域；和(b)蛋白C-末端RNA依赖性ATP酶结构域。由于蛋白质序列、整体三维结构和催化机制的相似性，认为NS3蛋白酶是胰凝乳蛋白酶家族的一个成员。其它胰凝乳蛋白酶样酶有弹性蛋白酶、Xa因子、凝血酶、胰蛋白酶、 纤溶酶、尿激酶、tPA和PSA。HCV NS3丝氨酸蛋白酶与所述多肽(多蛋白)于NS3/NS^、 NS4a/NS4b, NS4b/NS5a和NS5a/NS^接点水解有关，因此在病毒复制期间负责生成四种病毒蛋白。这使HCV NS3丝氨酸蛋白酶成为抗病毒化学治疗的令人关注的目标。已经确定约^ida多肽的NS^蛋白是NS3丝氨酸蛋白酶活性的辅因子。NS3/NS^ 丝氨酸蛋白酶对NS3/NS^接点的自动裂解在分子内(即顺式)进行，而其它的裂解位点在分子间(即反式)进行。对HCV蛋白酶的天然裂解位点的分析揭示，Pl存在半胱氨酸和ΡΓ存在丝氨酸，并且这些残基在NS^/NS4b、NS4b/NSfe* NS5a/NS^3接点中是严格保守的。NS3/NS^接点包含Pl的苏氨酸和ΡΓ的丝氨酸。推定NS3/NS^上的半胱氨酸一Thr取代解释该接点需要顺式而不是反式加工。参见例如 Pizzi 等(1994)Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 91 =888-892, !^ailla等(1996) Folding & Design 1 :35_42。NS3/NS^裂解位点也比其它位点更耐受诱变。参见例如Kollykhalov等(1994) T. Virol. 68 :7525_7533。还发现，裂解位点上游区的酸性残基是有效裂解所需要的。参见例如Komoda等(1994) T. Virol. 68 :7351_7357。已报道的HCV蛋白酶抑制剂包括抗氧化剂(参见国际专利申请公布号WO98/14181)、某些肽类和肽类似物(参见国际专利申请公布号WO 98/17679，Landro 等(1997)Biochem. 36:9340-9348, Ingallinella 等(1998)Biochem. 37 :8906-8914, Llinas-Brunet 等(1998) Bioorg. Med, Chem. Lett. 8 :1713-1718)、基于 70-氨基酸多肽水蛭蛋白酶抑制剂c的抑制剂(Martin等(1998)Biochem. 37 :11459-11468,诜自人胰腺分泌胰蛋白酶抑制剂(hPSTI-C3)和小体所有组成成分(MBip)的抑制剂亲和性(Dimasi 等(1997)1. Virol, 71 :7461-7469), cVHE2 ( “camelized” 可变结构域抗体片段)(Martin 等(1997) Protein Eng. 10 :607-614)禾Π α 1-抗胰凝乳蛋白酶(ACT) (Elzouki 等)(1997) Τ. Hemt- 27 =42-28)。最近公开了设计用来选择性破坏丙型肝炎病毒RNA的核酶(参见 BiofforldToday 9(217) :4(1998 年 11 月 10 日))。另外参见1998年4月30日公开的PCT公布号WO 98/17679 (Vertex Pharmaceuyticals Incorporated)、1998 年 5 月 28 日公开的 W098/22496 (F. Hoffmann-La Roche AG)和 1999 年 2 月 18 日公开的 W099/07734 (Boehringer Ingelheim Canada Ltd)。HCV与肝硬化有关，而且诱发肝细胞癌。目前HCV感染患者的预后很差。由于缺乏免疫性或者与HCV感染有关的豁免性(remission)，HCV感染比起其它形式的肝炎更难以治疗。目前的资料表明，肝硬化诊断后四年的存活率小于50%。诊断为患有局灶性可切除性肝细胞癌的患者的五年存活率为10-30%，而局灶性不可切除性肝细胞癌的患者的五年存活率小于1%。参见A. Marchett 等 Synlett，丛，1000-1002 (1999)，它介绍了 HCVNS3 蛋白酶抑制剂的二环类似物的合成，其中所公开的化合物的结构式如下
权利要求
1. 一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，所述化合物选自具有下列结构的化合物
2.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性的方法，该方法包含使HCV蛋白酶与一种或多种权利要求1化合物接触。
3.权利要求2的方法，其中所述HCV蛋白酶为赂3/赂如蛋白酶。
4.权利要求3的方法，其中所述一种或多种化合物抑制!10^33/赂如蛋白酶。
5.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽加工的方法，该方法包括在加工所述多肽的条件下使包含HCV多肽的组合物与一种或多种权利要求1化合物接触。
6.权利要求2或5的方法，其还包括使用干扰素。
全文摘要
本发明公开了具有HCV蛋白酶抑制活性的新型化合物以及制备所述化合物的方法。在另一实施方案中，本发明公开了包含所述化合物的药用组合物以及将其用于治疗HCV蛋白酶相关性疾病的方法。
文档编号A61K45/00GK102206247SQ20111006519
公开日2011年10月5日 申请日期2001年7月19日 优先权日2000年7月21日
发明者A·K·甘古利, A·K·萨克塞纳, A·阿拉萨潘, B·桑塔纳姆, E·E·尧, F·G·恩约罗格, F·本尼特, H·A·瓦卡罗, H·王, J·L·麦克科尔米克, M·利姆-维尔比, O·E·莱维, P·A·平托, R·E·皮克, R·G·洛维, S·J·坎普, S·L·伯根, S·Y·塔穆拉, S·亨德拉塔, S·文卡特拉曼, T·N·帕雷克, V·M·吉里亚瓦拉班, W·吴, Y·黄, 刘怡宗, 朱昭宁, 覃天佑, 陈新海 申请人:先灵公司, 登德雷昂公司