专利名称：促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法
技术领域：
本发明属于生物技术制药工程中蛋白质药物口服吸收的技术领域。
背景技术：
随着生物技术的飞速发展，具有生物学活性的蛋白质药物被不断发现和开发上市。与化学药物相比，蛋白质药物具有作用靶点专一、不良反应少、药效作用强等特点，故其在现代疾病的预防和治疗中的应用日益广泛。但由于多肽和蛋白质药物本身的性质以及人体对其产生的屏障(如膜屏障、酶屏障等)，其非注射给药生物利用度低，使得这类药物常规给药途径一直以注射为主。对慢性疾病的治疗而言，诸如糖尿病、白细胞减少症，需要长期频繁注射给药，这给患者带来了诸多不便。蛋白质药物口服给药是一种方便并使患者依从性提高的给药方式，近二十年来，国内外对这一领域的研究异常活跃。蛋白质药物口服吸收机制也一直是生命科学领域关注的议题，一种机制是依靠某种传送机制介导的(如肠多肽转运系统)，从而将蛋白药物间接地通过细胞旁路转运入血，另外一个机制就是通过胞饮作用将蛋白质从血管外跨膜转运到小肠粘膜血管中。要成功开发蛋白质口服制剂，必须解决两个问题其一是使其在肠道的酶环境中得到保护，其二是使其顺利通过肠壁。目前现有的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料为将蚕蛹加ddH20浆液后，过滤，过滤后浆液离心，弃位于下层的沉淀，将位于上层的上清和位于中间层的成分合并后冻干，所得的冻干粉为促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料。该冻干粉对促进蛋白质药物口服吸收有一定的效果，但该效果还有待进一步提高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法，采用该方法制备而得的药用辅料能大大促进蛋白质药物口服吸收的效果。为了解决上述技术问题，本发明提供一种促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法，包括以下步骤1)、按照IOOg蚕蛹/280 320mL的(MH2O的用量比，将蚕蛹与ddH20混合后勻浆；所得的浆液经过滤，得过滤后浆液；2)、过滤后浆液于3 5°C下3000 4000rpm速度离心25 !35min，自然分成作为上层的上清、作为中间层的浅黄色成分和位于下层的沉淀；3)、将上清转移到分液漏斗中，于3 5°C下静置1. 5 2. 5h，收集位于上层的蚕蛹富脂蛋白成分，该蚕蛹富脂蛋白成分为包含漂浮的油脂及蛋白质的混合组份(主要是由漂浮的油脂及蛋白质这2种组份组成)；4)、将蚕蛹富脂蛋白成分冻干，所得的冻干粉为促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料。作为本发明的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法的改进步骤4)的冻干为先将蚕蛹富脂蛋白成分于-75 -85°C预先冷冻23 25h小时(最佳为于-80°C预先冷冻24h小时)，然后置入冻干机中按下列程序冷冻抽干制成冻干粉-40°C，2h —-25°C，12h —4°C，12h— 10°C，4h。作为本发明的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法的改进步骤1)的勻浆为于1300 1700rpm进行搅拌勻浆4 6min(最佳为于1500rpm进行搅拌勻浆5min)，过滤方式为纱布过滤。本发明以新鲜蚕蛹为原材料，采用生物分离的方法获得一种促进蛋白质药物口服吸收的新型药用辅料。本发明的促进蛋白质药物口服吸收的新型药用辅料的制备方法是采用新鲜蚕蛹为材料，在3 5°C (最佳为4°C)下加入双蒸水，进行勻浆、分离、纯化，收集蚕蛹中的富脂蛋白成分，然后冷冻干燥，即获得促进蛋白质药物口服吸收的新型药用辅料。本方法制备的新型药用辅料可用于重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子、胰岛素等蛋白质口服制剂的生产。在小鼠等动物试验中证实，利用本方法制备的新型药用辅料可以减少胃肠道内的蛋白酶、胰酶等消化酶对重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子、胰岛素等蛋白质的降解，促进这些药物通过肠粘膜血管进入血液，从而提高重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子、胰岛素口服的生物利用度。本方法适用于大规模生产，提高蛋白质药物口服生物利用度，应用价值大，市场开发前景广阔。本发明的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料取材于新鲜蚕蛹，在制备过程中未加入其他化学物质，而且蚕蛹为我国传统的保健食品，因此所得的药用辅料无毒害。本发明的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料实际使用时与蛋白质药物按照1000 2000 1的重量比混合后，然后按照蛋白质药物的常规口服剂量进行口服。
具体实施例方式下面结合实施例详细阐述本发明的具体内容实施例1、一种促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法(即蚕蛹富脂蛋白成分的分离与制备)，依次进行以下步骤1)、取新鲜的蚕蛹500g分批放入勻浆机里，并按照每IOOg蚕蛹加入300mL的ddH20的比例加入ddH20混合后，于1500rpm进行搅拌勻浆5min，所得的浆液经过纱布过滤以除去蚕蛹外壳；得过滤后浆液；2)、步骤1)所得的过滤后浆液转移到离心杯中在4°C下于3500rpm速度离心30min,自然分成作为上层的上清、作为中间层的浅黄色成分和位于下层的沉淀；弃下层沉淀和中间层的浅黄色成分；3)、将步骤2)所得的上清转移到2000mL分液漏斗中，在4°C下静置2h，收集位于上层的蚕蛹富脂蛋白成分，该蚕蛹富脂蛋白成分为主要包含漂浮的油脂及蛋白质(为密度较低的蛋白质)的混合组份；4)、先将蚕蛹富脂蛋白组份于-80°C预先冷冻24h小时，再置入冻干机中按下列程序冷冻抽干制成冻干粉-40°C，2h — -25°C，12h — 4°C，12h — 10°C，4h，共制得冻干粉50g，备用。该冻干粉为促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料。试验1、以下是按照本发明方法制备的蚕蛹富脂蛋白成分(即实施例1所得的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料)作为重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF，大肠杆菌表达，厦门特宝生物工程股份有限公司生产，以下简称rhGM-CSF冻干粉针)载药的药用辅料为例说明其促进蛋白质药物经胃肠道给药途径吸收入血的药学试验1、蚕蛹富脂蛋白成分促进rhGM-CSF 口服吸收的小鼠试验方法试验安排每组小鼠数量为10只，分别于给药后的0、30、60min眼眶静脉丛取血，然后1500rpm离心lOmin，取出的血清用于ELISA(酶联免疫吸附法)检测并分析小鼠血清中rhGM-CSF浓度，试验分组如下(1)阳性对照组皮下注射rhGM-CSF，取150 μ g的rhGM-CSF冻干粉针溶于定容至IOmL的ddH20中，然后按照0. 2mL/10g的剂量在小鼠的头颈部皮下注射；(2)阴性对照组a 将2g已分离制备好的蚕蛹富脂蛋白层组份(即实施例1所得的药用辅料)溶于定容至IOmL的ddH20中，充分溶解混勻，然后按照0. 2mL/10g的剂量给
小鼠灌胃；(3)阴性对照组b 将1500 μ g的rhGM-CSF冻干粉针溶于定容至IOmL的ddH20中，然后按照0. 2mL/10g的剂量给小鼠灌胃；(4)溶媒对照组取ddH2010mL，然后按照O. 2mL/10g的剂量给小鼠灌胃；(5)试验组将2g已分离制备好的蚕蛹富脂蛋白层组份(即实施例1所得的药用辅料)和1500 μ g的rhGM-CSF冻干粉针溶于定容至IOmL的ddH20中，充分溶解混勻，在4°C下静置池后按照0. 2mL/10g的剂量给小鼠灌胃；2、蚕蛹富脂蛋白成分促进rhGM-CSF 口服吸收的小鼠试验结果试验安排每组小鼠10只，分别于给药后的0、30、60min眼眶静脉丛取血，然后1500rpm离心lOmin，取出的血清用于ELISA检测并分析小鼠血清中rhGM-CSF浓度，结果见表1 表1.小鼠口服蚕蛹富脂蛋白成分载药的rhGM-CSF后血药浓度(ng/L)变化
权利要求
1.促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法，其特征是包括以下步骤1)、按照IOOg蚕蛹/280 320mL的ddH20的用量比，将蚕蛹与ddH20混合后勻浆；所得的浆液经过滤，得过滤后浆液；2)、所述过滤后浆液于3 5°C下3000 4000rpm速度离心25 35min，自然分成作为上层的上清、作为中间层的浅黄色成分和位于下层的沉淀；3)、将所述上清转移到分液漏斗中，于3 5°C下静置1.5 2. 5h，收集位于上层的蚕蛹富脂蛋白成分，所述蚕蛹富脂蛋白成分为包含漂浮的油脂及蛋白质的混合组份；4)、将所述蚕蛹富脂蛋白成分冻干，所得的冻干粉为促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料。
2.根据权利要求1所述的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法，其特征是所述步骤4)的冻干为先将蚕蛹富脂蛋白成分于-75 _85°C预先冷冻23 25h小时，然后置入冻干机中按下列程序冷冻抽干制成冻干粉-40°C，2h — -25°C,12h — 4°C，12h — 10°C，4h。
3.根据权利要求1或2所述的促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法，其特征是所述步骤1)的勻浆为于1300 1700rpm进行搅拌勻浆4 6min，过滤方式为纱布过滤ο
全文摘要
本发明公开了一种促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料的制备方法，包括以下步骤1)、按照100g蚕蛹/280～320mL的ddH2O的用量比，将蚕蛹与ddH2O混合后匀浆；所得的浆液经过滤；2)、过滤后浆液于3～5℃下3000～4000rpm速度离心25～35min，自然分成作为上层的上清、作为中间层的浅黄色成分和位于下层的沉淀；3)、将上清转移到分液漏斗中，于3～5℃下静置1.5～2.5h，收集位于上层的蚕蛹富脂蛋白成分；4)、将蚕蛹富脂蛋白成分冻干，所得的冻干粉为促进蛋白质药物口服吸收的药用辅料。采用该方法制备而得的药用辅料能大大促进蛋白质药物口服吸收的效果。
文档编号A61K47/44GK102552927SQ20121000459
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月9日 优先权日2012年1月9日
发明者于威, 吕正兵, 张文平, 张耀洲 申请人:浙江理工大学