一种鼻用疫苗组合物液体制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种鼻用疫苗组合物液体制剂及其制备方法。所述鼻用疫苗组合物液体制剂包括如下原料组分：（1)0.002?0.2%抗原；（2)0.1?15%油相；（3)70?99.7%水相；和（4)0.1?15%表面活性剂；所述百分比表示各组分在每lOOmL原料总体积中的克数。所述制备方法包括如下步骤：（1)将油相和表面活性剂混合，再与水相混合，得佐剂；（2)将步骤（1)制得的佐剂与抗原混合均匀，即得。本发明的鼻用疫苗组合物液体制剂为经鼻黏13吴免疫，其制备方法简单，稳定性高，实际应用过程中操作便捷，能大幅提高接种率，具有非常好的应用前景。
【专利说明】一种鼻用疫苗组合物液体制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药剂领域，具体涉及一种鼻用疫苗组合物液体制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 疫苗是预防和治疗病毒感染类疾病最为经济有效的手段。以流感疫苗为例，在发 达国家，如果流感疫苗的抗原和正在流行的流感病毒匹配良好，就能够保护70-90%的健康 成人免于出现临床疾病。目前，国内主要的免疫手段仍然是传统的注射接种，但是肌肉注射 的给药方式存在诸多缺陷，包括注射接种不便、明显的疼痛感(尤其对于婴幼儿和儿童)、注 射可能存在的不安全因素等。
[0003] 口服流感疫苗需克服胃肠道的酸性环境，将敏感的抗原蛋白完整递送至胃肠道黏 膜上的微褶细胞（M细胞)。由于胃肠道环境的不适宜及流感抗原蛋白的不稳定性，口服流 感疫苗的研究鲜有突破。
[0004] 鼻喷雾流感疫苗的出现改善了肌注免疫因疼痛感造成的患者顺应性差，并且避免 了肌肉注射可能引起的血液感染或疾病传播风险。
[0005] 专利文献CN1562364A公开了一种含脂肪乳佐剂的鼻用流感疫苗，制剂制备过程 需要经历高速搅拌和纳米对撞过程，即通过高速搅拌，混匀流感全病毒悬液与纳米化脂肪 乳悬液；通过纳米对撞，使流感病毒脂肪乳混合液裂解为l〇-12nm微粒。其制备过程控制难 度高，且易导致抗原效价降低。
[0006] 专利文献CN101405027A公开了一种包含流感病毒重构包膜的流感病毒颗粒组合 物，而无单独添加的佐剂，用于经鼻免疫；其制备工艺复杂，难以应用于大生产。
[0007] 因此，为了提高免疫接种的便捷性，降低医护人员的人力成本；避免肌肉注射可能 引起的血液感染或疾病传播风险，减少此类原因造成的医疗支出，同时提升接种者的依从 性，提高目标人群的接种率，降低疾病的发生概率和死亡率，本领域目前迫切需要发展制备 过程更简单、效果更好的鼻用疫苗制剂。
【发明内容】
[0008] 本发明要解决的技术问题是为了克服现有的鼻用疫苗制剂制备繁琐、稳定性差的 缺陷，而提供一种鼻用疫苗组合物液体制剂。其适用于不同年龄人群、动物的免疫接种，提 高免疫系统的黏膜应答和系统应答，改善接种者顺应性。本发明的鼻用疫苗组合物液体制 齐U，其制备过程不需高压均质或纳米裂解，简化了生产步骤，提高了产品的稳定性。
[0009] 本发明提供的技术方案之一是：一种鼻用疫苗组合物液体制剂，其包括如下原料 组分：
[0010] (1) 0· 002 ?0· 2% 抗原；
[0011] (2) 0· 1 ?15% 油相；
[0012] (3) 70 ?99. 7% 水相；和
[0013] (4) 0· 1?15%表面活性剂；
[0014] 所述百分比表示各组分在每lOOmL原料总体积中的克数。
[0015] 在本发明中，如0. 1%油相表示在每lOOmL原料总体积中油相组分的质量为0. lg。
[0016] 较佳地，所述的鼻用疫苗组合物液体制剂包括如下原料组分：
[0017] (1)0.02 ?0· 1% 抗原；
[0018] (2) 0.2 ?8% 油相；
[0019] (3) 85 ?99. 5% 水相；和
[0020] (4) 0· 2?8%表面活性剂；
[0021] 所述百分比表示各组分在每lOOmL原料总体积中的克数。
[0022] 更佳地，所述的鼻用疫苗组合物液体制剂包括如下原料组分：
[0023] (1) 0· 03 ?0· 1% 抗原；
[0024] (2) 0.5 ?5% 油相；
[0025] (3 ) 90 ?98% 水相；和
[0026] (4) 0· 5?5%表面活性剂；
[0027] 所述百分比表示各组分在每lOOmL原料总体积中的克数。
[0028] 本发明中，所述抗原可以为本领域常规所述的各类抗原。
[0029] 从抗原的种类而言，所述抗原可以包括但不局限于流感病毒抗原、SARS病毒抗原、 麻疫病毒抗原、人乳头瘤状病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、狂犬病毒抗原以及脊髓灰质炎病 毒抗原，更优选流感病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和破伤风病毒抗原中的任一种；所述的流 感病毒抗原包括季节性流感病毒抗原和大流行性流感病毒抗原(如流感病毒抗原HI、H2、 H3、H5、H7、H9、B亚型以及HA、NA、Ml、M2亚单位抗原等）。
[0030] 从抗原的来源而言，所述抗原可以包含一种或多种不同来源，即抗原可源自一种 或多种不同的病原体或不同的病原体血清型。
[0031] 从抗原的存在形式和制备方法而言，所述抗原可以为灭活疫苗、减活疫苗、裂解疫 苗、DNA疫苗、重组疫苗、亚单位疫苗和多肽蛋白疫苗中的一种或多种。
[0032] 本发明中，所述油相为本领域常规所述油相，较佳地，所述油相选自角鲨烯、角鲨 烷、中链甘油三酸酯、鱼油、橄榄油和大豆油中的一种或多种，更优选角鲨烯、角鲨烷和中链 甘油三酸酯中的一种或多种。
[0033] 本发明中，所述水相为本领域常规所述水相，较佳地，所述水相为水，更佳地，所述 水相为注射用水。
[0034] 本发明中，所述表面活性剂为本领域常规所述表面活性剂，较佳地，所述表面活性 剂选自吐温、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯（Solutol HS15)、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯 (Solutol HS15)和磷脂的混合物，以及吐温与磷脂的混合物中的一种或多种。
[0035] 所述磷脂为本领域常规，优选可药用的天然磷脂或合成磷脂，或磷脂的衍生物，更 优选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂和氢化大豆磷脂中的一种或多种。
[0036] 本发明中，较佳地，所述的原料组分还包括不超过2%的缓冲剂，更优选0. 5? 1. 5%，所述的百分比表示缓冲剂在每100mL原料总体积中的质量（g)。所述缓冲剂较佳地选 自4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、枸橼酸、磷酸盐和醋酸盐中的一种或多种。
[0037] 本发明中，较佳地，所述的原料组分还包括不超过0.01%的防腐剂，更优选 0. 005?0. 01%，所述的百分比表示防腐剂在每100mL原料总体积中的质量（g)。所述防腐 剂较佳地选自硫柳汞、苯扎氯氨、苯酚、苄索氯铵和2-苯氧乙醇中的一种或多种。
[0038] 本发明中，较佳地，所述的原料组分还包括不超过0. 2%的等渗调节剂，更优选 0. 05?0. 15%，所述的百分比表示等渗调节剂在每100mL原料总体积中的质量（g)。所述等 渗调节剂较佳地选自甘油、氯化钠和葡萄糖中的一种或多种。
[0039] 本发明中，所述鼻用疫苗组合物液体制剂的规格可以为本领域常规，较佳地为 0· 05 ?0· 3ml/剂。
[0040] 本发明的鼻用疫苗组合物液体制剂的制备方法同本领域常规，其只需要将油相和 表面活性剂混合，搅拌并加入水相，得到带乳光的溶液后加入抗原混匀即可。所述鼻用疫 苗组合物液体制剂以液体形式存在，灌装于本领域常规的给药装置(如常规的鼻喷雾装置） 中，做鼻喷雾剂备用。
[0041] 较佳地，所述的鼻用疫苗组合物液体制剂的制备方法包括如下步骤：
[0042] ( 1)将油相和表面活性剂混合，再与水相混合，得佐剂；
[0043] (2)将步骤（1)制得的佐剂与抗原混合均勻，即得。
[0044] 其中，所述油相、表面活性剂和水相的用量如前所述。
[0045] 在本发明中，在步骤（2)之后较佳地还包括步骤（3):将步骤（2)所得的混合物过 滤后分装，然后低温保存，优选于2?8°C保存。
[0046] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0047] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0048] 本发明的积极进步效果在于：本发明的鼻用疫苗组合物液体制剂为经鼻黏膜免 疫，可同时诱导包括体液免疫和细胞免疫在内的系统免疫应答和黏膜免疫应答；经由呼吸 道黏膜入侵人体而引发疾病的病原体在感染部位即时得到有效抵抗；可通过共同黏膜免疫 系统引起消化道和生殖道的远端黏膜免疫应答；可使抗原经黏膜特有的褶皱细胞(M细胞） 转运至树突状细胞（DC)等抗原提呈细胞（APC)，提高APC对抗原的摄取和提呈能力。
【具体实施方式】
[0049] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0050] 实施例1
[0051] 称取角鲨烯lg，中链甘油三酸酯lg，Solutol HS151. 5g，蛋黄卵磷脂0. 5g，搅拌， 得到油相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸2g，硫柳汞0. Olg，加入60mL注射用水中，搅拌 使溶解；在搅拌下，将上述水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶 液 ；加入7500μgHA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL，搅匀，0.22μm滤膜 滤过；按照〇. 2ml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0052] 实施例2
[0053] 称取角鲨烯4g，中链甘油三酸酯4g，Solutol HS156g，蛋黄卵磷脂2g，搅拌，得到 油相/表面活性剂混合物；称取磷酸二氢钾〇. 2g，苯酚0. 01g，加入60mL注射用水中；在搅 拌下，将上述水溶液慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入50000 μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至lOOmL ;加入0. Olg氯化钠，调节为鼻腔黏液 等渗溶液搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即100 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置 中，即得疫苗组合物。
[0054] 实施例3
[0055] 称取角鲨烯3g，中链甘油三酸酯7g，Solutol HS1515g，搅拌，得到油相/表面 活性剂混合物；称取苯扎氯胺0. 〇16g，加入60mL注射用水中；在搅拌下，将水溶液缓慢 加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入30000 μ g HA的流感抗原（B/ Brisbane/60/2008)，加水至 100mL，搅匀，(λ 22 μ m 滤膜滤过；按照(λ 05ml/ 剂（即 15 μ g/ 齐U)灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0056] 实施例4
[0057] 称取角鲨烷0. 5g，中链甘油三酸酯0. 5g，Solutol HS153g，大豆磷脂lg，搅拌，得 到油相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸〇. 3g，苄索氯铵0. 004g，加入60mL注射用水中，搅 拌使溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液； 加入30000μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. 2甘油，调节 为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 05ml/剂（即15 μ g/剂)灌装于鼻用 喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0058] 实施例5
[0059] 称取角鲨烯0.2g，中链甘油三酸酯0.2g，Solutol HS150.5g，氢化卵磷脂0· lg， 搅拌，得到油相/表面活性剂混合物；称取磷酸二氢钾lg，加入60mL注射用水中，搅拌使 溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入 7500μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. lg葡萄糖，调节为鼻 腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾 剂装置中，即得疫苗组合物。
[0060] 实施例6
[0061] 称取角S烯2g，中链甘油三酸酯2g，Solutol HS154. 5g，氢化大豆磷脂0· 5g，搅 拌，得到油相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸lg，苯酚〇. 〇lg，加入60mL注射用水中，搅拌 使溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；力口 入25000μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0· 05g甘油，调节 为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即50 μ g/剂）灌装于鼻用 喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0062] 实施例7
[0063] 称取角S烯5g,中链甘油三酸酯10g,吐温8012g,蛋黄卵磷脂3g,搅拌，得到油相 /表面活性剂混合物；称取HEPESlg，苄索氯胺0. 002g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解； 在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入250 μ g 重组乙型肝炎疫苗（由酿酒酵母表达并纯化）加水至100mL ;加入0. 2g葡萄糖，调节为鼻腔 黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即5 μ g/剂)灌装于鼻用喷雾剂装 置中，即得疫苗组合物。
[0064] 实施例8
[0065] 称取中链甘油三酸酯0· lg，吐温800. 075g，卵磷脂0· 025g，搅拌，得到油相/表面 活性剂混合物；量取60mL注射用水，搅拌使溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面 活性剂混合物中，得到带乳光的溶液，加入20000IU破伤风疫苗，加水至lOOmL ;加入0. lg 氯化钠，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即40IU/剂） 灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0066] 实施例9
[0067] 称取角鲨烯lg，中链甘油三酸酯lg，Solutol HS152g，卵磷脂0. 5g，搅拌，得到油 相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸0. lg，加入60mL注射用水中；在搅拌下，将无菌注射用 水缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入11250 μ g HA的流感抗原 (B/Brisbane/60/2008)，加水至lOOmL ;加入0. 05g甘油，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀， 0. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 3ml/剂（即15 μ g/剂)灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合 物。
[0068] 实施例10
[0069] 称取角鲨烯2. 5g，中链甘油三酸酯2. 5g，Solutol HS154g，蛋黄卵磷脂lg，搅拌， 得到油相/表面活性剂混合物；称取HEPES0. 2g，硫柳汞lg，加入60mL注射用水中，搅拌使 溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入 15000 μ g HA的流感抗原（A/California/7/2009)，加水至100mL ;加入0· 01g氯化钠，调节 为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. lml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用 喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0070] 实施例11
[0071] 称取角鲨烯0. 5g，中链甘油三酸酯0. 5g，Solutol HS152g，蛋黄卵磷脂0. 5g，搅 拌，得到油相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸〇. 2g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶 解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入 25000μ g HA 的流感抗原（A/California/7/2009)，加水至 100mL，搅匀，0· 22μπι 滤膜滤过； 按照〇. lml/剂（即25 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0072] 实施例12
[0073] 称取角鲨烯0. 5g，Solutol HS154g，搅拌，得到油相/表面活性剂混合物；称取磷 酸二氢钾2g，硫柳汞0. 002g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢 加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入10000 μ g HA的流感抗原（A/ California/7/2009)，加水至100mL ;加入0. 15g甘油，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀， 0. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即20 μ g/剂)灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合 物。
[0074] 实施例13
[0075] 称取角鲨烯0. 3g，Solutol HS152g，搅拌，得到油相/表面活性剂混合物； 称取枸橼酸〇. 5g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解；在搅拌下，将水溶液缓慢加入 油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入25000 μ g HA的流感抗原（A/ California/7/2009)，加水至100mL ;加入0. 05g氯化钠，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀， 0. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即50 μ g/剂)灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合 物。
[0076] 实施例14
[0077] 称取角鲨烯0. 2g，Solutol HS150.4g，蛋黄卵磷脂0. lg，搅拌，得到油相/表面活 性剂混合物；称取HEPESO. 8g，2-苯氧乙醇0. 006g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解；在 搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入250 μ g重 组乙型肝炎疫苗（由酿酒酵母表达并纯化）加水至l〇〇mL ;加入0. lg氯化钠，调节为鼻腔黏 液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即5 μ g/剂)灌装于鼻用喷雾剂装置 中，即得疫苗组合物。
[0078] 实施例15
[0079] 称取角鲨烯3g，中链甘油三酸酯5g，吐温806g，蛋黄卵磷脂2g，搅拌，得到油相/ 表面活性剂混合物；称取HEPES1. 5g，苯酚0. 005g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解；在 搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液，加入30000IU 破伤风疫苗，加水至l〇〇mL ;加入0. 12g葡萄糖，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，0. 22 μ m滤 膜滤过；按照〇. 2ml/剂（即60IU/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0080] 实施例16
[0081] 称取角鲨烯5g，中链甘油三酸酯10g，Solutol HS1511g，蛋黄卵磷脂4g，搅拌， 得到油相/表面活性剂混合物；称取HEPESO. 5g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解；在 搅拌下，将无菌注射用水缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入 7500 μ g HA的流感抗原（A/Perth/16/2009)，加水至100mL ;加入0. 08g甘油，调节为鼻腔黏 液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装 置中，即得疫苗组合物。
[0082] 实施例17
[0083] 称取中链甘油三酸酯0. lg，Solutol HS150. 15g，蛋黄卵磷脂0. 05g，搅拌，得到油 相/表面活性剂混合物；称取磷酸二氢钾0. 5g，苄索氯铵0. 008g，加入60mL注射用水中；在 搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入7500 μ g HA的流感抗原（A/Perth/16/2009)，加水至100mL，搅匀，0. 22 μ m滤膜滤过；按照0. lml/剂 (即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0084] 实施例18
[0085] 称取中链甘油三酸酯5g，Solutol HS157g，搅拌，得到油相/表面活性剂混合物； 量取60mL注射用水，用氢氧化钠溶液调节pH至7 ;在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面 活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入30000 μ g HA的流感抗原（A/Perth/16/2009)， 加水至100mL ;加入0. 06甘油，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，0. 22 μ m滤膜滤过；按照 0. 05ml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0086] 实施例19
[0087] 称取角鲨烯0. 2g，中链甘油三酸酯lg，Solutol HS155g，搅拌，得到油相/表面活 性剂混合物；称取2-苯氧乙醇0. 018g，加入60mL注射用水，搅拌使溶解；在搅拌下，将水溶 液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入45000 μ g HA的流感抗原 (A/Perth/16/2009)，加水至 100mL，搅匀，0. 22μπι 滤膜滤过；按照 0. lml/剂（即 45μ g/剂） 灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0088] 实施例20
[0089] 称取角鲨烯5g，Solutol HS1512g，蛋黄卵磷脂3g，搅拌，得到油相/表面活性剂混 合物；称取磷酸二氢钾1.5g，2-苯氧乙醇0.002g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，；在 搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入2500 μ g 重组乙型肝炎疫苗（由酿酒酵母表达并纯化）加水至100mL ;加入0. lg葡萄糖，调节为鼻腔 黏液渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即50 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装 置中，即得疫苗组合物。
[0090] 实施例21
[0091] 称取鱼油lg，中链甘油三酸酯lg，Solutol HS151.5g，蛋黄卵磷脂0. 5g，搅拌，得 到油相/表面活性剂混合物；称取甘油2g，枸橼酸2g，硫柳汞0. Olg，加入60mL注射用水中， 搅拌使溶解，;在搅拌下，将无菌注射用水缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光 的溶液 ；加入7500μgHA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL，搅匀，0·22μm 滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0092] 实施例22
[0093] 称取大豆油4g，中链甘油三酸酯4g，Solutol HS156g，蛋黄卵磷脂2g，搅拌，得到 油相/表面活性剂混合物；称取磷酸二氢钾〇. 2g，苯酚0. 01g，加入60mL注射用水中，搅 拌，；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入 15000μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. 2g氯化钠，调节为 鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. lml/剂（即15 μ g/剂）灌装于鼻用喷 雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0094] 实施例23
[0095] 称取鱼油3g，中链甘油三酸酯5g，吐温806g，蛋黄卵磷脂2g，搅拌，得到油相/表 面活性剂混合物；称取HEPES1. 5g，苯酚0. 005g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，；在搅 拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液，加入30000IU破 伤风疫苗，加水至l〇〇mL ;加入0. lg葡萄糖，调节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，0.22 μ m滤膜 滤过；按照〇. 2ml/剂（即60IU/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0096] 实施例24
[0097] 称取大豆油0. 5g，中链甘油三酸酯0. 5g，Solutol HS153g，大豆磷脂lg，搅拌，得 到油相/表面活性剂混合物；称取枸橼酸〇. 3g，苄索氯铵0. 004g，加入60mL注射用水中，搅 拌使溶解，；在搅拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液； 加入22500 μ g HA的流感抗原（B/Brisbane/60/2008)，加水至100mL ;加入0. 05g甘油，调 节为鼻腔黏液等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即45 μ g/剂）灌装于鼻 用喷雾剂装置中，即得疫苗组合物。
[0098] 实施例25
[0099] 称取橄榄油0· 2g，Solutol HS150. 4g，蛋黄卵磷脂0· lg，搅拌，得到油相/表面活 性剂混合物；称取HEPES0. 8g，苯扎氯胺0. 006g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，；在搅 拌下，将水溶液缓慢加入油相/表面活性剂混合物中，得到带乳光的溶液；加入250 μ g重组 乙型肝炎疫苗（由酿酒酵母表达并纯化)加水至l〇〇mL ;加入0. 01g氯化钠，调节为鼻腔黏液 等渗溶液，搅匀，〇. 22 μ m滤膜滤过；按照0. 2ml/剂（即10 μ g/剂）灌装于鼻用喷雾剂装置 中，即得疫苗组合物。
[0100] 效果实施例1本发明液体制剂的粒径测定
[0101] 将实施例1-25制备的鼻用疫苗组合物液体制剂以注射用水作适当稀释，采用 Malvern Nan〇-ZS90动态光散射粒径电位测定仪测定其粒径。结果记录与表1中：
[0102] 表1液体制剂粒径测定结果
[0103]
【权利要求】
1. 一种鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，其包括如下原料组分： (1) 0· 002 ?0· 2% 抗原； (2) 0· 1 ?15% 油相； (3) 70?99. 7%水相；和 (4) 0. 1?15%表面活性剂； 所述百分比表示各组分在每l〇〇mL原料总体积中的克数。
2. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述抗原选自流感病 毒抗原、乙型肝炎病毒抗原和破伤风病毒抗原中的任一种。
3. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述油相选自角鲨烯、 角鲨烷、中链甘油三酸酯、鱼油、橄榄油和大豆油中的一种或多种；所述表面活性剂选自吐 温、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯和磷脂的混合物以及吐温与 磷脂的混合物中的一种或多种。
4. 如权利要求3所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述油相选自角鲨烯、 角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种；所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷 脂和氢化大豆磷脂中的一种或多种；所述水相为水。
5. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述的原料组分还包 括不超过2%的缓冲剂，所述的百分比表示缓冲剂在每100mL原料总体积中的毫克数；所述 缓冲剂选自4-羟乙基哌嗪乙磺酸、枸橼酸和磷酸盐中的一种或多种。
6. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述的原料组分还包 括不超过0. 01%的防腐剂，所述的百分比表示防腐剂在每100mL原料总体积中的毫克数；所 述防腐剂选自硫柳汞、苯扎氯氨、苯酚、苄索氯铵和2-苯氧乙醇中的一种或多种。
7. 如权利要求1所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述的原料组分还包 括不超过0. 2%的等渗调节剂，所述的百分比表示等渗调节剂在每100mL原料总体积中的毫 克数；所述等渗调节剂选自甘油、氯化钠和葡萄糖中的一种或多种。
8. 如权利要求1?7任一项所述的鼻用疫苗组合物液体制剂，其特征在于，所述鼻用疫 苗组合物液体制剂的规格为〇. 05?0. 3ml/剂。
9. 如权利要求1?7任一项所述的鼻用疫苗组合物液体制剂的制备方法，其特征在于， 其包括如下步骤： (1) 将油相和表面活性剂混合，再与水相混合，得佐剂； (2) 将步骤（1)制得的佐剂与抗原混合均匀，即得。
10. 如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，在步骤（2)之后还包括步骤（3):将步 骤（2)所得的混合物过滤后分装，然后于2?8°C保存。
【文档编号】A61K39/145GK104208664SQ201310211896
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年5月30日 优先权日:2013年5月30日
【发明者】金方, 蔡伟惠, 王颖 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院