专利名称：一种姜黄素包覆脂质体制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种姜黄素包覆脂质体制剂及其制备方法，属于医药应用技术领 域。
背景技术：
姜黄素(curcumin)是从姜科姜黄属(curcuma L.)植物姜黄、莪术、郁金等的根
茎中提取的一种天然有效成分，分子式为C21H2tlO615药理实验表明姜黄素除具有抗炎、 抗癌、抗氧化作用外，还具有保护肾脏、抑制肺纤维化、抑制肝纤维化、帮助肌肉损伤 修复、治疗白内障、抗寄生虫病等多种药理作用，且毒副作用小，使用安全，有良好的 临床应用前景。但姜黄素几乎不溶于水，脂溶性也较差，因此经胃肠道吸收少，口服生 物利用度低。因此目前改善姜黄素的口服吸收是扩大姜黄素临床应用、使其进一步规模 化生产的瓶颈。三甲基壳聚糖包覆脂质体(N-trimethylchitosan chloride coated liposomes)是在传
统脂质体的基础上，用三甲基壳聚糖对其表面进行修饰所制备的一种新型给药系统，其 制备方法主要是滴注法，即将药物、载体材料，通过薄膜分散法制备出脂质体混悬液， 然后采用滴注法将脂质体混悬液逐滴滴入到三甲基壳聚糖溶液中进行孵育而成。与传统 脂质体制剂相比，三甲基壳聚糖包覆脂质体有其自身的优点TMC是壳聚糖的季铵盐衍 生物，安全无毒，与壳聚糖仅在酸性pH条件下具有水溶性相比，三甲基壳聚糖在更广的 pH值范围内都具有良好的水溶性。同时，三甲基壳聚糖具有生物可降解性和良好的生物 相容性以及生物粘附性，用其进行脂质体包覆后不仅可以提高脂质体的体内外稳定性， 还可以延长制剂与胃肠道粘膜的吸附时间，促进药物的吸收；而且三甲基壳聚糖可以通 过打开细胞间的紧密连接实现药物的细胞旁路转运，进一步提高药物的口服吸收。因此 这种给药系统能够解决许多与口服生物利用度低相关的问题，尤其适合于难溶性药物的 口服吸收。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种姜黄素包覆脂质体制剂及其制备方法。术语说明薄膜分散法将磷脂、胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于有机溶剂中，然后将 有机溶剂在玻璃瓶中旋转挥发，使在烧瓶内壁上形成薄膜，将水溶性药物溶于磷酸盐缓 冲液中，加入烧瓶中不断搅拌，即得脂质体。TPGS 水溶性维生素E。TMC:三甲基壳聚糖。PF127 普郎尼克 F127。PF68 普郎尼克 F68。Tween80 吐温 80。
本发明的技术方案如下本发明的姜黄素包覆脂质体制剂，以姜黄素作为原料药，采用磷脂、胆固醇为 药物载体，表面活性剂为药物增溶剂，通过薄膜分散法制备出脂质体混悬液，以三甲基 壳聚糖作为包覆材料；各组份组成如下姜黄素10 20mg，磷脂100 400mg，胆固醇0 30mg，表面活性剂0 25mg,三甲基壳聚糖溶液浓度为0.1% 0.5% (w/v)，脂质体混悬液与三甲基壳聚糖溶 液体积比1 (1 4)，其中，胆固醇、表面活性剂不同时为0。本发明所述的质量体积比(w/v)单位是g/ml。所述的磷脂为下列之一或它们的组合豆磷脂或卵磷脂。所述的表面活性剂为下列之一或它们的组合水溶性维生素E(TPGS)、普郎尼 克F127(PF127)、普郎尼克F68 (PF68)、吐温80 (Tween80)、单硬脂酸甘油酯或肉豆蔻异 丙脂，优选水溶性维生素E(TPGS)。优选的原料组成为姜黄素20mg、卵磷脂400mg、胆固醇20mg、水溶性维生 素 E(TPGS)20mg ；或者，姜黄素20mg、卵磷脂400mg、胆固醇20mg、水溶性维生素E(TPGS) 10mg、肉 豆蔻异丙脂10mg。本发明的姜黄素包覆脂质体制剂的制备方法如下(1)取姜黄素、磷脂、胆固醇、表面活性剂溶于有机溶剂20 30ml中，减压旋 蒸除去有机溶剂，真空干燥箱中干燥过夜；(2)加入20ml pH 5 7的磷酸盐缓冲液，水化形成脂质体，离心除去结晶性药 物，所得脂质体混悬液A进行微孔滤膜过滤，勻化，所得脂质体混悬液B粒径约为300 500nm ；(3)将脂质体混悬液B逐滴滴入到浓度为0.1-0.5 % (w/v)的三甲基壳聚糖 (TMC)溶液C中，孵育时间1 3h，即得本发明的粒径约为600 800nm的姜黄素包覆 脂质体混悬液D；继续制备冻干制剂(4)向上述姜黄素包覆脂质体混悬液D中加入质量体积比(w/v)为 4%冻 干保护剂冻干即得冻干制剂E。步骤(1)中所述的有机溶剂选自下列之一或它们的组合甲醇、乙醇、丙酮、 乙酸乙酯或氯仿。步骤(4)中所述的冻干保护剂选自下列之一或它们的组合甘露醇、蔗糖、乳 糖、葡萄糖或海藻糖。优选的，步骤(3)中三甲基壳聚糖(TMC)溶液C的浓度为0.5%，孵育时间为3h。为了改善姜黄素的口服吸收，提高其口服生物利用度，本发明选择磷脂、胆固 醇作为药物载体，TPGS作为增溶剂，三甲基壳聚糖作为包衣材料将其制备成姜黄素包 覆脂质体制剂。本实验中所采用的载体材料、包覆材料、表面活性剂以及冻干保护剂等 均为药剂学上广泛应用的药剂辅料，具有无毒、无刺激性、生物相容性好的特性。由于姜黄素属于难溶性药物，很难与水溶性和脂溶性的辅料相容，因此制备起来有相当大的 难度。基于前期长时间艰辛的工作，本发明针对姜黄素本身的理化性质，在脂质体中加 入了对姜黄素具有明显增溶作用、同时又能稳定保持脂质体特征的特定浓度的表面活性 剂-水溶性维生素E(TPGS)，既提高了姜黄素在脂相中的溶解度，又使脂相和水相具有 一定的互溶性，有利于制备载药量高的脂质体。根据实验数据结果选择合适组分组成 及其用量，本发明以薄膜分散法制备的脂质体包封率可达80% 90%，载药量能达到 3.14%,而且脂质体成型性较好。TMC在较广泛的pH范围内都具有很好的溶解性，并具 有良好的生物粘附性和生物可降解性，最重要的是，TMC可以通过打开细胞间的紧密连 接促进药物的吸收。在包衣过程中，本发明考察了 TMC用量以及孵育时间、滴注顺序、 搅拌速度等包衣工艺对脂质体包覆率的影响。通过筛选，本发明制备的姜黄素包覆脂质 体包覆率可达85%，粒径在600-800nm之间。这种姜黄素包覆脂质体对胃肠道黏膜具有 很好的粘附性，可以增加药物的吸收，从而显著提高药物的口服生物利用度。体外释放 实验表明包覆脂质体48h内仅释放70% 80%，说明该制剂具有良好的控制药物释放的 特性；大鼠口服给药结果表明，本发明姜黄素包覆脂质体的口服吸收(药时曲线下面积 AUC为516.58 μ g/L h)是未包覆脂质体(给药剂量均为50mg/kg) (AUC为226.77 μ g/L h)的2.28倍，是姜黄素混悬液(给药剂量为100mg/kg) (AUC为44.68 μ g/L h)的23.12 倍，表明包覆脂质体能显著提高姜黄素的口服生物利用度。本发明姜黄素包覆脂质体制备简单，在三甲基壳聚糖包覆的姜黄素脂质体混悬 液中加入冻干保护剂，冷冻干燥，可使三甲基壳聚糖包覆的脂质体在载体材料中均勻分 散，大大提高了制剂的稳定性，能够更好的促进药物的溶解与吸收。
图1是本发明实施例5的未进行包衣的姜黄素脂质体混悬液的电镜照片 (X72000)；图2是本发明实施例5的姜黄素包覆脂质体的电镜照片(X72000)。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不限于这些具体记载的实施例。所 使用原料没有特别说明的均为市售。实施例1 精密称取IOmg姜黄素、IOOmg豆磷脂，IOmg胆固醇，加至20ml无水乙醇中，
40°C条件下减压去除乙醇，真空干燥箱中干燥过夜，加入20ml磷酸盐缓冲液(PBS，pH 5 7)进行水化，离心除去去结晶性药物，所得脂质体混悬液A进行0.8 μ m的微孔滤膜 过滤，勻化，将所得脂质体混悬液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.1%，w/v),孵育Ih 即得本发明姜黄素包覆脂质体混悬液D。所得脂质体包封率为9.21%，载药量为0.445%。实施例2 精密称取IOmg姜黄素、200mg豆磷脂、IOmg胆固醇，加至30ml无水乙醇中，
40°C条件下减压旋蒸除去乙醇，真空干燥箱中干燥过夜，加入20ml磷酸盐缓冲液(PBS，pH5 7)进行水化，离心除去结晶性药物，所得脂质体混悬液A进行0.8μιη的微孔滤膜 过滤，勻化，将所得脂质体混悬液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.2%，w/v),孵育Ih 即得本发明姜黄素包覆脂质体混悬液D。取2ml制备的混悬液D加入甘露醇(1%，w/v) 后装入西林瓶中，置冰箱中-80°C预冻24h，然后放入冷冻干燥机中_40°C、0.IOmbar 48h 即得冻干制剂。取混悬液适量，滴加于铜网上，用2%磷钨酸溶液进行负染，自然干燥后在透射 电镜下(TEM)下观察，为圆整的类球形实体粒子，表面光滑，粒径600-800nm之间，根 据粒子的大小和形态可以判定该制剂为姜黄素包覆脂质体。实施例3:精密称取IOmg姜黄素、400mg豆磷脂、20mg普郎尼克F127(PF127)，加至 20ml乙酸乙酯中，40°C条件下减压旋蒸除去有机溶剂，真空干燥箱中干燥过夜，加入 20ml磷酸盐缓冲液(PBS，pH 5 7)进行水化，离心除去结晶性药物，所得脂质体混悬 液A进行0.8 μ m的微孔滤膜过滤，勻化，将所得脂质体混悬液B逐滴滴入到TMC溶液 C中(0.5%，w/v)，孵育2h即得本发明姜黄素包覆脂质体混悬液D。分取2ml制备的 混悬液D加入蔗糖(4%，w/v)后装入西林瓶中，置冰箱中-80°C预冻24h，然后放入冷 冻干燥机中_40°C、0.1 Ombar 48h即得冻干制剂。zeta电位测定结果表明包覆脂质体为+15.64mV，未包覆脂质体为_9.63mV，表 明带正电荷的TMC已包覆在脂质体的表面。实施例4 精密称取IOmg姜黄素、400mg卵磷脂、IOmgTPGS,加至20ml氯仿中，30°C条 件下减压旋蒸除去有机溶剂，真空干燥箱中干燥过夜，加入20ml磷酸盐缓冲液(PBS， pH 5 7)进行水化，离心除去结晶性药物，所得脂质体混悬液A进行0.8 μ m的微孔滤 膜过滤，勻化，将所得脂质体混悬液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.2%，w/v),孵育
2h即得本发明姜黄素包覆脂质体混悬液D。体外释放实验6h内，包覆脂质体和不包覆脂质体分别释放了 25%和40%，而 姜黄素原料药的丙二醇溶液释放量达到91%，结果表明包覆脂质体进一步降低了药物 的释放速率，具有较好的缓控释特性。实施例5 精密称取20mg姜黄素、400mg卵磷脂、20mg胆固醇、20mg TPGS，加至20ml
甲醇中，40°C条件下减压旋蒸除去甲醇，真空干燥箱中干燥过夜，加入20ml磷酸盐缓冲 液(PBS，pH 5 7)进行水化，离心除去结晶性药物，所得脂质体混悬液A进行0.8 μ m 的微孔滤膜过滤，勻化，将所得脂质体混悬液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.5%，w/ ν),孵育3h即得本发明姜黄素包覆脂质体混悬液D。分取2ml制备的混悬液D加入适量甘露醇(4%，w/v)后装入西林瓶中，置冰箱 中-80°C预冻24h，然后放入冷冻干燥机中_40°C、0.10mbar48h即得冻干制剂。粒径分布实验表明用TMC溶液对姜黄素脂质体混悬液进行包衣后，脂质体的 平均粒径由包衣前的400nm变为包衣后的800nm，表明TMC已成功包覆于脂质体表面； TMC包覆姜黄素脂质体大鼠口服相对于不包覆的姜黄素脂质体和姜黄素混悬液的生物利 用度分别为228%和2312%。
实施例6:精密称取20mg姜黄素、400mg卵磷脂、20mg胆固醇、IOmg TPGS、IOmg肉豆 蔻异丙脂，加至30ml丙酮中，40°C条件下减压旋蒸除去有机溶剂，真空干燥箱中干燥过 夜，加入20ml磷酸盐缓冲液(PBS，pH 5 7)进行水化，离心出去结晶性药物，所得 脂质体混悬液A进行0.8 μ m的微孔滤膜过滤，勻化，将所得脂质体混悬液B逐滴滴入到 TMC溶液C中(0.5%，w/v),孵育Ih即得本发明姜黄素包覆脂质体混悬液D。所得脂质体包封率为75.68%，载药量为1.86%。结果表明肉豆蔻异丙脂的加 入并没有很好的改善姜黄素的溶解性。实施例7:不同药脂比、胆固醇用量对姜黄素脂质体包封率和载药量的影响实 验表1药脂比对姜黄素脂质体包封率和载药量的影响
权利要求
1.一种姜黄素包覆脂质体制剂，其特征在于以姜黄素作为原料药，采用磷脂、胆 固醇为药物载体，表面活性剂为药物增溶剂，通过薄膜分散法制备出脂质体混悬液，以 三甲基壳聚糖作为包覆材料；各组份组成如下姜黄素10 20mg，磷脂100 400mg，胆固醇0 30mg，表面活性剂0 25mg， 三甲基壳聚糖溶液浓度为0.1% 0.5% (w/v),脂质体混悬液与三甲基壳聚糖溶液体积比 1 (1 4)，其中，胆固醇、表面活性剂不同时为0。
2.如权利要求1所述的姜黄素包覆脂质体制剂，其特征在于所述的磷脂为下列之 一或它们的组合豆磷脂或卵磷脂。
3.如权利要求1所述的姜黄素包覆脂质体制剂，其特征在于所述的表面活性剂为 下列之一或它们的组合水溶性维生素E、普郎尼克F127、普郎尼克F68、吐温80、单 硬脂酸甘油酯或肉豆蔻异丙脂，优选水溶性维生素E。
4.如权利要求1-3任一项所述的姜黄素包覆脂质体制剂，其特征在于各组份组成如下姜黄素20mg、卵磷脂400mg、胆固醇20mg、水溶性维生素E 20mg。
5.如权利要求1-3任一项所述的姜黄素包覆脂质体制剂，其特征在于各组份组成如下姜黄素20mg、卵磷脂400mg、胆固醇20mg、水溶性维生素E 10mg、肉豆蔻异丙脂 IOmg0
6.如权利要求1-5任一项所述的姜黄素包覆脂质体制剂的制备方法，其特征在于步骤 如下(1)取姜黄素、磷脂、胆固醇、表面活性剂溶于有机溶剂20 30ml中，减压旋蒸除 去有机溶剂，真空干燥箱中干燥过夜；(2)加入20mlpH 5 7的磷酸盐缓冲液，水化形成脂质体，离心除去结晶性药物， 所得脂质体混悬液A进行微孔滤膜过滤，勻化，所得脂质体混悬液B粒径约为300 500nm ；(3)将脂质体混悬液B逐滴滴入到浓度为0.1-0.5%(w/v)三甲基壳聚糖溶液C中， 孵育时间1 3h，即得本发明的粒径约为600 SOOnm的姜黄素包覆脂质体混悬液D。
7.如权利要求6所述的姜黄素包覆脂质体制剂的制备方法，其特征在于继续制备冻干 制剂步骤如下(4)向上述姜黄素包覆脂质体混悬液D中加入质量体积比(w/v)为 4%冻干保 护剂冻干即得冻干制剂E。
8.如权利要求6所述的姜黄素包覆脂质体制剂的制备方法，其特征在于步骤(1)中所 述的有机溶剂选自下列之一或它们的组合甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿。
9.如权利要求6所述的姜黄素包覆脂质体制剂的制备方法，其特征在于步骤(4)中所 述的冻干保护剂选自下列之一或它们的组合甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖或海藻糖。
10.如权利要求6所述的姜黄素包覆脂质体制剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中 三甲基壳聚糖溶液C的浓度为0.5%，孵育时间为3h。
全文摘要
本发明涉及一种姜黄素包覆脂质体及其制备方法。该制剂由姜黄素、磷脂、胆固醇、水溶性维生素E、三甲基壳聚糖组成，可制成冻干粉并用于口服给药。本发明姜黄素包覆脂质体的胃肠道吸收效率显著高于传统的姜黄素脂质体制剂，进一步改善了姜黄素的口服吸收，提高了其口服生物利用度。
文档编号A61K31/12GK102008439SQ20101056166
公开日2011年4月13日 申请日期2010年11月29日 优先权日2010年11月29日
发明者翟光喜, 陈焕蕾 申请人:山东大学