一种鼻用疫苗组合物粉体制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种鼻用疫苗组合物粉体制剂及其制备方法。所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂包括如下原料组分：（1)0.05%?5%抗原；（2)0.3?45%油相；(3)0.3~45%表面活性剂；(4)2?20%黏膜黏附剂；和（5)4?40%冻干赋形剂;所述百分比为各成分占原料总量的质量百分比。所述制备方法包括如下步骤：（1)将油相和表面活性剂混合，搅拌并加入水，得佐剂；（2)将步骤(1)制得的佐剂与抗原混合后，冷冻干燥得粉末，即得。本发明的鼻用疫苗组合物粉体制剂为经鼻黏膜免疫，其制备方法简单，稳定性高，实际应用过程中操作便捷，能大幅提高接种率，具有非常好的应用前景。
【专利说明】一种鼻用疫苗组合物粉体制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药剂领域，具体涉及一种鼻用疫苗组合物粉体制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 疫苗是预防和治疗病毒感染类疾病最为经济有效的手段。以流感疫苗为例，在发 达国家，如果流感疫苗的抗原和正在流行的流感病毒匹配良好，就能够保护70-90%的健康 成人免于出现临床疾病。目前，国内主要的免疫手段仍然是传统的注射接种，但是肌肉注射 的给药方式存在诸多缺陷，包括注射接种不便、明显的疼痛感(尤其对于婴幼儿和儿童)、注 射可能存在的不安全因素等。
[0003] 口服流感疫苗需克服胃肠道的酸性环境，将敏感的抗原蛋白完整递送至胃肠道黏 膜上的微褶细胞（M细胞)。由于胃肠道环境的不适宜及流感抗原蛋白的不稳定性，口服流 感疫苗的研究鲜有突破。
[0004] 鼻喷雾流感疫苗的出现改善了肌注免疫因疼痛感造成的患者顺应性差，并且避免 了肌肉注射可能引起的血液感染或疾病传播风险。但鼻喷雾剂中的药物仍以液体形式存 在，需低温保存和运输，稳定性不够高。
[0005] 专利文献CN1562364A公开了一种含脂肪乳佐剂的鼻用流感疫苗，制剂制备过程 需要经历高速搅拌和纳米对撞过程，即通过高速搅拌，混匀流感全病毒悬液与纳米化脂肪 乳悬液；通过纳米对撞，使流感病毒脂肪乳混合液裂解为l〇-12nm微粒。整个制备过程控制 难度高，且易导致抗原效价降低。
[0006] 专利文献CN101405027A公开了一种包含流感病毒重构包膜的流感病毒颗粒组合 物，而无单独添加的佐剂，用于经鼻免疫；其制备工艺复杂，难以应用于大生产。
[0007] 因此，为了提高免疫制剂给药的便捷性、给药途径的安全性、提高免疫制剂的稳定 性，减少医疗支出，本领域目前迫切需要发展新型的鼻用疫苗制剂。
【发明内容】
[0008] 本发明要解决的技术问题是为了克服现有的鼻用疫苗制剂制备繁琐、稳定性差的 缺陷，而提供一种新型的鼻用疫苗组合物粉体制剂。其适用于不同年龄人群及动物的免疫 接种，提高免疫系统的黏膜应答和系统应答，改善接种者的顺应性。本发明的鼻用疫苗组合 物粉体制剂，其制备过程不需高压均质或纳米裂解，简化了生产步骤，生产过程中抗原性质 保持稳定。
[0009] 本发明提供的技术方案之一是：一种鼻用疫苗组合物粉体制剂，其包括如下原料 组分：
[0010] (1) 0· 05% ?5% 抗原；
[0011] (2) 0· 3 ?45% 油相；
[0012] (3) 0· 3?45%表面活性剂；
[0013] (4 ) 2?20%黏膜黏附剂；和
[0014] (5 ) 4?40%冻干赋形剂；
[0015] 所述百分比为各成分占原料总量的质量百分比。
[0016] 较佳地，所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂包括如下原料组分：
[0017] (1) 0· 15% ?4% 抗原；
[0018] (2) 4 ?40% 油相；
[0019] (3 ) 4?40%表面活性剂；
[0020] (4) 4?16%黏膜黏附剂；和
[0021] (5 ) 8?36%冻干赋形剂；
[0022] 所述百分比为各成分占原料总量的质量百分比。
[0023] 更佳地，所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂包括如下原料组分：
[0024] (1) 0· 25% ?3% 抗原；
[0025] (2) 20 ?30% 油相；
[0026] (3) 20?30%表面活性剂；
[0027] (4) 10?15%黏膜黏附剂；和
[0028] (5 ) 25?32%冻干赋形剂；
[0029] 所述百分比为各成分占原料总量的质量百分比。
[0030] 本发明中，所述抗原可以为本领域常规所述的各类抗原。
[0031 ] 从抗原的种类而言，所述抗原可以包括但不局限于流感病毒抗原、SARS病毒抗原、 麻疫病毒抗原、人乳头瘤状病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、狂犬病毒抗原以及脊髓灰质炎病 毒抗原，更优选流感病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和破伤风病毒抗原中的任一种；所述的流 感病毒抗原包括季节性流感病毒抗原和大流行性流感病毒抗原(如流感病毒抗原HI、H2、 H3、H5、H7、H9、B亚型以及HA、NA、Ml、M2亚单位抗原等）。
[0032] 从抗原的来源而言，所述抗原可以包含一种或多种不同来源，即抗原可源自一种 或多种不同的病原体或不同的病原体血清型。
[0033] 从抗原的存在形式和制备方法而言，所述抗原可以为灭活疫苗、减活疫苗、裂解疫 苗、DNA疫苗、重组疫苗、亚单位疫苗和多肽蛋白疫苗中的一种或多种。
[0034] 本发明中，所述油相为本领域常规所述油相，较佳地，所述油相选自角鲨烯、角鲨 烷、中链甘油三酸酯、鱼油、橄榄油和大豆油中的一种或多种，更优选角鲨烯、角鲨烷和中链 甘油三酸酯中的一种或多种。
[0035] 本发明中，所述表面活性剂为本领域常规所述表面活性剂，较佳地，所述表面活性 剂选自吐温、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯（Solutol HS15)、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯 (Solutol HS15)和磷脂的混合物，以及吐温与磷脂的混合物中的一种或多种。所述磷脂为 本领域常规，优选可药用的天然磷脂或合成磷脂，或磷脂的衍生物，更优选自大豆磷脂、卵 磷脂、蛋黄卵磷脂和氢化大豆磷脂中的一种或多种。
[0036] 本发明中，所述黏膜黏附剂为本领域常规所述黏膜黏附剂，较佳地，所述黏膜黏附 剂选自壳聚糖、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、卡波姆和羟丙甲纤维素中的一种或多种。
[0037] 本发明中，所述冻干赋形剂为本领域常规所述冻干赋形剂，较佳地，所述冻干赋形 剂选自乳糖、蔗糖、海藻糖、菊糖、右旋糖酐、葡聚糖、氨基酸、甘露醇和山梨醇中的一种或多 种，更优选海藻糖、乳糖、菊糖和甘露醇中的一种或多种。所述氨基酸为本领域常规所述的 各类氨基酸，如精氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸等。
[0038] 本发明中，较佳地，所述的原料还包括不超过8% (优选2?5%)的缓冲剂，所述百 分比为缓冲剂占原料总量的质量百分比。所述的缓冲剂较佳地选自磷酸盐、4-羟乙基哌嗪 乙磺酸（HEPES)、醋酸盐和枸橼酸中的一种或多种。
[0039] 本发明中，较佳地，所述的原料还包括不超过60% (优选5?30%)的载体,所述百 分比为载体占原料总量的质量百分比。所述载体较佳为羧甲基纤维素钠和乳糖的混合物， 更优选质量比为1 : 50的羧甲基纤维素钠和乳糖的混合物。
[0040] 本发明提供的技术方案之二是：前述鼻用疫苗组合物粉体制剂的制备方法。
[0041] 本发明的鼻用疫苗组合物粉体制剂的制备方法同本领域常规，其只需要将抗原 (如流感病毒抗原原液）与油相和表面活性剂混合冻干后，再与粘膜粘附剂和冻干赋形剂混 合均匀即可。按照本领域常规，一般会将最后混合均匀所得的终产品灌装于本领域常规的 给药装置中，作为鼻用干粉吸入剂备用。
[0042] 较佳地，所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂的制备方法包括如下步骤：
[0043] (1)将油相和表面活性剂混合，搅拌并加入水，得佐剂；所述水的加入量以能均匀 乳化油相和表面活性剂为准；
[0044] (2)将步骤（1)制得的佐剂与抗原混合后，冷冻干燥得粉末，即得。
[0045] 其中，所述油相、表面活性剂和抗原的用量如前所述。
[0046] 在本发明中，在步骤（2)之后较佳地还包括步骤（3):将步骤（2)所得的粉末过筛， 然后分装保存。
[0047] 优选地，本发明中，在步骤（1)之前还包括步骤（a)，且步骤（3)替换为步骤（3'）； 所述的步骤（a)为：将羧甲基纤维素钠溶于水制得粘合剂，再将乳糖加入所述粘合剂中，混 合均匀，制粒、整粒并烘干，得载体，其中，所述水的量以能溶解所述的羧甲基纤维素钠为 准；所述的步骤（3'）为：将步骤（2)所得的粉末与步骤（a)制得的载体混合均匀，即得。本 发明更优选在步骤（3'）之后将步骤（3'）中混合均匀所得产物过筛，然后分装保存。
[0048] 本发明中，所述的过筛较佳地为过100?400目筛。
[0049] 本发明中，步骤（1)所述搅拌为本领域常规所述的搅拌；步骤（2 )所述冷冻干燥为 本领域常规所述；步骤（a)中所述制粒、整粒和烘干为本领域常规操作。
[0050] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0051] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0052] 本发明的积极进步效果在于：本发明的鼻用疫苗组合物粉体制剂为经鼻黏膜免 疫，相比以往的免疫制剂，可以显著提升免疫效果，其可同时诱导包括体液免疫和细胞免疫 在内的系统免疫应答和黏膜免疫应答，还可经由呼吸道黏膜入侵人体而引发疾病的病原体 在感染部位即时得到有效抵抗；其可通过共同黏膜免疫系统引起消化道和生殖道的远端黏 膜免疫应答，还可使抗原经黏膜特有的褶皱细胞(M细胞)转运至树突状细胞（DC)等抗原提 呈细胞（APC)，提高APC对抗原的摄取和提呈能力。此外，本发明的鼻用疫苗组合物粉体制 剂的制备方法简单，稳定性高，实际应用过程中操作便捷，能大幅提高接种率。
【具体实施方式】
[0053] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，均按照常规方法和条件，或按照 商品说明书选择。
[0054] 实施例1
[0055] 称取0. 64g羧甲基纤维素钠，加64ml水，制备1%粘合剂；称取30g乳糖，以粘合剂 制软材；过20目筛制粒，60° C烘干30分钟后分别过60目和80目筛整粒，60° C烘干120 分钟，筛取100?400目颗粒，即得粉末载体。
[0056] 称取角鲨烯0· 6g，中链甘油三酸酯0· 6g，Solutol HS150. 9g，蛋黄卵磷脂0· 3g， 搅拌，得到油相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸1.6g，蔗糖8g加入15mL注射用水 中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在搅拌下，将无菌注射用水缓 慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入150mg HA的流感抗原（B/ Brisbane/60/2008)，加水至20mL，搅勻，0. 22 μ m滤膜滤过；使用Labconco冷冻干燥箱进行 干燥(冻干程序如表1)。
[0057] 称取海藻酸钠6g，与所得冻干含药粉体及载体混合，使总重为20g，按照2mg/剂 (即15 μ g/剂）灌装于鼻用粉雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0058] 表1冻干程序设置
[0059]
【权利要求】
1. 一种鼻用疫苗组合物粉体制剂，其特征在于，其包括如下原料组分： (1) 0· 05% ?5% 抗原； (2) 0· 3 ?45% 油相； (3) 0.3?45%表面活性剂； (4) 2?20%黏膜黏附剂；和 (5) 4?40%冻干赋形剂； 所述百分比为各成分占原料总量的质量百分比。
2. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂，其特征在于，所述抗原选自流感病 毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和破伤风病毒抗原中的任一种。
3. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂，其特征在于，所述油相选自角鲨烯、 角鲨烷、中链甘油三酸酯、鱼油、橄榄油和大豆油中的一种或多种；所述表面活性剂选自吐 温、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯和磷脂的混合物以及吐温与 磷脂的混合物中的一种或多种；所述黏膜黏附剂选自壳聚糖、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、 卡波姆和羟丙甲纤维素中的一种或多种；所述冻干赋形剂选自乳糖、蔗糖、海藻糖、菊糖、氨 基酸和甘露醇中的一种或多种。
4. 如权利要求3所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂，其特征在于，所述油相选自角鲨烯、 角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种；所述磷脂选自大豆磷脂、卵磷脂、蛋黄卵磷脂和 氢化大豆磷脂中的一种或多种；所述冻干赋形剂选自海藻糖、乳糖、菊糖和甘露醇中的一种 或多种。
5. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂，其特征在于，所述的原料还包括不 超过8%的缓冲剂，所述百分比为缓冲剂占原料总量的质量百分比；所述的缓冲剂选自磷酸 盐、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和枸橼酸中的一种或多种。
6. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂，其特征在于，所述的原料还包括不 超过60%的载体，所述百分比为载体占原料总量的质量百分比；所述载体为羧甲基纤维素 钠和乳糖的混合物。
7. 如权利要求1?6任一项所述的鼻用疫苗组合物粉体制剂的制备方法，其特征在于， 其包括如下步骤： (1) 将油相和表面活性剂混合，搅拌并加入水，得佐剂； (2) 将步骤（1)制得的佐剂与抗原混合后，冷冻干燥得粉末，即得。
8. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤（2)之后还包括步骤（3):将步 骤（2)所得的粉末过筛，然后分装保存。
9. 如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，在步骤（1)之前还包括步骤（a)，且步骤 (3)替换为步骤（3'）；所述的步骤（a)为：将羧甲基纤维素钠溶于水制得粘合剂，再将乳糖 加入所述粘合剂中，混合均匀，制粒、整粒并烘干，得载体；所述的步骤（3'）为：将步骤（2) 所得的粉末与步骤（a)制得的载体混合均匀，即得。
10. 如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，在步骤（3'）之后将步骤（3'）中混合 均匀所得产物过筛，然后分装保存。
【文档编号】A61K39/145GK104208029SQ201310211875
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年5月30日 优先权日:2013年5月30日
【发明者】金方, 蔡伟, 惠王颖 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院