专利名称：冰片-姜黄素脂质体及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，涉及一种抗Hiv-I相关神经认知障碍的药物，特别涉及一种冰片-姜黄素脂质体及其制备方法与其在制备抗HIV-I相关神经认知障碍药物中的应用。
背景技术：
世界卫生组织(WHO)认为HIV (human immunodeficiency virus)疾病是目前对公众健康最大的威胁。目前全球艾滋病感染人数约6000万，2500万人死于艾滋病相关疾病。依据卫生部和联合国艾滋病规划署、WHO评价结果，截至2011年底，我国现存活感染者和病人约78万人，其中病人约15. 4万人，死亡约8万人。在由HIV-I引起的全球艾滋病中，由于进行性病毒感染的存在，约有40 60%的HIV患者发展为HIV相关神经认知障碍·(HIV-associated neurocognitive disorder, HAND),即认知、运动或行为损伤。HAND 中认知功能障碍的相关病理特征是单核巨噬细胞的浸润、多核巨细胞的形成、星形神经胶质细胞及小神经胶质细胞的结节的形成、髓磷脂脱失、血脑屏障(BBB)的破坏和神经功能缺失。神经损伤与树突分枝改变及核周体体积减小同时发生。这些损伤有些是可逆的。HIV-I感染早期，HIV-I就进入大脑，在中枢神经系统(CNS)中长期存在。所以，SP使治疗控制了其它部位的HIV-I复制，病毒仍然可以在脑中继续复制。随着高效抗逆转录病毒药物的应用，艾滋病患者的寿命逐年延长，但由于一些抗逆转录病毒的药物无法有效地通过血脑屏障进入脑实质，所以尽管病人用药后可以活得更久一点，但他们面临着随后患HAND的危险，且HAND是引起AIDS患者死亡的主要原因之一。于是HAND致患者生存质量减低、死亡率升高等问题凸显出来。如何防治HAND的发生发展已成为医学研究的重大课题。目前，HAND患者在全球范围内日益增加，但是临床并没有有效的药物用于治疗HAND，研究指出如果HAND患者不经任何药物治疗，将会在4个月内死亡。临床治疗艾滋病的药物自1987年第I个抗HIV药物叠氮胸苷(AZT)用于治疗艾滋病以来，美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市的抗艾滋病药物和剂型已有28种，但多为针对HIV的复制为靶点，对隐匿在中枢神经系统内的HIV效果甚微，同时中枢神经系统的损伤多以HIV引起的免疫损伤为主，故目前所用的高效抗逆转录酶药物(HARRT)对艾滋痴呆的防治几乎无任何益处。且西药作用较为单一，毒副反应大，价格昂贵，限制了该类药物的普及。目前，国内外学者并没有找到一种效果明显且毒副作用小的抗艾滋病相关认知障碍药物。专利号为ZL 200710027098. X的专利业已报道中药单体姜黄素(curcumin)在治疗艾滋痴呆上的积极作用，姜黄素具有明确改善HIV-I糖蛋白gpl20所致大鼠学习记忆障碍的能力，且无任何毒副作用。但姜黄素水溶性差，体外容易被氧化，难以穿过血脑屏障进入脑实质，口服给药的姜黄素大部分在肠胃道被代谢，因此给姜黄素在防治HAND的临床应用带来一定难度。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种冰片-姜黄素脂质体。本发明的另一目的在于提供上述冰片-姜黄素脂质体的制备方法。本发明的再一目的在于提供上述冰片-姜黄素脂质体的应用。本发明的目的通过下述技术方案实现一种冰片-姜黄素脂质体，包括如下按质量份数计的组分卵磷脂270 330份、胆固醇90 110份、姜黄素O. 9 I. I份和冰片
O.09 O. 11 份。 优选的，所述的冰片-姜黄素脂质体包括如下按质量份数计的组分卵磷脂300份、胆固醇100份、姜黄素I份和冰片O. I份。优选的，所述的冰片-姜黄素脂质体还包括O 11质量份氧化保护剂，更优选的，氧化保护剂的量为10质量份；所述的氧化保护剂优选为维生素E。上述冰片-姜黄素脂质体的制备方法，包括如下步骤(I)取270 330质量份卵磷脂、90 110质量份胆固醇、O. 9 I. I质量份姜黄素、O. 09 O. 11质量份冰片和O 11质量份氧化保护剂用无水乙醇溶解，于旋转蒸发仪上旋蒸至无水乙醇完全挥发后形成均匀薄膜。(2)按每3g卵磷脂加5mL PBS (磷酸盐缓冲液)的比例加PBS至步骤(I)所形成的薄膜中，孵育3h以上，再通过水合反应使薄膜和PBS形成乳状液。(3)将步骤(2)所得的乳状液超声处理后，再通过0.45 μ m微孔滤膜整粒即得到冰片-姜黄素脂质体。步骤(I)中所述的氧化保护剂的量优选为9 11质量份；所述的氧化保护剂优选为维生素E。步骤(I)中所述的旋蒸优选为35°C水浴条件下进行。步骤(2)中所述的PBS 优选为 pH 7. 0、0· 03mol/L 的 PBS。步骤(2)中所述的孵育优选为35°C下进行。步骤(2)中所述的水合反应优选为35°C水浴条件下在旋转蒸发仪上旋转进行。步骤(3)中所述的超声处理优选为80KHz超声处理lOmin。上述冰片-姜黄素脂质体在制备抗HIV相关神经认知障碍药物中的应用，冰片-姜黄素脂质体是一种新型的抗HIV相关神经认知障碍的药物，其可制备成适合口服的任何剂型，如片剂、胶囊剂、冲剂、口服液、咀嚼片等。本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果(I)本发明提供的冰片-姜黄素脂质体无毒副作用且含有氧化保护剂，可通过血脑屏障，提高了姜黄素的中枢药效作用和生物利用度，对治疗HAND针对性强，效果好。(2)本发明提供的冰片-姜黄素脂质体所需原料药材药源丰富、价格低廉，生产可行，适合制备成任何可口服剂型。
图I是不同组SD大鼠血液中姜黄素浓度-时间曲线图。图2是不同组SD大鼠脑吸收的姜黄素含量高效液相色谱峰图。
图3是Morris水迷宫检测不同制剂药物对SD大鼠定位航行实验的影响图。
具体实施例方式下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例I冰片-姜黄素脂质体的制备取3g卵磷脂、Ig胆固醇、IOmg姜黄素、Img冰片和IOOmg维生素E溶于无水乙醇中，于35°C恒温水浴条件下在旋转蒸发仪上旋蒸至无水乙醇完全挥发后形成均匀薄膜；力口入5mL O. 03mol/L的PBS (pH 7. O), 35°C孵育3h，于35°C恒温水浴条件下在旋转蒸发仪上旋转水合至形成乳状溶液；将乳状溶液80KHz超声处理lOmin，再通过O. 45 μ m微孔滤膜整粒即得到冰片-姜黄素脂质体。通过分光光度法(检测波长为424nm)测定所得冰片-姜黄素脂质体的包封率为75%左右。
实施例2不同制剂药物进入SD大鼠血液和脑组织速度的比较将Spraugue-Dawley (SD )成年雌雄大鼠分为姜黄素组、姜黄素脂质体组和冰片-姜黄素脂质体组，每组8只雌雄各半，分别灌胃给药姜黄素单体(IOmg姜黄素溶于5mLpH 7. 0、0. 03mol/L的PBS得到姜黄素)、姜黄素脂质体(按实施例I的条件不加冰片制备得到姜黄素脂质体)、冰片-姜黄素脂质体(由实施例I制备得到)，5mL/只。给药后15、30、45、60、90、120、150min断尾取血并通过高效液相色谱测定血液中姜黄素的浓度，以时间为横坐标，血液中姜黄素浓度为纵坐标，制备药浓度-时间曲线。结果如图I所示姜黄素脂质体及冰片-姜黄素脂质体组的入血速度明显快于姜黄素，在O. 25h即出现血药浓度最大值，而姜黄素组在O. 75h才出现血药浓度最大值。灌胃给药一周后将大鼠处死取脑组织，通过高效液相色谱测定脑组织中姜黄素的含量；大鼠脑组织样品处理方法为大鼠断头处死后，迅速取出250±50mg脑组织，放入冰中冷冻，加入O. lmol/L的乙酸乙酯4mL,冰浴下研磨成勻衆；4°C > 12000r/min离心20min,收集上层有机相，下层继续用乙酸乙酯4mL提取两次，合并三次收集的有机相层；氮气过夜吹干后，残渣用甲醇ImL溶解，3000r/min离心IOmin后，吸取上清液，4°C保存备用；进样前需经O. 45 μ m微孔滤膜滤过。结果如图2和表I所示姜黄素脂质体组SD大鼠脑内姜黄素的含量多于姜黄素组(P < O. 05)，表明制备成脂质体后，有利于姜黄素的吸收；冰片-姜黄素脂质体组SD大鼠脑内姜黄素的含量与姜黄素脂质体组相比明显提高(P < O. 05)，表明冰片可起到促进药物通过血脑屏障的作用。表I各组样品脑吸收含量的比较(n=3)
分组N吸光度(1(Τ3)
姜黄素组31.57±0.82
姜黄素脂质体组30.98 ±0.30*
冰片-姜黄素脂质体组30.70±0.24*#*Ρ < O. 05与姜黄素组比较，flP < O. 05与姜黄素脂质体组比较。
实施例3不同制剂药物对gpl20所致大鼠学习记忆障碍的影响用Morris水迷宫检测各组大鼠的空间学习能力，实验动物为SD成年雌雄大鼠，每组15只，随机抽取，分组如下 对照组侧脑室不插管+双蒸水灌胃；假手术组侧脑室插管+人工大鼠脑脊液+双蒸水灌胃；模型组(gpl20):侧脑室插管+gpl20+双蒸水灌胃；gpl20+姜黄素单体组侧脑室插管+gpl20+姜黄素单体灌胃；gpl20+姜黄素脂质体组侧脑室插管+gpl20+姜黄素脂质体灌胃；
gpl20+冰片-姜黄素脂质体组侧脑室插管+gpl20+冰片-姜黄素脂质体灌胃。将除对照组大鼠外其它各组大鼠进行侧脑室插管固定术。腹腔注射1%戊巴比妥钠40 60mg/kg，大鼠完全麻醉后，超净工作台内操作，将其头部固定于立体定位仪耳杆处，颅顶区备皮，碘酒、医用酒精消毒手术区皮肤。沿颅顶中线作2. 5cm切口，在前颅向后
I.Omm,中线左或右旁开I. 4±0. Imm处，用牙科钻钻开颅骨，将消毒好的聚乙烯塑料管插入颅骨以下3. 2±0. 2mm处，用502胶及牙托粉充分固定，夹闭塑料管，缝合切口皮肤，使其与外界隔离，6. 25X IO6UAg青霉素钠腹腔注射；之后每天注射青霉素钠治疗。手术三天恢复后，进行侧脑室灌注给药。乙醚麻醉术后大鼠，微量进样器垂直插入已固定于大鼠头部的聚乙烯塑料管4. 0mm。假手术组给予人工脑脊液5 μ L，模型组及各姜黄素治疗组(gpl20+姜黄素单体组、gpl20+姜黄素脂质体组和gpl20+冰片-姜黄素脂质体组)给予5 μ LlOng/ μ L的gpl20，均注入大鼠侧脑室，给药速度< O. 5μ L/min，留针5min，确保药物能充分弥散，缓慢撤针后，夹闭塑料管；连续给药3天，每天I次。第四天姜黄素单体组、姜黄素脂质体组和冰片-姜黄素脂质体组分别灌胃给药2mL (姜黄素单体IOmg姜黄素溶于5mL pH 7.0、O. 03mol/L的PBS得到姜黄素；姜黄素脂质体按实施例I的条件不加冰片制备得到姜黄素脂质体；冰片-姜黄素脂质体由实施例I制备得到。)，对照组、假手术组和模型组则用2mL蒸馏水进行灌胃，每天2次，连续灌胃14天。然后用Morris水迷宫检测各组大鼠的空间学习能力。Morris水迷宫检测所得数据统计用重复测量设计、配对检验或单因素方差分析。从图3看出，各组大鼠寻找平台所耗费的时间(即逃避潜伏期)随着实验天数的增加而减少，可说明各组大鼠对于寻找平台均具备一定的学习记忆能力，但此学习记忆能力有组间差异。组间两两比较显示，五天的训练测试中，对照组和假手术组大鼠的逃避潜伏期明显短于模型组(P <0.05)，模型组大鼠寻找平台时间最长，说明造模成功。姜黄素单体、姜黄素脂质体、冰片-姜黄素脂质体与模型组相比，逃避潜伏期缩短(P < O. 05)，说明姜黄素具有一定的治疗作用。冰片-姜黄素脂质体组大鼠与姜黄素单体组和姜黄素脂质体组相比，所耗时间减退较为明显，说明冰片-姜黄素脂质体组的学习记忆能力优于姜黄素单体、姜黄素脂质体组(P < O. 05)。从表2中可以看出，模型组大鼠在目标象限停留时间明显短于对照组和假手术组(P < 0.01)，说明模型组大鼠的记忆能力明显降低；姜黄素单体、姜黄素脂质体及冰片-姜黄素脂质体治疗组大鼠在目标象限停留时间均长于模型组大鼠(P < O. 05)，其中冰片-姜黄素脂质体治疗组的效果优于另外两组治疗组(P < O. 05)。模型组大鼠穿越目标象限次数少于对照组和假手术组(P < O. 01)，说明模型组大鼠的记忆能力不如对照组及假手术组；姜黄素单体、姜黄素脂质体及冰片-姜黄素脂质体治疗组大鼠穿越目标象限的次数均多于
模型组大鼠(P < O. 05)，其中冰片-姜黄素脂质体治疗组的效最好(P < O. 05)。表2各组大鼠在目标象限停留的时间和穿过目标象限的次数比较(I± S n=15)
权利要求
1.一种冰片-姜黄素脂质体，其特征在于包括如下按质量份数计的组分卵磷脂270 330份、胆固醇90 110份、姜黄素O. 9 I. I份和冰片O. 09 O. 11份。
2.根据权利要求I所述的冰片-姜黄素脂质体，其特征在于所述的冰片-姜黄素脂质体包括如下按质量份数计的组分卵磷脂300份、胆固醇100份、姜黄素I份和冰片O. I份。
3.根据权利要求I所述的冰片-姜黄素脂质体，其特征在于所述的冰片-姜黄素脂质体还包括O 11质量份氧化保护剂，所述的氧化保护剂为维生素E。
4.根据权利要求3所述的冰片-姜黄素脂质体，其特征在于所述的氧化保护剂的量为10质量份。
5.权利要求I 4任一项所述的冰片-姜黄素脂质体的制备方法，其特征在于包括如下步骤 (1)取270 330质量份卵磷脂、90 110质量份胆固醇、O.9 I. I质量份姜黄素、O.09 O. 11质量份冰片和O 11质量份氧化保护剂用无水乙醇溶解，于旋转蒸发仪上旋蒸至无水乙醇完全挥发后形成均匀薄膜； (2)按每3g卵磷脂加5mLPBS的比例加PBS至步骤(I)所形成的薄膜中，孵育3h以上，再通过水合反应使薄膜和PBS形成乳状液； (3)将步骤(2)所得的乳状液超声处理后，再通过O.45 μ m微孔滤膜整粒即得到冰片-姜黄素脂质体。
6.根据权利要求5所述的冰片-姜黄素脂质体的制备方法，其特征在于 步骤(I)中所述的氧化保护剂的量为9 11质量份；所述的氧化保护剂为维生素E ; 步骤(I)中所述的旋蒸为35°C水浴条件下进行。
7.根据权利要求5所述的冰片-姜黄素脂质体的制备方法，其特征在于 步骤(2)中所述的 PBS 为 pH 7. 0、0· 03mol/L 的 PBS ； 步骤(2)中所述的孵育为35°C下进行； 步骤(2)中所述的水合反应为35°C水浴条件下在旋转蒸发仪上旋转进行。
8.根据权利要求5所述的冰片-姜黄素脂质体的制备方法，其特征在于 步骤(3)中所述的超声处理为80KHz超声处理lOmin。
9.权利要求I 4任一项所述的冰片-姜黄素脂质体的在制备抗HIV相关神经认知障碍药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的冰片-姜黄素脂质体的在制备抗HIV相关神经认知障碍药物中的应用，其特征在于所述的冰片-姜黄素脂质体制备成适合口服的任何剂型的抗HIV相关神经认知障碍的药物。
全文摘要
本发明提供了一种冰片-姜黄素脂质体及其制备方法与其在制备抗HIV-1相关神经认知障碍药物中的应用，属于医药领域。冰片-姜黄素脂质体主要由270～330质量份卵磷脂、90～110质量份胆固醇、0.9～1.1质量份姜黄素和0.09～0.11质量份冰片制备得到。通过将上述质量份组分及0～11质量份氧化保护剂用无水乙醇溶解，于旋转蒸发仪上旋蒸至乙醇挥发形成均匀薄膜；再加入适量PBS孵育3h，再通过水合反应形成乳状液；然后超声10min，过0.45μm微孔滤膜整粒，即得到冰片-姜黄素脂质体。冰片-姜黄素脂质体可制备成适合口服的任何剂型的抗HAND的药物，对治疗HAND针对性强，效果好。
文档编号A61K47/28GK102895188SQ20121036279
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月24日 优先权日2012年9月24日
发明者董军, 邓钦莹 申请人:暨南大学