竹节参皂苷Ib制备方法及在制备纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的抑制药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种竹节参皂苷Ib的制备方法，其制备主要步骤有：以竹节参作为原料破碎，用70%乙醇水提取，将提取液浓缩；正丁醇萃取，合并萃取层萃取液，浓缩成0.05-0.1g/ml浓缩液，向浓缩液中加入丙酮为沉淀剂，充分沉淀，减压干燥得粗提物；取粗提物，经MCI锥形吸附色谱富集，以30%乙醇-水混合液除杂，60-80%乙醇-水混合液洗脱，收集洗脱液，干燥得总皂苷；总皂苷经锥形硅胶色谱分离，收集相应馏分，减压回收溶剂，干燥，得竹节参皂苷Ib。竹节参皂苷Ib具有PAI-1抑制活性，可用于临床治疗血纤紊乱引起的疾病，如深静脉血栓和冠状动脉心脏病和肺纤维化等。
【专利说明】竹节参皂苷Ib制备方法及在制备纤溶酶原激活物抑制剂(PA卜1 )的抑制药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及竹节参中一种齐墩果烷型皂苷-竹节参皂苷Ib制备方法及在纤溶酶原激活物抑制剂(PA1-1)的抑制药物方面的应用，属于中药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]竹节参为五加科人参属,植物竹节参Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根莖。秋季采挖，除去主根及外皮， 干燥。其根状茎称“竹节参”，块根称“明七”或“白三七”。含有多种皂苷、挥发油、糖类和氨基酸。竹节参主要分布于陕西、甘肃、安徽、浙江、江西、福建、河南、湖南、湖北、广西、西藏等地。具有补虚强壮；止咳祛痰；散瘀止血；消肿止痛功效。含竹节人参阜式(chikusetsu-saponin) II1、IV、V，人参阜式(ginsenoside) RcU Re、Rgl、Rg2
坐寸ο
[0003]目前，有关竹节参化学成分的研究报道较多，但主要集中在化学成分的研究，杨小林研究了竹节参皂苷V和总皂苷在制备抗血栓药物中的应用，并申请了中国专利(竹节参皂苷V或/和总皂苷在制备抗血栓药物中的应用:201010615966.8),该发明专利，提供了竹节参皂苷V和总皂苷的制备方法，及其在抗血栓药物方面的作用和应用；杨中林等，研究了竹节参皂苷IV在制备降血脂药物中的应用，并申请了中国专利(竹节参皂苷IV在制备降血脂药物中的应用:201310165941.6)，该发明专利，公开了竹节参皂苷IV的制备，及在降血脂方面的应用。但相关专利均未涉及竹节参皂苷Ib的制备，PA1-1抑制剂方面的药理作用及其相关制剂制备的研究。
[0004]纤溶酶原激活物抑制剂-1 (PA1-1)是纤溶系统的主要抑制剂之一，纤溶系统包括酶原纤溶酶原，通过两种组织的类型的纤溶酶原激活剂U-PA或t-PA)之一转化为活性酶(纤溶酶)。PA1-1为U-PA和t-PA的主要抑生理学制剂。在纤溶系统中，不仅负责自循环中除去纤维蛋白，而且，参与多种其他生物学过程，包括排卵、胚胎发生、内膜增生、血管生成、肿瘤发生和动脉粥样硬化。
[0005]PA1-1的水平升高与多种疾病和病症有关，包括那些与纤溶系统损伤有关的疾病和病症。例如，PA1-1的水平提高与血栓形成疾病有关，例如与血栓形成为特征的疾病，该血栓形成阻碍了血管内血液在局部的流动或分离和栓塞了，血液向下的流动(Krishnamurti,blood,69,798 (1987);Reilly, Arteriosclerosis and Thrombosis, 11, 1276(1991);Carmeliet, Journal of Clinical investigation, 92, 2756(1993);Rocha, Fibrinolysis, 8, 294,1994; Aznar, Haemostasis, 24, 243(1994) aPA1-1活性的抗体中和导致内源性血栓溶解和再灌注的提高(Biemond, Circulation, 91, 1175, (1995) ; Levi, Circulation, 85, 305 (1992)。PA1-1水平升高,也与下列疾病有关:例如:多囊卵巢综合征(Nordt, Journal of clinicEndocrinology and Metabolism, 85, 4, 1563 (2000);雌激素缺乏诱导的骨丢失(Daci,Journal of Bone and Mineral Research, 15，8，1510 (2000)、囊性纤维化、糖尿病、慢性牙周炎、淋巴瘤、与细胞外基质积聚有关的疾病、与血管增生有关的疾病、与新血管生成有关的恶性疾病、炎性疾病、与感染有关的血管损伤以及与u-PA水平升高有关的疾病(例如乳癌和卵巢癌)。
[0006]综上所述，人类亟需PA1-1活性的抑制剂，在PA1-1水平升高有关的疾病中使用它们来调节PA1-1表达或活性。
【发明内容】
[0007]发明提供了一种竹节参皂苷Ib的制备方法及在PA1-1抑制剂方面的应用。
[0008]本发明的目的是通过以下技术方案来实现。
[0009]1.竹节参皂 苷Ib的制备方法，包括以下步骤:
[0010](I)将竹节参原材料破碎，将破碎物料用8-10倍量(W/V) 70%乙醇水溶解提取，得到提取液，收集提取液，过滤，将滤液减压浓缩，得浓缩液；
[0011](2)将浓缩液加入萃取溶剂反复萃取1-3次，合并萃取层萃取液，浓缩成
0.05-0.lg/ml萃取浓缩液；
[0012](3)向萃取浓缩液中加入沉淀剂，充分混匀，静置24h以上，过滤，收集沉淀，减压干燥得粗提物；
[0013](4)粗提物溶于水，经装填树脂的锥形吸附色谱富集，用30%乙醇-水混合液洗脱除去杂质,加入5-8倍量60-80%乙醇-水混合液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂,减压干燥得总皂苷；
[0014](5)按总皂苷1:10-60倍量进行锥形层析色谱分离，再以三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脱，收集相应馏分，减压干燥，得竹节参皂苷Ib0
[0015]所述的滤液减压浓缩是将浓缩液浓缩至无乙醇。
[0016]所述的萃取溶剂为正丁醇。
[0017]所述的沉淀剂为丙酮，萃取浓缩液和沉淀剂体积比为1:1-2。
[0018]所述的吸附柱色谱分离是MCI吸附柱，总皂苷与MCI的比例为l:l_10(g/g)，洗脱体系为60-80%乙醇水溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩干燥得总皂苷。
[0019]所述的锥形层析色谱分离是硅胶层析，总皂苷与硅胶的比例为1:10-60 (g/g)，洗脱体系为三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脱，进行等分收集，通过薄层层析检测，合并洗脱液，浓缩干燥得竹节参皂苷lb。
[0020]所述的锥形层析柱夹角为15-45°。
[0021]所述的竹节参皂苷Ib在药物制剂中的应用，是竹节参皂苷Ib在PA1-1抑制药物制剂中的应用；制剂竹节参皂苷Ib与一种或多种医药载体/辅料制成固体口服制剂，竹节参皂苷Ib按照1:1-10重量比与药物固体赋形剂混合，制备制成固体口服制剂。
[0022]竹节参皂苷Ib的结构式为
[0023]
【权利要求】
1.竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将竹节参原材料破碎，将破碎物料用8-10倍量(W/V)70%乙醇水溶解提取，得到提取液，收集提取液，过滤，将滤液减压浓缩，得浓缩液； (2)将浓缩液加入萃取溶剂反复萃取1-3次，合并萃取层萃取液，浓缩成0.05-0.lg/ml萃取浓缩液； (3)向萃取浓缩液中加入沉淀剂，充分混匀，静置24h以上，过滤，收集沉淀，减压干燥得粗提物； (4)粗提物溶于水，经装填树脂的锥形吸附色谱富集，用30%乙醇-水混合液洗脱除去杂质，加入5-8倍量60-80%乙醇-水混合液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂,减压干燥得总皂苷; (5)按总皂苷1:10-60倍量进行锥形层析色谱分离，再以三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脱，收集相应馏分，减压干燥，得竹节参皂苷Ib。
2.根据权利要求1所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于:所述的滤液减压浓缩是将浓缩液浓缩至无乙醇。
3.根据权利要求1所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于:所述的萃取溶剂为正丁醇。
4.根据权利要求1所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于:所述的沉淀剂为丙酮，萃取浓缩液和沉淀剂体积比为1:1-2。
5.根据权利要求1所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于:所述的吸附柱色谱分离是MCI吸附柱，总皂苷与MCI的比例为1:1-10 (g/g)，洗脱体系为60-80%乙醇水溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩干燥得总皂苷。
6.根据权利要求1所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于:所述的锥形层析色谱分离是硅胶层析，总皂苷与硅胶的比例为1:10-60(g/g)，洗脱体系为三氯甲烷-甲醇-甲酸梯度15:1:0.01-4:1:0.01洗脱，进行等分收集，通过薄层层析检测，合并洗脱液，浓缩干燥得竹节参皂苷Ib。
7.根据权利要求5或6所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，其特征在于:所述的锥形层析柱夹角为15-45°。
8.根据权利要求1所述的竹节参皂苷Ib的制备方法，竹节参皂苷Ib在药物制剂中的应用，其特征在于:竹节参皂苷Ib在PA1-1抑制药物制剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的竹节参皂苷Ib在PA1-1抑制药物制剂中的应用，其特征在于:制剂竹节参皂苷Ib与一种或多种医药载体/辅料制成固体口服制剂，竹节参皂苷Ib按照1:1-10重量比与药物固体赋形剂混合，制备制成固体口服制剂。
【文档编号】A61P7/02GK103739651SQ201310726623
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月25日 优先权日:2013年12月25日
【发明者】陈新, 李龙, 刘梁 申请人:武汉轻工大学