治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法

专利名称：治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法，具体的说，是一种使用了抑制转运蛋白作用，促进吸收的，用于治疗心脑血管疾病的灯盏乙素的药物组合物及制备方法。
背景技术：
灯盖花素是从菊科植物短亭飞蓬(Erigero n breviscapus (Vant. ) Hand Mazz)的干燥全草中提取的总黄酮类成分。灯盏乙素占灯盏花素90%以上，化学名为4，5，6-三羟基黄酮-7-葡萄糖醛酸苷。近年来，灯盏乙素用来治疗心脑血管疾病，研究表明其具有保护神经元与防治细胞毒性、调节血管内皮功能、缓解脑血管痉挛、改善微循环、降低血脂、调节免疫及减轻炎症反应、抗自由基损伤、抑制血小板凝集等作用。从20世纪60年代到90年代临床开发了注射剂、片剂和颗粒剂等剂型，但是这些药物制剂的生物利用度依然有待提高，灯盏乙素作为治疗和预防心脑血管疾病具有特殊疗效的药物，市场前景广阔，经济价值很高。灯盏乙素在体内的生物利用度很差，不仅归因于灯盏乙素的水溶性差，而且更重要的是小肠中的转运蛋白如人多药耐药相关蛋白2 (Multidrug resistance-associatedprotein 2，MRP2)等会外排药物导致其吸收量下降，所以极大限制了灯盏乙素制剂在临床上的使用和普及。MRP2分布在肝、小肠、肾和脑组织中的顶端膜，表达水平差异大，MRP2具有多种结合位点，是谷胱甘肽依赖的外排泵，并且对抑制剂的选择性很高，研究发现很多种药用辅料都有抑制人小肠上皮细胞中MRP2促进药物吸收的作用。现阶段文献报道的筛选抑制MRP2作用药物或者药用辅料的方法很多，最主要的是采用人结肠癌上皮细胞(Caco-2)模型实验和昆虫sf9过表达MRP2膜囊转运实验的方法，而有很多种药用辅料如聚乙二醇等被报道具有抑制小肠上皮细胞中MRP2促进药物吸收的作用。通过中国专利检索发现已有专利多数是对灯盏花素不同剂型制备方法的保护在中国专利CN1875981 (公开号)中记载了高春平发明的“含有灯盏花素注射乳剂及其制备方法”。其中涉及发明了一种制备成冻干乳剂的灯盏花素注射乳剂及其制备方法。在中国专利CN 1593449 (公开号)中记载了王兵等发明的“灯盏花素自乳化软胶囊及其制备方法”。其涉及发明了一种优化配方的灯盏花素自乳化软胶囊及其制备方法。在中国专利CN 1383817 (公开号)中记载了张均寿等发明的“口服灯盏花素缓释制剂”。其涉及发明了延长药物作用时间的口服灯盏花素缓释制剂。在中国专利CN 1596905 (公开号)中记载了谢亚苏发明的“灯盏花素分散片”。其涉及发明了一种适合于特殊病人群的灯盏花素分散片。在中国专利CN 101336886 (公开号)中记载了吴正红等发明的“一种灯盏花素的可溶制剂”。其涉及发明了一种使用树状聚合物来实现灯盏花素增溶作用的制剂。在中国专利CN 102048691A (公开号)中记载了唐勇发明的“含灯盏花素的口腔喷雾剂及其制备方法”。其涉及发明了一种起效迅速的含灯盏花素的口腔喷雾剂及其制备方法。
在中国专利CN 101543481 (公开号)中记载了张建立等发明的“一种双层灯盏花素缓释片及制备方法”。其涉及发明了含有速释层和缓释层的双层灯盏花素缓释片及制备方法。在中国专利CN101439041 (公开号)中记载了李永强等发明的“一种含灯盏花素的中药颗粒及其制备方法”。其涉及发明了制备成球化颗粒的一种含灯盏花素的中药颗粒及其制备方法。在中国专利CN 101088505 (公开号)中记载了王义明等发明的“灯盏花素聚合物纳米制剂及其制备方法”。其涉及发明了制备成纳米粒的灯盏花素聚合物纳米制剂及其制备方法。在中国专利CN 1965848 (公开号)中记载了任杨帆发明的“一种灯盏花素冻干粉针及其制备工艺”。其涉及发明了一种药物含量较高的灯盏花素冻干粉针及其制备工艺。 在中国专利CN1939320 (公开号)中记载了翁伟宇等发明的“灯盏花素泡腾干混悬剂及制备方法”。其涉及发明了分散迅速的灯盏花素泡腾干混悬剂及制备方法。在中国专利CN1843368 (公开号)中记载了罗国安等发明的“一种灯盏花素长循环纳米脂质体及其制备方法”。其涉及发明了一种粒径均一的一种灯盏花素长循环纳米脂质体及其制备方法。在中国专利CN 1830451 (公开号)中记载了张玉梅发明的“灯盏花素葡萄糖注射液的制备方法”。其涉及发明了一种稳定性好的灯盏花素葡萄糖注射液的制备方法。

发明内容
本发明的目的是提供一种治疗心脑血管疾病的灯盏乙素的药物组合物，该药物组合物抑制了小肠上皮细胞中多药耐药相关蛋白2(MRP2)对灯盏乙素的外排作用，灯盏乙素吸收好，生物利用度高。实现上述目的的技术方案如下一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂20%-25%、乳化剂40%-50%，油相25%-30%和灯盏乙素O. 1%-0. 3%，上述组分的总和为
100% ο在其中一个实施例中，一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，所述的助乳化剂为
二乙二醇单乙基醚。在实施例中，一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，所述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或者任意两种的混合物或者三种的混合物。在实施例中，一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，所述的油相为单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)中的一种或者两种的混合物。本发明的另一目的是提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，该方法简便。实现上述目的的技术方案如下一种治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤(I)将灯盏乙素分散于乳化剂和助乳化剂中，得混合物，
(2 )将混合物分散于油相中，于25°C -37°C恒温搅拌使组份混匀，使药物溶解完全后得到灯盏乙素药物组合物。本发明的另一个目的是揭示一种治疗心脑血管疾病的药物组合物的用途，实现上述目的的技术方案如下在另一个实施例中，一种治疗心脑血管疾病的药物组合物的用途，二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)，通过Caco-2模型实验和昆虫sf9过表达MRP2膜囊转运实验证明，具有抑制人小肠中MRP2，促进灯盏乙素吸收的重要作用。在另一个实施例中，一种治疗心脑血管疾病的药物组合物的用途，所述的灯盏乙素的药物组合物可加工制备成口服微乳剂、固体自微乳缓释或控释剂，用于心脑血管疾病的治疗。 在另一个实施例中，一种治疗心脑血管疾病的药物组合物的用途，所述的灯盏乙素的药物组合物，有效提高了灯盏乙素的生物利用度，并且制备方法简便。本发明利用治疗心脑血管疾病的药物组合物(以下也称灯盏乙素药物组合物)中的药用辅料能够抑制小肠上皮细胞中MRP2而促进灯盏乙素的药物组合物的吸收，通过药物组合配方中药用辅料对MRP2抑制作用的筛选与制备技术研究，得到灯盏乙素的药物组合物，并将制剂研究与临床应用结合，为发现具有最佳吸收效果的灯盏乙素的药物组合物提供基础科学研究数据。本发明通过灯盏乙素与辅料二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(CapmulMCM)制备的组合物，通过Caco-2模型实验和昆虫sf9过表达MRP2膜囊转运实验证明，具有抑制人小肠中MRP2，促进灯盏乙素吸收的重要作用。所述的灯盏乙素的药物组合物加工制备成口服微乳剂、固体自微乳缓释或控释剂，用于心脑血管疾病的治疗。本发明所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，克服了小肠上皮细胞多药耐药相关蛋白2对灯盏乙素的外排作用，促进灯盏乙素吸收，有效提高了灯盏乙素的生物利用度，并且制备方法简便。概而言之，本发明所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法简便，灯盏乙素的吸收好，生物利用度高。
具体实施例方式Caco-2细胞是人结肠癌上皮细胞，含有与小肠刷状缘上皮相关的酶系，如P糖蛋白和多药耐药相关蛋白等，在多孔可渗透的聚碳酯膜上生长的Caco-2细胞可以作为小肠吸收模型筛选抑制转运蛋白的药物或者药用辅料。通过选用多药耐药相关蛋白2的抑制剂MK571，确定了灯盏乙素为多药耐药相关蛋白2的底物，所以根据灯盏乙素分别与二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的混合物在Caco-2细胞模型从基底侧向顶侧之间的正向和逆向转运量，得到Caco-2细胞模型对它们的外排率，与不加药用辅料的灯盏乙素做比较，证明所选药用辅料具有抑制MRP2转运蛋白促进小肠吸收的作用。MRP2膜囊转运实验使用了过表达MRP2的sf9昆虫细胞膜囊，因为MRP2转运蛋白的主要功能时单向的，消耗ATP来转运ATP来转运两性阴离子化合物，在完整的细胞中很难灵活的调节ATP浓度，所以研究MRP2的底物特异性和筛选抑制剂方面，此具有很大优点，MRP2膜囊转运实验分为两部分，首先是通过过表达MRP2的膜确定二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的ATP酶活性，然后过表达MRP2的囊进行抑制性实验，比较与灯盏乙素对转运蛋白的抑制作用。灯盏乙素药物组合物可加工制备成口服微乳剂、固体自微乳缓释或控释剂而用于心脑血管疾病的治疗。以下通过实施例对本发明做进一步的阐释。实施例I :一种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂24%、乳化剂47. 7%，油相28%和药物O. 3%。所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的混合物(重量比为 I :1)。所述的油相为单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM，购于美国Abitec公司，以下相同)的混合物(重量比为I :1)。制备方法先将称取的二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的助乳化剂和乳化剂混合均匀，再灯盏乙素分散于其中，然后缓慢加入混合均匀的单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的油相，25°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。实施例2 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂23. 6%、乳化剂46. 3%，油相30%和药物O. 1%。所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的混合物(重量比为4:1)。所述的油相为单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的混合物(重量比为2 1) ο制备方法先将灯盏乙素分散于混合均匀的单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的油相，然后缓慢加入混合均匀的二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的助乳化剂和乳化剂，37°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。实施例3 —种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂20%、乳化剂49. 9%,油相30%和药物O. 1%。
所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的混合物(重量比为1:1:1)。所述的油相为单亚油酸甘油酯。制备方法先将灯盏乙素分散于单亚油酸甘油酯，然后缓慢加入混合均匀的二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的助乳化剂和乳化齐U，37°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。 实施例4 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂25%、乳化剂45%，油相29. 8%和药物O. 2%。所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油。所述的油相为椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)。制备方法先将灯盏乙素分散于椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)，然后缓慢加入混合均匀的二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油的助乳化剂和乳化剂，25°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。实施例5 —种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂21%、乳化剂49. 7%，油相29%和药物O. 3%。所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯。所述的油相为单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的混合物(重量比为I :3)。制备方法先将灯盏乙素分散于混合均匀的单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的油相，然后缓慢加入混合均匀的二乙二醇单乙基醚和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的助乳化剂和乳化剂，25°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。实施例6 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂22. 3%、乳化剂50%,油相27. 5%和药物O. 2%。所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油的混合物(重量比为I :I)。所述的油相为单亚油酸甘油酯。制备方法先将灯盏乙素分散于单亚油酸甘油酯，然后缓慢加入混合均匀的二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油的助乳化剂和乳化剂，30°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。实施例7 一种治疗心脑血管疾病的药物组合物由以下的重 量百分比的组份制备而成助乳化剂20%、乳化剂49. 9%,油相30%和药物O. 1%。所述的药物为灯盏乙素。所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。所述的乳化剂为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯。所述的油相为椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)。制备方法先将灯盏乙素分散于椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)，然后缓慢加入混合均匀的二乙二醇单乙基醚和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的助乳化剂和乳化剂，27°C恒温磁力搅拌使组分混匀，使药物溶解完全，得到灯盏乙素药物组合物。需要说明的问题由于灯盏乙素是一种水溶性较差，化学性质不稳定，而且容易脱去一个糖形成灯盏乙素苷元的黄酮类化合物，所以用于制备灯盏乙素的药物组合物中温度应控制在25°C -37°C范围内。每种油和表面活性剂对灯盏乙素的溶解性质不同，造成在使用不同比例油和表面活性剂条件下制备灯盏乙素药物组合物时，本领域的技术人员可根据常识，将其实验的磁力搅拌温度存在一定差异性和变化区间范围。实施例8 将浓度为50 μ M灯盏乙素的单体，与浓度均为50 μ M二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)分别混合，分别在多孔可渗透聚碳酯膜上培养21天的Caco-2细胞模型的顶侧加入400 μ L样品和底侧加入600μ L空白缓冲液，然后分别在Caco-2细胞模型的顶侧加入400 μ L空白缓冲液和在底侧加入600 μ L样品，根据从基底侧和顶侧膜透出的底物灯盏乙素的含量得到的表观渗透系数(Papp)的比值计算出外排率，结果见表I。从表I中数据可以看出，六种药用辅料与灯盏乙素的混合物的外排率比相同浓度的灯盏乙素单体的外排率下降了很多，说明在药用组合物中选用的几种药用组合物具有促进药物吸收的作用。证明二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)具有MRP2抑制作用。在昆虫Sf9过表达MRP2膜的ATP酶活性实验的96孔板的实验中，根据标准孔的磷酸标准曲线，在样品孔中选择E2-17 β G作为MRP2底物，与钒酸钠对照孔相对比，得到浓度均为50 μ M的灯盏乙素单体，二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)的ATP酶活性激动作用，结果见表I。
在昆虫Sf9过表达MRP2囊的MRP2抑制作用实验中，在96孔板上以羧苯磺酸作为阳性对照溶液，在六种药用辅料的半数抑制浓度附近选取5 μ M，10 μ M，25 μ M，50 μ M浓度，以MgATP和MgAMP分别加入两组加样相同的样品孔中，37°C下反应40min，加入O. 2ml终止缓冲液终止，然后快速转移至96孔滤板上，通过O. 7 μ m的玻璃纤维滤膜进行快速过滤抽滤，ATP依赖性转运为两种转运中灯盏乙素含量的差值，实验结果见表I。以上实验结果证明二乙二醇单乙基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯(Capmul MCM)是具有抑制人小肠中MRP2的药用辅料，具有促进药物组合物中药物口服吸收的重要作用。表I实施例8抑制MRP2作用的Caco-2外排率和MRP2膜囊转运结果
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，由以下的重量百分比的组份制备而成助乳化剂20%-25%、乳化剂40%-50%，油相25%-30%和灯盏乙素O. 1%-0. 3%，上述组分的总和为100%。
2.根据权利要求I所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，所述的助乳化剂为二乙二醇单乙基醚。
3.根据权利要求I所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，所述的乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或者任意两种的混合物或者三种的混合物。
4.根据权利要求1-3任一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，所述的油相为单亚油酸甘油酯和椰子油辛酸癸酸甘油酯中的一种或者两种的混合物。
5.一种制备权利要求1-4任一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)将灯盏乙素分散于乳化剂和助乳化剂中，得混合物， (2)再将混合物分散于油相中，于25°C_37°C恒温搅拌使组份混匀，使药物溶解完全后得到所述药物组合物。
全文摘要
本发明涉及一种用于治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法；该药物组合物由以下的重量百分比的组份制备而成灯盏乙素0.1%-0.3%、助乳化剂20%-25%、乳化剂40%-50%和油相25%-30%；该药物组合物的制备方法为包括如下步骤(1)将灯盏乙素分散于乳化剂和助乳化剂中，得混合物;(2)再将混合物分散于油相中，于25℃-37℃恒温磁力搅拌使组份混匀，使药物溶解完全后得到灯盏乙素的药物组合物。该药物组合物通过在处方中选用具有抑制多药耐药相关蛋白2的药用辅料，而有效提高了灯盏乙素的吸收和生物利用度，并且制备方法简便，同时这种药物组合物可应用于制备多种口服给药剂型。
文档编号A61K47/34GK102805751SQ20121030889
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月27日 优先权日2012年8月27日
发明者易涛, 李良, 林伟基 申请人:澳门科技大学