抗cd98抗体及其使用方法

抗cd98抗体及其使用方法
【专利摘要】本发明提供了结合CD98的抗体，以及该抗体在癌症的诊断和治疗中的使用方法。
【专利说明】抗CD98抗体及其使用方法

【技术领域】
[0001] 本发明总体上涉及抗CD98抗体和使用该类抗体的方法。

【背景技术】
[0002] CD98 (也被称为CD98重链；42F重链；SLC3A2)是由529个氨基酸残基组成的II 型跨膜糖蛋白。该蛋白包含75个氨基酸的N末端胞内细胞质域，单一跨膜域和426个氨基 酸的 C 末端胞外域（Parmacek 等人，Nucleic Acids Res. 17:1915-1931,1989)。CD98 通过 二硫键共价连接至几种轻链（SLC7A5、6、7、8、10或11)之一，该些轻链是L型氨基酸转运蛋 白。该种相互作用是轻链的细胞表面表达和氨基酸转运功能所需要的。CD98还与整合素 目亚单位结合，借此调节了控制细胞增殖、存活、迁移和上皮细胞粘附/极性的整合素信号 (Cai 等人，J. Cell Sci. 118:889-899, 2005)。
[0003] CD98原来被鉴别为与淋己细胞活化有关的细胞表面抗原化aynes等人，J. Immunol. 126:1409-1414, 1981)。此后，在除了血小板之外的所有细胞类型中均鉴别 出CD98,并且CD98在胃肠佑I)道和肾小管中的表达水平最高（Verrey等人，Pflugers Arch. 440:503-512, 2000)。在肠炎中已观察到了 CD98的上调。最近，肠CD98表达显示在 控制肠中的体内平衡和先天免疫反应中具有重要作用。因此，肠上皮细胞中CD98表达的调 节已表明是炎症性肠道疾病，如炎症性肠病（IBD)和结肠炎相关性癌症的治疗和预防的有 希望的治疗策略（Nguyen等人，J. Clin. Invest. 121:1733-1747, 2011)。不考虑组织来源， CD98还在几乎所有肿瘤细胞的细胞表面上过表达（Itoh等人，化n. J. Cancer Res. 92:13 13-1321，2001)。
[0004] 还在多种类型的人癌细胞中观察到了结合CD98的轻链之一，L型氨基酸转运蛋 白ULAT 1 ;也称为化口AW的表达增加，所述癌症包括乳腺癌、结肠癌、口腔癌、卵巢癌、 食道癌、神经胶质瘤和白血病（Fan等人，Biochem. Pharmacol. 80:811-818, 2010)。可能 需要增加氨基酸供给来支持癌细胞的高生长速度，该是通过提供用于蛋白质合成的氨基 酸硕块和通过哺乳动物雷帕霉素祀标（mTOR)刺激生长来实现的（Fan等人，同上；Imai 等人，Anticancer Res. 30:4819-4828, 2010)。与原发位点相比，人癌症的转移性位点中 LATl和CD98的表达显著更高，该表明LAT1/CD98的过表达是人癌症发展和转移所必需的。 具体地，LAT1/CD98过表达似乎是结肠癌患者中肿瘤转移所必需的化aira等人，Cancer Sci. 99:2380-2386, 2008)。
[0005] CD98和LATl和表达类型和功能表明该些蛋白是治疗多种人癌症的有希望 的祀标。LATl活性抑制剂在一些癌症类型，包括非小细胞肺癌（Imai等人，同上），结 肠癌细胞（Oda 等人，Cancer Sci. 101:173-179, 2010)，口腔癌细胞化im 等人，Biol. Wiarm. Bull. 33:1117-1121，2010)，和乳腺癌细胞（Shennan 和 Iliomson.Oncol. Rep. 20:885-889, 2008)中显示出抗肿瘤活性。LATl还显示是治疗卵巢癌的祀标（Fan等人， 同上）中显示出抗肿瘤活性。
[0006] 发现鉴别为皿J127的鼠抗CD98单克隆抗体抑制淋己细胞增殖（Yagita和 Hashimoto, J. Immunol. 136:2062-2068, 1986)并且抑制球囊肿瘤和淋己瘤细胞的生 长（Yagita 等人，Cancer Res. 46:1478-1489, 1986)。发现町127 抗体的表位是人 CD98的残基442AFS444 (Itoh等人，2007)。不同的鼠抗CD98单克隆抗体对神经胶质 瘤、前列腺和结肠癌细胞显示出显著抑制肿瘤细胞体外生长（Papetti和化rman, Am. J. Pathol. 159:165-178,2001)。在美国专利公开No. 20100143367中公开了其他的抗人 CD98单克隆抗体。该些单克隆抗体结合至CD98的氨基酸区372-530和104-371内的表位。 发现该些抗体中的五种抑制膀脫癌细胞中的氨基酸吸收，并且该些抗体中的H种在小鼠模 型中显示抑制肿瘤生长。
[0007] 如本文所公开的，使用细胞表面蛋白质组的表面标记抗原谱对患者新发原发性急 性髓性白血病（AML)肿瘤样品的分析将跨膜蛋白CD98鉴别为在AML肿瘤细胞表面上W高 密度存在。因此，CD98是（例如）通过使用结合剂，如特异性结合至CD98的抗体来治疗AML 的祀标。对CD98特异的结合剂，如抗CD98抗体，还在多个体内异种移植模型中显示出不但 在AML的治疗，而且在多种癌症，如肉瘤、淋己瘤、非小细胞肺癌（NSCLC)和结肠直肠癌的治 疗中具有应用。
[0008] 本发明提供了在多种类型的人癌症的诊断和治疗中有用的CD98。
[000引发明概述
[0010] 使用完整的AML肿瘤细胞表面的溶液中标记，然后通过高分辨率的基于溶液的液 相色谱串联质谱联用（LC-MS/M巧将CD98鉴别为与正常细胞（包括发育的血细胞）相比， 在大部分AML细胞亚型表面上W高密度存在。因此，本发明提供了抗CD98抗体和使用该类 抗体治疗AML及其他癌症，包括（但不限于）淋己瘤、肉瘤、非小细胞肺癌和结肠直肠癌的 方法。
[0011] 在一种实施方式中，本发明提供了特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能 性片段，其中所述抗体或功能性片段结合至包含人CD98的残基A377、D397、1398、G400和 A401的表位。在一些实施方式中，所述表位还包含人CD98的残基D374和L378。在一些实 施方式中，所述表位还包含人CD98的残基P379和G380。在一些实施方式中，所述表位还包 含人CD98的残基F395和P396。在一些实施方式中，所述表位还包含人CD98的残基Q381、 P382和P399。在一些实施方式中，所述表位还包含选自由人CD98的D374、L378、P379、G380、 Q381、P382、F395、P396和P399组成的组中的任意一种或多种其他残基。
[0012] 在一种实施方式中，本发明提供了特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能 性片段，其中所述抗体结合至包含人CD98的残基P379、G380、D397和1398的表位。在一些 实施方式中，所述表位还包含人CD98的残基F395和P396。在一些实施方式中，所述表位还 包含人CD98的残基Q381、P382、P399、G400和A401。在一些实施方式中，所述表位还包含 人CD98的残基D374、A377和L378。在一些实施方式中，所述表位还包含选自由人CD98的 D374、A377、L378、Q381、P382、F395、P396、P399、G400 和 A401 组成的组中的任意一种或多 种其他残基。
[0013] 在一些实施方式中，本发明提供了分离的抗体或其功能性片段，其中所述抗体或 功能性片段结合至包含人 CD98 的残基 D374、A377、1378、P379、G380、Q381、P382、F395、 P396、D397、1398、P399、G400 和 A401 的表位。
[0014] 在一些实施方式中，本发明提供了特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能 性片段，其中所述抗体或功能性片段结合至包含在人CD98的氨基酸残基369-405内的表 位。在一些实施方式中，本发明提供了特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能性片 段，其中所述抗体或功能性片段结合至由人CD98的氨基酸残基369-405组成的表位。
[0015] 在一些实施方式中，本发明所述的单克隆抗体是人源化抗体、人抗体或嵌合抗体。 在一些实施方式中，本发明的抗体功能性片段是F油、F (油'）2、Fv或SCFv片段。
[0016] 在一种实施方式中，本发明提供了分离的抗体或其功能性片段，其包含来自具有 选自 SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、SEQ ID NO ; 12、SEQ ID NO ;31 和 SEQ ID NO ;35 的氨基 酸序列的重链可变结构域的全部H个重链互补决定区（CDR)，和/或来自具有选自SEQ ID N0;6、SEQ ID N0;10、SEQ ID N0;14、SEQ ID N0;33 和 SEQ ID N0;37 的氨基酸序列的轻链 可变结构域的全部H个轻链CDR。
[0017] 在一种实施方式中，本发明提供了分离的抗体或其功能性片段，其包含来自具有 选自沈Q ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、SEQ ID NO ; 12、沈Q ID NO ;31 和沈Q ID NO ;35 的氨基 酸序列的重链可变结构域的全部H个重链CDR，和来自具有选自SEQ ID NO ;6、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO ;14、SEQ ID NO ;33和SEQ ID NO ;37的氨基酸序列的轻链可变结构域的全 部H个轻链CDR。在一些实施方式中，抗体或其功能性片段包含全部重链和轻链互补决定区 (CDR)，其来自；（a)称为8-34B的抗体；化）称为18-2A2. 2的抗体；（C)称为18-2A7. 1的抗 体；（d)称为1-47C的抗体；或（e)称为1-115A的抗体。在一些实施方式中，所述抗体或其 功能性片段包含来自称为8-34B的抗体的全部重链和轻链CDR。在一些实施方式中，所述抗 体或其功能性片段包含来自称为18-2A2. 2的抗体的全部重链和轻链CDR。在一些实施方 式中，所述抗体或其功能性片段包含来自称为18-2A7. 1的抗体的全部重链和轻链CDR。在 一些实施方式中，所述抗体或其功能性片段包含来自称为1-47C的抗体的全部重链和轻链 CDR。在一些实施方式中，所述抗体或其功能性片段包含来自称为1-115A的抗体的全部重 链和轻链CDR。
[001引在一些实施方式中，所述抗体包含选自SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、SEQ ID NO : 12、SEQ ID N0;31和SEQ ID N0;35的重链可变结构域序列。在一些实施方式中，所述抗体 包含选自 SEQ ID NO ;6、SEQ ID NO ; 10、SEQ ID NO ; 14、SEQ ID NO ;33 和 SEQ ID NO ;37 的 轻链可变结构域序列。在一些实施方式中，所述抗体包含选自SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、 SEQ ID NO ;12、SEQ ID NO ;31和SEQ ID NO ;35的重链可变结构域序列，并且还包含选自 沈Q ID NO ;6、SEQ ID NO ; 10、沈Q ID NO ; 14、沈Q ID NO ;33 和沈Q ID NO ;37 的轻链可变 结构域序列。
[0019] 在一种实施方式中，所述抗体包含SEQ ID NO ;4的重链可变结构域序列和SEQ ID NO ;6的轻链可变结构域序列。在一种实施方式中，所述抗体包含SEQ ID NO ;8的重链可变 结构域序列和SEQ ID NO=IO的轻链可变结构域序列。在一种实施方式中，所述抗体包含 SEQ ID NO ;12的重链可变结构域序列和SEQ ID NO ;14的轻链可变结构域序列。在一种实 施方式中，所述抗体包含SEQ ID NO ;31的重链可变结构域序列和SEQ ID NO ;33的轻链可 变结构域序列。在一种实施方式中，所述抗体包含SEQ ID NO ;35的重链可变结构域序列和 SEQ ID NO ;37的轻链可变结构域序列。
[0020] 在一种实施方式中，本发明提供了人源化抗体。在一些实施方式中，所述人源化抗 体包含选自沈Q ID N0;17、沈Q ID N0;18、沈Q ID N0;19、沈Q ID N0;22 和沈Q ID N0;23 的重链可变结构域序列。在一些实施方式中，所述人源化抗体包含选自SEQ ID NO ;15、SEQ ID NO ;16、SEQ ID NO ;20和SEQ ID NO ;21的轻链可变结构域序列。在一些实施方式中， 所述人源化抗体包含选自 SEQ ID NO; 17、SEQ ID NO; 18、SEQ ID NO; 19、SEQ ID NO ;22 和 SEQ ID N0;23的重链可变结构域序列，并且还包含选自SEQ ID N0;15、SEQ ID N0;16、SEQ ID NO ;20和SEQ ID NO ;21的轻链可变结构域序列。在一些实施方式中，所述人源化抗体 包含选自SEQ ID NO ;15和SEQ ID NO ;16的轻链可变结构域序列，和选自SEQ ID NO ;17、 SEQ ID NO ;18和SEQ ID NO ;19的重链可变结构域序列。在一种实施方式中，所述人源化 抗体包含SEQ ID NO ; 15的轻链可变结构域序列和SEQ ID NO ; 18的重链可变结构域序列。
[0021] 在一种实施方式中，所述人源化抗体包含SEQ ID NO ;20的轻链可变结构域序列和 SEQ ID NO ;22的重链可变结构域序列。在一种实施方式中，所述人源化抗体包含SEQ ID NO ;21的轻链可变结构域序列和SEQ ID NO ;23所示的重链可变结构域序列。在一种实施 方式中，所述人源化抗体包含SEQ ID NO ;20的轻链可变结构域序列和SEQ ID NO ;23的重 链可变结构域序列。在一种实施方式中，所述人源化抗体包含SEQ ID NO ;21的轻链可变结 构域序列和SEQ ID NO ;22的重链可变结构域序列。在一种实施方式中，本发明提供了结 合至与人源化抗体相同的表位的抗体，其包含SEQ ID NO ;21的轻链可变结构域序列和SEQ ID NO ;22的重链可变结构域序列。在替代性实施方式中，本发明包含结合至与来自Mnl或 bin3-7的抗体基本相同的表位的结合剂，如图1所示。
[0022] 在其他实施方式中，本发明包含结合至与W上所公开的任何抗体基本相同的 表位的结合剂。在一些实施方式中，所述结合剂抑制表达CD98的肿瘤的生长。在一些 实施方式中，所述结合剂是抗体或其功能性片段。在其他实施方式中，所述结合剂是 anticalin、a化ectin、亲和体（affibody)、DARPiru fynomer、affitin、affilin、商亲和性多聚 体（avimer)、扭结菌素肤（knottin peptide)或者工程设计的Kunitz型抑制剂。
[0023] 在一种实施方式中，本发明提供了能够结合至CD98的结合剂，其中在竞争性结合 测定中W上公开的任一种抗体置换结合剂。在一些实施方式中，所述结合剂是抗体或其功 能性片段。在另一种实施方式中，本发明提供了能够结合至CD98的结合剂，其中在竞争性 结合测定中结合剂置换W上公开的任一种抗体。在一些实施方式中，所述结合剂是抗体或 其功能性片段。
[0024] 在一些实施方式中，本发明提供了结合至CD98的抗体，其中所述抗体包含与选自 沈Q ID N0;4、SEQ ID N0;8、SEQ ID N0;12、沈Q ID N0;17、沈Q ID N0;18、沈Q ID N0;19、 SEQ ID NO ;22、SEQ ID NO; 23、SEQ ID NO ;31 和 SEQ ID NO ;35 的氨基酸序列具有至少 90 %、 至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或 至少99%的序列同一性的重链可变结构域。在一些实施方式中，所述抗体包含与选自SEQ ID N0;6、SEQ ID N0;10、沈Q ID N0;14、沈Q ID N0;15、沈Q ID N0;16、沈Q ID N0;20、沈Q ID NO ;21、SEQ ID NO ;33和SEQ ID NO; 37的氨基酸序列具有至少90 %、至少91 %、至少 92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列 同一性的轻链可变结构域。在一些实施方式中，所述抗体包含与选自SEQ ID NO ;4、SEQ ID NO ;8、沈Q ID NO ; 12、沈Q ID NO ; 17、沈Q ID NO ; 18、沈Q ID NO ; 19、沈Q ID NO ;22、沈Q ID NO ;23、SEQ ID NO ;31和SEQ ID NO ;35的氨基酸序列具有至少90%、至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列 同一性的重链可变结构域，并且所述抗体还包含与选自SEQ ID NO ;6、SEQ ID NO ;10、SEQ ID NO; 14、沈Q ID NO; 15、沈Q ID NO; 16、沈Q ID NO ;20、沈Q ID NO ;21、沈Q ID NO ;33 和 SEQ ID NO ;37的氨基酸序列具有至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至 少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列同一性的轻链可变结构域。
[0025] 在一些实施方式中，本发明提供了作为任何W上抗体的变体的抗体，其具有一个 或多个氨基酸取代、缺失、插入或修饰，并且其保留了所述抗体的生物学功能。在一些实施 方式中，本发明提供了结合至在细胞表面上表达的CD98并抑制细胞生长的抗体。在一些实 施方式中，抗CD98抗体结合至在细胞表面上表达的CD98并且抑制细胞增殖。在一些实施 方式中，抗CD98抗体结合至在细胞表面上表达的CD98并且诱导细胞死亡。在一些实施方 式中，本发明提供了作为任一种上述抗体的变体的抗体，其具有与未修饰的抗体相比改善 的一种或多种性质，如结合亲合力、特异性、热稳定性、表达水平、效应子功能、糖基化作用、 降低的免疫原性或溶解度。
[0026] 在一些实施方式中，本发明提供了上述抗体或功能性片段中的任一种，其中所述 抗体或片段结合至细胞毒性试剂。在多个实施方式中，所述细胞毒性试剂选自化疗剂、药 物、生长抑制剂、毒素或放射性同位素。在一些实施方式中，本发明提供了上述抗体或功能 性片段中的任一种，其中所述抗体或片段结合至可检测的标志物。在多个实施方式中，所述 可检测的标志物选自放射性同位素、金属馨合剂、酶、英光化合物、生物发光化合物和化学 发光化合物。
[0027] 在一种实施方式中，本发明提供了产生本发明的单克隆抗体的杂交瘤。在一种实 施方式中，本发明提供了产生本发明的单克隆抗体的转基因动物。
[0028] 在一些实施方式中，提供了编码任何上述抗体的多核巧酸。在一种实施方式中，提 供了包含多核巧酸的载体。在一种实施方式中，提供了包含载体的宿主细胞。在一种实施 方式中，所述宿主细胞是原核的。在一种实施方式中，所述宿主细胞是大肠杆菌巧.COli) 细胞。在另一种实施方式中，所述宿主细胞是真核细胞。在一种实施方式中，所述宿主细胞 是中华仓鼠卵巢（CHO)细胞。在一种实施方式中，提供了制备抗CD98抗体的方法，其中所 述方法包括在适合于表达编码所述抗体的多核巧酸的情况下培养宿主细胞，和分离所述抗 体。
[0029] 在一种实施方式中，本发明提供了包含本发明的任何上述抗体或其功能性片段、 抗体结合物或结合剂的药物组合物。在其他实施方式中，本发明提供了抑制表达CD98的癌 细胞生长的方法，所述方法包括将所述细胞暴露于任何一种或多种本发明的上述抗体或其 功能性片段、抗体结合物或结合剂。在多个实施方式中，癌细胞来自于选自膀脫癌、乳腺癌、 结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑 素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌的癌症。
[0030] 在一种实施方式中，本发明提供了治疗受试者中癌症的方法，所述方法包括向所 述受试者施用包含本发明的任何上述抗体或其功能性片段、抗体结合物或结合剂的药物组 合物。在多种实施方式中，所述癌症选自膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺 癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血 病，或者任何该些癌症的转移癌。在一些实施方式中，所述癌症是急性髓细胞性白血病。在 一些实施方式中，所述受试者是复发性或难治性急性髓细胞性白血病。在一些实施方式中， 所述癌症与细胞表面上CD98的表达增加有关。
[0031] 在一些实施方式中，将所述抗体或功能性片段与一种或多种化学治疗化合物组合 向受试者施用，其中所述化学治疗化合物选自苯达莫司汀盐酸盐、环磯醜胺、异环磯醜胺、 氣达拉滨（fliKlur油ine)、阿糖胞巧、吉西他滨、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、紫杉醇、多西 他赛、长春瑞滨、长春新碱、依巧泊巧、伊立替康、意环霉素、多柔比星、顺笛、卡笛和利妥昔 单抗。
[0032] 在一种实施方式中，提供了检测生物样品中CD98的存在性的方法，所述方法包 括在允许抗体与CD98结合的条件下将所述生物样品与任何上述抗体接触，并检测抗体和 CD98之间是否形成复合物。在一些实施方式中，所述生物样品来自于患有或者怀疑患有 细胞或组织癌症的哺乳动物，所述癌症包括，但不限于，膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃 癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、 淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。
[0033] 在一种实施方式中，提供了诊断与CD98表达升高有关的癌症的方法，所述方法包 括将测试细胞与任何上述抗体接触；通过检测所述抗体与CD98的结合来确定CD98的表达 水平；和将测试细胞的CD98表达水平与对照细胞的CD98表达水平相比较，其中与对照细 胞相比，测试细胞较高的CD98表达水平显示癌症的存在性与CD98表达增加有关。在一些 实施方式中，所述测试细胞是来自怀疑患有癌症的患者的细胞，所述癌症选自膀脫癌、乳腺 癌、结肠癌、直肠癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、神经 胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。在一种实施方式中，所述方法包括 确定测试细胞表面上CD98的表达水平，和将所述测试细胞表面上CD98的表达水平与对照 细胞表面上CD98的表达水平相比较。在一些实施方式中，所述测试细胞是癌细胞，并且所 述对照细胞是相同组织类型的正常细胞。
[0034] 在一种实施方式中，本发明提供了任何上述抗体或功能性片段药物制备中的用 途，其中所述药物用于抑制表达CD98的癌细胞的生长的方法中。在多种实施方式中，所述 细胞来自于选自膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、 卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的 转移癌的癌症。
[0035] 在一种实施方式中，本发明提供了任何上述抗体或功能性片段用于抑制表达CD98 的癌细胞生长的用途。在多种实施方式中，所述细胞来自于选自膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直 肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经 胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌的癌症。
[0036] 在一种实施方式中，本发明提供了包含任何上述抗体或功能性片段的药物组合物 在药物制备中的用途，其中所述药剂用于治疗受试者中的癌症的方法中。在多种实施方式 中，所述癌症选自膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、 卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的 转移癌。在一些实施方式中，所述癌症是急性髓细胞性白血病。在一些实施方式中，所述受 试者是复发性或难治性急性髓细胞性白血病。在一些实施方式中，所述癌症与细胞表面上 CD98的表达增加有关。在一些实施方式中，将该抗体或功能性片段结合与一种或多种化学 治疗化合物组合向受试者施用，其中该化学治疗化合物选自苯达莫司汀盐酸盐、环磯醜胺、 异环磯醜胺、氣达拉滨、阿糖胞巧、吉西他滨、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、紫杉醇、多西他 赛、长春瑞滨、长春新碱、依巧泊巧、伊立替康、意环霉素、多柔比星、顺笛、卡笛和利妥昔单 抗。
[0037] 在一种实施方式中，本发明提供了包含任何上述抗体或功能性片段和可药用载体 的药物组合物在治疗受试者中癌症中的应用。在多种实施方式中，所述癌症选自膀脫癌、乳 腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉 瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。在一些实施方式 中，所述癌症是急性髓细胞性白血病。在一些实施方式中，所述受试者是复发性或难治性急 性髓细胞性白血病。在一些实施方式中，所述癌症与细胞表面上CD98的表达增加有关。在 一些实施方式中，将所述抗体或功能性片段结合与一种或多种化学治疗化合物组合向受试 者施用，其中所述化学治疗化合物选自苯达莫司汀盐酸盐、环磯醜胺、异环磯醜胺、氣达拉 滨、阿糖胞巧、吉西他滨、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、长春新 碱、依巧泊巧、伊立替康、意环霉素、多柔比星、顺笛、卡笛和利妥昔单抗。
[0038] 在一种实施方式中，本发明提供了任何上述抗体或功能性片段在药物制备中的用 途，其中所述药物用于在检测生物样品中CD98的存在性的方法中。在一些实施方式中，所 述方法包括在允许抗体与CD98结合的条件下将所述生物样品与任何上述抗体接触，并检 测抗体和CD98之间是否形成复合物。在一些实施方式中，所述生物样品来自于患有或者怀 疑患有细胞或组织癌症的哺乳动物，所述癌症包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直 肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经 胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。
[0039] 在一种实施方式中，本发明提供了任何上述抗体或功能性片段在检测生物样品中 CD98的存在性的方法中的应用。在一些实施方式中，所述方法包括在允许抗体与CD98结 合的条件下将所述生物样品与任何上述抗体接触，并检测抗体和CD98之间是否形成复合 物。在一些实施方式中，所述生物样品来自于患有或者怀疑患有细胞或组织癌症的哺乳动 物，所述癌症包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、 肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任 何该些癌症的转移癌。
[0040] 在一种实施方式中，本发明提供了任何上述抗体或功能性片段在药物制备中的用 途，其中所述药物用于在诊断与CD98表达增加有关的癌症的方法中使用。在一些实施方式 中，所述方法包括将测试细胞与任何上述抗体接触；通过检测所述抗体与CD98的结合来确 定CD98的表达水平；和将测试细胞的CD98表达水平与对照细胞的CD98表达水平相比较， 其中与对照细胞相比，测试细胞较高的CD98表达水平显示癌症的存在性与CD98表达升高 有关。在一些实施方式中，所述测试细胞是来自怀疑患有癌症的患者的细胞，所述癌症选自 膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或 者肉瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。在一种实施方式中，所 述方法包括确定测试细胞表面上CD98的表达水平，和将所述测试细胞表面上CD98的表达 水平与对照细胞表面上CD98的表达水平相比较。在一些实施方式中，所述测试细胞是癌细 胞，并且所述对照细胞是相同组织类型的正常细胞。
[0041] 在一种实施方式中，本发明提供了任何上述抗体或功能性片段在诊断与CD98表 达升高有关的癌症的方法中的应用。在一些实施方式中，所述方法包括将测试细胞与任何 上述抗体接触；通过检测所述抗体与CD98的结合来确定CD98的表达水平；和将测试细胞 的CD98表达水平与对照细胞的CD98表达水平相比较，其中与对照细胞相比，测试细胞较高 的CD98表达水平显示癌症的存在性与CD98表达增加有关。在一些实施方式中，所述测试细 胞是来自怀疑患有癌症的患者的细胞，所述癌症选自膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、食道 癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病， 或者任何该些癌症的转移癌。在一种实施方式中，所述方法包括确定测试细胞表面上CD98 的表达水平，和将所述测试细胞表面上CD98的表达水平与对照细胞表面上CD98的表达水 平相比较。在一些实施方式中，所述测试细胞是癌细胞，并且所述对照细胞是相同组织类型 的正常细胞。
[0042] 在本发明的另一种实施方式中，提供了生产制品或"试剂盒"，其含有用于治疗如 上所述的病症的物质。所述生产制品包括容器和位于所述容器上或与之有关的标签或包装 说明书。适合的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。所述容器可W由多种材料， 如玻璃或塑料形成。所述容器容纳了对治疗病况有效的抗体或抗体-药物结合物（ADC)组 合物，并且可W具有无菌入孔（例如，所述容器可W是静脉内输液袋或者具有通过皮下注 射针头可刺穿的塞子的小瓶）。所述组合物中至少一种活性剂是抗体或ADC。标签或包装 说明书显示所述组合物用于治疗所选的病况，如癌症。作为另外一种选择或者另外，所述生 产制品还可W包括第二（或第H )容器，其包含可药用缓冲液，如抑菌性注射用水炬WFI)、 磯酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它还可W包括从商品化或使用者角度所期望 的其他材料，其包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

【专利附图】

【附图说明】
[0043] 图1示出了通过在AML、化L、CRC样品和相应正常对照中的STAg分析鉴别和定量 的CD98的蛋白表达水平。线显示了阳性样品中％归一化光谱丰度因子（NSA巧的平均值。
[0044] 图2是显示39个抗CD98抗体的表位框并（epitope binning)结果的图。
[0045] 图3示出了嵌合抗CD98单克隆抗体8-34B、18-2A2. 1U8-2A2. 2和18-2A2. 7的结 合性质。图3A是显示嵌合抗CD98单克隆抗体的表位框并结果的图。四个参比抗体如图1 所示。"同型"是不结合CD98的相同同型的对照抗体。图3B显示了嵌合抗CD98单克隆抗 体的Kd,如通过用结肠癌细胞系DLDl的FACS分析所确定的。图3C显示了用嵌合抗CD98 单克隆抗体染色的H种AML原发性肿瘤样品和表达食蟹猴CD98(cynCD98)的细胞系的FACS 分析结果。
[0046] 图4示出了人源化8-34B抗体的构成。图4A显示了与人受体序列（AC)和人源化 轻链Ll和L2的序列比对的鼠8-34B轻链可变结构域（IGN 34)的序列。根据K油at编号 的CDR用红色显示，并且与Ll相比，L2中的取代用下划线表示。图4A按照出现顺序分别公 开了 SEQ ID NO 6、38、15-16和38。图4B示出了与人受体序列（AC)和人源化重链H1、肥 和册的序列比对的鼠8-34B重链可变结构域（IGN 34)的序列。根据KK油at编号的CDR 用红色显示，并且与册相比，肥和册中的取代用下划线表示。图4B按照出现顺序分别公 开了 SEQ ID NO 4、39、17-19 和 40。
[0047] 图5示出了抗CD98抗体处理在建立的Ramos肿瘤中引起了强烈的肿瘤生长抑制。 治疗开始时的肿瘤体积从（A)约75mm3,（B)约150mm3提高至（C)约250mm 3。在第29天（A) 或第22天炬）停止抗体剂量施用，并且测量了研究持续期间的肿瘤再生长。将利妥昔单抗 (抗CD20抗体）用作阳性治疗对照抗体，并且抗体皿12UATCC)用作IgG2a同型阴性对照。
[0048] 图6示出了抗CD98抗体显著延长了所处理的RAMOS肿瘤发展的时间。计算了上 述肿瘤再生长数据的肿瘤倍增时间（图4A-C)并用于进一步预测发展时间（TTP)。然后，对 处理组内每只动物外推TTP，直至将达到2000mm 3,并且作为Kaplan-Meier曲线作图。
[0049] 图7示出了与rituxan(美罗华）和阴性对照IgG2a相比，抗CD98单克隆抗体 18-2A对淋己瘤异种移植中体内肿瘤生长的抑制。箭头显示抗体处理的施用。
[0050] 图8示出了与阴性对照IgG2a相比，抗CD98单克隆抗体18-2A和8-34B对急性髓 细胞性白血病异种移植中体内肿瘤生长的抑制。箭头显示抗体处理的施用。
[0051] 图9示出了与爱必妥和阴性对照IgG2a(第一研究）W及与DC101+CTX(环磯醜胺） 和阴性对照IgG2a(第二研究）相比，抗CD98单克隆抗体18-2A对结肠直肠癌异种移植中 体内肿瘤生长的抑制。DClOl是大鼠抗小鼠VEGFR2/邸R IgGl mAb(ATCC No.皿-11534)并 且用作阳性对照。箭头显示抗体处理的施用。
[0052] 图10示出了与爱必妥（抗EGFR)和阴性对照IgG2a相比，抗CD98单克隆抗体 18-2A对非小细胞肺癌异种移植中体内肿瘤生长的抑制。箭头显示抗体处理的施用。
[005引图11示出了抗CD98单克隆抗体对具有不同免疫缺陷背景的小鼠系；(A)NSG小 鼠；做NOD. SCID小鼠和似SCID小鼠中淋己瘤异种移植的体内肿瘤生长的影响。
[0054] 图12示出了与它们亲本鼠单克隆抗体（18-2A和8-34B)相比，嵌合抗CD98单克 隆抗体（18-2A-ch7. 1和8-34B-ch)对淋己瘤异种移植的体内肿瘤生长的影响的比较。
[005引图13示出了取代至人CD98序列（SEQ ID NO ;1) W形成用于绘制人源化单克隆抗 体IGN523结合的人CD98表位图的13个小鼠-人CD98嵌合体构件的小鼠CD98序列（SEQ ID NO ;96)区。
[0056] 图14示出了人源化单克隆抗体IGN523和对照抗体与13个小鼠-人CD98嵌合体 构件的结合，如通过FACS分析所确定的。
[0057] 图15示出了其中IGN523结合的人CD98区的序列，如使用小鼠-人CD98嵌合体 构件所鉴别的，和该序列在CD98的立体结构内的位置。氨基酸T358-G368(下划线）包埋 在晶体结构中并且不可能是结合界面的一部分。用加粗显示了人和小鼠序列之间的非保守 性残基。
[005引图16示出了通过将来自小鼠CD98的非同源性残基引入至人序列的祀标环区造 成IGN523与四个构件结合。构件4. 1包括突变J371L、D374Q、A375G和A376的缺失。构 件4.2包括突变；M383A和E384。构件4.3包括突变；D391N、F395I、P396F和D397H。构件 4. 4包括突变；G400R、A401P和A404L。通过用各个构件转染的CHO细胞的FACS分析检测 表口口。
[0059] 图17示出了 IGN523与祀标环区中疏水性残基的单个突变构件的结合。如所示 的，用高度带电的氨基酸取代每个所指明的疏水性残基。通过用各个构件转染的Cffi)细胞 的FACS分析检测结合。
[0060] 图18示出了 IGN523与在祀标环区中含有多个残基突变的构件的结合，如通过用 各个构件转染的C册细胞的FACS分析所检测的。Ml含有突变D374Q、D397H、G400R和A40IP。 M2含有突变D374E和A375E。M3含有突变D397S和口98T。
[0061] 图19示出了用于人源化单克隆抗体IGN523的表位定位的可变长度肤筛选的结 果。用水平线显示每种肤的化ISA结果。线的起点和终点显示了包含在所述肤中的残基。 线的Y值显示了对该肤所获得的化ISA结果。结果显示了对395FPDIPGA401的主要结合和 对379PGQP382(阴影区）的次要结合。
[0062] 图20示出了最佳结合的单一位置丙氨酸取代肤组的结果。每个残基均被A取代 (或者G，如果原始氨基酸为A)。图中取代字母作图的高度是对该突变肤所获得的ELISA 值。中线和阴影间隔显示了参考化ISA值。
[0063] 图21示出了表示得自将人CD98的两个部分序列狂轴上所示的SEQ ID N045-59， 和Y轴上所示的SEQ ID N060-74)合并的化IPS构象矩阵结构的数据的热图。
[0064] 图22示出了根据图21中所示的矩阵分析的强烈结合肤的突变筛选结果。SEQl示 出了肤序列，并且DIFl显示了肤中突变的位置。灰色区域显示了具有非突变序列的肤。最 后一列显示了野生型和突变肤之间化ISA值的差异。较高的值显示突变对结合具有强烈的 副作用。
[0065] 图23示出了确定对人源化单克隆抗体IGN523的结合重要的氨基酸残基的人CD98 的序列中和表面上的位置。图23A显示了通过嵌合体和突变研究（加粗），通过化pscan分 析（灰色），或者通过两者（阴影）确定的残基序列中的位置。图23B显示了通过嵌合体和 突变研究（暗灰色）确定的残基位置。图23C显示了通过化pscan分析（浅灰色）确定的 残基位置。图23D显示了两组残基的重叠（黑色）。
[0066] 图24示出了与利妥昔单抗和阴性对照IgG相比，人源化单克隆抗体IGN523对 RAMOS (RA. 1)伯基特淋己瘤异种移植中体内肿瘤生长的抑制。在第11、17和25天，W IOmg/ kg腹膜间剂量施用抗体。箭头显示抗体处理的施用。
[0067] 图25示出了与r;Uuxan和阴性对照IgG相比，人源化单克隆抗体IGN523对DAU 伯基特淋己瘤异种移植中体内肿瘤生长的抑制。在第20和26天，W lOmg/kg腹膜间剂量 施用抗体。箭头显示抗体处理的施用。
[006引图26A示出了与卡笛和阴性对照IgG相比，人源化单克隆抗体IGN523对 IGN-LNG-12肺肿瘤异种移植中体内肿瘤生长的抑制。在第17、24和31天，分别W IOmg/ kg或75mg/kg腹膜间剂量施用IGN523和卡笛。箭头显示处理的施用。图2她显示了对 应于图26A中用所指示的试剂处理的小鼠的体重测量。W其最大耐受剂量施用卡笛，它在 NOD-SCID小鼠中引起体重损失。
[006引图27示出了与rituxan和阴性对照IgG相比，人源化单克隆抗体IGN523对KG-I 急性髓细胞性白血病异种移植中体内肿瘤生长的抑制。在第21、28和34天，W 15mg/kg腹 膜间剂量施用抗体。箭头显示抗体处理的施用。
[0070] 图28示出了人源化单克隆抗体IGN523对肺肿瘤异种移植中体内肿瘤生长的剂量 依赖性抑制。在第12和19天，W所指示的剂量腹膜内施用抗体。箭头显示抗体处理的施 用。
[0071] 图29示出了通过人源化单克隆抗体IGN523的人和食蟹猴冷冻组织切片的 染色。用IOy g/mL的IGN523对人和食蟹猴肾、脑和胎盘的冷冻切片染色。将化son、 化ng和化erck用于免疫组织化学的方法的修改用于消除对标记IGN523的需要W及 用于排除第二标记的抗人IgG和对待检查组织为内源的IgG之间的非特异性反应性 (Rmgl992, Hierckl994, I\isonl990)。W约5 y m切割切片。开始，评价所有载玻片的组织 元件和染色的适合性，然后由研究病理学家对染色强度进行评价并主观地分级。除人脑 (20X)外，W 40X放大显示代表性图片。

【具体实施方式】
[0072] 一般巧术
[0073] 本文所描述或参考的技术和程序是本领域技术人员一般公知并且使用常规 方法常用的，如，例如，在 Sambrook 等人，Molecular Cloning = A L油oratory Manual, 第 3 版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. Current Protocols in Molecular Biology (p.M. Ausubel 等人主编，（2003)); Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic, Z. An主编，Wiley, Hoboken N J. (2009) ;Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols, M. A 化 itar 主编，Humana Press, Totawa,N.J. (2010);和 Antibody !Engineering,第 2 版，第 I 卷和第 2 卷，Kontermann and Dubel 主编，Springer-Verlag, Heide化e;rg, 2010 中描述的广泛使用 的方法。
[0074] 定义和缩写 [00巧]定义
[0076] 出于解释本说明书的目的，W下定义将适用并且当适合时，W单数使用的术语还 将包括复数，并且反之亦然。如果所述的任何定义与作为参考并入本文的任何文档冲突时， 则应W下列所述的定义为准。
[0077] 如本文所使用的，除非另外说明，否则术语"CD98"是指来自任何脊椎动物源的任 何天然CD98,所述脊椎动物包括哺乳动物，如灵长类（例如，人、食蟹猴（cyno))、狗和晒齿 类（例如，小鼠和大鼠）。W下分别作为SEQ ID NO ;1和SEQ ID NO ;2提供了人CD98的氨 基酸和编码核酸序列。
[0078] MSQDTEVDMKEV 化肥 LEP 邸 QPMNAASGAAMSLAGA 邸 NGLVKIKVAEDEAEAAAAAKFTCLSIffiEli KVAGSPGWVRTRWA 化化 FWLGWLGMLAGAVVIIVRAPRCRELPAQKWWHTGALYRIGDLQAFQGHGAGNLA 化 KGR LD 化 SSLKVKGLVLGPIHKNQ 邸 DVAQTDLLQIDPNFGS 邸 D 抑化 LQSAKKKSIRVILDLTPNYRGENSWFSTQVD TVATKV 邸 ALEFWLQAGVDGFQV 畑 IENL 邸 ASS 化 AEWQNITKG!^ 邸化 LlAGTNSSDLQQIL^LESMffilXLT SS化SDSGSTGEHTKSLVTQYLNATGNRWCSW化SQA化LTS化PA化Lrlyqlmlfiipgtpvfsygdeigldaaa LPGQPMEAPVMLWDESSFPDIPGAVSANMTVKGQS邸PG化LSLFRRLSDQRS邸RSLL服DFHAFSAGPGLFSYIR HWDQ 肥 R化 WLNFGDVGLSA 化 QASDLPASASLPAKADL 化 STQPGREEGSPLELERLKLEP 肥化化 RFPYAA(S EQ ID NO ：1)
[00巧]ATGAGCCAGGACACCGAGGTGGATATGAAGGAGGTGGAGCTGAATGAGTTAGAGCCCGAGAAGCAGCCG ATGAACGCGGCGTCTGGGGCGGCCATGTCCCTGGCGGGAGCCGAGAAGAATGGTCTGGTGAAGATCAAGGTGGCGGA AGACGAGGCGGAGGCGGCAGCCGCGGCTAAGTTCACGGGCCTGTCCAAGGAGGAGCTGCTGAAGGTGGCAGGCAGCC CCGGCTGGGTACGCACCCGCTGGGCACTGCTGCTGCTCTTCTGGCTCGGCTGGCTCGGCATGCTTGCTGGTGCCGTG GTCATAATCGTGCGAGCGCCGCGTTGTCGCGAGCTACCGGCGCAGAAGTGGTGGCACACGGGCGCCCTCTACCGCAT CGGCGACCTTCAGGCCTTCCAGGGCCACGGCGCGGGCAACCTGGCGGGTCTGAAGGGGCGTCTCGATTACCTGAGCT CTCTGAAGGTGAAGGGCCTTGTGCTGGGTCCAATTCACAAGAACCAGAAGGATGATGTCGCTCAGACTGACTTGCTG CAGATCGACCCCAATTTTGGCTCCAAGGAAGATTTTGACAGTCTCTTGCAATCGGCTAAAAAAAAGAGCATCCGTGT CATTCTGGACCTTACTCCCAACTACCGGGGTGAGAACTCGTGGTTCTCCACTCAGGTTGACACTGTGGCCACCAAGG TGAAGGATGCTCTGGAGTTTTGGCTGCAAGCTGGCGTGGATGGGTTCCAGGTTCGGGACATAGAGAATCTGAAGGAT GCATCCTCATTCTTGGCTGAGTGGCAAAATATCACCAAGGGCTTCAGTGAAGACAGGCTCTTGATTGCGGGGACTAA CTCCTCCGACCTTCAGCAGATCCTGAGCCTACTCGAATCCAACAAAGACTTGCTGTTGACTAGCTCATACCTGTCTG ATTCTGGTTCTACTGGGGAGCATACAAAATCCCTAGTCACACAGTATTTGAATGCCACTGGCAATCGCTGGTGCAGC TGGAGTTTGTCTCAGGCAAGGCTCCTGACTTCCTTCTTGCCGGCTCAACTTCTCCGACTCTACCAGCTGATGCTCTT CACCCTGCCAGGGACCCCTGTTTTCAGCTACGGGGATGAGATTGGCCTGGATGCAGCTGCCCTTCCTGGACAGCCTA TGGAGGCTCCAGTCATGCTGTGGGATGAGTCCAGCTTCCCTGACATCCCAGGGGCTGTAAGTGCCAACATGACTGTG AAGGGCCAGAGTGAAGACCCTGGCTCCCTCCTTTCCTTGTTCCGGCGGCTGAGTGACCAGCGGAGTAAGGAGCGCTC CCTACTGCATGGGGACTTCCACGCGTTCTCCGCTGGGCCTGGACTCTTCTCCTATATCCGCCACTGGGACCAGAATG AGCGTTTTCTGGTAGTGCTTAACTTTGGGGATGTGGGCCTCTCGGCTGGACTGCAGGCCTCCGACCTGCCTGCCAGC GCCAGCCTGCCAGCCAAGGCTGACCTCCTGCTCAGCACCCAGCCAGGCCGTGAGGAGGGCTCCCCTCTTGAGCTGGA ACGCCTGAAACTGGAGCCTCACGAAGGGCTGCTGCTCCGCTTCCCCTACGCGGCCTGA(SEQ ID NO ：2)
[0080] 术语"CD98"涵盖了 "全长"未处理的CD98 W及由在细胞中的处理所产生的任何 形式的CD98。该术语还涵盖了 CD98的天然存在的变体或突变，例如，剪切变体、等位变体、 SNP变体和同工型。本文所述的CD98多肤可W分离自多种来源，如来自人组织类型或者来 自另一种来源，或者通过重组或合成方法制备。"天然序列CD98多肤"包括具有与来源于天 然的相应CD98多肤相同的氨基酸序列的多肤。该些天然序列CD98多肤可W分离自天然， 或者可W通过重组或合成方式产生。术语"天然序列CD98多肤"具体地涵盖了天然存在的 截短或分泌形式的特异性CD98多肤（例如，胞外域序列）、所述多肤的天然存在的变体形式 (例如，作为另外一种选择，剪切形式）和天然存在的等位变体。
[0081] 术语"抗体"W最广泛的含义使用并且具体地涵盖了，例如，单一抗CD98单克隆抗 体（包括激动剂、枯抗剂、中和抗体、全长或完整单克隆抗体）、具有多表位特异性的抗CD98 抗体组合物、多克隆抗体、多价抗体、多重特异性抗体（例如，双重特异性抗体，只要它们显 示出所需的生物活性），它是由至少两个完整抗体形成的，单链抗CD98抗体和抗CD98抗体 的片段，如W下所定义的。在本文中，术语"免疫球蛋白"（Ig)与抗体是可互换地使用的。 抗体可W是人抗体、人源化抗体和/或亲合成熟的抗体。
[0082] "抗原"是抗体可W选择性结合的预先确定的抗原。祀标抗原可W是多肤、碳水化 合物、核酸、脂质、半抗原或其他天然存在或合成的化合物。优选地，所述祀标抗原是多肤。
[0083] "结合"所关也的抗原的抗体是W足够的亲合力结合抗原的抗体，从而所述抗体 作为祀向表达所述抗原的细胞或组织的治疗剂是有用的，并且与其他蛋白无显著的交叉反 应。在该些实施方式中，抗体与"非祀标"蛋白结合的程度将小于抗体与其特定祀标蛋白结 合的约10%，如通过英光激活细胞分选（FAC巧分析或放射免疫沉淀巧IA)所确定的。对于 抗体与祀标分子的结合，术语"特异性结合"或"特异性结合至"特定多肤或特定多肤祀标 上的表位或对其"特异的"是指可测量地不同于非特异性相互作用的结合。可W通过（例 如）确定与对照分子的结合相比的分子结合来测量特异性结合，所述对照分子通常是具有 类似结构但不具有结合活性的分子。例如，可W通过与类似于祀标，例如，过量的未标记的 祀标的对照分子的竞争来确定特异性结合。在该种情况下，如果标记祀标与探针的结合被 过量未标记的祀标竞争性地抑制，则表明是特异性结合。如本文所使用的，术语"特异性结 合"或"特异性结合至"特定多肤或特定多肤祀标上的表位或者对其"特异"可W通过（例 如）对祀标具有至少约ICT 4M,作为另外一种选择，至少约IO^M,作为另外一种选择，至少约 i(t6m，作为另外一种选择，至少约！(Tm,作为另外一种选择，至少约i〇-8m，作为另外一种选 择，至少约1(T9m，作为另外一种选择，至少约作为另外一种选择，至少约icriiM，作为 另外一种选择，至少约ICTi 2M或更大的Kd的分子来显示。在一种实施方式中，术语"特异性 结合"是指其中分子结合至特定多肤或特定多肤上的表位，但与任何其他多肤或多肤表位 基本没有结合的结合。
[0084] 术语"抗CD98抗体"或者"结合至CD98的抗体"是指能够W足够的亲合力结合CD98 从而使所述抗体在作为祀向CD98的诊断和/或治疗剂时有用的抗体。优选地，抗CD98抗 体与不相关的非CD98蛋白结合的程度小于所述抗体与CD98结合的约10%，例如，如通过英 光激活细胞分选（FAC巧分析或放射免疫沉淀巧IA)所测量的。"特异性结合至"CD98或对 CD98 "特异"的抗体为如上所定义的。在某些实施方式中，结合至CD98的抗体的解离常数 化d)<lyM，<100nM，<10nM，<lnM或<0.1nM。在某些实施方式中，抗CD98抗体结合至在来 自不同物种的CD98中保守的CD98表位。
[0085] "分离的抗体"是已鉴别并分离和/或从其自然环境组成中获得的抗体。其自然环 境的污染物组分包括（但不限于）将干扰抗体的治疗性使用的材料，并且所述材料可W包 括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。在优选的实施方式中，所述抗体将纯化（1)达到 按重量计大于95 %的抗体，如通过Lowry法（Lowry等人，J. Bio. Chem. 193:265-275, 1951) 所确定的，并且最优选地大于按重量计的99%，（2)达到足W通过使用自旋杯测序仪 (spinning cup sequenator)获得N端的至少15个残基或内部氨基酸序列的程度，或（3) 达到使用考马斯亮蓝染色，或者优选地银染在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE确定的 均一性。分离的抗体包括在重组细胞内的原位抗体，因为所述抗体的天然环境的至少一个 组分将不存在。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤制备。
[0086] 基本的4-链抗体单元是包含两个相同的轻（L)链和两个相同的重（H)链的杂四 聚糖蛋白。就IgG来说，4-链单元通常为约150, 000道尔顿。每个L链通过一个共价二硫 键与H链连接，而根据H链的同型，两个H链通过一个或多个二硫键彼此连接。每条H链和 L链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条H链在N-末端具有一个可变结构域（Vh),接着是 H个（对于每种a和Y链）和四个（对于y和e同型）恒定结构域（Ch)D每条L链在 N-末端具有一个可变结构域（￥山接着在其另一端具有一个恒定结构域（片)。￥^与￥?排列 在一起，而片与重链的第一恒定结构域（ChI)排列在一起。特定的氨基酸残基被认为在轻 链和重链可变结构域之间形成界面。成对的Vh和Vl 一起形成单一抗原结合位点。对于不 同类别抗体的结构和性质，参见，例如，Basic and Clinical Immunology,第8版，Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (主编），Appleton&Lange, Norwa化,CT, I 994,第71页和第6章。
[0087] 抗体的"可变区"或"可变结构域"或"V域"是指抗体的重链或轻链的氨基端域。 重链的可变结构域可W称为"VH"。轻链的可变结构域可W称为"VL"。术语"可变"是指在 抗体中，可变结构域的某些部分在序列上显著不同的事实。V域调节抗原结合并且定义了特 定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性是在可变结构域的110个氨基酸区间内不均 匀分布的。相反，V区由15-30个氨基酸的称作框架区（FR)的相对不变异的区段及将框架 区分开的每个9-12个氨基酸长的称作"高变区"的极度变异的较短区域组成。天然重链和 轻链的可变结构域分别包含四个FR,它们大多采取目-折叠构象，通过形成环状连接且在 一些情况下形成目-折叠结构的一部分的H个高变区连接。每条链中的高变区通过FR紧 密结合在一起，并且与来自另一条链的高变区一起促进抗体的抗原结合位点的形成（参见 Kabat尊人.Se日Uences of Proteins of Tmmunol ogical Interest.第 5 片反.Public Health Service, ^tional Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)。恒定结构域不直接参与 抗体与抗原的结合，但显示出多种效应子功能，如在抗体依赖性细胞毒性（ADCC)和补体依 赖性细胞毒性（CDC)中抗体的参与。
[008引"完整"抗体是包含抗原结合位点W及片和至少重链恒定结构域Ch1、Ch2和句3的 抗体。所述恒定结构域可W是天然序列恒定结构域（例如，人天然序列恒定结构域）或其 氨基酸序列变体。优选地，所述完整抗体具有一种或多种效应子功能。
[0089] "抗体片段"包含完整抗体的一部分，优选地，包含完整抗体的抗原结合区或可变 区。抗体片段的实例无限制地包括F油、F油'、F (油'）2和Fv片段；双抗体和双-双抗体（参 见，例如，Holliger, P.等人，（1993)Proc.化tl. Acad. Sci. 90:6444-8 ;Lu，D.等人，（2005) J. Biol. Chem. 280:19665-72 ;Hudson 等人，化t.Med. 9:129-134(2003) ;W0 93/11161 ;和 美国专利No. 5837242和6492123);单链抗体分子（参见，例如，美国专利No. 4946778 ; 5260203 ;5482858和5476786);双可变结构域抗体（参见，例如，美国专利No. 7612181); 单可变结构域抗体（SdAb)(参见，例如，Woolven 等人，Immunogenetics 50:98-101, 1999 ; Streltsov等人，Proc 化tl Acad Sci USA. 101:12444-12449,2004);和由抗体片段形成的 多特异性抗体。
[0090] 治疗性抗体的"功能性片段"将显示出至少一种归因于完整抗体的生物学功能，女口 果不是一些或全部生物学功能的话，所述功能包括至少对祀标抗原的特异性结合。
[0091] 如本文所使用的，术语"单克隆抗体"是指得自基本均一的抗体群体的抗体，即除 了可W少量存在的可能的天然存在的突变之外，组成所述群体的各个抗体是相同的。不应 将修饰语"单克隆"视作需要通过任何特定方法产生抗体。例如，可W通过首先由Kohier 等人，化化re, 256:495(1975)描述的杂交瘤法制备在本发明中有用的单克隆抗体，或者 可W在细菌、真核动物或植物细胞（参见，例如，美国专利No. 4816567)中使用重组DNA 法进行。例如，使用 Clackson 等人，化Uire, 352:624-628(1991)和 Marks 等人，J. Mol. Biol.，222:581-597(1991)中所述的技术，还可W从瞻菌体抗体文库中分离"单克隆抗体"。
[0092] 在本文中，单克隆抗体包括其中部分重链和/或轻链与来源于特定物种或属于特 定抗体种类或亚类的抗体中的相应序列等同或相同，而所述链的其余部分与来源于另一物 种或属于另一种抗体种类或亚类的抗体中的相应序列等同或相同的"嵌合"抗体，W及该些 抗体的片段，只要它们显示出所需的生物活性（参见美国专利No. 4816567 ;和Morrison等 人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。
[0093] 非人（例如，晒齿类）抗体的"人源化"形式是指包含来源于非人抗体的最少序列 的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白（受体抗体）中的受体的高变区残 基被具有所期望的抗体特异性、亲合力和能力的非人物种（供体抗体），如小鼠、大鼠、兔或 非人灵长类动物的高变区残基置换的人免疫球蛋白。在一些情况下，将人免疫球蛋白的框 架区（FR)残基用相应的非人残基置换。此外，人源化抗体可W包含在受体抗体或供体抗体 中不存在的残基。进行该些修饰是为了进一步改进抗体性能。一般地，人源化抗体将包含 基本全部的至少一个，并且通常两个可变结构域，其中全部或基本全部的高变环对应于非 人免疫球蛋白的那些，并且全部或基本全部的FR为人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体 任选地还将包含免疫球蛋白恒定区（Fe)的至少一部分，通常为人免疫球蛋白的恒定区。有 关其他详细情况，参见化nes等人，化化re 321:522-525 (1986);化echmann等人，化化re 332:323-329 (1988);和 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。还参见在本 文中引用的下列综述和专利和参考文献；Vaswani和Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol, 1:105-115(1998) ；Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038(1995)； Almagro and Rransson'Rront.Biosci. 13:1619-1633(2008);美国专利 No. 5585089; 5693762 ;6180370 ;和 6054297。
[0094]"人抗体"指具有该样的氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列对应于该样抗体的 氨基酸序列，所述抗体由人产生和/或已使用如本文所公开的用于制备人抗体的任何技 术制备。人抗体的该种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可W使用本 领域中已知的多种技术产生人抗体，其包括瞻菌体展示文库化OOgenboom和Winter, J. Mol.Biol，227:381 (1991) ;Marks 等人，J.Mol.Biol，222:581 (1991))和酵母展示文库 (化ao等人，化化re Protocolsl :755-768 (2006))。在W下文献中描述的方法也可用 于制备人单克隆抗体；Cole 等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Hierapy, Alan R. Liss,第 77 页（1985) sBoerner 等人，J. Immunol, 147 (I) : 86-95 (1991)。还参见 van DiJk和 van de WinkeLQirr. Opin. Pharmacol,5:368-74(2001)。可 W通过将抗原施 用于转基因动物来制备人抗体，所述转基因动物已修饰在对抗原激发起反应时会产生 该些抗体，但是其内源位点已失去功能，例如，小鼠（参见，例如，化kobovits, A.,化rr. Opin,Biotechnol. 1995, 6 (5):561-6 ；Briiggemann and Taussing,Curr.Opin. Biotechnol. 1997, 8(4) :455-8 ;和有关 XEN0M0USE? 技术的美国专利 No. 6075181 和 6150584)。有关通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体，参见，例如，Li等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562(2006)。
[009引当在本文中使用时，术语"高变区"、"HVR"或"HV"是指序列上高度可变和/或形成 结构上定义的环的抗体可变结构域区域。通常，抗体包含六个高变区：H个在VH中化1、肥、 册），H个在化中（LU 12、L3)。使用了一些高变区示意图并且它们涵盖在本文中。K油at 互补决定区（CDR)基于序列变异性，并且是最常用的化油at等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5 片反，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。相反，Qiothia 是指结构环的位置（Qiothia和 Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。根据环的长度，化Othia CDR-Hl环的末端在使用K油at编号规 则编号时在册2和册4之间改变（该是因为K油at编号方案着眼于H35A和H35B处的插入； 如果35A和35B均不存化则环在32处结束；如果仅35A存化则环在33处结束；如果35A 和35B均存在，则环在34处结束）。AbM高变区表示K油at CDR和化Othia结构环之间的 折中，并且通过牛津分子AbM抗体模型软件（Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)使用。"触点"高变区基于可用的复合物晶体结构的分析。下文记录了该些高变 区中每一个的残基。
[0096] 环 Kabat AbM Cbothia 触点 LI L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96 HI H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat編号） HI H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia编号） H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58 H3 H95-H102 H95-HI02 H96-H101 H93-H101
[0097] 高变区可以包括如下所示的"延伸的高变区":VL中的24-36或24-34 (LI)、46-56 或 50-56 (L2)和 89-97 或 89-96 (L3)及VH中的 26-35 或 26-35A(Hl)、50-65 或 49-65 (H2) 和93-102、94-102或95-102 (H3)。对于这些定义中的每一个，可变结构域残基是根据Kabat 等人（如上）进行编号的。如本文所使用的，术语"HVR"和"CDR"是可互换使用的。
[0098] "框架"或"FR"残基是指除本文中所定义的高变区残基之外的那些可变结构域残 基。
[0099] 术语"依照Kabat的可变结构域残基编号"或"依照Kabat的氨基酸位置编号"及 其变化形式是指Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第 5 版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991)中用 于抗体编制的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用该编号系统，真实的线 性氨基酸序列可以含有对应于可变结构域的FR或CDR的缩短或插入的较少或其他的氨基 酸。例如，重链可变结构域可以在H2的残基52之后包含单个氨基酸插入（根据Kabat，残 基52a)和在重链FR残基82之后包含插入的残基（例如，根据Kabat，残基82a、82b和82c 等）。可以通过用"标准"Kabat编号序列在抗体序列同源性区进行比对来确定给定抗体的 Kabat残基编号。
[0100] 当提及可变结构域中的残基（大致为轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时， 通常使用Kabat编号系统（例如，Kabat等人，SequencesofImmunologicalInterest.第 5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md. (1991))〇 "EU编号系统"或"EU索弓I" 一般在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用（例如，在 Kabat等人中报道的EU索引，如上）。"如在Kabat中的EU索弓丨"指人IgGlEU抗体的残基 编号。除非本文中另有说明，否则提及抗体可变结构域中的残基编号是指根据Kabat编号 系统的残基编号。除非本文中另有说明，否则提及抗体恒定结构域中的残基编号是指根据 EU编号系统的残基编号。
[0101] "亲合力成熟的"抗体是指这样的抗体，在该抗体的一个或多个HVR中具有一 个或多个改变，这导致该抗体对抗原的亲合力与没有这些改变的亲本抗体相比有所提 高。优选的亲合力成熟的抗体将对靶标抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲合力。通过 本领域中已知的程序产生亲合力成熟抗体。有关综述，参见Hudson和Souriau,Nature Medicine9:129-134(2003) ；Hoogenboom,NatureBiotechnol. 23:1105-1116 (2005)； Quiroz 和 Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia4:39-51(2010)。
[0102] "阻断"抗体或"枯抗剂"抗体是抑制或降低它所结合的抗原的生物活性的抗体。优 选的阻断抗体或枯抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物活性。
[0103] 如本文所使用的，"激动剂抗体"是模拟所关也的多肤的至少一种功能性活性的抗 体。
[0104] "结合亲合力"一般是指分子（例如，抗体）的单一结合位点与其结合伴侣（例如， 抗原）之间非共价相互作用的总和的强度。除非另外说明，否则如本文所使用的，"结合亲 合力"是指反映结合对成员（例如，抗体和抗原）之间1 :1相互作用的内在结合亲合力。分 子X对其伴侣Y的亲合力一般可W通过解离常数（KD)来表示。可W通过本领域中已知的常 规方法来测量亲合力，包括本文所述的那些方法。低亲合力抗体通常与抗原缓慢结合并且 往往易于解离，而高亲合力抗体通常与抗原更快速地结合并且往往保持结合更长时间。测 量结合亲合力的多种方法在本领域中是已知的，并且出于本发明的目的，可W使用任何该 些方法。W下描述了具体的说明性实施方式。
[0105] 当在本文中用于表示结合亲合力时，"或者更好的"是指分子（例如，抗体）及其 结合伴侣之间更强的结合，并且它是由较小的Kd数值表示的。例如，对抗原的亲合力为 6nM或者更好的"抗体，所述抗体对抗原的亲合力<.6nM，即.59nM、. 58nM、. 57nM等，或者 小于.6nM的任何值。
[0106] 在一种实施方式中，根据本发明的"Kd"或"Kd值"是通过使用所关也的抗体及其 抗原的F油形式进行的放射性标记的抗原结合测定巧IA)来测量的，如通过测量F油溶液 对抗原的结合亲合力的W下测定所描述的，所述测定是在存在非标记抗原的滴定系列的情 况下用最低浓度的严 51)-标记抗原平衡Fab,然后用抗Fab抗体涂覆的板捕获结合的抗原 来进行的（Chen等人，（1999) J. Mol Biol 293:865-881)。根据另一种实施方式，Kd或Kd 值是通过使用（例如）BIAcore-2000 或TM BIAcore-3000 炬IAcore, Inc. ,Piscataway, NJ), 用表面等离子共振测定所测量的TM。
[0107] 根据本发明，还可W使用（例如）BIAcore-2000?或者BIAcore-3000?炬IAcore Inc.，Piscataway, NJ)，使用如上所述的相同的表面等离子共振技术来确定"on速率"或 "结合速率"或"kon"。
[010引如本文所使用的，短语"基本类似的"或者"基本相同的"表示两个数值（一般一个 与本发明的抗体有关，而另一个与参比抗体有关）之间差异的足够高的相似度，从而本领 域技术人员将认为在通过所述值所测量的生物学特征的背景内所述两个数值之间的差异 几乎没有生物和/或统计显著性。根据参比抗体的值，所述两个值之间的差异优选地小于 约50 %，优选地小于约40 %，优选地小于约30 %，优选地小于约20 %，优选地小于约10 %。
[0109] 如本文所使用的，短语"基本降低的"或者"基本不同的"表示两个数值（一般一 个与本发明的抗体有关，而另一个与参比抗体有关）之间差异的足够高的相似度，从而本 领域技术人员将认为在通过所述值所测量的生物学特征（例如，Kd值、HAMA反应）的背景 内所述两个值之间的差异具有统计显著性。根据参比抗体的值，所述两个值之间的差异优 选地大于约10 %，优选地大于约20 %，优选地大于约30 %，优选地大于约40 %，优选地大于 约 50%。
[0110] "抑制表达CD98多肤的肿瘤细胞生长"的抗体或者"生长抑制性"抗体是导致表达 或过表达适当的CD98多肤的癌细胞产生可测量的生长抑制的抗体。CD98多肤可W是在癌 细胞表面上表达的跨膜多肤，或者可W是由癌细胞产生和分泌的多肤。与适当的对照相比， 优选的生长抑制性抗CD98抗体将表达CD98的肿瘤细胞的生长抑制超过20%，优选地抑制 了约20%至约50%，并且甚至更优选地，抑制了大于50% (例如，约50%至约100% )，所 述对照通常是未用待测试抗体处理的肿瘤细胞。在一种实施方式中，可W在细胞培养物中 W约0. 1至30g/ml或者约0. SnM至200nM的抗体浓度测量生长抑制，其中所述生长抑制是 在将肿瘤细胞暴露于所述抗体后的1-10天确定的。可W通过如下所述的多种方式确定肿 瘤细胞的体内生长抑制。如果W约1 y g/kg至约lOOmg/kg体重施用抗CD98抗体会在从所 述抗体的首次施用起约5天至3个月，优选地约5天至30天内导致肿瘤大小或肿瘤细胞增 殖减少，则所述抗体是体内生长抑制的。
[0111] "诱导细胞调亡"的抗体是诱导程序性细胞死亡的抗体，如通过膜联蛋白V结合、 DNA断裂、细胞皱缩、内质网膨胀、细胞破碎和/或膜囊（称为调亡体）形成所确定的。细胞 通常是过表达CD98多肤的细胞。优选地，所述细胞是肿瘤细胞。多种方法对评价与细胞调 亡有关的细胞事件是可用的。例如，可W通过膜联蛋白结合测量磯脂醜丝氨酸（P巧易位； 可W通过DNA梯度法（laddering)评估DNA断裂；并且可W通过亚二倍体细胞的任何增加 评价核/染色质浓缩W及DNA断裂。优选地，诱导细胞调亡的抗体是在膜联蛋白结合测定 中相对于未处理细胞引起约2至50倍、优选地约5至50倍、最优选地约10至50倍的膜联 蛋白结合诱导的抗体。
[0112] "诱导细胞死亡"的抗体是导致活细胞死亡的抗体。所述细胞是特异表达或过表 达CD98多肤的细胞类型。所述细胞可W是癌性的或者是特定细胞类型的正常细胞。CD98 多肤可W是在癌细胞表面上表达的跨膜多肤，或者可W是由癌细胞产生和分泌的多肤。可 W在不存在补体和免疫效应细胞的情况下确定细胞体外死亡W区分抗体依赖性细胞介导 的细胞毒性（ADCC)或补体依赖性细胞毒性（CDC)诱导的细胞死亡。因此，可W使用热 失活血清（即，在没有补体的情况下）和在没有免疫效应细胞的情况下进行细胞死亡测 定。为了确定抗体是否能够诱导细胞死亡，如通过楓化丙巧（PI)、台盼蓝（参见Moore等 人，切totechnology 17:1-11(1995))或7AAD的吸收所评价的，可W相对于未处理的细胞 评价膜完整性的损失。优选的细胞死亡诱导的抗体是在BT474细胞中的PI吸收测定中诱 导PI吸收的那些。
[0113] 抗体"效应子功能"是指那些可归于抗体化区（天然序列化区或氨基酸序列变 体化区）的生物学活性，且其随抗体同型而变化。抗体效应子功能的实例包括；Clq结合 和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC);吞瞻作用； 细胞表面受体（例如，B细胞受体）的下调；和B细胞活化。
[0114] 在本文中，术语"化区"用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域，其包括天然序列 化区和变体化区。尽管免疫球蛋白重链的化区的边界可W改变，但是人IgG重链化区通 常定义从位置切S226的氨基酸残基或从pro230延伸至其駿基末端。例如，在抗体的生产 或纯化期间或者通过重组工程设计编码所述抗体重链的核酸，可W除去化区的C末端赖氨 酸（根据抓编号系统的残基447)。因此，完整抗体的组成可W包括全部K447残基除去的 抗体群体、无K447残基除去的抗体群体和具有K447残基除去和未除去的抗体混合物的抗 体群体。
[0115] "功能性化区"具有天然序列化区的"效应子功能"。示例性"效应子功能"包括 Clq结合；CDC ;化受体结合；ADCC ;吞瞻作用；细胞表面受体（例如，B细胞受体；BCR)下调 等。该些效应子功能通常需要化区与结合域结合（例如，抗体可变结构域）并且可W使用 如（例如）在本文中的定义中所公开的多种测定评价。
[0116] "天然序列化区"包含与自然界中存在的化区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。 天然序列人化区包括天然序列人IgGl化区（非A和A同种异型）；天然序列人IgG2化区； 天然序列人IgG3化区；和天然序列人IgCM化区及其天然存在的变体。
[0117] "变体化区"包含由于至少一个氨基酸修饰，优选地一个或多个氨基酸取代而不同 于天然序列化区的氨基酸序列。优选地，与天然序列化区或与亲本多肤的化区相比，变 体化区具有至少一个氨基酸取代，例如，在天然序列化区或在亲本多肤的化区中约1至 约10个氨基酸取代，并且优选地约1至约5个氨基酸取代。在本文中，变体化区将优选地 与天然序列化区和/或与亲本多肤的化区具有至少约80%的同源性，并且最优选地与其 具有至少约90 %的同源性，更优选地与其具有至少约95 %的同源性。
[0118] "抗体依赖性细胞介导的细胞毒性"或者"ADCC"是指一种细胞毒性形式，其中分 泌的Ig结合至在某些细胞毒性细胞（例如，自然杀伤（NK)细胞、中性粒细胞和巨瞻细胞） 上存在的化受体（FcR)，从而使得该些细胞毒性效应细胞与具有抗原的祀细胞特异性结合 并随后通过细胞毒素杀死祀细胞。所述抗体"武装"细胞毒性细胞，而且绝对是该类杀伤 所必需的。介导ADCC的主要细胞仅表达化Y RIII，而单核细胞表达化Y RI、化Y RII和 化 Y RIII。Ravetch 和 Kinet,Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)中第 464 页上的表 3 总 结了造血细胞上的FcR表达。为了评价所关也的分子的ADCC活性，可W进行体外ADCC测 定，如美国专利No. 5500362或5821337中所述的。对于该些测定有用的效应细胞包括周围 血单核细胞（PBMC)和自然杀伤（NK)细胞。作为另外一种选择或另外，可在体内评价所关 也的分子的ADCC活性，例如，在动物模型中，如Clynes等人扣SA) 95:652-656 (1998)中所 公开的。
[0119] "化受体"或"FcR"描述了与抗体化区结合的受体。优选的FcR是天然序列人 化R。此外，优选的FcR是与IgG抗体结合的化R( Y受体），并且其包括化Y RI、化Y RII 和化YRIII亚类的受体，包括该些受体的等位变体和作为另外一种选择，该些受体的 剪切形式。化YRII受体包括化YRIIA("活化受体"）和化YRIIB ("抑制受体"）， 它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其细胞质域（参见综述M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-2:34(1997))。I^R 的综述参见 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492(1991) ;Capel 等人，Immunomethods4:25-；M(1994);和 de 化 as 等 人，J. L油.Cl in. Med. 126:330-41(1995)。术语"化R"在本文中涵盖其他化R，包括未来将 会鉴别的化R。该术语还包括新生儿受体（化化），它负责将母体的IgG转移给胎儿（Guyer 等人，J. Immunol. 117:587(1976)和 Kim 等人，J. Immunol. 24:249 (1994))。对化R 的结合 改善或减弱的抗体变体描述于，例如，W02000/42072和美国专利No. 7183387 ;7332581 ;和 7335742。还参见，例如，Shields 等人，J. Biol. Chem. 9(2) :6591-6604(2001)。
[0120] "补体依赖性细胞毒性"或"CDC"是指在存在补体的情况下祀细胞的溶胞。经典 补体途径的激活是由补体系统第一组分（Clq)的结合与其同族抗原结合的（适当子类的） 抗体起始的。为了评价补体激活，可W进行CDC测定，例如，Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163(1996)所述的。具有改变的化区氨基酸序列的多肤变体（具有 变体化区的多肤）和Clq结合能力的提高或降低描述于，例如，美国专利No. 6194551 Bl 和 W01999/51642,还参见，例如，Idusogie 等人，J. Immunol. 164:4178-4184(2000)。
[012。 CD98多肤的"胞外域"或"ECD"是指基本不含跨膜和细胞质域的CD98多肤的形 式。通常，CD98多肤ECD将具有小于1 %的该些跨膜和/或细胞质域，并且优选地，将具有小 于0.5 %的该些域。CD98的跨膜域包含氨基酸残基76-103 (Parmacek等人，Nucleic Acids Res. 17:1915-1931，1989)。跨膜域的确切边界可W改变，但是如初始鉴别的，在所述域的任 一端很可能改变不超过约5个氨基酸。因此，任选地，CD98多肤的胞外域可W包含CD98序 列从约98-108至529的氨基酸，如在Parmacek等人，同上中所公开的。
[0122] 将相对于参考多肤序列的"氨基酸序列同一性百分比（％)"定义为在序列比对并 且（必要时）引入空隙后W达到最大百分比序列同一性，但是不认为任何保守取代是序列 同一性的部分之后，与参考多肤序列中氨基酸残基相同的候选序列中的氨基酸残基的百分 比。可W使用本领域技术内的多种方式来实现用于确定氨基酸序列百分比同一性的比对， 例如，使用公开可用的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megali即值NASTAR)软件。 本领域技术人员可W确定用于序列比对的适当参数，其包括对要比较的序列全长实现最大 比对所需的任何算法。
[0123] 如本文所使用的，氨基酸残基/位置的"修饰"是指与起始氨基酸序列相比，主要 氨基酸序列的变化，其中所述变化是由涉及所述氨基酸残基/位置的序列变化所产生的。 例如，典型的修饰包括用另一个氨基酸置换残基（例如，保守或非保守置换），邻近于所述 残基/位置的一个或多个（通常少于5个或3个）氨基酸的插入，和所述残基/位置的缺 失。
[0124] "表位"是单一抗体分子结合的抗原分子表面上的位点。通常，抗原具有几个或多 个不同的表位并且与多种不同的抗体反应。术语具体地包括线性表位和构象表位。
[0125] 当两个抗体识别相同或空间重叠的表位时，抗体结合与参比抗体"基本相同的表 位"。确定两个表位是否结合至相同或空间重叠的表位的最广泛使用并且快速的方法是竞 争性测定，其可W使用标记抗原或标记抗体W多个不同形式配置。通常，将抗原固定在96 孔板上，并使用放射性或酶标记测量未标记抗体阻止标记抗体结合的能力。
[0126] "表位定位"是鉴别抗体对它们的祀标抗原的结合位点或表位的方法。抗体表位可 W是线性表位或构象表位。线性表位是由蛋白质中氨基酸的连续序列形成的。构象表位是 由蛋白质序列中间断的氨基酸形成的，但是当蛋白质折叠成其立体结构时汇合在一起。
[0127] 如本文所定义的，"表位框并（epitope binning)"是基于它们所识别的表位对抗 体分组的方法。更具体地，表位框并包括区分不同抗体的表位识别性质的方法和系统，并且 结合了基于它们的表位识别性质对抗体聚类和鉴别具有不同结合特异性的抗体的计算过 程。
[012引"病症"是将受益于使用本发明的物质/分子或方法的治疗的任何病况或疾病。该 包括慢性和急性病症，其包括使哺乳动物对所讨论的病症易感染的那些病理学的条件。在 本文中，待治疗的病症的非限制性实例包括癌性病况，如膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、 胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、 淋己瘤或白血病，和该些癌症的转移癌。
[0129] 术语"细胞增殖性病症"和"增殖性病症"是指与一定程度的异常细胞增殖有关的 病症。在一种实施方式中，所述细胞增殖性病症是癌症。
[0130] 如本文所使用的，"肿瘤"是指所有新生细胞的生长和增殖，无论是恶性或良性的， 并且是指所有的癌前细胞和癌细胞及组织。如本文中所提及的，术语"癌症"、"癌性的"、"细 胞增殖性病症"、"增殖性病症"和"肿瘤"不是互相排斥的。
[0131] 术语"癌症"和"癌性的"表示或说明哺乳动物W无限制细胞生长为特征的生理情 况。癌症的实例包括（但不限于）癌、淋己瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋己恶性肿瘤。该 些癌症更具体的实例包括鱗状细胞癌（例如，上皮细胞鱗状细胞癌）、肺癌，包括小细胞肺 癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鱗状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌，包括胃肠癌、膜癌、成胶质 细胞瘤、宮颈癌、卵巢癌、口腔癌、肝癌、膀脫癌、尿道癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠 直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、化口癌、阴 茎癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋己瘤、脑癌和头颈癌W及相关转移癌。
[0132] "表达CD98的细胞"是在细胞表面表达内源或转染的CD98的细胞。"表达CD98的 癌症"是具有在细胞表面上存在的CD98蛋白的细胞的癌症。"表达CD98的癌症"在其细胞 表面上产生足够水平的CD98,从而使得抗CD98抗体可W与之结合并对癌症具有治疗效果。 "过表达"CD98的癌症是与相同组织类型的非癌性细胞相比，在其细胞表面上具有显著更高 水平的CD98的癌症。该些过表达可W由基因扩增或者由提高的转录或翻译引起。可W通过 评价细胞表面上存在的CD98蛋白水平的提高（例如，通过免疫组织化学测定；FACS分析）， 在诊断或预后测定中确定CD98的过表达。作为另外一种选择或者另外，可W测量细胞中 CD98编码核酸或mRM的水平，例如，通过英光原位杂交；的甜；参见1998年10月公开的 WO 98/45479)、DNA印迹、RNA印迹或聚合酶链反应（PCR)技术，如实时定量PCR(RT-PCR)。 除了上述测定W外，对于熟练的医师来说，多种体内测定是可用的。例如，可W将患者体内 的细胞暴露于任选地用可检测标记物（例如，放射性同位素）标记的抗体，并且可W通过 (例如）对放射性的外部扫描或者通过分析从先前暴露于所述抗体的患者采集的活组织检 查来评价患者中抗体与细胞的结合。表达CD98的癌症包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、 结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑 素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。
[0133] 如本文所使用的，"治疗"（及其语法变体）是指在尝试改变待治疗的个体或细胞 的天然进程中的临床介入，并且可W为了预防或在临床病理学进程中进行。所希望的治疗 效果包括防止疾病发生或复发，缓和症状，消除疾病的任何直接或间接病理学后果，就癌症 来说预防转移，减少疾病进展速率，改善或减轻疾病状态和症状缓解或改善预后。在一些实 施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发生或延缓疾病的进展。
[0134] 通过医师所熟悉的常规程序，用于评价成功治疗和疾病改善的上述参数是可容易 测量的。对于癌症疗法，可W通过（例如）评价疾病进展时间OT巧和/或通过确定应答率 (RR)测量效力。用于测量效力的其他终点包括，例如，整体存活率（0巧、无病存活率值FS) 和无再发病（或无复发）存活率（RF巧。可W通过分期测试确定癌转移，并通过骨扫描和 巧水平W及其他酶的测试确定骨转移。还可W进行CT扫描W查找在该区域中的骨盆转移 和淋己结转移。胸部X射线和通过已知方法的肝脏酶水平的测量分别用于查找肺和肝的转 移。用于监测疾病的其他常规方法包括经直肠超声波扫描（TRU巧和经直肠针穿刺活检术 (TRNB)。
[0135] "个体"是脊椎动物。在某些实施方式中，所述脊椎动物为哺乳动物。哺乳动物包 括（但不限于）农畜（如，牛）、运动动物、宠物（如猫、狗和马）、灵长类、小鼠和大鼠。在 某些实施方式中，所述哺乳动物是人。
[0136] "有效量"是指W所需剂量和时间段对于实现所需治疗或预防结果有效的量。本发 明的物质/分子的"治疗有效量"可W根据W下因素改变，如个体的疾病状况、年龄、性别和 体重，W及所述物质/分子在所述个体中引起所需反应的能力。治疗有效量包括其中与治 疗有益作用相比，所述物质/分子的任何毒性或不利作用是微不足道的量。"预防有效量" 是指W所需剂量和时间段对于实现所需预防结果有效的量。通常，但是不必需的，由于在疾 病之前或疾病早期在受试者中使用预防剂量，因此预防有效量将小于治疗有效量。就癌症 来说，药物的治疗有效量可W (例如）减少癌细胞数量；减小肿瘤大小；抑制（即，减慢到 一定程度并优选地停止）癌细胞浸润到周围器官中；抑制（即，减慢到一定程度并优选地停 止）肿瘤转移；在一定程度抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解一种或多种与癌症相 关的症状。参见W上"治疗"的定义。到药物可W防止生长和/或杀死现有的癌细胞的程 度，它可W是抑制细胞的和/或细胞毒性的。
[0137] "长期"施用是指W与急性形式相反的连续模式施用试剂，从而将初始治疗效果 (活性）维持延长的一段时间。"间歇"施用是并非没有中断地连续进行的治疗，但是在本 质上它是循环的。
[013引与一种或多种其他治疗剂"结合"施用包括W任何顺序同时（并行）和连续施用。
[0139] 如本文所使用的"载体"包括对W所使用的剂量和浓度暴露的细胞或哺乳动物无 毒的可药用载体、赋形剂或稳定剂。通常，生理学可用的载体是抑缓冲水溶液。生理学可 用的载体的实例包括缓冲液，如磯酸盐、巧樣酸盐及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸； 低分子量（小于约10个残基）多肤；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合 物，如聚己帰化咯焼丽；氨基酸，如甘氨酸、谷氨醜胺、天冬醜胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二 糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；馨合剂，如EDTA ;糖醇，如甘露糖醇或山 梨糖醇；成盐抗衡离子，如轴；和/或非离子型表面活性剂，如TWEEN?、聚己二醇（PEG)和 化URONICS?。
[0140] 术语"药物制剂"是指处于使活性成分的生物活性有效的形式并且不包含对所述 制剂将施用至的受试者具有不可接受的毒性的其他组分的制剂。该些制剂可W是无菌的。
[0141] "无菌"制剂是无菌的，其不含所有活的微生物W及它们的抱子。如本文所公开的， 抗体的"有效量"是足够进行具体说明的目的的量。相对于所说明的目的，可W经验性地并 W常规方式确定"有效量"。
[0142] 术语"治疗有效量"是指对"治疗"受试者或哺乳动物中的疾病或病症有效的抗体 或其他药物的量。就癌症来说，药物的治疗有效量可W减少癌细胞数量；减小肿瘤大小；抑 制（即，减慢到一定程度并优选地停止）癌细胞浸润到周围器官中；抑制（即，减慢到一定 程度并优选地停止）肿瘤转移；在一定程度抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解一种 或多种与癌症相关的症状。参见本文中"治疗"的定义。到药物可W防止生长和/或杀死 现有的癌细胞的程度，它可W是抑制细胞的和/或细胞毒性的。"预防有效量"是指W所需 剂量和时间段对于实现所需预防结果有效的量。通常，但是不必需的，由于在疾病之前或疾 病早期在受试者中使用预防剂量，因此预防有效量将小于治疗有效量。
[0143] 如本文所使用的术语"细胞毒素试剂"是指抑制或放置细胞功能和/或导致细胞 破坏的物质。术语旨在包括放射性同位素（例如，At2ii、I"i、li25、YW、Rei 86、Rei88、Smi53、Bi2i2、 P 32和Lu的放射性同位素）、化疗剂，例如甲氨蝶岭、阿霉素、长春花生物碱（长春新碱、长春 碱、依巧泊巧）、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯下酸氮芥、柔红霉素或其他插入剂、酶及 其片段，如核酸酵素酶、抗生素和毒素，如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活 性毒素，包括其片段和/或变体，和W下所公开的多种抗肿瘤或抗癌剂。W下描述了其他细 胞毒性试剂。杀肿瘤试剂导致肿瘤细胞的破坏。
[0144] "毒素"是能够对细胞的生长或增殖具有不利影响的任何物质。
[0145] "化疗剂"是不考虑作用机理，在癌症治疗中有用的化合物。化疗剂包括在"祀向 疗法"和常规化疗中使用的化合物。化疗剂的实例包括（但不限于）焼基化试剂，如塞替 脈和CYTOXAN环磯醜胺；焼基賴酸醋，如白消安、英丙舒凡和脈泊舒凡；吓丙巧类，如苯佐 替派、卡波酿、美妥替脈和乌瑞替脈；己撑亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、曲他胺、H 亚己基磯醜胺、H己帰硫代磯酸胺和H轻甲蜜胺；多聚己醜类（具体地，布拉他辛和布拉 他辛丽）；A-9-四氨大麻酷（屈大麻酷、AR1N0L);目-拉帕酿；拉帕醇；秋水仙碱；禅木 酸；喜树碱（包括合成的类似物巧泊替康（HYCAMTIN)、CPT-Il (伊立替康、CAMPT0SAR)、 己醜喜树碱、scopolectintin和9-氨基喜树碱）、苔薛抑素；callystatin ;CC-1065 (包 括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物）；鬼白毒素；鬼白酸；替尼泊巧；隐藻素 类（具体地，隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀；倍癌霉素（包括合成类似物、KW-2189和 CB1-TM1);艾恼素；pancratistatin ;甸枝珊瑚醇；海绵素；氮芥，如苯下酸氮芥、蔡氮芥、胆 磯醜胺、雌莫司汀、异环磯醜胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆留醇、泼尼莫司 汀、曲磯胺、尿嚼巧氮芥；亚硝基脈类，如卡莫司汀、氯脈菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司 汀和雷莫司汀；抗生素，如帰二快类抗生素（例如，加利车霉素，具体地，加利车霉素YlI 和加利车霉素《11(参见，例如，Angew, Chem. Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994));帰二快 意环霉素类抗生素（dynemicin)，包括帰二快意环霉素类抗生素A ;埃斯波霉素；W及新制 癌菌素生色团和相关色素蛋白帰二快类抗生素生色团）、阿克拉霉素、放线菌素、意霉素、 偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、 柔红霉素、地巧比星、6-重氮-5-氧代-k正亮氨酸、ADRIAMYCIN、多柔比星（包括吗晰 代-多柔比星、氯基吗晰代-多柔比星、2-化咯晰-多柔比星和脱氧多柔比星）、表柔比 星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素类，如丝裂霉素C、麦考酷酸、诺拉霉素、橄 揽霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘿岭霉素、H铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核 菌素、乌苯美司、净司他了、佐柔比星；抗代谢产物，如甲氨蝶岭和5-氣尿嚼巧巧-即）；叶 酸类似物，如二甲叶酸、甲氨噪岭、噪罗岭、H甲曲沙；嘿岭类似物，如氣达拉滨、6-琉嘿岭、 硫咪嘿岭、硫鸟嘿岭；嚼巧类似物，如安西他滨、阿扎胞巧、6-氮尿巧、卡莫氣、阿糖胞巧、双 脱氧尿巧、去氧氣尿巧、依诺他滨、氣尿巧；雄激素类，如卡鲁睾丽、丙酸屈他雄丽、环硫雄 醇、美雄焼、睾内醋；抗肾上腺药，如氨鲁米特、米巧坦、曲洛司坦；叶酸补偿剂，如亚叶酸； 醋葡酵内醋；轻酵磯醜胺糖巧；氨基-Y-丽戊酸；恩尿嚼巧；安吓巧；bestr油UCil ;比生 群；依达曲沙；defofamine ;秋水仙胺；地吓酿；elfornithine ;依利醋馈；埃坡霉素；依巧 格鲁；硝酸嫁；轻基脈；香茹多糖；氯尼达明；美登木素生物碱类，如美登素和安丝菌素；米 巧脈踪；米巧意酿；莫脈达醇；尼曲吓巧；喷司他下；异丙嗦；化柔比星；洛索意酿；2-己基 醜脱；丙卡己脱；PSK多糖复合物（J服化化ral Pro化Cts,化gene,化eg.);雷佐生；利索 新；西佐喃；错螺胺；细交链抱菌丽酸；H亚胺酿；2, 2'，2" - H氯H己胺；单端抱霉帰族 化合物（具体地，T-2毒素、verra州rin A、杆抱菌素A和蛇形菌素）；乌拉坦；长春地辛 (化DISINE⑩、巧LD巨SIN⑥）；达卡己嗦；甘露莫司汀；二漠甘露醇；二漠卫矛醇；脈泊 漠焼；gacytosine ;阿糖胞巧（"Ara-c");塞替脈；紫杉焼类化合物，例如，TAXOL唆紫 杉醇炬ristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.)、ABRAXANE? 不含克列莫佛的紫 杉醇白蛋白工程纳米颗粒制剂（American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, 111.) 和 TAXOTERE 多西他塞（Mione-Poulenc Rorer, Antony, Rrance);苯了酸氮芥；吉西 他滨（GEMZAR驳）；6-硫鸟嘿岭；琉嘿岭；甲氨噪岭；笛类似物，如顺笛和卡笛； 长春碱（VELBAN够）；笛；依巧泊巧（VP-16);异环磯醜胺；米巧意酿；长春新碱 (ONCOVIN饭）；奥沙利钥；Ieucovorin ;长春瑞滨（NAV化朗NE⑥）；诺安巧；依 达曲沙；道诺霉素；氨基噪岭；伊班麟酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000 ;二氣甲基鸟氨 酸（DMFO);类视黄酸类，如视黄酸；卡培他滨（XELODA敬）；任何上述试剂的可药用 盐、酸或衍生物；W及两种或多种上述试剂的组合，如CHOP,即环磯醜胺、多柔比星、长春新 碱、和泼尼松龙的组合疗法的缩写；和F0LF0X，即关于与5-即和亚叶酸组合的奧沙利笛 巧L0XATIN?)的治疗方案的缩写。其他化疗剂包括作为抗体药物结合物有用的细胞毒性试 齐U，如美登木素生物碱（例如，DMl和DM4)和auristatin (例如，MMAE和MMAF)。
[0146] 在"化疗剂"的定义中还包括；（i)调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素 试剂，如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂（SERM)，其包括，例如，他莫昔芬（包括 NOLVADEX?;巧樣酸它莫西芬）、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-轻基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷 洛昔芬化eoxifene)、LY117018、奧那司丽和FARESTON屯'(巧樣酸巧瑞米芬）；（ii) 抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂，它调节肾上腺中雌激素的产生，如，例如，4巧)-咪哇、氨 鲁米特、MEGA沈⑧（甲地孕丽）、AROMASIN巧（依西美坦；州zer)、福美司坦、法 個哇、民IVTSOR狼（伏氯哇）、FEMA民A饭（来曲哇；Novartis)和A民IMIDEX饭 (阿那曲哇；AstraZeneca) ; (iii)抗雄激素，如氣他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮脯利特 和戈舍瑞林；W及曲沙他滨（1,3-二氧戊环核巧胞嚼巧类似物）；（iv)蛋白激酶抑制 齐U，如ME抑制剂（WO 2007/044515) ; (V)脂质激酶抑制剂；(Vi)反义寡核巧酸，具体地 抑制与异常细胞增殖有关的信号通路中基因表达的那些，例如，PKC-Q、Raf和H-Ras, 如奧利默森（GENASENSE⑩，Genta Inc.); (Vii)核糖酶，如VEGF表达抑制剂（例 女口，ANGIOZYM巨? )和肥R2表达抑制齐U; (ViU)疫化如基因疗法疫化例如， ALLOVECTINC島、LEUVECTIN⑩和VAXlD⑩；P民OLEUKIN⑩ r化-2 ;拓扑异构 酶1抑制剂，如LURTOTECAN⑩；ABA艮EUX狼rmRH ; (ix)抗血管原试剂，如贝伐单 抗（AVASTIN够，Genentech);和任何上述试剂的可药用的盐、酸和衍生物。
[0147] 如在本发明申请中所使用的，术语"前药"是指与药物的母体化合物相比对细 胞的细胞毒素可W是较低的并且能够通过酶解或水解激活或转化为活性更强的母体形 式的本发明的化合物的前体或衍生形式。参见，例如，Wilman, "Pro化Ugs in Cancer Chemotherapy^'"Biochemical Society Transactions, 14,第 375-382 页，615th Meeting Belfast(1986)和 Stella 等人，"Pro化ugs:A Qiemical Approach to Targeted Drug Delivery, "Directed Drug Deliveiy, Borchar化等人（主编），第 247-267 页，Humana Press(1985)。本发明的前药包括（但不限于）含有磯酸盐的前药、含有硫代磯酸盐的前药、 含有硫酸盐的前药、含有肤的前药、D-氨基酸修饰的前药、糖基化前药、含有目-内醜胺的 前药、含有任选地取代的苯氧己醜胺的前药、含有任选地取代的苯己醜胺的前药、5-氣胞嚼 巧和其他5-氣脈嚼巧前药，该些前药可W转化成活性更强的无细胞毒性药物。可W衍生化 成用于在本发明中使用的前药形式的细胞毒性药物的实例包括但不限于本发明的化合物 和如上所述的化疗剂。
[014引在本文中，将"小分子"定义为具有小于约500道尔顿的分子量。
[0149] "分离的核酸"是基本上与天然地伴随天然序列的其他基因组DNA序列W及蛋白质 或复合物，如核糖体和聚合酶分离的核酸，例如，RNA、DNA或混合聚合物。该术语涵盖了已 从其天然存在的环境中除去的核酸序列，并且包括重组或克隆的DNA分离物和化学合成的 类似物或通过异源系统生物合成的类似物。基本纯的分子包括所述分子的分离形式。
[0150] 如在本文中可互换使用的"多核巧酸"或"核酸"是指任何长度的核巧酸聚合物并 且包括DNA和RNA。所述核巧酸可W是脱氧核糖核巧酸、核糖核巧酸、修饰的核巧酸或碱基 和/或它们的类似物，或者可W通过DNA或RNA聚合酶或者通过合成反应引入到聚合物中 的任何基质。多核巧酸可W包括修饰的核巧酸，如甲基化核巧酸和它们的类似物。如本文 所使用的，"寡核巧酸"一般是指短的，通常单链的，通常是合成多核巧酸，所述合成多核巧 酸的长度通常（但不必需）小于约200个核巧酸。术语"寡核巧酸"和"多核巧酸"是不互 相排斥的。W上对多核巧酸的描述同样并且充分适用于寡核巧酸。
[015。 产生本发明的抗CD98抗体的细胞将包括亲本杂交瘤细胞，例如，提交至ATCC的杂 交瘤，W及已引入编码抗体的核酸的细菌和真核宿主细胞。W下公开了适合的宿主细胞。
[0152] 术语"包装说明书"用于表示习惯上包括在治疗产物的商业包装中的说明书，其包 含了有关该些治疗产物的使用的适应症、用法、剂量、施用、禁忌征和/或警告的信息。
[0153] 组合物和制备所述组合物的方法
[0154] 提供了结合至CD98的抗体。提供了包含抗CD98抗体的免疫结合物。本发明的抗 体和免疫结合物对于（例如）与CD98表达改变，例如，表达升高有关的病症的诊断或治疗 有用。在某些实施方式中，本发明的抗体或免疫结合物对于细胞增殖病症，如癌症的诊断或 治疗有用。
[0155] 抗 CD98 抗体
[0156] 在一种实施方式中，本发明提供了可W在本文中作为治疗剂使用的抗CD98抗体。 示例性抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、双重特异性抗体和异源结 合物抗体W及具有改善的亲合力或其他性质的它们的变体。 。巧7] 1.《克險杭体
[015引本发明所述的抗体可W包括多克隆抗体。制备多克隆抗体的方法是技术人员已知 的。可W (例如）通过免疫剂和（如果需要）佐剂的一次或多次注射，在哺乳动物中产生多 克隆抗体。通常，将通过多次皮下或腹膜内注射在哺乳动物中注射免疫剂和/或佐剂。所 述免疫剂可W包括CD98多肤或其融合蛋白。将免疫剂结合至在要免疫的哺乳动物中已知 是免疫原的蛋白可W是有用的。该些免疫原蛋白的实例包括（但不限于）钥孔血蓝素、血 清白蛋白、牛甲状球蛋白和大豆膜蛋白酶抑制剂。可W使用的佐剂的实例包括弗氏不完全 佐剂和MPkTDM佐剂（单磯醜醋A、合成海藻糖二杆菌分枝菌酸醋）。本领域技术人员无需 过度实验就可W选择免疫规程。然后，可W将哺乳动物放血，并测定血清的CD98抗体滴度。 如果需要，可W促进哺乳动物直至抗体滴度升高或达到平稳。 。15引 2.单克險杭体
[0160] 作为另外一种选择，本发明所述的抗体可W是单克隆抗体。可W使用Kohler等 人，化化re, 256:495(1975)首先描述的杂交瘤方法制备单克隆抗体，或者可W通过重组 DNA方法（参见，例如，美国专利No. 4816567)制备。
[0161] 在杂交瘤方法中，如上所述对小鼠或其他适合的宿主动物，如仓鼠进行免疫W 引起淋己细胞，所述淋己细胞产生或能够产生将特异性结合至用于免疫的所述蛋白的抗 体。作为另外一种选择，淋己细胞可W体外免疫。免疫后，分离淋己细胞，然后使用适合 的融合试剂，如聚己二醇，与骨髓瘤细胞系融合W形成杂交瘤细胞(GodinR. Monoclonal Antibodies:Principles and Practice.第 59_103 页（Academic Press, 1986))〇
[0162] 将因此所制备的杂交瘤细胞接种并在适合的培养基中生长，所述培养基优选地含 有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞的生长或存活的一种或多种物质（也称为融合伴侣）。例 女口，如果亲本骨髓瘤细胞缺少酶次黄嘿岭鸟嘿岭转磯酸核糖基酶（HGPRT或HPRT)，则用于 杂交瘤的选择性培养基通常将包含次黄嘿岭、氨基蝶岭和胸巧（HAT培养基），所述物质阻 止HGPRT缺陷型细胞的生长。
[0163] 优选的融合伴侣骨髓瘤细胞是有效地融合，支持所选抗体产生细胞稳定地高 水平产生抗体并且对选择抵抗未融合亲本细胞的选择培养基敏感的那些。优选的骨髓 瘤细胞系是鼠骨髓瘤系，如来源于从Sa化Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA可得的MOPC-21和MPC-Il小鼠肿瘤的那些，和SP-2和衍生物，例 女口，从美国模式培养物保藏所（Manassas, Virginia, USA)可得的X63-A妍-653细胞。还 已描述了用于人单克隆抗体产生的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系化〇zbor，J. Immunol. ,133:3001(1984);和 Brodeur 等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第 51-63 页（Marcel Dekker, Inc. , New York, 1987))。
[0164] 对杂交瘤细胞在其中生长的培养基测定了针对所述抗原的单克隆抗体的产生。优 选地，通过免疫沉淀或体外结合测定，如放射免疫测定巧IA)或酶联免疫吸附测定巧LISA) 确定了通过杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性。可W (例如）通过Munson等 人，Anal. Biochem. , 107:220 (1980)描述的斯卡查德分析确定单克隆抗体的结合亲合力。
[0165] 一旦鉴别出产生具有所期望的特异性、亲合力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞 后，可W通过有限稀释程序将该克隆亚克隆并通过标准方法培养(GodinR. Monoclonal AntibodiesiPrinciples and Practice.第 59_103 页（Academic Press, 1986)) 〇 出于此 目的，适合的培养基包括（例如）D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，可W在动物中作为腹 水肿瘤体内培养杂交瘤细胞，例如，通过将细胞i.P.注射至小鼠。
[0166] 通过常规抗体纯化程序将亚克隆分泌的单克隆抗体与培养基、腹水液或血清适当 地分离，所述纯化程序如（例如）亲和色谱法（例如，使用蛋白A或蛋白G-Se地arose)或 离子交换色谱法、轻基磯灰石色谱法、凝胶电泳、透析等。
[0167] 使用常规程序（例如，通过使用能够特异性结合至编码鼠抗体重链和轻链基因的 寡核巧酸探针）将编码单克隆抗体的DNA容易地分离并测序。杂交瘤细胞用作该DNA优 选的来源。一旦分离，可W将DNA置于表达载体中，然后将所述载体转染到宿主细胞中，女口 大肠杆菌巧.COli)细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢（CHO)细胞或不产生抗体蛋白的骨髓 瘤细胞，从而在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。有关编码所述抗体的DNA的细菌 中重组表达的综述包括 Skerra 等人，Qirr. Opinion in Immunol. ,5:256-262(1993)和 Pluckthun, Tmmunol. Revs. 130:151-188(1992)。
[0168] 在其他实施方式中，单克隆抗体或抗体片段可W分离自使用（例如）Antibody Phage Display:Methods and Protocols, P.M.0'E5rien 和 R. Aitken 主编，Humana Press, Totawa N. J.，2002中所述的技术产生的抗体瞻菌体文库。基本上，通过含有展示融 合至瞻菌体外壳蛋白的抗体可变区（Fv)的多个片段的瞻菌体的筛选瞻菌体文库选择合成 抗体克隆。对于针对所期望的抗原，筛选该些瞻菌体文库。将表达能够结合至所期望的抗 原的Fv片段的克隆吸附至所述抗原，并因此与所述文库中的非结合克隆分离。然后，从所 述抗原洗脱结合克隆，并且还可W通过抗原吸附/洗脱的额外的循环进行富集。
[0169] 可W在瞻菌体上或者作为单链Fv(SCFv)片段在功能上展示可变结构域，其 中VH和化通过短的柔性肤共价连接，或者作为F油片段在功能上展示可变结构域，其 中它们分别融合至恒定结构域，并且非共价键地相互作用，如Winter等人，Ann. Rev. Immunol.，12:433-455(1994)中所述。
[0170] 可W通过聚合酶链反应（PCR)单独克隆VH和化基因的集合，并且在瞻菌体文库 中随机重组，然后可W对其寻找抗原结合克隆，如Winter等人，同上中所述。来自免疫来源 的文库提供了对免疫原具有高亲合力的抗体，而无需构造杂交瘤。作为另外一种选择，可W 克隆天然集合（naive repertoire) W提供针对广泛的非自体W及自体抗原的单一来源的 人抗体，而无需任何免疫，如通过Gri巧ths等人，EMBO J，12:725-734(1993)所述。最后， 也可W通过从干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度 可变的CDR3区并在体外实现重排来合成制备天然文库，如通过化Ogenboom和Winter, J. Mol. Biol.，227:381-388(1992)所描述的。
[0171] 可W通过本领域中已知的多种技术完成文库的筛选。例如，CD98可W用于涂 覆吸附板的孔，可W在固定至吸附板的宿主细胞上表达或者可W在细胞分选中使用，或 者可W结合至生物素W用于用抗生蛋白链菌素涂覆的珠进行捕获，或者可W在淘选展 示文库的任何其他方法中使用。通过使用长时间清洗和单价瞻菌体展示（如Bass等 人，Proteins, 8:309-314 (1990)和 WO 92/09690 中所述）W及抗原低涂覆密度（如 Marks 等人，Biotechnol., 10:779-783(1992)中所述），可W促进具有慢解离动力学（和良好结合 亲合力）的抗体的选择。
[0172] 可W通过设计适合的抗原筛选程序W选择所关也的瞻菌体克隆，然后使用来自 所关也的瞻菌体克隆的Fv序列和适合的恒定区（Fe)序列构建全长抗CD98抗体克隆 (女口 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 片反，NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991)，第1-3卷中所述）来获得任何本发明的抗CD98 抗体。 。。引 3.杭体片段
[0174] 本发明涵盖了抗体片段。在某些情况下，存在使用抗体片段的优势，而不是整个抗 体。片段较小的尺寸允许快速清除，并且可W导致对实体瘤可接近性的改善。对于某些抗 体片段的综述，参见化dson等人，（2003)化t. Med. 9:129-134。
[01巧]已发展了多种用于生产抗体片段的技术。传统地，该些片段是通过完整抗体 的蛋白水解消化获得的（参见，例如，Morimoto等人，Journal of Biochemical and Bio地ysical Methods24:107-117(1992);和化ennan 等人，Science, 229:81 (1985))。然 而，现在可W直接通过重组宿主细胞产生该些片段。F油、Fv和scFv抗体片段均可W在大肠 杆菌巧.COli)或酵母细胞中表达并从它们中分泌，因此使得能够容易地产生大量该些片 段。抗体片段可W分离自W上所讨论的抗体瞻菌体文库。作为另外一种选择，可W直接从 大肠杆菌巧.COli)回收F油甜片段并化学偶联W形成F(油'）2片段（Carter等人，Bio/ Technology 10:163-167 (1992))。根据另一种方法，F (油'）2片段可W直接从重组宿主细胞 培养中分离。在美国专利No. 5869046中描述了包含补救受体结合表位残基的体内半衰期 提高的Fab和F (ab'）2片段。对于熟练的医师来说，用于产生抗体片段的其他技术将是显 而易见的。在某些实施方式中，抗体是单链Fv片段（scFv)。参见WO 93/16185;美国专利 No. 5571894 ;和5587458。Fv和SCFv是仅有的具有缺少恒定区的完整结合簇的种类；因此， 在体内使用期间，它们可W适合于降低的非特异性结合。可W构造SCFv融合蛋白W产生在 scFv的氨基或駿基末端中任一处的效应子蛋白的融合。参见Antibody化gineering,ed. Borrebaeck，同上。所述抗体片段也可W是"线性抗体"，例如，如在W前所引用的参考文献 中所述的。该些线性抗体可W是单特异性的或多重特异性的，如双重特异性的。
[0176] 最小的抗体来源的结合结构是还称为单可变结构域抗体（SdAb)的单独的可变结 构域（V域）。某些类型的生物，骆驼科动物和软骨鱼，具有作为它们免疫系统的一部分的位 于化等价域结构上的高亲合力单V样域（Woolven等人，ImmunogeneticsSO :98-101, 1999 ; Streltsov 等人，Proc 化tl Acad Sci USA. 101:12444-12449,2004)。V 样域（在骆驼科 动物中称为化H，而在蠻鱼中称为V-NAR)通常显示了长表面环，其允许祀标抗原腔的渗透。 它们还通过掩蔽疏水表面片区来稳定分离的VH域。该些化H和V-NAR域已用于工程设计 sdAb。已使用来自瞻菌体文库的选择和产生稳定、高结合Vk和VH-来源的域的其他方法 设计了人V域变体。 。177] 4.人源化杭体
[0178] 本发明涵盖了人源化抗体。用于将非人抗体人源化的多种方法在本领域中是已知 的。例如，人源化抗体可W具有来自非人来源的引入其中的一个或多个氨基酸残基。该些 非人氨基酸残基通常称作"输入"残基，所述残基通常取自"输入"可变区。人源化可W按 照Winter及其同事的方法通过用高变区序列取代人抗体的相应序列来进行（Jones等人 (1986)化1:脚6321:522-525 ;I?iechmann 等人（1988)化1:脚6332:323-327 sVerhoeyen 等人 (1988) Science239:15:34-1536)。
[0179] 在一些情况下，通过CDR移植构建人源化抗体，其中将亲本晒齿类抗体的6个互补 决定区（CDR)的氨基酸序列移植到人抗体框架上。Padlan等人（FASEB J. 9:133-139, 1995) 确定CDR中实际上仅有约H分之一的残基接触抗原，并且将该些称为"特异性决定 残基"或SDR。在SDR移植技术中，仅将SDR残基移植到人抗体框架上化ashmiri等 人，Methods36:25-；34, 2005)。
[0180] 在制备人源化抗体中使用的人可变结构域（轻链和重链两者）的选择对降低抗原 性来说可W是重要的。根据所谓的"最佳拟合化est-fit)"法，针对已知的人可变结构域序 列的整个文库筛选了晒齿类抗体的可变结构域序列。然后，将与晒齿类最接近的人序列接 受作为人源化抗体的人框架（Sims等人（1993) J. Immunol. 151:2296 ;Chothia等人（1987) J. Mol. Biol. 196:901)。另一种方法使用了来源于轻链或重链的特定亚群的所有人抗体 的共有序列的特定框架。相同框架可W用于几种不同的人源化抗体（Carter等人（1992) Proc.化1:1. Acad. Sci. USA, 89:4285 ;Presta 等人（1993) J. Immunol. , 151:2623)。在一些情 况下，所述框架来源于最大量的人亚类K亚组I (V, Kl)和Vh亚组III (VhHI))的共有 序列。在另一种方法中，在框架区来源使用人种系基因。
[0181] 在基于CDR比较的替代性范例（称为超人源化）中，FR同源性是不相关的。所述 方法包括非人序列与功能性人种系基因集合的比较。然后，选择编码与鼠序列相同或者密 切相关的标准结构（canonical structure)的那些基因。然后，在与非人抗体共有所述标 准结构的基因内，选择在CDR内具有较高同源性的那些作为FR供体。最后，将所述非人CDR 移植到该些 FR 上（Tan 等人，J. Immunol. 169:119-1125, 2002)。
[0182] 通常，还期望人源化的抗体保留对抗原的高亲合力W及其他良好的生物学性 质。为了实现该目标，根据一种方法，通过使用亲本和人源化序列的立体模型的亲本序 列分析方法和多种概念性人源化产物制备人源化抗体。立体免疫球蛋白模型是一般可 用的并且是本领域技术人员所熟悉的。说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的大致立 体构型结构的计算机程序是可用的。该些包括（例如）WAM(Whitelegg和Rees, Protein 化 g. 13:819-824, 2000) ,Modeller (Sali 和 Blundell, J. Mol. Biol. 2:34:779-815, 1993)和 Swiss PDB Viewer(Guex 和化itsch,Electrophoresis 18:2714-2713, 1997)。对该些显巧 图案的检查使得能够分析所述残基在候选免疫球蛋白序列的功能中可能所起的作用，即对 影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基的分析。W该种方式，可W从接受者和输入 序列选择FR残基并合并，从而实现所需的抗体特性，如对祀标抗原提高的亲合力。一般地， 高变区残基直接并且最显著地参与影响抗原结合。
[0183] 用于抗体人源化的另一种方法是基于被称为人类序列含量化SC)的抗体人化的 量度。该种方法将小鼠序列与人种系基因的集合进行比较，并且将差异作为HSC评分。然 后，通过使其服C最大，而不是使用产生多个多样性人源化变体的全局同一性方法来使祀 标序列人源化（Lazar 等人，Mol. Immunol. 44:1986-1998, 2007)。
[0184] 与上述方法相反，经验方法可W用于产生和选择人源化抗体。该些方法基于使 用富集技术或高通量筛选技术的大人源化变体文库的产生和最佳克隆的选择。抗体变 体可W分离自瞻菌体、核糖体和酵母展示文库W及通过菌落筛选分离Oloogenboom，化t. Biotechnol. 23:1105-1116,2005 ;Dufner 等人，Trends Biotechnol. 24:523-529,2006; Fel化aus 等人，化1:. Biotechnol. 21:163-70, 2003 ;Schlapschy 等人，Protein E；ng. Des. Sel.17:847-60, 2004)。
[0185] 在FR文库方法中，将一系列残基变体引入到FR中的特定位置，然后选择文库W选 择对移植的CDR最佳支持的FR。要取代的残基可W包括鉴别为可能有助于CDR结构的"游 标"残基的一些或全部（Foote 和 Winter, J. Mol. Biol. 224:487-499, 1992)，或者来自 Baca 等人（J. Biol. Chem. 272:10678-10684, 1997)鉴别的祀标残基的更有限的组。
[0186] 在FR改组中，整个FR与非人CDR结合，而不是产生了所选残基变体的组合文库 值all'Acqua等人，Methods 36:43-60,2005)。可W在两步选择过程（首先人源化化，然后 VH)中对文库筛选结合。作为另外一种选择，可W使用一步FR改组方法。该方法已证明比两 步筛选更有效，该是因为所得的抗体显示出改善的生物化学性质和理化性质，其包括提高 的表达、提高的亲合力和热稳定性值amsc虹Oder等人，Mol. Immunol. 44:3049-60, 2007)。
[0187] "人化工程化umaneering)"方法基于基本最小特异性决定簇（MSD)的实验鉴别 和基于非人片段向人FR文库中的序列取代W及对结合的评价。它从非人VH和化链的 CDR-3区开始并逐渐将非人抗体的其他区（包括VH和化两者的CDR-I和CDR-2)置换到 人FR中。该方法通常导致表位保留和从具有不同人V片段CDR的多个亚类的抗体的鉴别。 Humaneering使得能够分离与人种系基因抗体91-96%同源的抗体（Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007)。 。18引 5.人杭体
[0189] 可W通过合并选自具有如上所述的已知的人恒定结构域序列的人来源的瞻 菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列来构造本发明的人抗CD98抗体。作为另外 一种选择，可W通过杂交瘤方法制备本发明的人单克隆抗CD98抗体。已通过W下 文献描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂合骨髓瘤细胞系，例如， Kozbor J. Immunol. , 133:3001 (1984) ;Brodeur 等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第 51-63 页（Marcel Dekker, Inc. , New York, 1987);和 Boerner 等人，J. Tmmunol. , 147:86 (1991)。
[0190] 还可能产生一旦免疫，能够在不存在内源免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体 的全部集合的转基因动物（例如，小鼠）。表达人抗体集合的转基因小鼠已用于产生抗 多种潜在药物祀标的高亲合力人序列单克隆抗体。参见，例如，化kobovits，A.，化rr. Opin. Biotechnol. 1995, 6 (5) :561-6 ；Briiggemann 和 Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997,8(4) :455-8 ;美国专利 No. 6075181 和 6150584 ;和 Lonberg 等人，化Uire Biotechnol. 23:1117-1125,2005。
[0191] 作为另外一种选择，可W通过产生针对祀标抗原的抗体的人B淋己细胞（该些B 淋己细胞可W从个体收获或者可W体外免疫）的永生化制备人抗体。参见，例如，Cole等 人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss,第 77 页（1985) ；Boerner 等人，J. Immunol.，147(1) :86-95(1991);和美国专利 No. 5750373。
[0192] 基因改组还可W用于从非人，例如晒齿类抗体获得人抗体，其中所述人抗体具有 与起始非人抗体类似的亲合力和特异性。根据该方法，它还被称为"表位印记"或者"导 向选择"，用人V域基因的集合替代通过如本文所述的瞻菌体展示技术获得的非人抗体片 段的重链或轻链可变区，从而产生非人链/人链SCFv或Fab嵌合体的群体。用抗原进行 选择导致非人链/人链嵌合SCFv或Fab的分离，其中人链在一级瞻菌体展示克隆中去除 了相应的非人链后使破坏的抗原结合位点恢复，即表位导向（印记）人链伴侣的选择。当 重复该方法W置换剩余的非人链时，获得了人抗体（参见PCT W093/06213和Osbourn等 人，Methods. , 36, 61-68, 2005)。与传统的通过CDR移植进行的非人抗体的人源化不同，该 技术提供了完全人抗体，它们不含非人来源的FR或CDR残基。使小鼠抗体对细胞表面抗原 人源化的导向选择的实例包括卵巢癌细胞上存在的叶酸盐结合蛋白（Figini等人，Cancer Res.，58, 991-996, 1998)和CD147,其在肝细胞癌上高表达炬ao等人，Cancer Biol. Ilier.，4, 1374-1380, 2005)。
[0193] 导向选择方法可能的缺陷在于一个抗体链改组而保持另一个不变可能会导 致表位漂移。为了维持非人抗体识别的表位，可W应用CDR保留化Iimfoi等人，Br. J. Cancer.，83, 252-260, 2000 ;Beiboer 等人，J. Mol. Biol.，296, 833-49, 2000)。在该方法 中，非人CDR-册通常保留，该是因为CDR位于抗原结合位点的中也并且已证明是用于抗原 识别的抗体最重要的区域。然而，在一些情况下，可W保留非人抗体的CDR-册和CDR-L3 W 及 CDR-册、CDR-L3 和 CDR-L2。 。194] 6.双軍特屏巧杭体
[0195] 双特异性抗体是对至少两个不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施 方式中，双重特异性抗体是人或人源化抗体。在某些实施方式中，其中一种结合特异性是对 CD98,而另一种是对任何其他抗原。在某些实施方式中，双重特异性抗体可能结合至两个不 同的CD98表位。双重特异性抗体还可W用于将细胞毒性试剂定位至表达CD98的细胞。该 些抗体具有CD98结合臂和结合细胞毒性试剂（如，例如，服皂草毒蛋白、抗干扰素-a、长春 花生物碱、當麻毒蛋白A链、甲氨蝶岭或放射性同位素半抗原）的臂。可W将双重特异性抗 体制备成全长抗体或抗体片段（例如，F (油'）2双重特异性抗体）。
[0196] 制备双重特异性抗体的方法在本领域中是已知的，如，例如，通过两种免疫 球蛋白重链-轻链对的共表达，其中所述两个重链具有不同的特异性（Milstein和 化e 11〇,化化re, 305:537 (1983))。有关产生双重特异性抗体的详细信息，参见，例如， Bispeci円C Antibodies, Kontermann 主编，Springer-Verlag, Hiedelberg(2011)。 阳197] 7.名价杭体
[019引多价抗体可W比二价抗体更快的受到表达该抗体所结合抗原的细胞的内化（和/ 或分解代谢）。本发明的抗体可W是具有H个或更多抗原结合位点（例如，四价抗体）的多 价抗体（它们是除IgM类W外的），其可W容易地通过编码所述抗体多肤链的核酸的重组 表达而产生。多价抗体可W包含二聚化域和H个或更多个抗原结合位点。在某些实施方案 中，所述二聚化域包含（或由其组成）化区或较链区。在该种情况下，抗体将包含化区W 及化区氨基末端的H个或更多个抗原结合位点。在某些实施方式中，多价抗体包含（或由 其组成）H个至约八个抗原结合位点。在一个该种实施方式中，多价抗体包含（或由其组 成）四个抗原结合位点。多价抗体包含至少一条多肤链（例如，两条多肤链），其中所述多 肤链包含两个或更多个可变结构域。例如，多肤链可W包含VDl-狂1) n-VD2-狂2) n-Fc，其中 VDl是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，化是化区的一条多肤链，Xl和X2代表氨 基酸或多肤，而n是0或1。例如，多肤链可W包含；VH-CHl-柔性接头-VH-CHl-化区链；或 VH-CHl-VH-CHl-Fc区链。本文中的多价抗体还可W包含至少两条（例如，四条）轻链可变 结构域多肤。本文中的多价抗体可W (例如）包含约2至约8条轻链可变结构域多肤。本 文所考虑的轻链可变结构域多肤包含轻链可变结构域，并且任选地还包含化域。 阳19引 8.效巧子巧能的工巧改浩
[0200] 可W期望对于效应子功能来修饰本发明的抗体，例如，从而提高所述抗体的抗原 依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)或补体依赖性细胞毒性（CDC)。该可W通过在所述抗体 的化区引入一个或多个氨基酸取代来实现。参见，例如，Lazar等人，Proc.化1:1. Acad. Sci. USA 2006, 103 (11) : 4005-4010 ；Presta, L. G. , Curr. Opin. Immunol. 2008, 20(4) :460-70 ； 和美国专利 No. 7183387 ;7332581 ;和 7335742。
[0201] 作为另外一种选择或另外，可W将半脫氨酸残基引入化区，借此允许在该区 域中形成链间二硫键。因此所产生的均二聚抗体可W具有改善的内化能力和/或提 高的补体介导的细胞杀死和抗体依赖性细胞毒性（ADCC)。参见Caron等人，J.Exp Med. 176:1191-1195(1992)和 Shopes，B.J. Immunol. 148:2918-2922(1992)。还可 W 使 用异源双功能交联剂制备具有提高的抗肿瘤活性的均二聚抗体，如Wolff等人，Cancer Research 53:2560-2565(1993)中所述。作为另外一种选择，可W工程改造具有双化区并 因此具有提高的补体溶胞和ADCC能力的抗体。参见Stevenson等人，Anti-Cancer Drug Design 3:219-230(1989)。为了提高抗体的血清半衰期，一种方法是在所述抗体（特别是 抗体片段）中惨入补救受体结合表位，例如，如美国专利5739277中所述。如本文所使用的， 术语"补救受体结合表位"是指IgG分子（例如，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)化区中负责提 高所述IgG分子的体内血清半衰期的表位。 阳20引 9.替代结合剂
[0203] 本发明涵盖了特异性结合至与本文所公开的抗CD98抗体相同的表位的非免疫 球蛋白结合剂。在一些实施方式中，结合剂是所鉴别的在竞争性结合测定中置换本发明 的抗CD98抗体或被本发明的抗CD98抗体置换的试剂。该些替代结合剂可W包括（例 如）本领域中已知的任何工程改造的蛋白骨架。该些骨架包括，例如，anticalins，它基 于Iipocalin骨架，其蛋白质结构的特征在于支持形成配体结合位点的四个高变环的刚性 目-折叠桶。通过环区域中祀向随机突变并结合功能展示和导向选择来工程改造新型的结 合特异性（Skerra (2008)阳BS J. 275:2677-2683)。其他适合的骨架可W包括例如EUlnectin 或单体（monobody)，基于第十人纤连蛋白III型胞外域化Oide和Koide (2007)Methods Mol.Biol.352:95-109);亲和体（affibody)，基于葡萄球菌蛋白A的Z结构域（Nygren等 人，（2008)阳BS J. 275:2668-2676) ;DARPin，基于销蛋白重复蛋白（Stumpp 等人，（2008) Drug. Discov. Todayl3:695-701) ;fynomers,基于人 Fyn 蛋白激酶的甜3 域（Grabulovski 等人，（2007) J. Biol. Qiem. 282:3196-3204) ;affitins,基于来自 Sulfolobus acidolarius 的 Sa(：7d(Krehenbrink 等人，（2008) J. Mol. Biol. 383:1058-1068) ;affilins,基于人 y-B-晶体蛋白巧bersbach 等人，（2007) J. Mol. Biol. 372:172-185);高亲和性多聚体 (avimer),基于膜受体蛋白的 A 域（Silverman 等人，（200 巧 Biotechnol. 23:1556-1561); 富含半脫氨酸的结肤化〇lmar(2008)阳BS J. 275:2684-2690);和工程改造的Kunitz型 抑制剂（Nixon 和 Wood(2006) Qirr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9:261-268)。有关综述，参见 Gebauer 和 Skerra(2009) Qirr. Opin. Qiem. Biol. 13:245-255。
[0204] 杭体巧体
[0205] 在一些实施方式中，考虑了本文所述的抗体的氨基酸序列修饰。例如，可W期望改 善抗体的结合亲合力和/或其他生物学性质，其包括（但不限于）特异性、热稳定性、表达 水平、效应子功能、糖基化作用、降低的免疫原性或溶解度。除本文所述的抗CD98抗体之 夕F，考虑可W制备抗CD98抗体变体。可W通过将适当的核巧酸变化引入到编码DNA中和/ 或通过所需抗体或多肤的合成来制备抗CD98抗体变体。本领域技术人员将理解氨基酸变 化可W改变抗CD98抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置或者改变膜销定 特性。
[0206] 变化可W是编码所述抗体或多肤的一个或多个密码子的取代、缺失或插入，其导 致与天然序列的抗体或多肤相比，氨基酸序列的变化。氨基酸取代可W是用具有类似的结 构的和/或化学性质的另一种氨基酸替代一种氨基酸的结果，如用丝氨酸替代亮氨酸，即 保守氨基酸替代。插入或缺失可W任选地在约1至5个氨基酸的范围内。可W通过在序列 中系统地进行氨基酸的插入、缺失或取代并测试所得变体的全长或成熟天然序列所显示的 活性来确定所允许的变化。
[0207] 氨基酸序列插入包括长度在1个残基至含有100个或更多个残基的多肤的范围内 的氨基-和/或駿基-末端融合，W及单个或多个氨基酸残基的序列间插入。末端插入的 实例包括具有N末端甲硫氨醜基残基的抗体。所述抗体分子的其他插入变体包括向抗体的 N-或C-末端融合提高所述抗体血清半衰期的酶（例如，用于抗体定向酶前药疗法）或肤。 [020引抗体生物性质中的显著改变伴随着选择置换，它们对于维持（a)置换区域中多 肤主链的结构，例如，作为折叠或螺旋构象，化）祀标位点处分子的电荷或疏水性，或（C) 整个侧链的影响差异显著。根据侧链性质的类似性，氨基酸可W分组（A. L Lehninger, in Biochemistry,第 2 版，第 73-75 页，Worth Publishers, New York (1975)):
[0209] (I)非极性；Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile(I)、Pro (P)、Wie (巧、Tn(W)、Met (M)
[0210] 似不带电荷的极性；Gly 似、Ser (S)，、T虹(T)、切S 似、Tyr (Y)、Asn ㈱、Gln(Q)
[0211] 做酸性；Asp (D)、Glu 似
[0引引（4)碱性；LysOO、Arg (R)、His 做
[0213] 作为另外一种选择，可W将天然存在的残基基于常见的侧链性质分组为：
[0214] (1)疏水：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile ;
[0215] 似中性亲水性：切s、Ser、I"虹、Asn、Gln ;
[021 引（3)酸性；Asp、Glu ;
[0217] (4)碱性；His、Lys、Arg ;
[0引引 妨影响链取向的残基；Gly、Pro ;
[0219] 做芳香；TiT^TyiNPhe。
[0220] 非保守置换需要将该些类别中的一个的成员与另一类交换。所述置换的残基还可 W引入至保守置换位点，或引入至其余（非保守）位点。
[0221] 使用本领域中已知的方法可W制备所述变化，如寡核巧酸介导的（定向）诱变、 丙氨酸扫描和PCR诱变。可W对克隆的DNA进行定点突变（Carter等人，Nucl. Acids Res.，13:4331(1986) ;Zoller 等人，Nucl. Acids Res.，10:6487(1987))、盒式突变（Wells 等人，Gene, 34:315 (1985))、限制-选择突变（Wells 等人，Philos. Trans. R. Soc. London SerA，317:415 (1986))或其他已知的技术W产生抗CD98抗体变体DM。
[0222] 还可W通常用丝氨酸置换未参与维持抗CD98抗体正确构象的任何半脫氨酸残基 W改善所述分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反地，可W将半脫氨酸键加入到抗CD98 抗体中W改善其稳定性（具体地，其中所述抗体是抗体片段，如Fv片段）。在（例如）WO 2006/034488中描述了可W用于产生抗体-药物结合物的半脫氨酸工程改造的抗体。
[0223] 在一种实施方式中，本发明的抗CD98抗体分子是"去免疫"抗体。"去免疫"抗 CD98抗体是来源于人源化或嵌合抗CD98抗体的抗体，它在其氨基酸序列中具有一个或多 个变化，从而导致与各自原始的非去免疫抗体相比，所述抗体的免疫原性减小。用于产生 该些抗体突变体的程序之一涉及抗体分子T细胞表位的鉴别和除去。在第一步中，可W通 过几种方法确定所述抗体分子的免疫原性，例如，通过如本领域中已知的T细胞表位的体 外确定或者该些表位在娃片上的预测。一旦鉴别了 T细胞表位功能的关键残基，则可W进 行突变W除去免疫原性并保留抗体活性。对于综述，参见，例如，Jones等人，Methods in Molecular Biology 日25:405-423, 2009。
[0224] 体外亲合力成熟
[0225] 在一种实施方式中，与亲代抗体相比，具有改善的性质（如亲合力、稳定性或表达 水平）的抗体变体是体外亲合力成熟。与天然原型类似，体外亲合力成熟基于突变和选择 的原则。抗体文库展示为在生物（例如，瞻菌体、细菌或酵母）表面上或者与它们的编码 mRNA或DNA结合（共价键或非共价键）的F油、scFv或V域片段。展示抗体的亲合力选择 允许携带编码所述抗体的遗传信息的生物或复合物的分离。使用展示方法（如瞻菌体展 示），2或3轮突变和选择通常导致抗体片段的亲合力在低纳摩尔范围内。优选的亲和成熟 的抗体将对祀标抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲合力。
[0226] 瞻菌体展示是抗体展示和选择的最广泛的方法。抗体作为瞻菌体外壳蛋白上的 融合在Fd或M13瞻菌体表面上展示。选择涉及暴露于抗原W允许瞻菌体展示的抗体与它 们的祀标结合，该过程称为"淘选"。将结合至抗原的瞻菌体收获并在细菌中感染W产生用 于其他选择的瞻菌体。对于综述，参见化Ogenboom, Methods. Mol. Biol. 178:1-37,2002 ; Bradbuiy 和 Marks, J. Tmmuno. Methods 290:29-49, 2004)〇
[0227] 在酵母展示系统炬Oder 等人，化1:. Biotech. 15:553-57, 1997 ;Qiao 等人，化1:. Protocols 1:755-768, 2006)，抗体作为单链可变融合（SCfv)展示，其中重链和轻链通过 柔性接头连接。scFv融合至酵母凝集素蛋白Aga化的附着亚单位上，其通过与Agalp的二硫 键连接至酵母细胞壁。通过Aga2p的蛋白质展示显示所述蛋白质远离细胞表面，从而使与 酵母细胞壁上其他分子可能的相互作用最小化。将磁力分离和流式细胞术用于筛选文库W 选择具有改善的亲合力和稳定性的抗体。通过用生物素化抗原和第二试剂（如结合至英光 团的抗生蛋白链菌素）标记酵母来确定对所关也的可溶性抗原的结合。可W通过血球凝集 素或侧接SCFv的C-Myc表位标记的免疫英光标记来测量抗体表面表达中的变化。表达已显 示与所展示蛋白的稳定性相互关联，并因此可W选择稳定性和亲合力改善的抗体（Shusta 等人，J. Mol. Biol. 292:949-956, 1999)。酵母展示的其他优势在于所展示的蛋白在真核酵 母细胞的内质网中折叠，从而利用了内质网侣伴蛋白和质量控制机构。一旦成熟完全，则可 W在酵母表面上展示的同时方便地"滴定"抗体亲合力，从而消除对每个克隆表达和纯化的 需要。酵母表面展示的理论限制是与其他展示方法相比可能较小的功能性文库大小；然而， 最近的方法使用了酵母细胞繁育系统W产生预计为1014大小的组合多样性（美国专利公 开 2003/0186374 ;Blaise 等人，Gene :342:211-218, 2004)。
[022引在核糖体展示中，产生了抗体-核糖体-mRNA(ARM)复合物W用于在无细胞体系中 选择。将编码特定抗体文库的DNA文库遗传融合至缺少终止密码子的间隔序列。翻译时，该 间隔序列仍连接至肤基tRNA并占据核糖体通道，并且因此允许所关也的蛋白从核糖体伸 出并折叠。mRNA、核糖体和蛋白质所得的复合物可W结合至表面结合的配体，从而允许通过 与所述配体的亲合力捕获同时分离所述抗体及其编码mRNA。然后，将核糖体结合的mRNA反 转录到cDNA中，然后它可W经历突变并在下一轮选择中使用(pukuda等人，Nucleic Acids Res. 34, el27, 2006)。在mRNA展示中，使用嘿罗霉素作为接合体分子在抗体和mRNA之间建 立共价键（Wilson 等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA 98, 3750-3755, 2001)。
[0229] 由于该些方法是完全体外进行的，因此它们提供了优于其他选择技术的两个主要 优势。首先，文库的多样性不受细菌细胞转化效力的限制，而是仅受试管中存在的核糖体和 不同的mRNA分子的数目的限制。第二，在每轮选择之后可W容易地引入随机突变，例如，通 过无校正活性的聚合酶，该是因为在任何多样化步骤后无须转化文库。
[0230] 可W W祀标方式或者通过随机引入将多样性引入到抗体文库的CDR或整个V基 因中。前一种方法包括顺序地通过高或低水平的突变祀向抗体全部的CDR或者祀向体细 胞高度突变的分离的热点化〇等人，J. Biol.化em. 280:607-617, 2005)或者在实验基础上 或出于结构原因怀疑影响亲合力的残序。可W使用大肠杆菌巧.COli)突变基因株、使用 DNA聚合酶（Hawkins等人，J. Mol. Biol. 226:889-896, 1992)或RNA复制酶的易错复制将 随机突变引入到整个V基因中。还可W通过DNA改组或类似技术置换天然多样性区域来 引入多样性（(Lu 等人，J. Biol. Chem 278:43496-43507,2003 ;美国专利 No. 5565332 ;美 国专利No. 6989250)。替代性技术祀向伸入到框架区残基中的高变环炬ond等人，J. Mol. Biol. 348:699-709, 2005)，使用CDR中的环缺失和插入或者使用基于杂交的多样化（美国 专利公开No. 2004/0005709)。在美国专利No. 7985840中公开了在CDR中产生多样性的其 他方法。可W通过本领域中已知的多种技术完成文库的筛选。例如，可W将CD98固定在固 体载体、柱、针或纤维素/聚（偏二氣己帰）膜/其他过滤器上，在固定至吸附板的宿主细 胞上表达或者在细胞分选中使用，或者结合至生物素W用于使用抗生蛋白链菌素涂覆珠的 捕获，或者在用于淘选展示文库的任何其他方法中使用。
[0231] 有关体外亲合力成熟的综述，参见Hoogenboom,化加"6 Biotechnology23:1105-1116,2005 和 Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51,2010 W及其中的参考文献。
[023引 杭CD98杭体的修饰
[0233] 抗CD98抗体的共价修饰包括在本发明的范围内。共价修饰包括将抗CD98抗体的 目标氨基酸残基与能够与抗CD98抗体所选的侧链或者N-或C-末端残基反应的有机衍生 化试剂反应。其他修饰包括谷氨醜胺醜基和天冬醜胺醜残基分别向相应谷氨醜基和天冬氨 醜残基的脱醜胺，脯氨酸和赖氨酸的轻基化作用，丝氨醜或苏氨醜残基的轻基的磯酸化作 用，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的a氨基的甲基化化E.化ei曲ton, Proteins = Struc^r e and Molecular Properties, W. H. Freeman&Co. , San Francisco, pp. 79-86(1983))、N末 端胺的己醜化作用和任何C末端駿基的醜胺化。
[0234] 包含在本发明范围内的其他类型的抗CD98抗体的共价修饰包括改变所述抗 体或多肤天然的糖基化类型炬eck等人，Qirr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501, 2008 ; Walsh, Drug Discov. Today 15:773-780, 2010)，和 W 美国专利 No. 4640835 ;4496689 ; 4301144 ;4670417 ;4791192或者4179337中所述的方式，将所述抗体连接至多种非蛋白质 聚合物之一，例如，聚己二醇（PEG)、聚丙二醇或聚氧化帰。
[0235] 还可W修饰本发明所述的抗CD98抗体W形成包含融合至另一种异源多肤或氨基 酸序列，例如，表位标记（Te巧e, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-533, 2003)或 IgG 分子的化区的抗 CD98 抗体的嵌合分子（Aruffo, "Immunoglobulin fusion proteins"in Antibody Fusion Proteins, S. M. Chamow 和 A.Ashkenazi 主编，Wiley-Liss, New 化rk, 1999,第 221-242 页）。 。23引 杭CD98杭体的制各
[0237]可W通过培养用含有抗CD98抗体编码核酸的载体转化或转染的细胞来产生抗 CD98抗体。可W使用标准重组技术获得编码本发明的抗体的多肤组成的多核巧酸序列。所 需的多核巧酸序列可W分离和测序自抗体产生细胞，如杂交瘤细胞。作为另外一种选择，可 W使用核巧酸合成仪或PCR技术合成多核巧酸。一旦获得，将编码所述多肤的序列插入到 能够在宿主细胞中复制和表达异源多核巧酸的重组载体中。出于本发明的目的，可W使用 在本领域中可用并且已知的多种载体。适当载体的选择将主要取决于要插入到载体中的核 酸的大小W及将要用所述载体转化的具体的宿主细胞。适合于表达本发明的抗体的宿主细 胞包括原核生物，如古细菌和真细菌，其包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，真核微生物， 如丝状真菌或酵母、无脊椎动物细胞，如昆虫或植物细胞和脊椎动物细胞，如哺乳动物宿主 细胞系。用上述表达载体转化宿主细胞并根据用于诱导启动子、选择转化体或扩增编码所 需序列的基因的情况，在适当改变的常规培养基中培养宿主细胞。使用本领域中已知的标 准蛋白纯化方法纯化通过所述宿主细胞产生的抗体。
[023引包括载体构建、表达和纯化的抗体生产方法还描述于Pluckthun等人，（1996) in Antibody Engineering!Producing antibodies in Escherichia coli:From PCR to fermentation(McCafferty, J. , Hoogenboom, H. R.,和 Chiswell, D. J.主编），第 I 版,第 203-252 页,IRL Press, Oxford ；Kwong,K.&Rader, C. E. coli expression and puri円cation of Fab antibody fragments. Current protocols in protein science editorial board John E Coligan 等人，第 6 章，6. 10 单元（2009) Jachibana 和 Takekoshi, "Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli,"in Antibody Expression and Production, M. Al-Rubeai 主编，Springer, New York, 2011; Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic (Z.An 主编），John Wiley&Sons, Inc. , Hoboken, NJ, USA。
[0239] 当然，考虑可W使用本领域中熟知的其他方法来制备抗CD98抗体。例如，可W 通过使用固相技术的直接肤合成生产适合的氨基酸序列或其部分（参见，例如，Stewart 等人，Solid-Phase Peptide Synthesis, W. H. Freeman Co. , San Francisco, CA(1969)； Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85:2149-2154(1963))。可 W使用手动技术或通过自动化进行 体外蛋白质合成。可W单独地化学合成抗CD98抗体的多个部分，并使用化学或酶促方法 合并W产生所需的抗CD98抗体。作为另外一种选择，可W从工程改造W表达所述抗体的 转基因动物的细胞或体液，如乳汁中纯化抗体，例如在美国专利No. 5545807和美国专利 No. 5827690中所公开的。
[0240] 免疫结合物
[0241] 本发明还提供了免疫结合物（可互换地称为"抗体药物结合物"，或者"ADC")，其 包含通过合成接头共价结合至一种或多种细胞毒性试剂的本发明的抗CD98抗体中的任一 种。ADC将单克隆抗体的高特异性与细胞毒性分子的药理学效力结合，从而允许特异地将 细胞毒性试剂祀向肿瘤细胞并避免大部分抗癌药物的非特异性毒性。对于综述，参见，例 女口，Carter and Senter, Cancer J.14:154-169(2008) ；Ducry and Stump, B ioconjugate Chem. 21:5-13 (2010) ;Beck 等人，Discov. Med. 10:329-339 (2010)。
[0242] 在本发明所述的免疫结合物中使用的细胞毒性试剂可W包括如上所述的化疗剂、 药物或生长抑制剂、毒素（例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段）或者 放射性同位素。在一些实施方式中，所述免疫结合物包括DNA结合剂（例如，刺抱霉素）或 微管蛋白解聚剂（例如，类美坦素或奧里斯他汀（auristatin))。本发明还考虑了在抗体和 具有核酸酵素活性（例如，核糖核酸酶或DNA核酸内切酶，如脱氧核糖核酸酶；DNA酶）的 化合物之间形成的免疫结合物。
[0243] 可W在本发明的免疫结合物中使用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白 喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链（来自铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa))、 當麻毒蛋白（ricin)A链、相思豆毒蛋白（abrin)A链、菊莲根毒蛋白（modeccin)A链、a-靑 曲霉素（sarcin)、油桐（Aleurites fordii)蛋白、香石竹毒蛋白（dianthin proteins)、美 洲商陆（Phytolaca americana)蛋白（PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜（Momordica charantia) 抑制剂、麻疯树毒蛋白（curcin)、己豆毒蛋白（crotin)、服皂草（sapaonaria officinalis) 抑制剂、白树毒蛋白（gelonin)、丝林霉素（mitogellin)、局限曲菌素（restrictocin)、酷 霉素（phenomycin)、依诺霉素（enomycin)和单端抱菌素（trichothecenes)。参见，例如， WO 93/21232。
[0244] 多种放射性同位素对放射性结合抗体的产生是可用的。实例包括At2"、1"1、 Iiss、yw、Reise、Reiss、Sm" 3、Bi"2、P32、Pb2I2和Lu的放射性同位素。当所述结合物用于检测 时，它可W包含用于闪烁扫描研究的放射性原子，例如，tc99m或1123,或用于核磁共振 (NMR)成像（也称为磁共振成象，MRI)的自旋标记物，如楓-123、楓-131、钢-111、氣-19、 碳-13、氮-15、氧-17、乱、猛或铁。可W W已知的方法将放射性同位素引入到结合物中， 例女口，女口 Reilly, "The radiochemistry of monoclonal antibodies and peptides, "in Monoclonal Antibody and Peptide-Targeted Radiotherapy of Cancer, R. M. Reilly 主 编，Wil巧，Hoboken N. J.，2010 中所述。
[0245] 所述接头可W是有利于细胞毒性药物在细胞中释放的"可切割接头"，但是在本 文中还考虑了非可切割接头。在本发明的免疫结合物中使用的接头无限制地包括酸不稳 定的接头（例如，踪接头）、含有二硫化物的接头、肤酶敏感性接头（例如，肤接头，如瓜 氨酸-额氨酸或苯丙氨酸-赖氨酸）、光不稳的接头、二甲基接头（化ari等人，Cancer Research52:127-131 (1992);美国专利No. 5208020)、硫離接头或设计用于避免多药物转 运蛋白介导的耐受性的亲水接头化OVtun等人，Cancer Res. 70:2528-2537, 2010)。
[0246] 可W使用多种双功能蛋白偶联剂制备抗体和细胞毒性试剂的结合物，所述偶联 剂如 BMPS、EMCS、GMBS、皿VS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、 賴基-EMCS、賴基-GMBS、賴基-KMUS、賴基-MBS、賴基-SIAB、賴基-SMCC和賴基-SMPB W及SVSB(玻巧醜亚胺基-(4-己帰基讽）苯甲酸醋））。例如，可W如Vitetta等 人，Science238:1098(1987)中所述制备當麻毒蛋白免疫毒素。本发明还考虑可W 使用如本领域中所公开的任何适合的方法制备抗体和细胞毒性试剂的结合物，例如， Bioconjugate Techniques,第 2 片反，G. T. Hermanson主编，Elsevier, San Francisco, 2008。
[0247] 常规的抗体-药物结合策略已基于涉及Lys残基的e -氨基或切S残基的硫 醇基团的随机结合化学，其导致产生了异源结合物。近期发展的技术允许与抗体的位点 特异性结合，从而导致了均一的药物加载并且避免了具有改变的抗原结合或者药物动 力学的ADC亚群。该些包括在重链和轻链上的位置处包含半脫氨酸取代的"硫代单抗 (thiomab)"的工程改造，其提供了反应性硫醇基团并且不破坏免疫球蛋白折叠和组装或者 改变抗原结合（Junu1:ula 等人，J. Immunol. Meth. 332:41-52 (2008) ;Junu1:ula 等人，化1:. Biotechnol. 26:925-932, 2008)。在另一种方法中，通过从末端到砸代半脫氨酸插入重编 码终止密码子UGA，将砸代半脫氨酸共翻译地插入到抗体序列中，从而在存在另一种天然 氨基酸的情况下允许在砸代半脫氨酸的亲核砸醇基团处进行位点特异性共价结合Olofer 等人，Proc.化1:1. Acad. Sci. USA105:12451-12456 (2008) ;Hofer 等人，Biochemistry 48巧0):12047-12057, 2009)。 阳24引 药物制剂
[0249] 可W通过适合于要治疗的病况的任何途径施用本发明所述的抗体或抗体-药物 结合物（ADC)。通常，将肠胃外（即输注）、皮下、肌内、静脉内、皮内、銷内和硬膜外施用抗 体或ADC。
[0巧0] 对于治疗癌症，在一种实施方式中，通过静脉内输注施用所述抗体或抗体-药物 结合物。通过输注施用的剂量在每次剂量约1 U g/m2至约IOOOOy g/m2的范围内，通常每 周一次剂量，总计1、2、3或4次剂量。作为另外一种选择，所述剂量范围为约1 y g/m2至约 1000 y g/m2,约 1 y g/m2 至约 800 y g/m2,约 1 y g/m2 至约 600 y g/m2,约 1 y g/m2 至约 400 y g/ m2,约 10 至约 500 y g/m2,约 10 y g/m2 至约 300 y g/m2,约 10 y g/m2 至约 200g/m2 和约 1 y g/ m2至约200 y g/m2。所述剂量可W每天施用一次，每周施用一次，每周施用多次但小于每天 施用一次，每月施用多次但小于每天施用一次，每月施用多次但小于每周施用一次，每月施 用一次或间歇施用W缓解或减轻疾病症状。可W在任何公开的间隔继续施用，直至待治疗 的肿瘤或癌症症状缓解。在实现症状缓解或减轻后，可W继续施用，其中通过该继续的施用 延长了该种缓解或减轻。
[0巧1] 在一个方面，本发明还提供了药物制剂，其包含至少一种本发明的抗CD98抗体和 /或其至少一种免疫结合物和/或至少一种本发明的抗CD98抗体-药物结合物。在一些实 施方式中，药物制剂包含1)抗CD98抗体和/或抗CD98抗体-药物结合物和/或其免疫结 合物，和2)可药用载体。在一些实施方式中，药物制剂包含1)抗CD98抗体和/或其免疫 结合物，和任选地，2)至少一种其他治疗剂。
[0巧2] 通过将具有所需纯度的抗体或抗体-药物结合物与任选的生理学可用的载体、赋 形剂或稳定剂化emington'S Pharmaceutical Sciences,第 16 版，Osol, A.主编（1980)) 混合制备了用于储存的水溶液形式或冻干形式或其他干燥形式的包含本发明的抗体或免 疫结合物或者本发明的抗体-药物结合物的药物制剂。本文的制剂还可W包含对待治疗 的具体适应症所必需的不止一种活性化合物，优选地，彼此不会不利地影响的具有补充活 性的那些。例如，除了抗CD98抗体之外，可W期望在一种制剂中包含其他抗体，例如，结合 CD98多肤上不同表位的第二抗CD98抗体，或针对影响特定癌症生长的一些其他祀标，如生 长因子的抗体。作为另外一种选择或者另外，所述组合物还可W包括化疗剂、细胞毒性试 齐U、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂和/或也脏保护剂。该些分子W对预定用途有效的量 适合地W组合存在。
[0253] 本发明的抗体或免疫结合物可W配制成任何适合于递送至祀标细胞/组 织的形式，例如，作为微胶囊或巨乳液化emington' S Pharmaceutical Sciences, 第 16 版，Osol, A.主编（1980) ;Park 等人，Molecules 10:146-161 (2005); Malik 等人，Qirr. Drug. Deliv. 4:141-151(2007));作为缓释制齐0 (Putney and Burke,化1:脚6 Biotechnol. 16:153-157, (1998))或者在脂质体中（Maclean 等人，Int. J. Oncol. 11:235-332 (1997) ;Kontermann, Qirr. Opin. Mol. Hier. 8:39-45(2006))。 。巧4] 治巧方法
[0255] 本发明的抗体或免疫结合物可W在（例如）体外、离体和体内治疗方法中使用。在 一个方面，本发明提供了体内或体外抑制细胞生长或增殖的方法，所述方法包括将细胞在 允许免疫结合物结合至CD98的条件下暴露于抗CD98抗体或其免疫结合物。"抑制细胞生长 或增殖"表示将细胞的生长或增殖降低至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、 90%、95%或100%，并且包括引起细胞死亡。在某些实施方式中，所述细胞是肿瘤细胞。在 某些实施方式中，所述细胞是膀脫肿瘤、乳腺肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、胃肿瘤、食道肿瘤、 肺肿瘤、喉肿瘤、肾肿瘤、口腔肿瘤、卵巢肿瘤或前列腺肿瘤细胞，或者是肉瘤、黑素瘤、神经 胶质瘤、淋己瘤或白血病细胞。
[0256] 在一个方面，本发明的抗体或免疫结合物用于治疗或防止细胞增殖病症，如癌症。 在某些实施方式中，细胞增殖病症与CD98提高的表达和/或活性有关。例如，在某些实施 方式中，所述细胞增殖病症与癌细胞表面上的CD98的提高的表达有关。通过本发明的抗体 或免疫结合物治疗的细胞增殖病症的实例包括（但不限于）膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠 癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶 质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。
[0257] 在一个方面，本发明提供了治疗细胞增殖病症的方法，其包括向个体施用有效量 的抗CD98抗体或其免疫结合物。在某些实施方式中，用于治疗细胞增殖病症的方法包括向 个体施用有效量的药物制剂，所述药物制剂包含抗CD98抗体或抗CD98免疫结合物，和任选 地至少一种其他治疗剂，如W下提供的那些。在一种实施方式中，抗CD98抗体或免疫结合 物可W通过将所述抗体或免疫结合物与CD98接触W形成抗体或免疫结合物-抗原复合物 来用于祀向癌细胞上的CD98,从而免疫结合物结合的细胞毒性剂进入到细胞内部。在一种 实施方式中，结合的抗体或免疫结合物内化至表达CD98的癌细胞中。
[0巧引出于治疗目的，可W将抗CD98抗体或免疫结合物施用于人。此外，可W将抗CD98 抗体或免疫结合物施用于表达CD98的非人哺乳动物，并且出于兽医目的或者作为人疾病 的动物模型抗体与所述非人哺乳动物交叉反应（例如，灵长类、猪、大鼠或小鼠）。对于后 者，该些动物模型可W用于评价本发明的抗体或免疫结合物的治疗效力（例如，测试施用 剂量和时间过程）。
[0259] 本发明的抗体或免疫结合物可W在疗法中单独使用或者与其他组合物结合使用。 例如，本发明的抗体或免疫结合物可W与至少一种其他治疗剂和/或佐剂共施用。在某些 实施方式中，其他治疗剂是细胞毒性剂、化疗剂或生长抑制剂。在一些实施方式中，化疗剂 是试剂或试剂组合，如焼化剂（例如，苯达莫司汀盐酸盐、环磯醜胺或异环磯醜胺）、核巧类 似物（例如，氣达拉滨、阿糖胞巧或吉西他滨）、皮质类固醇（例如，泼尼松、泼尼松龙或甲 泼尼龙）、抗有丝分裂剂（例如，紫杉醇、多西他赛或长春瑞滨）、长春花生物碱（例如，长春 新碱或依巧泊巧）、局部异构酶抑制剂（例如，伊立替康）、抗生素（例如，意环霉素或多柔 比星）、笛类似物（例如，顺笛或卡笛）、治疗性抗体（例如，利妥昔单抗）或者试剂的组合 (例如，CHOP或CVP)，其中所述组合疗法在癌症的治疗中有用。在一些实施方式中，其他化 合物是除抗CD98抗体之外的治疗性抗体（例如，利妥昔单抗）。
[0260] 上述该些组合疗法包括混合施用（其中两种或更多种治疗剂包含在相同或单独 的制剂中）和单独施用，在该种情况下，本发明的抗体或免疫结合物的施用可W在其他治 疗剂和/或佐剂的施用之前、同时和/或之后发生。本发明的抗体或免疫结合物还可W与 其他治疗方案组合使用，所述其他治疗方案无限制地包括放射疗法和/或骨髓和周围血液 移植。
[0261] 可W通过任何适合的方法施用本发明的抗体或免疫结合物（和任何其他治疗剂 或佐剂），其包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内施化并且如果对于局部治疗需要，还包 括损害内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。另外，所述抗体 或免疫结合物适合地通过脉冲输注施用，具体地使用剂量降低的抗体或免疫结合物。部分 基于所述施用是短暂还是长期的，剂量施用可W通过任何适合的途径，例如通过注射，如静 脉内或皮下注射。
[0262] 本发明的抗体或免疫结合物将W按照优良医疗实践的方式配制，剂量分配和施 用。出于在该背景下的考虑，因素包括要治疗的具体病症、要治疗的具体哺乳动物，个体患 者的临床情况，造成病症的原因、试剂递送位点、施用方法、施用时间表和开业医生已知的 其他因素。所述抗体或免疫结合物不需要，但是任选地与目前用于预防或治疗所讨论的病 症的一种或多种试剂一起配制。该些其他试剂的有效量取决于所述制剂中存在的抗体或免 疫结合物的量，病症或治疗类型W及W上所讨论的其他因素。该些通常W相同的剂量并通 过如本文所述的施用途径，或者本文所述的约1至99 %的剂量，或者W经验/临床确定适合 的任何剂量和通过任何途径来使用。
[0263] 为了预防或治疗疾病，本发明的抗体或免疫结合物适当的剂量（当单独使用或与 一种或多种其他额外的治疗剂，如化疗剂组合使用时）将取决于要治疗的疾病类型、抗体 或免疫结合物的类型、疾病的严重程度和过程、所述抗体或免疫结合物是出于预防还是治 疗目的施用，上述疗法、患者的病史W及对所述抗体或免疫结合物的反应和主治医师的判 断。所述抗体或免疫结合物一次或在一系列治疗中适合地施用于患者。根据疾病的类型和 严重性，无论是（例如）通过一次或多次单独施用还是通过连续输注，约Iy g/kg至IOOmg/ kg(例如，0. lmg/kg-20mg/kg)的抗体或免疫结合物可W是用于施用于患者的初始候选剂 量。根据上述因素，一个典型的日剂量可W在约IygAg至lOOmg/kg或W上的范围内。对 于在几天或更长时间内的反复施用，根据情况，所述治疗通常将持续直至发生所需的疾病 症状抑制。所述抗体或免疫结合物的一个示例性剂量将在约0. 〇5mg/kg至约lOmg/kg的范 围内。因此，可W向患者施用一个或多个剂量的约0. 5mg/kg、2. 0mg/kg、4. Omg/kg或IOmg/ kg(或它们的任意组合）的抗体或免疫结合物。该些剂量可W间歇施用，例如，每周或每H 周（例如，从而所述患者接受约2至约20,或者例如，约6次剂量的所述抗体或免疫结合 物）。可W施用初始较高的负荷剂量，然后是一个或多个较低的剂量。示例性剂量施用方案 包括施用约4mg/kg的初始负荷剂量，然后是约2mg/kg抗体的每周维持剂量。然而，其他剂 量方案可W是有用的。通过常规技术和测定，容易地监控了该疗法的发展。 阳264] i金断方法巧檢测方法
[0265] 在一个方面，本发明的抗CD98抗体和免疫结合物对于检测生物样品中CD98的存 在性是有用的。如本文所使用的，术语"检测"包括定量或定性检测。在某些实施方式中， 生物样品包括细胞或组织。在某些实施方式中，该些组织包括相对于其他组织，W较高水平 表达CD98的正常和/或癌性组织，例如，膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺 癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋己瘤或白血 病，或者任何该些癌症的转移癌。
[0266] 在一个方面，本发明提供了检测生物样品中CD98的存在性的方法。在某些实施方 式中，所述方法包括在允许抗CD98抗体与CD98结合的条件下将所述生物样品与抗CD98抗 体接触，并检测抗CD98抗体和CD98之间是否形成复合物。
[0267] 在一个方面，本发明提供了诊断与CD98表达升高有关的病症的方法。在某些实施 方式中，所述方法包括将测试细胞与抗CD98抗体接触；通过检测抗CD98抗体与CD98的结 合确定测试细胞的CD98表达水平（定量或定性）；和将测试细胞的CD98表达水平与对照 细胞（例如，与测试细胞相同组织来源的正常细胞或者与该正常细胞相当的水平表达CD98 的细胞）的CD98表达水平相比较，其中与对照细胞相比，测试细胞较高水平的CD98表达表 明存在与CD98表达升高有关的病症。在某些实施方式中，如与正常细胞相比，提高的表达 对应于肿瘤细胞表面上较高密度的CD98表达。在某些实施方式中，测试细胞得自怀疑患有 与CD98的表达升高有关的病症的个体。在某些实施方式中，所述病症是细胞增殖病症，女口 癌症或肿瘤。可W使用本发明的抗体确诊的示例性细胞增殖病症包括膀脫癌、乳腺癌、结肠 癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、 神经胶质瘤、淋己瘤或白血病，或者任何该些癌症的转移癌。
[026引在某些实施方式中，如W上所述的那些，诊断或检测方法包括检测抗CD98抗体与 细胞表面上表达的CD98或者与得自在其表面上表达CD98的细胞的膜制备中的CD98的结 合。在某些实施方式中，所述方法包括在允许抗CD98抗体与CD98结合的条件下将细胞与 抗CD98抗体接触，并检测抗CD98抗体和细胞表面上的CD98之间是否形成复合物。用于检 测抗CD98抗体与细胞表面上表达的CD98的结合的示例性测定是"FACS"测定。
[0269] 某些其他方法可W用于检测抗CD98抗体与CD98的结合。该些方法包括（但不限 于）在本领域中熟知的抗原-结合测定，如免疫印迹、放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附 测定）、"夹也"免疫测定、免疫沉淀测定、英光免疫测定、蛋白A免疫测定和免疫组织化学 烟C)。
[0270] 在某些实施方式中，标记了抗CD98抗体。标记包括（但不限于）直接检测的标记 或部分（如英光、发色、电子密度、化学发光和放射性标记），W及（例如）通过酶促反应或 分子间相互作用间接检测的部分，如酶或配体。示例性标记包括但不限于放射性同位素 3中、 1吃、1251、巧和"4、英光团如稀±馨合物或英光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹醜、伞 形丽、英光素酶，例如，英光虫英光素酶和细菌英光素酶（美国专利No. 4737456)、蛮光素、 2, 3-二氨二氮杂蔡二丽、辣根过氧化酶（HRP)、碱性磯酸酶、目-半乳糖巧酶、葡糖淀粉酶、 溶菌酶、糖氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磯酸脱氨酶、杂环氧化 酶如尿酸酶和黄嘿岭氧化酶，其与使用过氧化氨氧化染料前体的酶结合，如HRP、乳过氧化 物酶或微过氧化酶、生物素/抗生物素蛋白、自旋标记物、瞻菌体标记物、稳定的自由基等。
[0271] 在某些实施方式中，将抗CD98抗体固定在不溶性基质上。固定化需要将抗CD98抗 体与溶液中保持游离的任何CD98分离。该通常伴随着在测定程序前使抗CD98抗体不溶， 如通过吸附至不溶于水的基质或表面炬ennich等人，U. S. 3720760)，或通过共价偶联（例 女口，使用戊二酵交联），或通过（例如）免疫沉淀在抗CD98抗体和CD98之间形成复合物后 使抗CD98抗体不溶。
[0272] 可W使用本发明的免疫结合物代替抗CD98抗体或者除抗CD98抗体之外使用本发 明的免疫结合物来进行诊断或检测的任何上述实施方式。
[0273] 遞定
[0274] 可W通过本领域中已知的多种测定来鉴定本发明的抗CD98抗体和免疫结合物的 物理/化学性质和/或生物活性。 。的引 活巧测定
[0276] 在一个方面，提供了鉴别具有生物活性的抗CD98抗体或其免疫结合物的测定。生 物活性可W包括（例如）抑制细胞生长或增殖的能力（例如，"细胞杀死"活性），或诱导细 胞死亡的能力，包括程序性细胞死亡（细胞调亡）。还提供了体内和/或体外具有该种生物 活性的抗体或免疫结合物。
[0277] 在某些实施方式中，测试了抗CD98抗体或其免疫结合物体外抑制细胞生长或增 殖的能力。细胞生长或增殖的抑制测定在本领域中是熟知的。通过本文所述的"细胞杀死" 测定举例说明的细胞增殖的某些测定测量了细胞存活力。一个该种测定是CellTiter-Glo? 发光细胞存活力测定，其可商购自Promega(Madison, WI)。该测定基于所存在的ATP(它 是代谢活性细胞的指示）的定量确定了培养中活细胞的数目。参见Crouch等人（1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88，美国专利 No. 6602677。所述测定可 W 在 96 或 384 孔形 式中进行，使其能够进行自动高通量筛选（HT巧。参见化ee等人（1995)Anticancer Drugs6:398-404。
[027引细胞增殖的另一种测定是"MTT"测定，它是测量3-(4, 5-二甲基喔 哇-2-基）-2,5-二苯四哇漠化物通过线粒体还原酶氧化为甲潑的比色测定。像 CellTiter-Glo?测定一样，该测定显示了细胞培养中存在的代谢活性细胞的数目。参 见，例如，Mosmann (1983) J. Immunol. Meth. 65:55-63 和化ang 等人（2005) Cancer Res.65:3877-3882。
[0279] 在一个方面，测试了抗CD98抗体诱导细胞体外死亡的能力。诱导细胞死亡的测定 在本领域中是熟知的。在一些实施方式中，该些测定测量（例如）膜完整性的损失，如通过 楓化丙巧（PI)、台盼蓝（参见Moore等人（1995)切totechnology, 17:1-11)或7AAD的吸 收所指示的。在示例性PI吸收测定中，细胞在杜尔贝科改良的伊格尔培养基值-MEM)中 培养；补充有10%热失活的FBS(Hyclone)和2mM k谷氨醜胺的汉姆氏F-12巧0:50)。因 此，所述测定是在没有补体和免疫效应细胞的情况下进行的。细胞W 3X 1〇6/皿的密度在 100X20mm培养皿中接种并使其附着过夜。除去培养基并仅用新鲜培养基或含有不同浓度 的抗体或免疫结合物的培养基置换。将细胞培育3天的时间段。处理后，用PBS清洗单层 并通过膜酶消化分离。然后，W 120化pm将细胞在4C离也5分钟，将颗粒再息浮于3ml冷 Ca"结合缓冲液（lOmM 化pes，pH7. 4，140mM NaCl，2. 5mM CaCl2)并等分到 35mm 盖有滤网 (strainer-capped)的12X75mm管中（每管1ml，每个处理组3管）W除去细胞团块。然 后，向管中加入PI (10 y g/ml)。使用FACSCAN?流式细胞仪和FACSCONVERT?CellQuest软 件炬ecton Dickinson)分析样品。因此，鉴别了如通过PI吸收所确定的诱导统计学显著 水平的细胞死亡的抗体或免疫结合物。
[0280] 在一个方面，测试了抗CD98抗体或免疫结合物体外诱导细胞调亡（程序性细胞死 亡）的能力。诱导细胞调亡的抗体或免疫结合物的示例性测定是膜联蛋白结合测定，例如， 如化ang等人中所述炬ioTechniques 23:525-531,1997)。诱导细胞调亡的抗体或免疫结 合物的另一个示例性测定是检测基因组DNA的核小体间降解的组蛋白DNA ELISA比色测 定。可W使用（例如）细胞死亡检测化ISA试剂盒（Roche,化Io Alto, CA)进行该种测定。
[0281] 在任何上述体外测定中使用的细胞包括天然表达CD98或已工程改造表达CD98的 细胞或细胞系。该些细胞包括相对于相同组织来源的正常细胞过表达CD98的肿瘤细胞。该 些细胞还包括表达CD98的细胞系（包括肿瘤细胞系）和不正常表达CD98但用编码CD98 的核酸转染的细胞系。
[0282] 在一个方面，测试了抗CD98抗体或其免疫结合物体内抑制细胞生长或增殖的能 力。在某些实施方式中，测试了抗CD98抗体或其免疫结合物抑制肿瘤体内生长的能力。体 内模型系统，如异种移植模型可W用于该些测试。在示例性异种移植系统中，将人肿瘤细胞 引入到适当免疫受损的非人动物，例如SCID小鼠中。将本发明的抗体或免疫结合物施用于 动物。测量了抗体或免疫结合物抑制或降低肿瘤生长的能力。在上述异种移植系统的某些 实施方式中，人肿瘤细胞是来自人患者的肿瘤细胞。用于制备异种移植模型的该些细胞无 限制地包括表达外源CD98的细胞和天然表达CD98的细胞。在某些实施方式中，通过皮下 注射或者通过移植到适合位点（如乳房脂肪垫）将人肿瘤细胞引入到适当免疫受损的非人 动物中。 阳28引 结合测定巧巧他测定
[0284] 在一个方面，测试了抗CD98抗体的抗原结合活性。例如，在某些实施方式中，测试 了抗CD98抗体结合至在细胞表面上表达的外源或内源CD98的能力。FACS测定可W用于该 些测试。
[0285] 可W基于它们所识别的表位将一组抗CD98的单克隆抗体分组，该方法称为表位 框并。通常使用竞争测定进行表位框并，它评价了在存在另一种抗体的情况下抗体结合至 抗原的能力。在示例性竞争测定中，在包含结合至CD98的第一标记的抗体和测试与所述第 一抗体竞争结合至CD98的能力的第二未标记抗体的溶液中培育固定化CD98。所述第二抗 体可W存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含所述第一标记的抗体但不包含所述第二 未标记抗体的溶液中培育固定化CD98。在允许所述第一抗体与CD98结合的情况下培育后， 除去过量未结合的抗体，并且测量与固定化CD98有关的标记物的量。如果在测试样品中相 对于对照样品与固定化CD98有关的标记物的量显著降低，那么它表明所述第二抗体与所 述第一抗体竞争结合至CD98。在某些实施方式中，固定化CD98存在于细胞表面上或者在得 自在其表面上表达CD98的细胞的膜制备中。
[0286] 表位框并的高通量方法也是本领域中已知的。参见，例如，Jia等人，J. Immunol. Methods 2004, 288(1-2) :91-98,其描述了用于单克隆抗体鉴定的多路竞争性抗体框并的 方法；和 Miller 等人，J. Tmmunol. Methods 2011, 365 (1-2) : 118-25,其描述了通过多路配 对测定的鼠单克隆抗体的表位框并。
[0287] 表位定位
[028引"表位定位"是鉴别抗体在其祀标蛋白抗原上的结合位点或表位的方法。抗体表位 可W是线性表位或构象表位。线性表位是由蛋白质中氨基酸的连续序列形成的。构象表位 是由蛋白质序列中间断的氨基酸形成的，但是当蛋白质折叠成其立体结构时汇合在一起。
[0289] 用于定位祀标蛋白抗原上抗体表位的多种方法在本领域中是已知的。该些包括突 变法、肤扫描法、展示法、涉及质谱的方法和结构确定。
[0290] 定点突变法涉及祀标定点突变，其中通过沿蛋白序列系统引入取代，然后确定每 个取代对抗体结合的影响鉴别了关键氨基酸。该可W通过如化nnin曲am和Wells (1989) Science 244:1081-1085所述的"丙氨酸扫描突变"或人CD98中氨基酸残基点突变的一些 其他形式来进行。然而，突变研究还可W显示对CD98的整体立体结构是关键的但不直接参 与抗体-抗原接触的氨基酸残基，并因此其他方法对确认使用该方法确定的功能性表位可 W是必需的。
[0291] 鸟枪突变定位利用祀标基因广泛的质粒-突变文库，其中文库中每个克隆具有独 特的氨基酸突变并且整个文库覆盖了祀标蛋白中的每一个氨基酸。将构成突变文库的克隆 分别在微孔板中布置，在活哺乳动物细胞中表达，并测试与所关也的抗体的免疫反应性。通 过反应性的损失鉴别了对抗体表位关键的氨基酸，然后在蛋白质结构上定位W显示表位。 通过自动分析，可W在数天至数周内获得新的表位图。由于它使用了哺乳动物细胞内蛋白 质的天然结构，因此所述技术允许线性和构象表位结构两者在复杂蛋白质上绘图（Paes等 人，J. Am. Qiem. Soc. 131(20):6952-6954(2009) ;Banik and Doranz, Genetic !Engineering and Biotechnology News 3 (2):25-28 (2010))〇
[0292] 还可W使用肤扫描法确定抗CD98抗体结合的表位。在肤扫描中，测试了来自祀标 蛋白质CD98的重叠片段的短肤序列文库结合所关也的抗体的能力。如"pepscan"法（WO 84/03564 ;W0 93/09872)中所述，合成了所述肤，并且例如使用化ISA或BIAC0RE，或者通过 任何多种固相筛选方法化eineke等人，Qirr. Opin. Biotechnol. 12:59-64, 2001)在芯片上 筛选所述肤的结合。该些肤筛选法可能不能检测一些间断的功能性表位，即涉及沿CD98多 肤链的一级序列不邻接的氨基酸残基的功能性表位。
[0293] 最近发展的被称为化IPS (支架上的肤化学键）的技术可W用于定位构象表位。所 述肤的松散端（loose end)固定至合成支架，从而所述支架肤可能能够采用与完整蛋白中 相应序列相同的立体结构。CLIPS技术用于将线性肤固定至环状结构（"单环"形式），并 且将不同部分的蛋白结合位点集合在一起广双环"、"H环"等形式），从而产生了可W测 定抗体结合的构象表位（美国专利No. 7972993)。
[0294] 还可W使用展示技术定位通过本发明的抗体结合的表位，所述展示技术包括，例 女口，如上所述的瞻菌体展示、微生物展示和核糖体/mRNA展示。在该些方法中，在瞻菌体或 细胞表面上展示了肤片段文库。然后，使用选择性结合测定，通过筛选抗该些片段的HlAb定 位表位。已发展了一些计算工具，其使得能够基于使用瞻菌体展示所获得的线性亲合力选 择的肤来预测构象表位（Mayrose等人，Bioinformatics 23:3244-3246, 2007)。方法还可 用于通过瞻菌体展示检测构象表位。微生物展示系统还可W用于在细胞表面上表达正确折 叠的抗原片段W用于鉴别构象表位（Coc虹an等人，J. Immunol. Meth. 287:147-158, 2004 ; Roclcberg 等人，化1:山"6 MethodsS: 1039-1045, 2008)。
[0295] 涉及蛋白水解和质谱的方法也可W用于确定抗体表位炬aerga-化tiz等 人，Protein Sci. 2002化ne ;11 (6) :1300-1308)。在限制性蛋白水解中，在存在和不存在 所述抗体的情况下通过不同的蛋白酶切割抗原，并且通过质谱法鉴别片段。表位是一旦 结合抗体则成为保护不受蛋白水解的抗原区域（Suckau等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA 87:9848-9852, 1990)。其他基于蛋白水解的方法包括，例如，选择性化学修饰（Fiedler等 人，Bioconjugate ChemistiT 1998, 9(2):236-234, 1998)、表位切除（Van de Water 等 人，Clin. Immunol. Immunopathol. 1997, 85 (3) : 229-235, 1997)和最近发展的氨-気化/D) 交换法（Flanagan, N., Genetic Engineering and Biotechnology NewsS (2) :25-28, 2010)。
[0296] 还可W通过结构方法确定本发明的抗体结合的表位，如晶体X射线结构确定（例 女口，WO 2005/044853)、分子模型和核磁共振（NMR)光谱学，其包括当游离时和当与所关也 的抗体在复合物中结合时，Ik23R中活泼的醜胺氨的H-D交换率的NMR确定狂inn-化Stin 等人，（1992)Biochemist;ry31:11335-11347 ;Zinn-Justin 等人，（1993)Biochemist;ry 32:6884-6891)〇
[0297] 可W通过（例如）抗CD98抗体对结合至所述表位的筛选，通过用包含含有表位序 列的人CD98片段的肤使动物免疫，或者通过使用瞻菌体展示选择结合至表位序列的抗体 可W获得结合至与本发明的抗体相同的表位的其他抗体。可W预期结合至相同功能性表位 的抗体显示出类似的生物活性，如阻断CD98的生物活性，和可W通过抗体功能性测定确认 的该些活性。
[029引其他活性测定
[0299] 在一种实施方式中，本发明的抗CD98抗体是抑制CD98生物活性的枯抗剂抗体。可 W测定本发明的抗CD98抗体W确定它们是否抑制CD98的生物活性，例如，与轻链的结合。 为了确定本发明的CD98抗体是否抑制与轻链的结合，根据Kim等人，Biochim. Bio地ys. Acta 1565:112-122, 2002中所述的方法，测定了 CD98抗体抑制癌细胞系中氨基酸吸收的 能力。
[0300] 在一个方面，还可W通过一系列测定来鉴定纯化的抗CD98抗体，所述测定包括 (但不限于）N末端测序、氨基酸分析、非变性尺寸排阻高压液相色谱法（HPLC)、质谱法、离 子交换色谱法和木瓜蛋白酶消化。
[0301] 在一种实施方式中，本发明考虑了具有一些但非全部效应子功能的改变的抗体， 该使其成为在其中抗体的体内半衰期是重要的但某些效应因功能（如补体和ADCC)是 不必需的或有害的多种应用中所期望的候选。在某些实施方式中，测量了抗体的化活 性W确保仅维持了所需的性质。可W引入体外和/或体内细胞毒性测定W确认CDC和/ 或ADCC活性的降低/消除。例如，可W引入化受体（FcR)结合测定W确保所述抗体缺 少化Y R结合（因此很可能缺少ADCC活性），但是保留了化化结合性能。在美国专利 No. 5500362或者5821337中描述了评价所关也的分子的ADCC活性的体外测试的实例。 对于该些测定有用的效应细胞包括周围血单核细胞（PBMC)和自然杀伤（NK)细胞。作为 另外一种选择或另外，可在体内评价所关也的分子的ADCC活性，例如，在动物模型中，女口 Clynes等人，PNAS (USA) 95:652-656 (1998)中所公开的。还可W进行Clq结合测定W确认 抗体不能结合Clq，并因此缺少CDC活性。为了评价补体激活，可W进行CDC测定，例如，女口 Gazzano-Santoro 等人，J. Immunol. Methods202:163(1996)中所述的。还可 W使用本领域 中已知的方法进行化化结合和体内清除/半衰期确定。
[0302] 尽管出于使理解清楚的目的已经通过例证说明和实例详细说明了上述发明，但所 述说明和实例不应视为对本发明范围的限制。在本文中引用的所有专利和科学文献的公开 内容明确地W其全部内容作为参考并入。
[0303] 实施例
[0304] W下是本发明的方法和组合物的实例。应理解考虑W上所提供的一般说明，可W 实践多种其他实施方式。
[0305] 实施例1 ;急性髓性白血病（AML)肿瘤细胞表面上CD98的鉴定
[0306] 总计16个原发性AML样品得自化ed化tchinson癌症研究中也（FHCRC)。分析 了 11个来自健康供体的样品。为了监测各个AML样品的质量，进行了 AML胚细胞的苏木素 伊红染色。仅分析了含有至少75%肿瘤细胞的样品。另外，对得自Billings诊所或佛罗 里达大学扣niversity of Florida)的23个原发性慢性淋己细胞性白血病（CLL)样品和 得自合作人组织网络（Cooperative Human Tissue Network)或国家疾病研究交流会（the ^tional Disease Research Interchange, NDRI)的 27 个原发性结肠直肠癌（CRC) W及 22个正常相邻结肠对照样品进行分析。优化样品处理W最大程度维持样品分离期间的细胞 存活力。确定AML、aL和CRC样品的最佳标记时间，从而使得能够有效标记而不会损害细 胞完整性。
[0307] 将表面标记的抗原谱（sTAg)用于在16个核也AML样品、5个骨髓单核细胞炬MMC) 对照和6个周围血单核细胞（PBMC)对照样品、20个核也化L样品、27个CRC样品和22个 正常相邻结肠样品中鉴别细胞上表面蛋白集合并定量绘制表面蛋白集合谱。化学标记与完 整原发瘤细胞的AML肿瘤细胞膜有关的蛋白胞外域，然后使用固相亲合树脂通过色谱法富 集标记的蛋白质。如下所述，在质谱分析前将洗脱的蛋白在-8(TC储存。
[030引鉴别通过STAg法富集的蛋白并使用高分辨率鸟枪法液相色谱串联质谱（M巧定 量。将结合了线性离子阱的灵敏性和旋转orbitrap质量分析器所提供的高分辨率和质 量准确度的混合化errnoFisher LTQ-Orbitrap Velos 质谱仪（Olsen 等人，Mol. Cell Proteomics 8:2759-2769,2009)偶联至纳流（nanoflow)液相色谱装置，并用于基于鸟枪 法的自下而上的蛋白质组学，W确定AML细胞表面富集部份中蛋白质的同一性和定量丰 度测量（Yates等人，Annu. Rev. Biomed. E；ng. 11:49-79, 2009)。通过在线纳流液相色谱， 根据疏水性分离来自富集的表面蛋白的膜蛋白酶消化液，同时通过质谱仪动态记录肤的 质量和断裂方式。为了确定肤和蛋白质的同一性，使用在快速处理Sorcerer2平台上执行 的 SEQ肥ST 算法处理原始 MS 数据（Lundgren 等人，Qirr. Protoc. Bioinformatics,第 13 章；13. 3单元，2009)，W确定实验断裂方式和人蛋白质组在娃片上所确定的那些之间的 最佳拟合匹配。使用 P 巧 tideProphet (Keller 等人，Anal. Qiem. 74:5383-5392, 2002)和 ProteinPro 地 et (Nesvizhskii 等人，Anal. Qiem. 75:4646-4658, 2003)软件工具统计地验 证所得的匹配W确保最低可能的错误发现率（抑时并因此在候选混合物中包含仅大致鉴 别的蛋白质。
[0309] 使用光谱计数法确定了 STAg样品中所鉴别的蛋白质的相对定量水平（Neilson等 人，Proteomics 11:535-553, 2011)。光谱计数基于经验性实证；与来自每种蛋白质的肤 有关的分配（阳性鉴别）光谱的数目与原始混合物中蛋白质的相对丰度密切相关（Liu等 人，Anal.化em. 76:4193-4201，2004)。所鉴别的肤的光谱计数得自蛋白质组学分析软件 平台，其包括ScafTold(蛋白质组学软件）和ProteoIQ(NuSep)，它们显示、分选并过滤了 SEQ肥ST搜索的质谱数据结果。将原始光谱计数转化为百分比归一化的光谱丰度因子（％ NAS巧值狂ybailov等人，J. Proteome Res. 5:2339-2347,2006) W说明蛋白质长度差异和 样本量的差异。使用定量FACS作为基于STAg质谱法的原发性肿瘤细胞表面表达的蛋白质 组学谱的独立、外部确认性量度，将所选的单克隆抗体用于验证蛋白质组学测量。
[0310] 使用sTAg，将具有SEQ ID NO ;1所示的氨基酸序列的异二聚体II型跨膜糖蛋白 CD98鉴别为在AML、化L和CRC肿瘤细胞表面上W高密度存在。如图1所示，使用sTAg，在 16个原发性AML样品中的7个中鉴别出了 CD98，其平均％ NSAF为0. 11，在20个原发性化L 样品中的20个中鉴别出了 CD98,其平均％ NSAF为0. 15。在5个骨髓单核细胞炬MMC)样 品中的5个和6个周围血单核细胞（PBMC)样品中的5个中鉴别出了 CD98,其平均％ NSAF 分别为0.05和0.06。另外，在27个原发性CRC样品中的11个中鉴别出了 CD98,其平均％ NSAF为0. 10,而仅在1个正常相邻的结肠样品中鉴别出了 CD98,其平均％ NSAF小于0. 01。 基于该分析，相对于相应的正常对照，CD98大量富集在患者来源的AML、化L和CRC原发性 肿瘤样品的显著部分上。
[0311] 实施例2 ;肿瘤中CD98的鉴别
[0312] 使用抗CD98单克隆抗体8-34B (参见实施例3)和同型对照抗体皿-121进行抗体 滴定实验W建立将导致最小背景和最大信号检测的稀释。使用基于蒸汽的抗原修复（P册.0 的巧樣酸缓冲液），对福尔马林固定，石蜡包埋（FFP巧的组织或对新鲜的冷冻组织W 1:50、 1:100、1:200和1:400进行连续稀释。由Igenica提供并且由LifeSpan制备冷冻的对照细 胞系（F244和巧44-巧和福尔马林固定的对照细胞系（F244、RM和巧44-P)。选择1:20和 1:50的8-34B的稀释进行福尔马林固定，石蜡包埋组织的研究，而选择1:400稀释的8-34B 进行新鲜冷冻组织的研究。
[0313] 主要检测系统由载体抗小鼠第二抗体炬A-2000)和载体ABC-AP试剂盒（AK-5000) W及用于产生紫红色沉淀的载体红色基底试剂盒（SK-5100)构成。还用阳性对照抗体（针 对CD31和波形蛋白）对组织染色，W确保保持了组织抗原并且它对免疫组织化学分析是可 使用的。仅选择对CD31和波形蛋白染色是阳性的组织进行剩下的研究。
[0314] 在15例恶性黑色素瘤中的10例W及18例肺癌中的4例中，W 1 ;20和1 ;50稀释 的抗体8-34B对福尔马林固定，石蜡包埋的组织显示出阳性染色。另外，W 1:400稀释，抗 体8-34B在6例冷冻肺癌样品中的6例中W及2例冷冻黑素瘤样品中的2例中显示出阳性 染色。
[0315] 表1 ;肺癌和黑素瘤中阳性CD98染色的频率
[0316]

【权利要求】
1. 一种特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能性片段，其中，所述抗体或功能性 片段结合至包含人CD98的残基A377、D397、1398、G400和A401的表位。
2. 根据权利要求1所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基D374和L378。
3. 根据权利要求2所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基P379和G380。
4. 根据权利要求3所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基F395和P396。
5. 根据权利要求3所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基 Q381、P382 和 P399。
6. 根据权利要求1所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含选自由人 CD98 的 D374、L378、P379、G380、Q381、P382、F395、P396 和 P399 组成的组中的任意一个或 多个其他残基。
7. -种特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能性片段，其中，所述抗体结合至包 含人CD98的残基P379、G380、D397和1398的表位。
8. 根据权利要求7所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基F395和P396。
9. 根据权利要求8所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基 Q381、P382、P399、G400 和 A401。
10. 根据权利要求8所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含人CD98的 残基 D374、A377 和 L378。
11. 根据权利要求7所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述表位还包含选自由人 CD98 的 D374、A377、L378、Q381、P382、F395、P396、P399、G400 和 A401 组成的组中的任意一 个或多个其他残基。
12. 根据权利要求1所述的分离的抗体或功能性片段，其中，所述抗体或功能性片段结 合至包含人 CD98 的残基 D374、A377、L378、P379、G380、Q381、P382、F395、P396、D397、I398、 P399、G400 和 A401 的表位。
13. -种特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能性片段，其中，所述抗体或功能 性片段结合至包含在人⑶98的氨基酸残基369-405内的表位。
14. 一种特异性结合至人CD98的分离的抗体或其功能性片段，其中，所述抗体或功能 性片段结合至由人CD98的氨基酸残基369-405组成的表位。
15. 根据权利要求1所述的抗体或功能性片段，其中，所述抗体是单克隆抗体。
16. 根据权利要求15所述的抗体或功能性片段，其中，所述单克隆抗体是人源化抗体、 人抗体或嵌合抗体。
17. 根据权利要求1所述的抗体或功能性片段，其中，所述片段是Fab、F(ab'）2、Fv或 Sfv片段。
18. -种分离的抗体或其功能性片段，其包含来自具有选自SEQ ID NO :8和SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的重链可变结构域的全部三个重链互补决定区（CDR)，和/或来自具有选 自SEQ ID N0:10和SEQ ID N0:14的氨基酸序列的轻链可变结构域的全部三个轻链⑶R。
19. 一种分离的抗体或其功能性片段，其包含来自具有选自SEQ ID NO :8和SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的重链可变结构域的全部三个重链CDR，和来自具有选自SEQ ID NO :10和 SEQ ID NO :14的氨基酸序列的轻链可变结构域的全部三个轻链⑶R。
20. 根据权利要求19所述的抗体，其中，所述抗体包含选自SEQ ID NO :8和SEQ ID NO: 12的重链可变结构域序列。
21. 根据权利要求19所述的抗体，其中，所述抗体包含由SEQ ID NO :10和SEQ ID NO: 14组成的轻链可变结构域序列。
22. 根据权利要求20所述的抗体，其中，所述抗体还包含由SEQ ID NO :10和SEQ ID NO :14组成的轻链可变结构域序列。
23. 根据权利要求22所述的抗体，其中，所述抗体包含SEQ ID NO :8的重链可变结构 域序列和SEQ ID NO : 10的轻链可变结构域序列。
24. 根据权利要求22所述的抗体，其中，所述抗体包含SEQ ID NO: 12的重链可变结构 域序列和SEQ ID NO: 14的轻链可变结构域序列。
25. 根据权利要求16所述的人源化抗体，其中，所述抗体包含选自SEQ ID NO :22和SEQ ID NO :23的重链可变结构域序列。
26. 根据权利要求16所述的人源化抗体，其中，所述抗体包含选自SEQ ID NO :20和SEQ ID NO :21的轻链可变结构域序列。
27. 根据权利要求25所述的人源化抗体，还包含选自SEQ ID N0:20和SEQ ID N0:21 的轻链可变结构域序列。
28. 根据权利要求27所述的人源化抗体，其中，所述抗体包含SEQ ID NO :20的轻链可 变结构域序列和SEQ ID NO :22的重链可变结构域序列。
29. 根据权利要求27所述的人源化抗体，其中，所述抗体包含SEQ ID NO :21的轻链可 变结构域序列和SEQ ID NO :23的重链可变结构域序列。
30. 根据权利要求27所述的人源化抗体，其中，所述抗体包含SEQ ID NO :21的轻链可 变结构域序列和SEQ ID NO :22的重链可变结构域序列。
31. 结合至与权利要求30所述的抗体基本相同的表位的抗体。
32. 结合至与权利要求1-31中任一项所述的抗体基本相同的表位的结合剂。
33. 根据权利要求32所述的结合剂，其中，所述结合剂抑制表达CD98的肿瘤的生长。
34. 根据权利要求32所述的结合剂，其为抗体或其功能性片段。
35. 根据权利要求32所述的结合剂，它是anticalin、adnectin、亲和体、DARPin、 fynomer、affitin、affilin、高亲和性多聚体、扭结菌素肽或者工程设计的Kunitz型抑制剂。
36. -种能够结合至CD98的结合剂，其中，根据权利要求1-31中任一项所述的抗体在 竞争性结合测定中置换所述结合剂。
37. -种能够结合至CD98的结合剂，其中，所述结合剂在竞争性结合测定中置换根据 权利要求1-31中任一项所述的抗体。
38. 根据权利要求36所述的结合剂，其中，所述结合剂是抗体或其功能性片段。
39. 根据权利要求37所述的结合剂，其中，所述结合剂是抗体或其功能性片段。
40. 根据权利要求1_31、34和38-39中任一项所述的抗体或功能性片段，其中，所述抗 体或片段结合至细胞毒性试剂。
41. 根据权利要求40所述的抗体或功能性片段，其中，所述细胞毒性试剂选自化疗剂、 药物、生长抑制剂、毒素或放射性同位素。
42. 根据权利要求1-31、34和38-39中任一项所述的抗体或功能性片段，其中，所述抗 体或片段结合至可检测的标志物。
43. 根据权利要求40所述的抗体或功能性片段，其中，所述可检测的标志物选自放射 性同位素、金属螯合剂、酶、荧光化合物、生物发光化合物和化学发光化合物。
44. 产生根据权利要求15所述的单克隆抗体的转基因动物。
45. 产生根据权利要求15所述的单克隆抗体的杂交瘤。
46. 包含编码根据权利要求1-31、34和38-39中任一项所述的抗体或其片段的多核苷 酸的载体。
47. 包含根据权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段和可药用 载体的药物组合物。
48. -种抑制表达⑶98的癌细胞生长的方法，所述方法包括将所述细胞暴露于根据权 利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段。
49. 根据权利要求48所述的方法，其中，所述癌细胞来自于选自膀胱癌、乳腺癌、结肠 癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、 神经胶质瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何这些癌症的转移癌的癌症。
50. 根据权利要求49所述的方法，其中，所述癌细胞来自于急性髓细胞性白血病。
51. -种用于治疗受试者中癌症的方法，包括向所述受试者施用根据权利要求47所述 的药物组合物。
52. 根据权利要求51所述的方法，其中，所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠 癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶 质瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何这些癌症的转移癌。
53. 根据权利要求52所述的方法，其中，所述癌症是急性髓细胞性白血病。
54. 根据权利要求51所述的方法，其中，所述受试者是复发性或难治性急性髓细胞性 白血病。
55. 根据权利要求51所述的方法，其中，将所述抗体或功能性片段与一种或多种化学 治疗化合物组合向所述受试者施用，其中所述化学治疗化合物选自苯达莫司汀盐酸盐、环 磷酰胺、异环磷酰胺、氟达拉滨、阿糖胞苷、吉西他滨、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、紫杉醇、 多西他赛、长春瑞滨、长春新碱、依托泊苷、伊立替康、蒽环霉素、多柔比星、顺钼、卡钼和利 妥昔单抗。
56. 根据权利要求51所述的方法，其中，所述癌症与细胞表面上CD98的表达增加有关。
57. -种检测生物样品中CD98的存在性的方法，包括在允许所述抗体与CD98结合的条 件下将所述生物样品与根据权利要求1_31、34和38-43中任一项所述的抗体接触，并检测 所述抗体和CD98之间是否形成复合物。
58. 根据权利要求57所述的方法，其中，所述生物样品来自于患有或者怀疑患有癌症 的哺乳动物，所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾 癌、口腔癌、卵巢癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何 这些癌症的转移癌。
59. -种诊断与CD98表达增加有关的癌症的方法，包括将测试细胞与根据权利要求 1-31、34和38-43中任一项所述的抗体接触；通过检测所述抗体与⑶98的结合确定⑶98的 表达水平；和将所述测试细胞中的⑶98表达水平与对照细胞中的⑶98表达水平相比较，其 中与对照细胞相比，所述测试细胞中较高的CD98的表达水平指示存在与CD98表达增加有 关的癌症。
60. 根据权利要求59所述的方法，其中，所述测试细胞来自于怀疑患有癌症的患者，所 述癌症选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢 癌或前列腺癌，或者肉瘤、黑素瘤、神经胶质瘤、淋巴瘤或白血病，或者任何这些癌症的转移 癌。
61. 根据权利要求60所述的方法，其中，所述方法包括确定所述测试细胞表面上CD98 的表达水平，和将所述测试细胞表面上CD98的表达水平与对照细胞表面上CD98的表达水 平相比较。
62. 根据权利要求61所述的方法，其中，所述测试细胞是癌细胞，并且所述对照细胞是 相同组织类型的正常细胞。
63. 权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段在药物制备中的用 途，其中，所述药用于在抑制表达CD98的癌细胞的生长的方法中。
64. 根据权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段，用于抑制表达 ⑶98的癌细胞的生长。
65. 权利要求47所述的药物组合物在药物制备中的用途，其中，所述药物用于治疗受 试者中的癌症的方法中。
66. -种包含根据权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段和可 药用载体的药物组合物，用于治疗受试者中的癌症。
67. 权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段在药物制备中的用 途，其中，所述药物用于检测生物样品中CD98的存在性的方法中。
68. 根据权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段，用于检测生物 样品中CD98的存在性的方法中。
69. 权利要求1-31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段在药物制备中的用 途，其中，所述药物用于诊断与CD98表达增加有关的癌症的方法中。
70. 根据权利要求1_31、34和38-43中任一项所述的抗体或功能性片段，用于诊断与 CD98表达增加有关的癌症的方法中。
【文档编号】A61P35/00GK104302669SQ201280067876
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2012年11月21日 优先权日:2011年11月23日
【发明者】约翰·利平科特, 爱德华·泰恩·顿·凡德霍斯特, 约瑟夫·扎克維加, 候昂·特朗 申请人:伊格尼卡生物治疗公司