手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物在制备抗炎药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物新的医药用途——在制备抗炎药物中的应用。通过抑制体外环氧合酶（COX）活性实验、抑制原代小鼠巨噬细胞内炎症分子一氧化氮的生成实验，以及对于小鼠体内耳肿和足肿模型的抑制实验表明，该手性化合物具有明显的抗炎作用，同时表现出极低的胃肠损伤作用。因此以其为活性成分，采用药剂学上可接受的工艺和辅料，制备成各种剂型的抗炎药物，具有很好的医药应用前景。
【专利说明】手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物在制备抗炎药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物化学【技术领域】，涉及一种手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物的新的医药用途，尤其涉及手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物在制备抗炎药物中的应用。
【背景技术】
[0002]手性药物是由具有药理活性的手性化合物组成，它在人体内通过与生物大分子间相互手性匹配、识别而发挥治疗作用。虽然对映异构体药物在体外的物理化学性质基本上相同，但是，由于药物分子所作用的受体或靶位是由氨基酸、核苷、膜等组成的手性蛋白和核酸大分子等，它们对与其结合的药物分子的空间立体构型有一定的要求，因此，对映异构体药物在体内往往呈现很大的药效学、代谢动力学等方面的差异。在二十世纪末，随着人们对对映异构体药物的研究与认识不断深入，FDA等药政部门于1992年开始把对映异构体药物当做混合物加以审批，要求生产厂家提供对映异构体药物各个异构体的研究数据。这一措施大大促进了手性药物的研制与开发。世界手性药物的年销售额在1993、1994、1995、1996年分别为356、452、614、729亿美元，平均每年以20%以上的幅度增长。到2000年世界手性药物年销售额增至1233亿美元，达药物年销售总额(2000年3900亿美元)的三分之一(StinsonS.C, Chem & Eng News.2001, 0ct7￥, 15)。与对映异构体药物相比，单一组分的手性药物还具有用量少、疗效高、不良反应低等优点。因此这个产业强烈吸引了世界各国的制药公司和相关单位从事开发手性药物，使之成为一个新兴的高技术产业。
[0003]中国专利申请201110138538.5公开了一种螺环吲哚-吡喃嘧啶碱化合物及其手性合成方法，其以4-羟基香豆素化合物或1-萘酚化合物，二氰基氧化吲哚烯化合物为反应底物，以松香衍生的手性硫脲为催化剂，立体选择性的合成了新型螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物。生物活性实验证明，本发明手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱化合物能够选择性地杀死肿瘤细胞，且对于不同类型的肿瘤都有较强的作用，说明其具有很好的选择性抗肿瘤活性。随着对螺环吲哚-吡喃嘧啶碱化合物性能的进一步研究和探索，发现其对炎症具有抑制作用，因此，针对其抗炎活性开发一种新型的抗炎药物，具有很好的生物学意义和应用前
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【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种手性螺环吲哚-批喃嘧啶碱类化合物新的医药用途——在制备抗炎药物中的应用。
[0005]下面通过细胞与实验动物说明手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱化合物对炎症的抑制作用。
[0006]1、细胞与实验动物的来源与培养方法 1.1细胞株
原代腹腔巨噬细胞由本研究室从小鼠腹腔新鲜提取，培养条件:用添加10%小牛血清的MEM培养液在37°C、5% CO2条件下常规培养。分离方法:取健康的雄性C57BL/6小鼠(体重25-31 g),腹腔注射Brewer Thioglycollate肉汤(2 ml/只)，四天后，断颈处死小鼠,在超净台内采集巨噬细胞，用细胞培养基(6 ml)冲洗小鼠腹腔得到细胞悬液，将其离心(5000rpm, 5 min),重悬细胞，计数并按照不同实验进行后续培养。
[0007]1.2实验动物
C57BL/6系雄性小鼠，体重2(T22g，由兰州大学实验动物中心(GLP)提供，整个实验过程的执行都参照欧洲实验动物伦理委员会的指导原则(86/609/EEC)，并且获得兰州大学实验动物伦理委员会的许可。动物饲养环境为清洁级，环境温度22±2°C，湿度50%~55%，8:00~20:00光照。小鼠每笼6、只饲养,可自由摄食饮水。雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠，体重140-160g，由兰州大学实验动物中心(GLP)提供。饲养环境与小鼠相同，大鼠每笼4只饲养，实验前禁食但不禁水12~16小时。
[0008]1.3 COX激酶体外抑制实验
采用COX检测试剂盒(Cayman Chemical, Ann Arbor, MI)检测JP_8g的COX抑制活性，操作按照其说明书进行。将手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物(JP-Sg)(溶于DMS0)加入反应缓冲液(分别加有荧光底物的C0X-1和C0X-2酶)。加入花生四烯酸溶液，室温反应2 min,米用大酶标仪器Varioskan Flash 4.00.53 plate fluorimeter (ThermoScitific,Waltham, MA, USA)检测590 nm波长(吸收波长:535 nm)的吸光度，并根据下式计算抑制率。实验结果见表1。表1表明一定浓度的JP_8g (50 uM)可以抑制环氧合酶COX的两种亚型(对C0X-1的抑制率为24.92% ;对C0X-2的抑制率为57.35%)，说明JP_8g具有很好的抗炎活性，为后续抗炎药物筛选奠定良好基础。
【权利要求】
1.手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物在制备抗炎药物中的应用；所述手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物的其结构式为:
2.如权利要求1所述手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物在制备抗炎药物中的应用，其特征在于:以手性螺环吲哚-吡喃嘧啶碱类化合物为活性成分，采用药剂学上可接受的工艺和辅料，制备成各种剂型的抗炎药物。
【文档编号】A61P29/00GK103622969SQ201310454221
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年9月29日 优先权日:2013年9月29日
【发明者】王锐, 蒋先兴, 孙瑜隆 申请人:兰州大学